离体蛙心灌流离体蛙心灌流实验目的实验目的l学习学习离体离体蛙心灌流的方法；蛙心灌流的方法；l观察观察钠、钾、钙钠、钾、钙三种离子对心脏活动的三种离子对心脏活动的影响。影响。l观察观察肾上腺素肾上腺素、乙酰胆碱乙酰胆碱等因素对心脏等因素对心脏活动的影响。活动的影响。实验原理实验原理l作为蛙心起搏点的静脉窦能按一定节律自动作为蛙心起搏点的静脉窦能按一定节律自动作为蛙心起搏点的静脉窦能按一定节律自动作为蛙心起搏点的静脉窦能按一定节律自动产生兴奋。因此，只要将离体失去神经支配产生兴奋。因此，只要将离体失去神经支配产生兴奋。因此，只要将离体失去神经支配产生兴奋。因此，只要将离体失去神经支配的蛙心保持在适宜的环境中，在一定时间被的蛙心保持在适宜的环境中，在一定时间被的蛙心保持在适宜的环境中，在一定时间被的蛙心保持在适宜的环境中，在一定时间被仍能产生节律性兴奋和收缩。仍能产生节律性兴奋和收缩。仍能产生节律性兴奋和收缩。仍能产生节律性兴奋和收缩。l另一方面，心脏正常的节律性活动有赖于内另一方面，心脏正常的节律性活动有赖于内另一方面，心脏正常的节律性活动有赖于内另一方面，心脏正常的节律性活动有赖于内环境理化因素的相对稳定，所以，改变灌流环境理化因素的相对稳定，所以，改变灌流环境理化因素的相对稳定，所以，改变灌流环境理化因素的相对稳定，所以，改变灌流液的成分，则可以引起心脏活动的改变。液的成分，则可以引起心脏活动的改变。液的成分，则可以引起心脏活动的改变。液的成分，则可以引起心脏活动的改变。实验原理实验原理 工作细胞工作细胞工作细胞工作细胞：普通的具有收缩能力的心肌细胞：普通的具有收缩能力的心肌细胞：普通的具有收缩能力的心肌细胞：普通的具有收缩能力的心肌细胞 自律细胞自律细胞自律细胞自律细胞：组成特殊传导系统的心肌细胞：组成特殊传导系统的心肌细胞：组成特殊传导系统的心肌细胞：组成特殊传导系统的心肌细胞n n心肌收缩力：心肌收缩力：心肌收缩力：心肌收缩力：CaCa2+2+n n心率：自律细胞心率：自律细胞心率：自律细胞心率：自律细胞4 4期自动除极速度期自动除极速度期自动除极速度期自动除极速度n nRPRP或或或或MDPMDP与阈电位之差与阈电位之差与阈电位之差与阈电位之差动物与器材动物与器材l牛蛙牛蛙牛蛙牛蛙l斯氏蛙心套管斯氏蛙心套管斯氏蛙心套管斯氏蛙心套管、套管夹、常用手术器械、任、套管夹、常用手术器械、任、套管夹、常用手术器械、任、套管夹、常用手术器械、任氏液、张力换能器、蛙心夹、氏液、张力换能器、蛙心夹、氏液、张力换能器、蛙心夹、氏液、张力换能器、蛙心夹、0.0.65%NaCl65%NaCl溶液、溶液、溶液、溶液、 5%NaCl5%NaCl溶液、溶液、溶液、溶液、 2% 2%CaClCaCl2 2溶液、溶液、溶液、溶液、1%1%KClKCl溶液、溶液、溶液、溶液、1:1:50005000肾上腺素溶液、肾上腺素溶液、肾上腺素溶液、肾上腺素溶液、1:100001:10000乙酰胆碱溶液、乙酰胆碱溶液、乙酰胆碱溶液、乙酰胆碱溶液、300300u/mlu/ml肝素溶液肝素溶液肝素溶液肝素溶液方法与步骤方法与步骤1.离体蛙心的制备：双毁髓离体蛙心的制备：双毁髓离体蛙心的制备：双毁髓离体蛙心的制备：双毁髓左主动脉结扎左主动脉结扎左主动脉结扎左主动脉结扎左右两主动脉下方活结备用左右两主动脉下方活结备用左右两主动脉下方活结备用左右两主动脉下方活结备用剪口，插管剪口，插管剪口，插管剪口，插管（管内盛任氏液与（管内盛任氏液与（管内盛任氏液与（管内盛任氏液与肝素肝素肝素肝素）结扎备用线（套结扎备用线（套结扎备用线（套结扎备用线（套管左右主动脉）管左右主动脉）管左右主动脉）管左右主动脉）剪断动脉剪断动脉剪断动脉剪断动脉结扎并剪断结扎并剪断结扎并剪断结扎并剪断静脉。静脉。静脉。静脉。2.固定套管并用任氏液换洗血液；进入固定套管并用任氏液换洗血液；进入固定套管并用任氏液换洗血液；进入固定套管并用任氏液换洗血液；进入RM6240RM6240系统。系统。系统。系统。方法与步骤方法与步骤3.观察并记录正常心搏曲线；观察并记录正常心搏曲线；观察并记录正常心搏曲线；观察并记录正常心搏曲线；4.向套管内分别加入以下溶液（向套管内分别加入以下溶液（向套管内分别加入以下溶液（向套管内分别加入以下溶液（0.65%NaCl0.65%NaCl溶液置换任氏液溶液置换任氏液溶液置换任氏液溶液置换任氏液 、 0.5%0.5%NaClNaCl溶液溶液溶液溶液1-2d1-2d、1%KCl1%KCl溶液溶液溶液溶液 1-2d 1-2d 、2%CaCl2%CaCl2 2溶液溶液溶液溶液1d 1d 、1:50001:5000肾上腺素肾上腺素肾上腺素肾上腺素溶液溶液溶液溶液1-2d 1-2d 、1:100001:10000乙酰乙酰乙酰乙酰胆碱胆碱胆碱胆碱溶液溶液溶液溶液1-2d 1-2d ） ，观察并记录曲线变化。，观察并记录曲线变化。，观察并记录曲线变化。，观察并记录曲线变化。0.65%0.5%NaCl0.5%NaCl竞争性抑制竞争性抑制竞争性抑制竞争性抑制CaCa内流内流内流内流胞浆内胞浆内胞浆内胞浆内Ca Ca 心肌细胞收缩力心肌细胞收缩力心肌细胞收缩力心肌细胞收缩力 n n肾上腺素肾上腺素肾上腺素肾上腺素：主要与心肌的：主要与心肌的：主要与心肌的：主要与心肌的 1 1受体结合，产生受体结合，产生受体结合，产生受体结合，产生正性变时、变力和变传导效应。正性变时、变力和变传导效应。正性变时、变力和变传导效应。正性变时、变力和变传导效应。n n乙酰胆碱乙酰胆碱乙酰胆碱乙酰胆碱：与心肌细胞的：与心肌细胞的：与心肌细胞的：与心肌细胞的MM2 2受体结合，产生受体结合，产生受体结合，产生受体结合，产生负性变时、变力和变传导效应。负性变时、变力和变传导效应。负性变时、变力和变传导效应。负性变时、变力和变传导效应。 具体作用机制见具体作用机制见具体作用机制见具体作用机制见大学生理学大学生理学大学生理学大学生理学P236239P236239、P248P248注意事项注意事项l制备蛙心标本时，制备蛙心标本时，制备蛙心标本时，制备蛙心标本时，勿伤静脉窦勿伤静脉窦勿伤静脉窦勿伤静脉窦；l各溶液作用一旦出现，应立即用新鲜任氏液各溶液作用一旦出现，应立即用新鲜任氏液各溶液作用一旦出现，应立即用新鲜任氏液各溶液作用一旦出现，应立即用新鲜任氏液换洗换洗换洗换洗，以免心肌受损，而且待心跳恢复正常，以免心肌受损，而且待心跳恢复正常，以免心肌受损，而且待心跳恢复正常，以免心肌受损，而且待心跳恢复正常后方能进行下一步实验；后方能进行下一步实验；后方能进行下一步实验；后方能进行下一步实验；l蛙心插管内蛙心插管内蛙心插管内蛙心插管内液面应保持恒定液面应保持恒定液面应保持恒定液面应保持恒定；l每次更换或滴加溶液每次更换或滴加溶液每次更换或滴加溶液每次更换或滴加溶液必须做标记必须做标记必须做标记必须做标记；