免疫复合物及检测免疫复合物及检测1 1当当Ag在体内持续存在或由微生物与在体内持续存在或由微生物与宿主细胞不断释放入细胞外液时，宿主细胞不断释放入细胞外液时， 可引起特异性可引起特异性Ab产生，从而形成免产生，从而形成免疫复合物。疫复合物。一一.免疫复合物含义及形成：免疫复合物含义及形成：（一）含义：（一）含义：immune complex，IC它主要指它主要指AgAb复合物复合物及及AgAbC 复合物复合物两种。两种。2 2（二）IC的形成：1.Ag持续存在于体内：（产生持续存在于体内：（产生Ab，形成，形成AgAb或或AgAbC）感染：是感染：是Ag持续存在于体内的最常见原因，持续存在于体内的最常见原因，如细菌、病毒、寄生虫感染；如细菌、病毒、寄生虫感染；组织组织Ag：自身组织的部分成分发生变异，：自身组织的部分成分发生变异， 如如DNA、IgG等；等；外源性外源性Ag：在生活、工作环境中接触的外来：在生活、工作环境中接触的外来性物质如粉尘、药物等；性物质如粉尘、药物等；肿瘤肿瘤Ag：如白血病等：如白血病等3 32.IC的清除受阻：的清除受阻： 形成的形成的IC一般分为一般分为大分子大分子IC、中等大、中等大小的小的IC及小分子及小分子IC三种：三种：大分子大分子IC：沉降系数为：沉降系数为19S，MW100万，万，易被巨噬易被巨噬细胞吞噬而清除；胞吞噬而清除；小分子小分子IC：可溶性，：可溶性，沉降系数沉降系数6.6S，MW 50万，易被万，易被肾小球小球滤过而排除；而排除；中等大小的中等大小的IC：沉降系数在沉降系数在8.8S19S间，间，MW在在50100万间，既不易被万间，既不易被巨噬巨噬细胞吞胞吞噬也不易被噬也不易被肾小球小球滤过，而沉，而沉积在血管壁、在血管壁、肾小球基底膜小球基底膜处，形成免疫复合物病。，形成免疫复合物病。4 4二二.免疫复合物病：免疫复合物病：（一）致病机理：中等大小的（一）致病机理：中等大小的IC沉积在沉积在体内，通过体内，通过激活补体、激活血小板激活补体、激活血小板 而致病。而致病。 激活补体：激活补体：a.激活激活C3a、C5a、C567趋化嗜中性粒细趋化嗜中性粒细胞胞释放溶放溶酶体体酶引起引起组织损伤；b.激活激活C3a、C5a（过敏毒素）（过敏毒素）作用于肥作用于肥大大细胞和嗜碱性粒胞和嗜碱性粒细胞胞释放血管活性物放血管活性物质血管通透性增加血管通透性增加引起引起组织水水肿；5 5 激活血小板：激活血小板：与血小板上的与血小板上的IgGFc受体结合受体结合使血小使血小板聚集板聚集微血栓形成微血栓形成局部出血缺血、局部出血缺血、坏死坏死 6 67 7常常见病病损部位部位肾小球、关小球、关节、皮肤、皮肤8 8（二）所致疾病（二）所致疾病内脏毛细血管炎：如急性肾小球肾炎、内脏毛细血管炎：如急性肾小球肾炎、变态反应性肺泡炎、溃疡性结肠炎变态反应性肺泡炎、溃疡性结肠炎关节炎：风湿性关节炎、类风湿性关关节炎：风湿性关节炎、类风湿性关节炎；节炎；皮肤：皮肤炎、脉管炎；皮肤：皮肤炎、脉管炎；全身：全身：SLE9 9血血 清清 病病1010类风湿性关节炎类风湿性关节炎体体体体内内内内变变变变性性性性IgGIgGIgGIgG刺刺刺刺激激激激机机机机体体体体产产产产生生生生抗抗抗抗体体体体( ( ( (称称称称为为为为类类类类风风风风湿湿湿湿因因因因子子子子,IgM,IgM,IgM,IgM型型型型) ) ) )，形形形形成成成成ICICICIC，沉沉沉沉积积积积于于于于全全全全身身身身小小小小关关关关节节节节滑滑滑滑膜膜膜膜处处处处，引引引引起起起起小小小小关关关关节节节节红红红红肿肿肿肿、变变变变形形形形僵僵僵僵直直直直、失失失失去去去去运动功能。运动功能。运动功能。运动功能。1111系统性红斑狼疮系统性红斑狼疮细细细细胞胞胞胞核核核核物物物物质质质质( ( ( (如如如如DNADNADNADNA、RNARNARNARNA、核核核核内内内内可可可可溶溶溶溶性性性性蛋蛋蛋蛋白白白白) ) ) )刺刺刺刺激激激激机机机机体体体体产产产产生生生生抗抗抗抗核核核核抗抗抗抗体体体体，形形形形成成成成ICICICIC，沉沉沉沉积积积积于于于于全全全全身身身身毛毛毛毛细细细细血血血血管管管管、关关关关节节节节滑滑滑滑膜膜膜膜、心心心心脏脏脏脏瓣瓣瓣瓣膜膜膜膜等等等等处处处处，引引引引起全身性损伤。起全身性损伤。起全身性损伤。起全身性损伤。1212三三.IC检测方法的分类：检测方法的分类： (一一) 局部组织中局部组织中IC的检测：的检测： 制备局部组织切片，用光学显微镜或电镜制备局部组织切片，用光学显微镜或电镜检测检测IC所致典型病理改变；或用所致典型病理改变；或用IF、免疫酶、免疫酶技术检测技术检测IC在组织中的沉着。在组织中的沉着。（二）（二）循环中循环中IC的检测：的检测： Circle immune complex，简称，简称CIC。 CIC检测方法大致分为两类：检测方法大致分为两类：13131.抗原特异性方法：抗原特异性方法：利用利用IC中中Ag的特的特异性而设计的方法。但由于每一待测异性而设计的方法。但由于每一待测标本中标本中Ag的特异性是不同的，不同的特异性是不同的，不同Ag就需不同方法进行检测，造成方法不就需不同方法进行检测，造成方法不统一，因此临床上使用较少。统一，因此临床上使用较少。2.抗原非特异性方法：抗原非特异性方法：利用利用CIC与游离与游离的的Ag或或Ab相比较，在物理性质、生物相比较，在物理性质、生物学活性上的差异而设计的方法。学活性上的差异而设计的方法。1414根据物理性质上的差异而设计的方法：根据物理性质上的差异而设计的方法：A.根据根据CIC与游离的与游离的Ag或或Ab分子大小不同分子大小不同而设计的方法：凝胶过滤超滤法、蔗糖密而设计的方法：凝胶过滤超滤法、蔗糖密度超速离心法；度超速离心法；B.根据根据CIC与游离的与游离的Ag或或Ab溶解度不同而溶解度不同而设计的方法：聚乙二醇（设计的方法：聚乙二醇（PEG）沉淀试验）沉淀试验1515根据生物学性质的差异而设计的方法：根据生物学性质的差异而设计的方法：A.根据根据C1q+CIC （AgAb)而设计的方法：而设计的方法：抗补体试验、抗补体试验、C1q结合试验；结合试验；B.根据根据IgGFc受体受体CIC （AgAb)而设计的而设计的方法：血小板凝集试验；方法：血小板凝集试验；C.根据根据C3b受体受体CIC（AgAbC)而设计的而设计的方法：方法：Raji细胞试验细胞试验1616四四.IC检测方法概述：检测方法概述：1.聚乙二醇（聚乙二醇（PEG）沉淀试验：）沉淀试验：原理：原理：PEG为水溶性多聚体，在为水溶性多聚体，在3-4低浓度时，能使血清中低浓度时，能使血清中CIC沉降。沉降。1717方法：方法： PEG待测血清待测血清 使使PEG终浓度达到终浓度达到34 4过夜 离心，取出沉淀 将沉淀用NaOH溶解 在分光光度计上测定OD（A）值1818优缺点：优缺点：该试验不但可检测该试验不但可检测IC，还可获得，还可获得IC（收集（收集沉淀），简单，快速；沉淀），简单，快速；特异性差，易受血清中大分子物质干扰；特异性差，易受血清中大分子物质干扰；常作为常作为CIC检测的粗筛试验检测的粗筛试验19192.抗补体试验：抗补体试验：原理：原理：C1q+IC方法：豚鼠血清（含补体方法：豚鼠血清（含补体)+待测血清待测血清(561h灭活其中补体）灭活其中补体） 再加入致敏羊红细胞 不溶血 溶血 （IC阳性） （IC阴性）20202121 优缺点：优缺点： 该试验敏感，干扰因素多，易出现假阳性该试验敏感，干扰因素多，易出现假阳性凡引起补体失活的原因都可引起假阳性，凡引起补体失活的原因都可引起假阳性，因此豚鼠血清必须保持新鲜；因此豚鼠血清必须保持新鲜；待测血清在待测血清在561h灭活自身补体时，对其中灭活自身补体时，对其中的的Ig构型有改变，可引起构型有改变，可引起Ig聚集代替聚集代替IC而与而与C1q结合，出现抗补体活性。结合，出现抗补体活性。22223.C1q结合试验结合试验：原理：原理：C1qIC方法：方法： 待测血清（灭活补体）同位素标记的待测血清（灭活补体）同位素标记的C1q PEG(使IC沉降） 测定沉淀物中的放射活性测定沉淀物中的放射活性 优点：对优点：对IC的检测既可定性又可定量，重复的检测既可定性又可定量，重复 性好，结果客观；性好，结果客观；缺点：易出现假阳性，缺点：易出现假阳性，C1q不但能与不但能与IC结合，结合， 还能与血清中鱼精蛋白、还能与血清中鱼精蛋白、C反应蛋白结合反应蛋白结合 23234.血小板凝集试验：血小板凝集试验：原理：原理：IC+血小板上的血小板上的IgGFc 受体受体血小板凝集血小板凝集方法：待测血清血小板方法：待测血清血小板 若出现凝集，则待测标本中含有若出现凝集，则待测标本中含有IC ； 若不出现凝集，则待测标本中无若不出现凝集，则待测标本中无IC 。特点：由于不同个体血小板对特点：由于不同个体血小板对IC的敏感性不同，的敏感性不同，所以实际运用时，至少需要三份不同个体的混合所以实际运用时，至少需要三份不同个体的混合血小板。血小板。可出现假阳性：高浓度的可出现假阳性：高浓度的Ig、凝血酶、蛋白溶解、凝血酶、蛋白溶解酶、胶原等都可使血小板凝集。酶、胶原等都可使血小板凝集。 2424 5.Raji 细胞试验：细胞试验：原理：原理：Raji细胞是一种有细胞是一种有B细胞特征的淋巴细胞特征的淋巴母细胞样细胞，由母细胞样细胞，由Burkitt氏淋巴瘤衍变而氏淋巴瘤衍变而来，其表面无来，其表面无SmIg，含有大量的补体受体，含有大量的补体受体，尤其是尤其是C3b受体。该法仅适用于检测受体。该法仅适用于检测AgAbC复合物。复合物。方法：待测血清方法：待测血清+Raji细胞细胞 孵育孵育洗洗涤，加，加入同位素入同位素标记的抗人的抗人IgG 离心、洗离心、洗涤 检测沉淀沉淀细胞的放射活性。胞的放射活性。2525五五.IC检测的有关技术问题：检测的有关技术问题： 到目前为止，所有检测到目前为止，所有检测IC 的试验，还没有的试验，还没有另人满意的标准化措施；另人满意的标准化措施；在体外制备的在体外制备的IC还很不稳定，因此用人工还很不稳定，因此用人工合成的复合物作为定量标准不适宜。合成的复合物作为定量标准不适宜。目前普遍应用的标准品是目前普遍应用的标准品是HAHG热聚合热聚合人人IgG（不是真正的（不是真正的IC）。）。2626检测检测IC的理想方法的理想方法：操作简便，敏感；操作简便，敏感；可检测各种类型可检测各种类型IC；能分析能分析IC的大小和组成成分；的大小和组成成分；能精确定量，无假阳性能精确定量，无假阳性2727WHO推荐的检测方法：推荐的检测方法：C1q结合试验、结合试验、胶固素试验、胶固素试验、类风湿因子（类风湿因子（RF）试验、）试验、Raji细胞试验细胞试验2828思考题:免疫复合物的含义及免疫复合物病的致病免疫复合物的含义及免疫复合物病的致病原因原因免疫复合物检测使用的标准品、出现的问免疫复合物检测使用的标准品、出现的问题及题及WHO推荐的检测方法推荐的检测方法2929