张少敏张少敏0308102803081028目前常用的有四种古老的经典方法:定氮法,双缩脲法( Biuret法) Folin -酚试剂法( Lowry 法)和紫外吸收法.另外还有一种近十年才普遍使用起来的新测定方法,考马斯亮蓝法( Bradford法).其中Bradford 法和 Lowry 法灵敏度高，比紫外吸收法高10-20倍,比 Biuret 法高100倍以上.凯氏定氮法比较复杂,但较准确,往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质.n2.器材n(1)可见光分光光度计n(2)旋涡混合器n(3)试管16支n(三)操作方法n1标准方法n(1)取16支试管,1支作空白,3支留作未知样品,其余试管分为两组,按表中顺序,分别加入样品,水和试剂,即用1.0mg/ml的标准蛋白质溶液给个试管分别加入:0,0.01,0.02,0.04,0.06,0.08,0.1ml,然后用水补充到0.1ml最后各试管中分别加入5.0ml考马斯亮蓝G-250试剂.未知样品见表中的8, 9,10管n(2)加完试剂2-5分钟后,即可开始用比色皿,在分光光度计上测定各样品在595nm处的光吸收值A595,空白对照为1号管.注意:不可用石英比色皿(因不易洗去染料)(3)用标准蛋白质(mg)为横坐标,用吸光值A595为纵坐标,作图 ,即得一标准曲线.由此标准曲线,根据测出的为止样品A595值,即可查出样品蛋白质含量.0.50mg牛血清蛋白/ml溶液约为0.50.管号管号 12345678910蛋白质蛋白质（mg/ml） 00.010.020.040.060.080.100.020.040.06蒸馏水蒸馏水 0.10.090.080.060.040.020.000.080.060.04考马斯考马斯亮兰亮兰5.05.05.05.05.05.05.05.05.05.0n2.微量法当样品中蛋白质浓度较稀时(10-100mg/ml)可将取样(包含补加的水)加到0.5ml或1.0ml,空白对照则分别为0.1ml或1.0mlH2O,考马斯亮兰G-250试剂仍加5.0ml,同时作相应的标准曲线,测595nm的光吸收值. 0.05mg牛血清蛋白/ml溶液A595约为0.29nz结束语结束语谢谢大家聆听！谢谢大家聆听！14