牛脾中RNA提取的工业化生产 生物生物08010801班班 刘清泉刘清泉 王王 琨琨1 1应用前景l 脾脏是机体重要的免疫器官，富含淋巴细胞、浆细胞和巨噬细胞。其RNA无种属特异性，可在不同种属间交叉转移免疫功能。l利用脾脏提取的RNA可作为非特异免疫信息刺激并增强受体的免疫防御能力，并可促使癌细胞逆转。l临床上主要用于治疗免疫功能低下的疾病及呼吸道疾病、肺心病、慢性气管炎、银屑病、荨麻疹，并可作为治疗恶性肿瘤的辅助用药。2生产主要原理v以牛脾为原料，提取活性RNA，利用苯酚法提取，可以选用紫外扫描、凝胶电泳及HPLC对所得的制品进行鉴定及含量测定。v而本生产选用紫外吸收法来进行RNA纯度的检测。v检测采用公式计算：3高效液相色谱法比较：4生产过程n（1）将细胞置于含有十二烷基磺酸钠（Sodium dodecyl sulfate,SDS）的中 ，加等体积水饱和酚，静置一段时间，使形成上层水相和下层酚相。核酸溶于水相，被苯酚变性的蛋白质或者溶于酚相，或者在两相界面处形成凝胶层。5（2）采用的0.15mol/L 缓冲液系统可使大部分RNA-蛋白复合物解离，而DNA-蛋白复合物只有极少部分解离；用酚处理时DNA-蛋白复合物变性，在低温条件下从水相中除去，这样得到的RNA 制品中混杂的DNA-蛋白复合物极少。（3）用氯仿-异戊醇继续处理RNA 制品，可进一步除去其中少量的蛋白质。最后用乙醇使RNA 从水溶液中沉淀出来。本法得到的RNA 不仅纯度高，而且多呈自然状态，可供继续研究之用。 6生产的主要流程RNA-蛋白复蛋白复合物解离合物解离。破碎细胞破碎细胞DNA-蛋白蛋白复合物变性复合物变性氯仿氯仿-异戊异戊醇继续处理醇继续处理 沉淀沉淀静置分层，静置分层，取上层水相取上层水相 成成 品品 RNA低温处理低温处理十二烷基十二烷基磺酸钠、等磺酸钠、等体积水饱和酚体积水饱和酚0.15mol/L 缓冲液缓冲液酚处理酚处理乙醇乙醇7生产所需主要设备锤式粉碎机搅拌器贮藏罐反应器温度控制仪冷冻干燥器紫外分光光度计8谢谢！9