耳聋基因检测与耳聋一级预防final数据来自：第二次（2006年）全国残疾人抽样调查中国耳聋人群庞大中国耳聋人群庞大耳聋基础耳聋基础 先天性听力障碍发病率：先天性听力障碍发病率： 1-31-3 全国每年新增耳聋患儿：全国每年新增耳聋患儿： 2-62-6万万 先天性听力障碍先天性听力障碍发病率高病率高每每1000010000新生儿中先天性新生儿中先天性出生缺陷的发生率出生缺陷的发生率耳聋基础耳聋基础导致严重后果：语言障碍（十聋九哑）导致严重后果：语言障碍（十聋九哑）目前无有效治疗方法，主要依赖助听器与人工目前无有效治疗方法，主要依赖助听器与人工耳蜗植入等辅助手段耳蜗植入等辅助手段影响终生：家庭社会负担沉重影响终生：家庭社会负担沉重p每个听障患儿增加社会成本约每个听障患儿增加社会成本约20-5020-50万元万元先天性听力障碍危害性高先天性听力障碍危害性高耳聋基础耳聋基础效果依赖早期发现、早期诊治和防控效果依赖早期发现、早期诊治和防控 助听器验配助听器验配 人工耳蜗植入人工耳蜗植入先天性听力障碍高度可干先天性听力障碍高度可干预性性 言语康复训练言语康复训练耳聋基础耳聋基础先天性耳先天性耳聋防治思路防治思路东部地区中部地区西部地区UNHSUNHS及干预网络及干预网络的建立与实施的建立与实施聋病基因孕前产前筛查聋病基因孕前产前筛查降低出生率降低出生率高危因素筛查及干预高危因素筛查及干预模式的建立与实施模式的建立与实施关口前移关口前移重心下移重心下移重心下移重心下移偏远地区重心下移重心下移儿童保健网络儿童保健网络筛查及干预筛查及干预耳聋基础耳聋基础耳聋的病因复杂：遗传性病因占主要部分遗传性病因占主要部分明确的遗传因素为耳聋的预防创造条件明确的遗传因素为耳聋的预防创造条件耳聋基础耳聋基础非综合征性耳聋基因60个p显性 30个p隐性 50个p线粒体 2个pX-连锁 4个综合征性耳聋基因40个遗传性耳聋具高度遗传异质性遗传性耳聋具高度遗传异质性Hereditary hearing loss Homepage耳聋基础耳聋基础常见耳聋基因少，占遗传因素多常见耳聋基因少，占遗传因素多pJournal of translational medicine:GJB2 mutation spectrum in 2063 Chinese patients with non-syndromic hearing impairment pAmerican journal of medical genetics:Molecular etiology of hearing impairment associated with non-syndromic enlarged vestibular aqueduct in East China. p American journal of human genetics :Maternally inherited aminoglycoside-induced and nonsyndromic deafness is associated with the novel C1494T mutation in the mitochondrial 12S rRNA gene in a large Chinese family. 针对常见耳聋基因的一级预防具有高度可行性常见耳聋基因占遗传性耳聋常见耳聋基因占遗传性耳聋50%50%以上，药物性耳聋以上，药物性耳聋40%40%以上以上pGJB2 GJB2 （40%-50%40%-50%）pSLC26A4 SLC26A4 （15%-20%15%-20%）p线粒体基因线粒体基因 （40%40%以上药物性耳聋）以上药物性耳聋） 常见耳聋基因检测常见耳聋基因检测基因检测与婚育指导基因检测与婚育指导产前诊断产前诊断常常见耳耳聋基因基因筛查常见耳聋基因检测常见耳聋基因检测聋病基因筛查在北京、上海等重点城市已得到初步开展，筛查技术成熟pGJB2pSLC26A4p线粒体DNA突变热点常常见耳耳聋基因基因筛查常见聋病基因筛查使先天性听力障碍的预防成为可能常见耳聋基因检测常见耳聋基因检测耳聋基因筛查与预防模式耳聋基因筛查与预防模式高危筛查模式p目标：高危人群（耳聋人群及其亲属等）p筛查手段：全序列测定为主（GJB2、SLC26A4和MT-RNR1）p筛查时间：孕前、婚前、恋前普遍筛查模式p目标：正常听力人群p筛查手段：快速筛查为主，序列测定为辅(GJB2、SLC26A4和MT-RNR1三大基因的热点突变)p筛查时间：孕前或孕早期常见耳聋基因检测常见耳聋基因检测耳聋基因高危筛查耳聋基因高危筛查试点及合作单位：上海市长宁区残联会员常见耳聋基因检测常见耳聋基因检测GJB2双等位基因突变（29.5%）SLC26A4双等位基因突变（14.1%）线粒体基因突变（6.0%）原因不明：（50.3%)常见耳聋基因突变检出比例：49.7%耳耳聋基因高危基因高危筛查N200例常见耳聋基因检测常见耳聋基因检测耳聋基因高危筛查耳聋基因高危筛查优缺点分析常见耳聋基因检测常见耳聋基因检测耳聋基因普遍筛查耳聋基因普遍筛查育龄或孕早期女性育龄或孕早期女性隐性基因突变携带者隐性基因突变携带者配偶基因芯片筛查配偶基因芯片筛查耳聋基因芯片筛查耳聋基因芯片筛查夫妇双方均为同证夫妇双方均为同证基因突变携带者基因突变携带者线粒体线粒体A1555GA1555G突变突变产前基因诊断产前基因诊断遗传咨询遗传咨询药物性耳聋遗传咨询药物性耳聋遗传咨询常见耳聋基因检测常见耳聋基因检测有效检测样本（怀孕早期孕妇）：有效检测样本（怀孕早期孕妇）：30563056例例孕妇中携带耳聋基因突变孕妇中携带耳聋基因突变160160例，占总样本的例，占总样本的5.235.23% %。携带者自身均听力正常，携带者自身均听力正常，157157例无家族史，例无家族史，3 3例例MTMT突变孕妇家族多人突变孕妇家族多人有药物性聋病史。有药物性聋病史。MTMT突变突变7 7例，对母系成员进行例，对母系成员进行氨基糖苷类抗生素氨基糖苷类抗生素药物预警，以避免药药物预警，以避免药物性耳聋物性耳聋全序列检测非全序列检测非MTMT突变的阳性孕妇配偶突变的阳性孕妇配偶124124例，例，1313家庭具隐性遗传性耳家庭具隐性遗传性耳聋生育风险，聋生育风险， 5 5例进行了产前诊断，例进行了产前诊断，1 1例胎儿为例胎儿为p.V37I/c.235delCp.V37I/c.235delC复合复合杂合杂合，其余为突变携带或野生型，其余为突变携带或野生型。耳聋基因普遍筛查耳聋基因普遍筛查常见耳聋基因检测常见耳聋基因检测耳聋基因普遍筛查耳聋基因普遍筛查优缺点分析常见耳聋基因检测常见耳聋基因检测 Aa Aa AA父母正常，孩子耳聋 “隐性遗传”耳耳聋基因基因诊断与断与遗传咨咨询实例例？孕早期羊水穿刺产前基因诊断 AA (25%)Aa (50%)aa (25%) 产前基因诊断可有效预防隐性遗传性耳聋的再生育风险耳聋遗传咨询耳聋遗传咨询父母耳聋，孩子个个耳聋 同证婚配：后代100%会耳聋耳耳聋基因基因诊断与断与遗传咨咨询实例例聋人婚前进行耳聋基因检查，可避免同证婚配的出现 AA AA AA AA AA耳聋遗传咨询耳聋遗传咨询AA;bb aa;BB 父母耳聋，孩子正常 Aa;Bb“多基因遗传”?携带不同隐性耳聋基因突变的聋人夫妇可生育正常听力的孩子耳耳聋基因基因诊断与断与遗传咨咨询实例例耳聋遗传咨询耳聋遗传咨询？Bb正常人群中耳聋基因突变携带率(Bb)为5%耳聋基因诊断可为遗传性耳聋高危人群提供生育风险评估及预防BBBbBbBb耳耳聋基因基因诊断与断与遗传咨咨询实例例耳聋遗传咨询耳聋遗传咨询 C C“线粒体基因母系遗传”?携带线粒体耳聋基因突变的人群通过指导可避免药物性耳聋的发生耳耳聋基因基因诊断与断与遗传咨咨询实例例耳聋遗传咨询耳聋遗传咨询耳聋基因遗传咨询与诊断耳聋基因遗传咨询与诊断 了解病因，帮助确诊了解病因，帮助确诊 预防下一代聋病的发生预防下一代聋病的发生 预防亲属或下一代药物性耳聋的可能预防亲属或下一代药物性耳聋的可能耳聋遗传咨询耳聋遗传咨询罕见已知耳聋基因检测罕见已知耳聋基因检测 非常见耳聋基因致病患者的分子病因非常见耳聋基因致病患者的分子病因p 罕见已知耳聋基因致病？罕见已知耳聋基因致病？p 罕见已知耳聋基因众多，如何检测？罕见已知耳聋基因众多，如何检测？罕见耳聋基因检测罕见耳聋基因检测本研究所检测的79个耳聋基因常见的耳聋致病基因：Sanger测序罕见耳聋基因检测：定向捕获二代测序p可行性分析：OtoSCOPE芯片（54个已知耳聋基因，2010年，University of Iowa）p79个已知耳聋基因的二代测序（本研究）2010年二代测序首次应用于已知耳聋基因检测适宜的检测技术罕见已知耳聋基因检测罕见已知耳聋基因检测罕见耳聋基因检测罕见耳聋基因检测总样本量：183例经济高效的检测方案检测方案（二步法）p第一步：常见耳聋基因Sanger测序（所有样本）p第二步：79个耳聋基因二代测序（排除常见耳聋基因致病样本）二步法优点：节约二代测序样本数量二步法优点：节约二代测序样本数量罕见已知耳聋基因检测罕见已知耳聋基因检测罕见耳聋基因检测罕见耳聋基因检测79个已知耳聋基因病因构成图常见耳聋基因突变：35.5%pGJB2: 19.7%pSLC26A4：12.0%pMT-RNR1: 3.8%罕见耳聋基因突变：罕见耳聋基因突变：15.8%15.8%罕见已知耳聋基因病因构成：15.8%罕见已知耳聋基因检测罕见已知耳聋基因检测罕见耳聋基因检测罕见耳聋基因检测罕见耳聋基因的异质性强罕见基因突变分布图p致病突变广泛分布于15个基因中Novel mutation Novel mutation 91.8%(45/49)91.8%(45/49)Reported mutation: 8.2%（4/49)p新发突变占绝大多数致病突变是否报道分布图Orphanet Journal of Rare DiseasesOrphanet Journal of Rare Diseases2013,8:85罕见已知耳聋基因检测罕见已知耳聋基因检测罕见耳聋基因检测罕见耳聋基因检测新耳聋基因克隆与发现新耳聋基因克隆与发现 所有已知耳聋基因检测后都为阴性p 新耳聋基因致病？p已知耳聋基因非编码区致病？p已知耳聋基因大片段缺失？p p新耳聋基因克隆新耳聋基因克隆遗传性耳性耳聋家系家系连锁分析分析遗传标记基因型分离表型分离基因型-表型共分离耳聋基因的定位克隆新耳聋基因克隆新耳聋基因克隆p外显子捕获/二代测序二代二代测序序耳聋基因定向外显子捕获/测序平台排除已知耳聋基因增加克隆新耳聋基因的把握新耳聋基因克隆新耳聋基因克隆Genome-Wide Linkage AnalysisPerformed in 9 affected and 9 unaffected (35 yrs)新耳聋基因克隆新耳聋基因克隆候选区域候选区域新耳聋基因克隆新耳聋基因克隆Genome-Wide Linkage Analysis9 affected and 8 unaffected Illumina OmniZhongHua BeadChip (900,015 SNPs) Chr16p13 kgp1005458-kgp2546988 (2.1 Mb) Maxium LOD = 3.8 Overlapped with DFNB86 interval新耳聋基因克隆新耳聋基因克隆Whole Exome Sequencing3 affected and 2 unaffected 新耳聋基因克隆新耳聋基因克隆Whole Exome SequencingCandidate variants: non-synonymous variants (missense, nonsense, splicing site, indels, etc) with allele frequencies 0.001 II-3III-9III-7III-5III-11II-3, III-7, III-9: Affected III-5, III-11: Unaffected新耳聋基因克隆新耳聋基因克隆Whole Exome SequencingConfirmed by Sanger sequencing in all family members新耳聋基因克隆新耳聋基因克隆Genome-Wide Linkage Analysis9 affected and 8 unaffected Illumina OmniZhongHua BeadChip (900,015 SNPs) Chr16p13 kgp1005458-kgp2546988 (2.1 Mb, 124 genes) Maxium LOD = 3.8 Overlapped with DFNB86 interval新耳聋基因克隆新耳聋基因克隆The p.Ser178Leu Variant of TBC1D24Highly conservative Not seen in 1000 normal hearing controls新耳聋基因克隆新耳聋基因克隆Hum MutatHum Mutat，2014, 35(7):814-818 2014, 35(7):814-818 TBC1D24TBC1D24新耳聋基因克隆新耳聋基因克隆耳聋基因检测技术：一代测序耳聋基因检测技术：一代测序DNADNA抽提抽提 PCRPCR扩增扩增 扩增片段测序扩增片段测序 突变检测突变检测优点：可覆盖目标基因全部编码序列，适合特定目标诊断优点：可覆盖目标基因全部编码序列，适合特定目标诊断总结总结- -检测技术检测技术高通量定点突高通量定点突变检测技技术p p耳聋基因突变芯片检测法耳聋基因突变芯片检测法p p飞行时间质谱法飞行时间质谱法p pSNAPshot/HRMSNAPshot/HRM等等优点：通量高，操作简便，适合大规模人群筛查优点：通量高，操作简便，适合大规模人群筛查总结总结- -检测技术检测技术9. 成你做了什么，而要问你为别人做了什么。9. 行动不一定带来快乐，而无行动则决无快乐。13. 行动是治愈恐惧的良药，而犹豫、拖延将不断滋养恐惧。12. 疑惑足以败事。一个人往往因为遇事畏缩的原故，失去了成功的机会。最好的好人，都是犯过错误的过来人;一个人往往因为有一点小小的缺点，更显出它的可爱。15. 成功需要改变，用新的方法改变过去的结果。9. 忽视当前一刹那的人，等于虚掷了他所有的一切。-富兰克林(美国)14. 使用双手的是劳工，使用双手和头脑的舵手，使用双手头脑与心灵的是艺术家，只有合作双手头脑心灵再加上双脚的才是推销员。“人”的结构就是相互支撑，“众”人的事业需要每个人的参与。19. 如果你能每天呐喊二十一遍我用不着为这一点小事而烦恼，你会发现，你心里有一种不可思议的力量，试试看，很管用的。7. 当一个小小的心念变成成为行为时，便能成了习惯;从而形成性格，而性格就决定你一生的成败。13. 不要在已成的事业中逗留着!-巴斯德(法国)15. 人只能按照自己的条件去寻找终生伴侣。15. 人只能按照自己的条件去寻找终生伴侣。7. 品味生活，完善人性。存在就是机会，思考才能提高。人需要不断打碎自己，更应该重新组装自己。7. 命运总是不如人愿。但往往是在无数的痛苦中，在重重的矛盾和艰辛中，才是人成熟起来12. 书本也是好老师，活用才能成功。10. 成功的法则极为简单，但简单并不代表容易。20. 人生最痛苦的事情是，人死了，钱没花完。12. 成功的秘诀是努力，所以的第一名都是练出来的。HARDWORK!7. 很多事先天注定，那是“命”;但你可以可以决定怎么面对，那是“运”!4. 信念的力量在于即使身处逆境，亦能帮助你鼓起前进的船帆;信念的魅力在于即使遇到险运，亦能召唤你鼓起生活的勇气;信念的伟大在于即使遭遇不幸，亦能促使你保持崇高的心灵。1. 人格的完善是本，财富的确立是末。15、夫妇一条心，泥土变黄金。9. 品格如同树木，名誉如同树阴，有什么时候样的树就在什么样的树阴。9、两粒种一子，一片森林。15、夫妇一条心，泥土变黄金。17. 我相信我没偷过半小时的懒。28、环境不会改变，解决之道在于改变自己。9. 根本不必回头去看咒骂你的人是谁?如果有一条疯狗咬你一口，难道你也要趴下去反咬他一口吗?