生物安全评估及生物安全柜的使用和检测生物安全评估及生物安全柜的使用和检测上海市临床检验中心上海市临床检验中心 葛平葛平www.pptcn.com2 所有操作人员必须经过培训，通过考核，获得上岗证所有操作人员必须经过培训，通过考核，获得上岗证书；书； 在开始相关工作之前，应对所从事的病原微生物及相在开始相关工作之前，应对所从事的病原微生物及相关操作进行危险评估，根据国家对于各种微生物操作的危险关操作进行危险评估，根据国家对于各种微生物操作的危险等级划分和防护要求以及危险评估的结果，制定全面、细致等级划分和防护要求以及危险评估的结果，制定全面、细致的标准操作规程和程序文件，对于关键的危险步骤设计出可的标准操作规程和程序文件，对于关键的危险步骤设计出可行的防护措施并对这些细节了然于胸；行的防护措施并对这些细节了然于胸； 熟悉各级生物安全实验室运行的一般规则，掌握各种熟悉各级生物安全实验室运行的一般规则，掌握各种仪器、设备、装备的操作步骤和要点，对于各种可能的危害仪器、设备、装备的操作步骤和要点，对于各种可能的危害应非常熟悉；应非常熟悉； 应掌握各种感染性物质操作的一般准则和技术要点。应掌握各种感染性物质操作的一般准则和技术要点。生物安全意识至关重要生物安全意识至关重要www.pptcn.com3前言事件：炭疽粉末、SARS、猪链球菌及各地的实验 室感染。投入：各国政府对卫生部门加大投入。实际：实验室相关感染在各地经常发生。www.pptcn.com4相关文件中华人民共和国传染病防治法（中华人民共和国传染病防治法（20042004）病原微生物实验室生物安全管理条例病原微生物实验室生物安全管理条例（20042004年年1111日国务院第日国务院第6969次常务次常务会议通过）会议通过）可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定（0505年年1212月月2828日卫生部令第日卫生部令第4545号发布号发布 ）医疗废物管理条例（医疗废物管理条例（国务院第国务院第380380号，号，20032003）人间传染的病原微生物名录（人间传染的病原微生物名录（中华人民共和国卫生部令第中华人民共和国卫生部令第4545号号）实验室生物安全通用要求实验室生物安全通用要求(GB19489-2008)(GB19489-2008)生物安全实验室建筑技术规范生物安全实验室建筑技术规范(GB50345-2004)(GB50345-2004)微生物和生物医学实验室生物安全通用准则微生物和生物医学实验室生物安全通用准则(WS233-2002)(WS233-2002)IIII级生物安全柜美国级生物安全柜美国/ /国际标准国际标准(NSF/ANS145-2002),(NSF/ANS145-2002),WHOWHO生物安全手册生物安全手册, ,第三版第三版.2004.2004.上海市一、二级病原微生物实验室生物安全管理规范（上海市一、二级病原微生物实验室生物安全管理规范（上海市卫生局上海市卫生局沪卫科教沪卫科教200620063434号号 ）www.pptcn.com5WHO生物安全手册生物安全手册Laboratory Biosafety Manual1st edition1983199320032004www.pptcn.com6实验室布局危险度评估 生物安全柜的检测生物安全柜的使用www.pptcn.com7BSL-2实验室布局www.pptcn.com8www.pptcn.com9上海市一、二级病原微生物实验室生物安全管理规范第二节 设施设备第三十四条 二级病原微生物实验室的设施设备要求（一）可设在共用建筑内，但应相对独立，设可自动关闭的带锁的门。（二）实验时门应呈关闭状态，在实验结束后实验室应呈锁闭状态。实验室的门或墙上应有可视窗。（三）在室内应配备生物安全柜，生物安全柜的型号应根据实验的项目和对象确定。生物安全柜应放在气流流动少，人员走动少，离出口处较远的位置，周围留有一定的空间。（四）当对可能产生气溶胶的感染性材料样本的操作无法在生物安全柜内进行而必须采取外部操作时，应加装负压罩。www.pptcn.com10（五）在所在的区域内应配备高压蒸汽灭菌器，并按期检查和验证，作好记录，确保消毒效果和使用安全。高压蒸汽灭菌器的安全、计量鉴（检）定和管理应符合国家压力容器管理的有关规定，使用人员应作好使用记录。（六）在室内应设有洗眼装置，必要时应设紧急喷淋。（七）应保障实验室的通风和换气，可采用自然通风，如采用机械通风，应保证有不少于每小时3-4次的通风换气次数。（九）在门口应有二级生物安全防护水平实验室标识。www.pptcn.com11www.pptcn.com12微生物危险度评估 www.pptcn.com133 3 3 3 风险评估及风险控制风险评估及风险控制风险评估及风险控制风险评估及风险控制3.1 3.1 3.1 3.1 实验室应实验室应实验室应实验室应建立并维持风险评估建立并维持风险评估建立并维持风险评估建立并维持风险评估和风险控制程序，以和风险控制程序，以和风险控制程序，以和风险控制程序，以持续进行持续进行持续进行持续进行危危危危险识别、风险评估和实施必要的控制措施。险识别、风险评估和实施必要的控制措施。险识别、风险评估和实施必要的控制措施。险识别、风险评估和实施必要的控制措施。3.1.2 3.1.2 3.1.2 3.1.2 应事先对所有应事先对所有应事先对所有应事先对所有拟从事活动的风险进行评估拟从事活动的风险进行评估拟从事活动的风险进行评估拟从事活动的风险进行评估，包括对化学、物，包括对化学、物，包括对化学、物，包括对化学、物理、辐射、电气、水灾、火灾、自然灾害等的风险进行评估。理、辐射、电气、水灾、火灾、自然灾害等的风险进行评估。理、辐射、电气、水灾、火灾、自然灾害等的风险进行评估。理、辐射、电气、水灾、火灾、自然灾害等的风险进行评估。3.1.3 3.1.3 3.1.3 3.1.3 风风风风险险险险评评评评估估估估应应应应由由由由具具具具有有有有经经经经验验验验的的的的专专专专业业业业人人人人员员员员（不不不不限限限限于于于于本本本本机机机机构构构构内内内内部部部部的的的的人人人人员）进行。员）进行。员）进行。员）进行。中华人民共和国国家标准（中华人民共和国国家标准（GB19489-2008）实验室生物安全通用要求实验室生物安全通用要求www.pptcn.com14病原微生物实验室生物安全管理条例第第四四条条 国国家家对对病病原原微微生生物物实实行行分分类类管管理理，对对实实验验室室实行分级管理。实行分级管理。 第第五五条条 国国家家实实行行统统一一的的实实验验室室生生物物安安全全标标准准。实实验验室应当符合国家标准和要求。室应当符合国家标准和要求。 第第二二十十一一条条 一一级级、二二级级实实验验室室不不得得从从事事高高致致病病性性病病原微生物实验活动。原微生物实验活动。www.pptcn.com15 第八条第八条第八条第八条 人间传染的病原微生物名录由国务人间传染的病原微生物名录由国务人间传染的病原微生物名录由国务人间传染的病原微生物名录由国务院卫生主管部门商国务院有关部门后制定、调整院卫生主管部门商国务院有关部门后制定、调整院卫生主管部门商国务院有关部门后制定、调整院卫生主管部门商国务院有关部门后制定、调整并予以公布；动物间传染的病原微生物名录由国并予以公布；动物间传染的病原微生物名录由国并予以公布；动物间传染的病原微生物名录由国并予以公布；动物间传染的病原微生物名录由国务院兽医主管部门商国务院有关部门后制定、调务院兽医主管部门商国务院有关部门后制定、调务院兽医主管部门商国务院有关部门后制定、调务院兽医主管部门商国务院有关部门后制定、调整并予以公布。整并予以公布。整并予以公布。整并予以公布。 病原微生物实验室生物安全管理条例病原微生物实验室生物安全管理条例www.pptcn.com16一. 危害程度评估的要素（一）危害程度分类（一）危害程度分类（一）危害程度分类（一）危害程度分类（二）病原微生物背景资料（二）病原微生物背景资料（二）病原微生物背景资料（二）病原微生物背景资料（三）拟从事实验活动的危险分析（三）拟从事实验活动的危险分析（三）拟从事实验活动的危险分析（三）拟从事实验活动的危险分析（四）评估结论（四）评估结论（四）评估结论（四）评估结论www.pptcn.com17（一）病原微生物危害程度分类www.pptcn.com18病原微生物实验室生物安全管理条例病原微生物实验室生物安全管理条例第第第第七七七七条条条条 国国国国家家家家根根根根据据据据病病病病原原原原微微微微生生生生物物物物的的的的传传传传染染染染性性性性、感感感感染染染染后后后后对对对对个个个个体体体体或或或或者者者者群体的危害程度，将病原微生物分为四类：群体的危害程度，将病原微生物分为四类：群体的危害程度，将病原微生物分为四类：群体的危害程度，将病原微生物分为四类： 第第第第一一一一类类类类病病病病原原原原微微微微生生生生物物物物，是是是是指指指指能能能能够够够够引引引引起起起起人人人人类类类类或或或或者者者者动动动动物物物物非非非非常常常常严严严严重重重重疾疾疾疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。 第第第第二二二二类类类类病病病病原原原原微微微微生生生生物物物物，是是是是指指指指能能能能够够够够引引引引起起起起人人人人类类类类或或或或者者者者动动动动物物物物严严严严重重重重疾疾疾疾病病病病，比比比比较较较较容容容容易易易易直直直直接接接接或或或或者者者者间间间间接接接接在在在在人人人人与与与与人人人人、动动动动物物物物与与与与人人人人、动动动动物物物物与与与与动动动动物物物物间间间间传播的微生物。传播的微生物。传播的微生物。传播的微生物。 第第第第三三三三类类类类病病病病原原原原微微微微生生生生物物物物，是是是是指指指指能能能能够够够够引引引引起起起起人人人人类类类类或或或或者者者者动动动动物物物物疾疾疾疾病病病病，但但但但一一一一般般般般情情情情况况况况下下下下对对对对人人人人、动动动动物物物物或或或或者者者者环环环环境境境境不不不不构构构构成成成成严严严严重重重重危危危危害害害害，传传传传播播播播风风风风险险险险有有有有限限限限，实实实实验验验验室室室室感感感感染染染染后后后后很很很很少少少少引引引引起起起起严严严严重重重重疾疾疾疾病病病病，并并并并且且且且具具具具备备备备有有有有效效效效治治治治疗疗疗疗和和和和预防措施的微生物。预防措施的微生物。预防措施的微生物。预防措施的微生物。 第第第第四四四四类类类类病病病病原原原原微微微微生生生生物物物物，是是是是指指指指在在在在通通通通常常常常情情情情况况况况下下下下不不不不会会会会引引引引起起起起人人人人类类类类或或或或者者者者动动动动物疾病的微生物。物疾病的微生物。物疾病的微生物。物疾病的微生物。 第一类、第二类病原微生物统称为第一类、第二类病原微生物统称为第一类、第二类病原微生物统称为第一类、第二类病原微生物统称为高致病性病原微生物。高致病性病原微生物。高致病性病原微生物。高致病性病原微生物。 www.pptcn.com19病病原原微微生生物物实实验验室室生生物物安全管理条例安全管理条例实实验验室室生生物物安安全全通通用用要要求求（GB19489-2004）WHO生生物物安安全全手手册册（第三版，（第三版，2004）四四类类：在在通通常常情情况况下下不不会会引引起起人人类类或或者者动动物物疾疾病病的的微生物。微生物。1级级：（低低个个体体危危害害，低低群群体体危危害害）不不会会导导致致健健康康工工作作者者和和动动物物致致病病的的细细菌菌、真真菌菌、病毒和寄生虫等生物因子。病毒和寄生虫等生物因子。1级级：（无无或或极极低低的的个个体体和和群群体体危危险险）不不太太可可能能引引起起人人或动物致病的微生物。或动物致病的微生物。三三类类：能能够够引引起起人人类类或或者者动动物物疾疾病病，但但一一般般情情况况下下对对人人、动动物物或或者者环环境境不不构构成成严严重重危危害害，传传播播风风险险有有限限，实实验验室室感感染染后后很很少少引引起起严严重重疾疾病病，并并且且具具备备有有效效治治疗疗和和预预防防措措施施的的微微生生物。物。2级级：(中中等等个个体体危危害害，有有限限群群体体危危害害)能能引引起起人人或或动动物物发发病病，但但一一般般情情况况下下对对健健康康工工作作者者、群群体体、家家畜畜或或环环境境不不会会引引起起严严重重危危害害的的病病原原微微生生物物。实实验验室室感感染染不不导导致致严严重重疾疾病病，具具备备有有效效治治疗疗和和预预防防措施，并且传播风险有限。措施，并且传播风险有限。2级级：（个个体体危危险险中中等等，群群体体危危险险低低）病病原原微微生生物物能能够够对对人人或或动动物物致致病病，但但对对实实验验室室工工作作人人员员、社社区区、牲牲畜畜或或环环境境不不易易导导致致严严重重危危害害。实实验验室室暴暴露露也也许许会会引引起起严严重重感感染染，但但对对感感染染有有有有效效的的预预防防和和治治疗疗措措施施，并并且且疾疾病病传传播播的危险有限。的危险有限。www.pptcn.com20病病原原微微生生物物实实验验室室生生物安全管理条例物安全管理条例实实验验室室生生物物安安全全通通用用要要求求（GB19489-2004）WHO生生物物安安全全手手册册（第三版，（第三版，2004）二二类类：能能够够引引起起人人类类或或者者动动物物严严重重疾疾病病，比比较较容容易易直直接接或或者者间间接接在在人人与与人人、动动物物与与人人、动动物物与动物间传播的微生物。与动物间传播的微生物。3级级：（高高个个体体危危害害，低低群群体体危危害害）能能引引起起人人类类或或动动物物严严重重疾疾病病，或或造造成成严严重重经经济济损损失失，但但通通常常不不能能因因偶偶然然接接触触而而在在个个体体间间传传播播，或或能能使使用用抗抗生生素素、抗抗寄寄生生虫虫药药治治疗疗的的病原微生物。病原微生物。3级级：（个个体体危危险险高高，群群体体危危险险低低）病病原原微微生生物物通通常常能能引引起起人人或或动动物物的的严严重重疾疾病病，但但一一般般不不会会发发生生感感染染个个体体向向其其他他个个体体的的传传播播，并并且且对对感感染有有效的预防和治疗措施。染有有效的预防和治疗措施。一一类类：能能够够引引起起人人类类或或者者动动物物非非常常严严重重疾疾病病的的微微生生物物，以以及及我我国国尚尚未未发发现现或或者者已已经经宣宣布布消消灭灭的微生物。的微生物。4级级：(高高个个体体危危害害，高高群群体体危危害害)能能引引起起人人类类或或动动物物非非常常严严重重的的疾疾病病，一一般般不不能能治治愈愈，容容易易直直接接或或间间接接或或因因偶偶然然接接触触在在人人与与人人，或或动动物物与与人人，或或人人与与动动物物，或或动动物物与与动动物物间传播的病原微生物。间传播的病原微生物。4级级：（个个体体和和群群体体的的危危险险均均高高）病病原原微微生生物物通通常常能能引引起起人人或或动动物物的的严严重重疾疾病病，并并且且很很容容易易发发生生个个体体之之间间的的直直接接或或间间接接传传播播，对对感感染染一一般般没没有有有有效效的的预预防防和和治治疗疗措措施。施。www.pptcn.com21涉及病原微生物 法定报告传染病所涉及的病原微生物法定报告传染病所涉及的病原微生物 法定报告传染病以外常见传染病病原微生物法定报告传染病以外常见传染病病原微生物 国外新发现和已消灭传染病病原微生物国外新发现和已消灭传染病病原微生物 病毒病毒病毒病毒 细菌细菌细菌细菌 放线菌放线菌放线菌放线菌 衣原体衣原体衣原体衣原体 支原体支原体支原体支原体 立克次体立克次体立克次体立克次体 螺旋体螺旋体螺旋体螺旋体 真菌真菌真菌真菌 www.pptcn.com22临床检验相关生物危险等级分布www.pptcn.com23名录有关说明国国外外新新发发现现（我我国国尚尚未未发发现现）传传染染病病病病原原体体的的操操作作级级别别完完全按照国外同类标准全按照国外同类标准非非法法定定传传染染病病病病原原微微生生物物的的操操作作级级别别主主要要参参照照国国际际相相关关标标准准本本规规定定中中所所涉涉及及病病毒毒的的操操作作级级别别主主要要指指野野生生型型病病原原微微生生物物，重组体另加说明重组体另加说明www.pptcn.com24名录名录有关说明有关说明根据国内的实际情况，有些病原体的防护标准低于国外根据国内的实际情况，有些病原体的防护标准低于国外根据国内的实际情况，有些病原体的防护标准低于国外根据国内的实际情况，有些病原体的防护标准低于国外病原体病原体病原体病原体国内国内国内国内国外国外国外国外乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒BSL-2BSL-2BSL-3BSL-3丙型肝炎病毒丙型肝炎病毒丙型肝炎病毒丙型肝炎病毒BSL-2BSL-2BSL-3BSL-3肾综合征出血热病毒肾综合征出血热病毒肾综合征出血热病毒肾综合征出血热病毒BSL-2BSL-2BSL-3BSL-3乙型脑炎病毒乙型脑炎病毒乙型脑炎病毒乙型脑炎病毒BSL-2BSL-2BSL-3BSL-3登革病毒登革病毒登革病毒登革病毒BSL-2BSL-2BSL-3BSL-3戊型肝炎病毒戊型肝炎病毒戊型肝炎病毒戊型肝炎病毒BSL-2BSL-2BSL-3BSL-3www.pptcn.com25www.pptcn.com26www.pptcn.com27 病病病病毒毒毒毒培培培培养养养养：指指指指病病病病毒毒毒毒的的的的分分分分离离离离、培培培培养养养养、滴滴滴滴定定定定、中中中中和和和和试试试试验验验验、活活活活病病病病毒毒毒毒及及及及其其其其蛋蛋蛋蛋白白白白纯纯纯纯化化化化、病病病病毒毒毒毒冻冻冻冻干干干干以以以以及及及及产产产产生生生生活活活活病病病病毒毒毒毒的的的的重重重重组组组组试试试试验验验验等等等等操操操操作作作作。利利利利用用用用活活活活病病病病毒毒毒毒或或或或其其其其感感感感染染染染细细细细胞胞胞胞（或或或或细细细细胞胞胞胞提提提提取取取取物物物物），不不不不经经经经灭灭灭灭活活活活进进进进行行行行的的的的生生生生化化化化分分分分析析析析、血血血血清清清清学学学学检检检检测测测测、免免免免疫疫疫疫学学学学检检检检测测测测等等等等操操操操作作作作视视视视同同同同病病病病毒毒毒毒培培培培养养养养。使使使使用用用用病病病病毒毒毒毒培培培培养养养养物物物物提提提提取取取取核核核核酸酸酸酸，裂裂裂裂解解解解剂剂剂剂或或或或灭灭灭灭活活活活剂剂剂剂的的的的加加加加入入入入必必必必须须须须在在在在与与与与病病病病毒毒毒毒培培培培养养养养等等等等同同同同级级级级别别别别的的的的实实实实验验验验室室室室和和和和防防防防护护护护条条条条件件件件下下下下进进进进行行行行，裂裂裂裂解解解解剂剂剂剂或或或或灭灭灭灭活活活活剂剂剂剂加加加加入入入入后后后后可可可可比比比比照照照照未未未未经经经经培培培培养养养养的的的的感感感感染染染染性性性性材材材材料的防护等级进行操作。料的防护等级进行操作。料的防护等级进行操作。料的防护等级进行操作。 动物感染实验动物感染实验动物感染实验动物感染实验：指以活病原微生物感染动物的实验。：指以活病原微生物感染动物的实验。：指以活病原微生物感染动物的实验。：指以活病原微生物感染动物的实验。名录名录有关说明有关说明www.pptcn.com28 未未未未经经经经培培培培养养养养的的的的感感感感染染染染性性性性材材材材料料料料的的的的操操操操作作作作：指指指指未未未未经经经经培培培培养养养养的的的的感感感感染染染染性性性性材材材材料料料料在在在在采采采采用用用用可可可可靠靠靠靠的的的的方方方方法法法法灭灭灭灭活活活活前前前前进进进进行行行行的的的的病病病病毒毒毒毒抗抗抗抗原原原原检检检检测测测测、血血血血清清清清学学学学检测、核酸检测、生化分析等操作。检测、核酸检测、生化分析等操作。检测、核酸检测、生化分析等操作。检测、核酸检测、生化分析等操作。 灭灭灭灭活活活活材材材材料料料料的的的的操操操操作作作作：指指指指感感感感染染染染性性性性材材材材料料料料或或或或活活活活病病病病毒毒毒毒在在在在采采采采用用用用可可可可靠靠靠靠的的的的方方方方法法法法灭灭灭灭活活活活后后后后进进进进行行行行的的的的病病病病毒毒毒毒抗抗抗抗原原原原检检检检测测测测、血血血血清清清清学学学学检检检检测测测测、核核核核酸酸酸酸检检检检测测测测、生化分析、分子生物学实验等不含致病性活病毒的操作。生化分析、分子生物学实验等不含致病性活病毒的操作。生化分析、分子生物学实验等不含致病性活病毒的操作。生化分析、分子生物学实验等不含致病性活病毒的操作。 无无无无感感感感染染染染性性性性材材材材料料料料的的的的操操操操作作作作：指指指指针针针针对对对对确确确确认认认认无无无无感感感感染染染染性性性性的的的的材材材材料料料料的的的的各各各各种操作，包括但不限于无感染性的病毒种操作，包括但不限于无感染性的病毒种操作，包括但不限于无感染性的病毒种操作，包括但不限于无感染性的病毒DNADNA或或或或cDNAcDNA操作。操作。操作。操作。www.pptcn.com29 在在在在保保保保证证证证安安安安全全全全的的的的前前前前提提提提下下下下，对对对对临临临临床床床床和和和和现现现现场场场场的的的的未未未未知知知知样样样样本本本本检检检检测测测测操操操操作作作作可可可可在在在在BSL-2BSL-2或或或或以以以以上上上上防防防防护护护护级级级级别别别别的的的的实实实实验验验验室室室室进进进进行行行行，涉涉涉涉及及及及病病病病毒毒毒毒分分分分离离离离培培培培养养养养的的的的操操操操作作作作，应应应应加加加加强强强强个个个个体体体体防防防防护护护护和和和和环环环环境境境境保保保保护护护护。要要要要密密密密切切切切注注注注意意意意流流流流行行行行病病病病学学学学动动动动态态态态和和和和临临临临床床床床表表表表现现现现，判判判判断断断断是是是是否否否否存存存存在在在在高高高高致致致致病病病病性性性性病病病病原原原原体体体体，若若若若判判判判定定定定为为为为疑疑疑疑似似似似高高高高致致致致病病病病性性性性病病病病原原原原体体体体，应应应应在在在在相相相相应应应应生生生生物物物物安安安安全全全全级级级级别的实验室开展工作。别的实验室开展工作。别的实验室开展工作。别的实验室开展工作。对未知样本的操作对未知样本的操作www.pptcn.com30 大大大大量量量量活活活活菌菌菌菌操操操操作作作作：实实实实验验验验操操操操作作作作涉涉涉涉及及及及“ “大大大大量量量量” ”病病病病原原原原菌菌菌菌的的的的制制制制备备备备，或或或或易易易易产产产产生生生生气气气气溶溶溶溶胶胶胶胶的的的的实实实实验验验验操操操操作作作作（如如如如病病病病原原原原菌菌菌菌离离离离心心心心、冻冻冻冻干干干干等等等等）。“ “大大大大量量量量” ”的的的的病病病病原原原原菌菌菌菌制制制制备备备备，是是是是指指指指病病病病原原原原菌菌菌菌的的的的体体体体积积积积或或或或浓浓浓浓度度度度，大大大大大大大大超超超超过过过过了了了了常常常常规规规规检检检检测测测测所所所所需需需需要要要要的的的的量量量量。比比比比如如如如在在在在大大大大规规规规模模模模发发发发酵酵酵酵、抗抗抗抗原原原原和和和和疫疫疫疫苗苗苗苗生生生生产产产产，病病病病原原原原菌菌菌菌进进进进一一一一步步步步鉴鉴鉴鉴定定定定以以以以及及及及科科科科研研研研活活活活动动动动中中中中，病病病病原菌增殖和原菌增殖和原菌增殖和原菌增殖和浓缩浓缩浓缩浓缩所需要处理的剂量。所需要处理的剂量。所需要处理的剂量。所需要处理的剂量。 样样样样本本本本检检检检测测测测：包包包包括括括括样样样样本本本本的的的的病病病病原原原原菌菌菌菌分分分分离离离离纯纯纯纯化化化化、药药药药物物物物敏敏敏敏感感感感性性性性实实实实验验验验、生生生生化化化化鉴鉴鉴鉴定定定定、免免免免疫疫疫疫学学学学实实实实验验验验、PCRPCR核核核核酸酸酸酸提提提提取取取取、涂涂涂涂片片片片、显显显显微观察等初步检测活动。微观察等初步检测活动。微观察等初步检测活动。微观察等初步检测活动。 霍霍霍霍乱乱乱乱弧弧弧弧菌菌菌菌：因因因因属属属属甲甲甲甲类类类类传传传传染染染染病病病病，流流流流行行行行株株株株按按按按第第第第二二二二类类类类管管管管理理理理，涉涉涉涉及及及及大大大大量量量量活活活活菌菌菌菌培培培培养养养养等等等等工工工工作作作作可可可可在在在在BSL-2BSL-2实实实实验验验验室室室室进进进进行行行行；非非非非流流流流行行行行株归第三类。株归第三类。株归第三类。株归第三类。有关细菌、真菌实验活动的说明有关细菌、真菌实验活动的说明www.pptcn.com31 本本本本表表表表未未未未列列列列出出出出之之之之病病病病毒毒毒毒和和和和实实实实验验验验活活活活动动动动，由由由由各各各各单单单单位位位位的的的的生生生生物物物物安安安安全全全全委委委委员员员员会会会会负负负负责责责责危危危危害害害害程程程程度度度度评评评评估估估估，确确确确定定定定相相相相应应应应的的的的生生生生物物物物安安安安全全全全防防防防护护护护级级级级别别别别。如如如如涉涉涉涉及及及及高高高高致致致致病病病病性性性性病病病病毒毒毒毒及及及及其其其其相相相相关关关关实实实实验验验验的的的的应应应应经经经经国国国国家病原微生物实验室生物安全专家委员会论证。家病原微生物实验室生物安全专家委员会论证。家病原微生物实验室生物安全专家委员会论证。家病原微生物实验室生物安全专家委员会论证。未列出的病原微生物未列出的病原微生物www.pptcn.com32 在在在在卫卫卫卫生生生生部部部部发发发发布布布布有有有有关关关关的的的的管管管管理理理理规规规规定定定定之之之之前前前前，对对对对于于于于人人人人类类类类病病病病毒毒毒毒的的的的重重重重组组组组体体体体（包包包包括括括括对对对对病病病病毒毒毒毒的的的的基基基基因因因因缺缺缺缺失失失失、插插插插入入入入、突突突突变变变变等等等等修修修修饰饰饰饰以以以以及及及及将将将将病病病病毒毒毒毒作为外源基因的表达载体）暂时遵循以下原则：作为外源基因的表达载体）暂时遵循以下原则：作为外源基因的表达载体）暂时遵循以下原则：作为外源基因的表达载体）暂时遵循以下原则：（1 1）严禁严禁严禁严禁两个不同病原体之间两个不同病原体之间两个不同病原体之间两个不同病原体之间进行完整基因组的重组进行完整基因组的重组进行完整基因组的重组进行完整基因组的重组；（2 2）对对对对于于于于对对对对人人人人类类类类致致致致病病病病的的的的病病病病毒毒毒毒，如如如如存存存存在在在在疫疫疫疫苗苗苗苗株株株株，只只只只允允允允许许许许用用用用疫疫疫疫苗苗苗苗株株株株为为为为外外外外源源源源基基基基因因因因表表表表达达达达载载载载体体体体，如如如如脊脊脊脊髓髓髓髓灰灰灰灰质质质质炎炎炎炎病病病病毒毒毒毒、麻麻麻麻疹疹疹疹病病病病毒毒毒毒、乙乙乙乙型型型型脑炎病毒等；脑炎病毒等；脑炎病毒等；脑炎病毒等；（3 3）对对对对于于于于一一一一般般般般情情情情况况况况下下下下即即即即具具具具有有有有复复复复制制制制能能能能力力力力的的的的重重重重组组组组活活活活病病病病毒毒毒毒，其其其其操操操操作作作作时时时时的的的的防防防防护护护护条条条条件件件件应应应应不不不不低低低低于于于于其其其其母母母母本本本本病病病病毒毒毒毒；对对对对于于于于条条条条件件件件复复复复制制制制型型型型或或或或复复复复制制制制缺缺缺缺陷陷陷陷型型型型病病病病毒毒毒毒可可可可降降降降低低低低防防防防护护护护条条条条件件件件，但但但但不不不不得得得得低低低低于于于于BSL-2BSL-2的的的的防防防防护护护护条条条条件件件件，例例例例如如如如来来来来源源源源于于于于HIVHIV的的的的慢慢慢慢病病病病毒毒毒毒载载载载体体体体，为为为为双双双双基基基基因因因因缺缺缺缺失失失失载载载载体体体体，可可可可在在在在BSL-2BSL-2实验室操作；实验室操作；实验室操作；实验室操作；使用人类病原微生物的重组体使用人类病原微生物的重组体www.pptcn.com33（4 4）对对对对于于于于病病病病毒毒毒毒作作作作为为为为表表表表达达达达载载载载体体体体，其其其其防防防防护护护护水水水水平平平平总总总总体体体体上上上上应应应应根根根根据据据据其其其其母母母母本本本本病病病病毒毒毒毒的的的的危危危危害害害害等等等等级级级级及及及及防防防防护护护护要要要要求求求求进进进进行行行行操操操操作作作作，但但但但是是是是将将将将高高高高致致致致病病病病性性性性病病病病毒毒毒毒的的的的基基基基因因因因重重重重组组组组入入入入具具具具有有有有复复复复制制制制能能能能力力力力的的的的同同同同科科科科低低低低致致致致病病病病性性性性病病病病毒毒毒毒载载载载体体体体时时时时，原原原原则则则则上上上上应应应应根根根根据据据据高高高高致致致致病病病病性性性性病病病病原原原原体体体体的的的的危危危危害害害害等等等等级级级级和和和和防防防防护护护护条条条条件件件件进进进进行行行行操操操操作作作作，在证明重组体无危害后，可视情降低防护等级；，在证明重组体无危害后，可视情降低防护等级；，在证明重组体无危害后，可视情降低防护等级；，在证明重组体无危害后，可视情降低防护等级；（5 5）对对对对于于于于复复复复制制制制型型型型重重重重组组组组病病病病毒毒毒毒的的的的制制制制作作作作事事事事先先先先要要要要进进进进行行行行危危危危险险险险性性性性评评评评估估估估，并并并并得得得得到到到到所所所所在在在在单单单单位位位位生生生生物物物物安安安安全全全全委委委委员员员员会会会会批批批批准准准准。对对对对于于于于高高高高致致致致病病病病性性性性病病病病原原原原体体体体重重重重组组组组体体体体或或或或有有有有可可可可能能能能制制制制造造造造出出出出高高高高致致致致病病病病性性性性病病病病原原原原体体体体的的的的操操操操作作作作应应应应经经经经国国国国家家家家病病病病原原原原微生物实验室生物安全专家委员会论证。微生物实验室生物安全专家委员会论证。微生物实验室生物安全专家委员会论证。微生物实验室生物安全专家委员会论证。www.pptcn.com34 国国国国家家家家正正正正式式式式批批批批准准准准的的的的生生生生物物物物制制制制品品品品疫疫疫疫苗苗苗苗生生生生产产产产用用用用减毒、弱毒毒种的分类地位另行规定。减毒、弱毒毒种的分类地位另行规定。减毒、弱毒毒种的分类地位另行规定。减毒、弱毒毒种的分类地位另行规定。 生物制品用菌毒种生物制品用菌毒种www.pptcn.com35（二）病原微生物的背景资料1.病原微生物的致病性和感染数量病原微生物的致病性和感染数量病原微生物的致病性和感染数量病原微生物的致病性和感染数量2.暴露的潜在后果暴露的潜在后果暴露的潜在后果暴露的潜在后果3.自然传播途径自然传播途径自然传播途径自然传播途径4.病原微生物在环境中的稳定性病原微生物在环境中的稳定性病原微生物在环境中的稳定性病原微生物在环境中的稳定性5.病原微生物的宿主病原微生物的宿主病原微生物的宿主病原微生物的宿主6.从动物研究和实验室感染报告或临床报告从动物研究和实验室感染报告或临床报告从动物研究和实验室感染报告或临床报告从动物研究和实验室感染报告或临床报告中得到的信息中得到的信息中得到的信息中得到的信息7.当地是否能进行有效的预防或治疗当地是否能进行有效的预防或治疗当地是否能进行有效的预防或治疗当地是否能进行有效的预防或治疗www.pptcn.com36 不不不不同同同同病病病病原原原原微微微微生生生生物物物物的的的的致致致致病病病病力力力力强强强强弱弱弱弱不不不不同同同同，即即即即使使使使同同同同类类类类病病病病原原原原微微微微生生生生物物物物不不不不同同同同菌菌菌菌、毒毒毒毒株株株株也也也也还还还还可可可可以以以以有有有有不不不不同同同同强强强强度度度度的的的的致致致致病病病病力。力。力。力。高高高高致致致致病病病病性性性性病病病病原原原原微微微微生生生生物物物物低低低低感感感感染染染染剂剂剂剂量量量量就就就就可可可可导导导导致致致致发发发发病病病病，同同同同一一一一微微微微生生生生物物物物感感感感染染染染数数数数量量量量越越越越大大大大，其其其其暴暴暴暴露露露露的的的的潜潜潜潜在在在在后后后后果果果果也也也也越越越越严重。严重。严重。严重。微微微微生生生生物物物物对对对对感感感感染染染染个个个个体体体体的的的的致致致致病病病病性性性性与与与与被被被被感感感感染染染染者者者者的的的的体体体体质质质质、免疫状态以及对该病原微生物的易感性有关。免疫状态以及对该病原微生物的易感性有关。免疫状态以及对该病原微生物的易感性有关。免疫状态以及对该病原微生物的易感性有关。1.病原微生物的致病性和感染数量病原微生物的致病性和感染数量www.pptcn.com37 暴暴露露以以后后，后后果果的的轻轻重重取取决决于于病病原原微微生生物物的的致致病病力力和和机机体体的的抵抵抗抗力力，不不同同属属、种种、亚亚种种、型型的的病病原原微微生生物物，甚甚至至不不同同株株的的病原微生物，其致病性各异。病原微生物，其致病性各异。还还取取决决于于所所感感染染病病原原微微生生物物的的数数量量，当当大大量量病病原原微微生生物物侵侵袭袭人人体体时时，潜潜伏伏期期一一般般较较短短，而而病病情情则则较较为为严严重重；反反之之，则则潜潜伏伏期较长而病情较轻，或不发病。期较长而病情较轻，或不发病。不不同同个个体体被被传传染染后后，可可产产生生各各种种不不同同的的结结局局，最最轻轻的的不不出出现现任任何何症症状状、最最重重的的发发生生严严重重型型临临床床疾疾病病而而死死亡亡。对对暴暴露露的的潜潜在在后后果果评评估估，应应参参考考教教科科书书并并收收集集相相关关资资料料，突突出出个个体体传传染染过过程程与结局。与结局。- - - - 隐性感染或不显性感染或亚临床感染隐性感染或不显性感染或亚临床感染隐性感染或不显性感染或亚临床感染隐性感染或不显性感染或亚临床感染- - - - 显性感染或临床传染病显性感染或临床传染病显性感染或临床传染病显性感染或临床传染病- - - - 是否出现个体最严重的结局，发生严重临床传染病而死亡是否出现个体最严重的结局，发生严重临床传染病而死亡是否出现个体最严重的结局，发生严重临床传染病而死亡是否出现个体最严重的结局，发生严重临床传染病而死亡- - - - 是否出现个体间的传播是否出现个体间的传播是否出现个体间的传播是否出现个体间的传播 2.暴露的潜在后果暴露的潜在后果www.pptcn.com38 病病原原微微生生物物可可通通过过空空气气、水水、食食物物、接接触触、血血液液、母母婴婴、虫媒、土壤等途径传播。虫媒、土壤等途径传播。每每一一种种传传染染病病的的传传播播途途径径不不一一定定相相同同，同同一一种种传传染染病病在在各各个个具具体体病病例例中中的的传传播播途途径径也也可可以以不不同同，同同一一种种病病原原微微生生物也可以有一种以上的传播途径。物也可以有一种以上的传播途径。通通过过呼呼吸吸道道传传播播的的病病原原微微生生物物容容易易引引起起不不同同的的感感染染性性疾疾病。因此，气溶胶是引起实验室感染的最重要因素。病。因此，气溶胶是引起实验室感染的最重要因素。3.自然传播途径自然传播途径www.pptcn.com39 病病病病原原原原微微微微生生生生物物物物的的的的稳稳稳稳定定定定性性性性是是是是指指指指其其其其抵抵抵抵抗抗抗抗外外外外界界界界环环环环境境境境的的的的存存存存活活活活能能能能力力力力。病病病病原原原原微微微微生生生生物物物物为为为为了了了了维维维维持持持持其其其其种种种种系系系系的的的的生生生生存存存存，可可可可凭凭凭凭借借借借其其其其自自自自身身身身的的的的结结结结构构构构特点以应对外界不利的环境。特点以应对外界不利的环境。特点以应对外界不利的环境。特点以应对外界不利的环境。 不同的微生物的稳定性不同不同的微生物的稳定性不同不同的微生物的稳定性不同不同的微生物的稳定性不同. . . . 对对对对病病病病原原原原微微微微生生生生物物物物的的的的稳稳稳稳定定定定性性性性评评评评估估估估除除除除考考考考虑虑虑虑其其其其在在在在自自自自然然然然界界界界中中中中的的的的稳稳稳稳定定定定性外，还应考虑其对性外，还应考虑其对性外，还应考虑其对性外，还应考虑其对物理因素与化学消毒剂的敏感性物理因素与化学消毒剂的敏感性物理因素与化学消毒剂的敏感性物理因素与化学消毒剂的敏感性。 4.病原微生物在环境中的稳定性病原微生物在环境中的稳定性www.pptcn.com405. 病原微生物的宿主 应应确确定定拟拟操操作作病病原原微微生生物物的的宿宿主主，同同时时应应注注意意收收集集该该病病原原微微生生物物对对实实验验室室常常用用的的实实验动物的感染性的相关资料。验动物的感染性的相关资料。www.pptcn.com416. 6. 从动物研究和实验室感染报告从动物研究和实验室感染报告或临床报告中得到的或临床报告中得到的信息信息 在在某某些些病病原原微微生生物物或或待待检检样样品品危危害害程程度度相相关关背背景景信信息息量量不不足足时时，应应尽尽可可能能从从病病人人医医学学资资料料、流流行行病病学学资资料料以以及及样样品品来来源源地地收收集集有有用用的的信信息息，同同时时可可以以利利用用动动物物致致病病性性、传染性和传播途径的研究数据获取对危害评估有用的信息。传染性和传播途径的研究数据获取对危害评估有用的信息。www.pptcn.com42 应应应应收收收收集集集集拟拟拟拟操操操操作作作作的的的的病病病病原原原原微微微微生生生生物物物物的的的的相相相相关关关关治治治治疗疗疗疗与与与与预预预预防防防防措措措措施施施施资料，确定资料，确定资料，确定资料，确定: : : :l l是是是是否否否否有有有有有有有有效效效效的的的的抗抗抗抗生生生生素素素素、抗抗抗抗病病病病毒毒毒毒药药药药物物物物、化化化化学学学学药药药药物物物物和和和和抗抗抗抗血血血血清清清清等治疗药物和其他与该疾病有效的治疗措施；等治疗药物和其他与该疾病有效的治疗措施；等治疗药物和其他与该疾病有效的治疗措施；等治疗药物和其他与该疾病有效的治疗措施；l l是否有针对该传染病的疫苗是否有针对该传染病的疫苗是否有针对该传染病的疫苗是否有针对该传染病的疫苗; ; ; ;l l同同同同时时时时应应应应考考考考虑虑虑虑该该该该疾疾疾疾病病病病是是是是否否否否有有有有典典典典型型型型的的的的体体体体征征征征和和和和可可可可靠靠靠靠的的的的诊诊诊诊断断断断试试试试剂剂剂剂，以以以以用用用用于于于于疾疾疾疾病病病病监监监监测测测测，在在在在查查查查出出出出可可可可能能能能感感感感染染染染时时时时能能能能及及及及时时时时进进进进行行行行有有有有效效效效的的的的隔隔隔隔离与预防。离与预防。离与预防。离与预防。l l还还还还应应应应考考考考虑虑虑虑 “当当当当地地地地”是是是是否否否否有有有有条条条条件件件件进进进进行行行行上上上上述述述述有有有有效效效效的的的的预预预预防防防防或或或或治疗。治疗。治疗。治疗。7.当地是否能进行有效的预防或治疗当地是否能进行有效的预防或治疗www.pptcn.com43（三）拟从事实验活动的危险分析1.1.操作所致的非自然途径感染操作所致的非自然途径感染操作所致的非自然途径感染操作所致的非自然途径感染2.2.病原微生物的种类、来源病原微生物的种类、来源病原微生物的种类、来源病原微生物的种类、来源3.3.操作病原微生物的浓度操作病原微生物的浓度操作病原微生物的浓度操作病原微生物的浓度4.4.实验操作实验操作实验操作实验操作5.5.涉及动物的病原微生物实验涉及动物的病原微生物实验涉及动物的病原微生物实验涉及动物的病原微生物实验6.6.工作人员的素质工作人员的素质工作人员的素质工作人员的素质www.pptcn.com44 因实验操作而造成非自然途径感染的机会是很多，例如：因实验操作而造成非自然途径感染的机会是很多，例如：因实验操作而造成非自然途径感染的机会是很多，例如：因实验操作而造成非自然途径感染的机会是很多，例如：l l对对对对感感感感染染染染性性性性材材材材料料料料的的的的清清清清除除除除污污污污染染染染和和和和处处处处理理理理可可可可能能能能导导导导致致致致手手手手污污污污染染染染，微微微微生生生生物物物物操操操操作作作作中中中中释释释释放放放放的的的的较较较较大大大大粒粒粒粒子子子子和和和和液液液液滴滴滴滴（直直直直径径径径大大大大于于于于100m100m100m100m）会会会会迅迅迅迅速速速速沉沉沉沉降降降降到到到到工工工工作作作作台台台台面面面面和和和和操操操操作作作作者者者者的的的的手手手手上上上上，由由由由于于于于手手手手被被被被污污污污染染染染而而而而导导导导致致致致感感感感染染染染性性性性物物物物质质质质的的的的食入或皮肤和眼睛的污染；食入或皮肤和眼睛的污染；食入或皮肤和眼睛的污染；食入或皮肤和眼睛的污染；l l破破破破损损损损玻玻玻玻璃璃璃璃器器器器皿皿皿皿的的的的刺刺刺刺伤伤伤伤，使使使使用用用用注注注注射射射射器器器器操操操操作作作作不不不不当当当当可可可可能能能能扎扎扎扎伤伤伤伤而而而而引引引引起起起起经血液感染经血液感染经血液感染经血液感染；l l血血血血清清清清样样样样本本本本采采采采集集集集时时时时可可可可能能能能喷喷喷喷溅溅溅溅和和和和气气气气溶溶溶溶胶胶胶胶可可可可产产产产生生生生呼呼呼呼吸吸吸吸道道道道感感感感染染染染或或或或误误误误入入入入眼睛而发生眼睛而发生眼睛而发生眼睛而发生粘膜感染粘膜感染粘膜感染粘膜感染；l l进行动物实验时被动物进行动物实验时被动物进行动物实验时被动物进行动物实验时被动物咬伤、抓伤咬伤、抓伤咬伤、抓伤咬伤、抓伤可导致感染。可导致感染。可导致感染。可导致感染。1.操作所致的非自然途径感染操作所致的非自然途径感染www.pptcn.com452. 病原微生物的种类、来源 不同属、种、亚种、型的病原微生物，甚至不同株不同属、种、亚种、型的病原微生物，甚至不同株不同属、种、亚种、型的病原微生物，甚至不同株不同属、种、亚种、型的病原微生物，甚至不同株的病原微生物，其致病性各异，因此进行危害评估时应考虑的病原微生物，其致病性各异，因此进行危害评估时应考虑的病原微生物，其致病性各异，因此进行危害评估时应考虑的病原微生物，其致病性各异，因此进行危害评估时应考虑相关因素。另外还要考虑是否为重组毒株。相关因素。另外还要考虑是否为重组毒株。相关因素。另外还要考虑是否为重组毒株。相关因素。另外还要考虑是否为重组毒株。www.pptcn.com463. 病原微生物的浓度 l l所所所所操操操操作作作作病病病病原原原原微微微微生生生生物物物物的的的的浓浓浓浓度度度度和和和和其其其其可可可可能能能能产产产产生生生生的的的的危危危危害害害害程程程程度度度度密密密密切切切切相相相相关关关关，对对对对病病病病原原原原微微微微生生生生物物物物的的的的操操操操作作作作的的的的危危危危险险险险性性性性通通通通常常常常涉涉涉涉及及及及操操操操作作作作的的的的病病病病原原原原微微微微生生生生物物物物的的的的生生生生长长长长状状状状况况况况以以以以及及及及病病病病原原原原微微微微生生生生物物物物的的的的数数数数量量量量和和和和浓浓浓浓度度度度，样样样样本本本本的的的的类类类类型型型型（纯纯纯纯培培培培养养养养物物物物、固固固固体体体体组组组组织织织织标标标标本本本本、血血血血标标标标本本本本、痰痰痰痰标标标标本本本本等等等等）以以以以及实验操作等因素。及实验操作等因素。及实验操作等因素。及实验操作等因素。l l必必必必须须须须对对对对要要要要进进进进行行行行的的的的实实实实验验验验操操操操作作作作进进进进行行行行评评评评估估估估，选选选选择择择择与与与与危危危危险险险险性性性性适适适适合合合合的操作技术、防扩散仪器和设施。的操作技术、防扩散仪器和设施。的操作技术、防扩散仪器和设施。的操作技术、防扩散仪器和设施。www.pptcn.com47 l l拟进行病原微生物实验的具体实验项目；拟进行病原微生物实验的具体实验项目；拟进行病原微生物实验的具体实验项目；拟进行病原微生物实验的具体实验项目；l l该该该该项项项项目目目目哪哪哪哪些些些些实实实实验验验验步步步步骤骤骤骤可可可可能能能能导导导导致致致致气气气气溶溶溶溶胶胶胶胶产产产产生生生生或或或或对对对对操操操操作作作作者者者者造造造造成危害；成危害；成危害；成危害；l l采采采采用用用用何何何何种种种种预预预预防防防防措措措措施施施施可可可可规规规规避避避避危危危危险险险险。同同同同时时时时应应应应该该该该将将将将该该该该项项项项评评评评估估估估的的的的内内内内容容容容作作作作为为为为制制制制定定定定实实实实验验验验活活活活动动动动标标标标准准准准操操操操作作作作程程程程序序序序（SOPSOP）的的的的重重重重要要要要依依依依据据据据，并并并并尽尽尽尽可可可可能能能能制制制制定定定定与与与与SOPSOP对对对对应应应应的的的的表表表表格格格格化化化化操操操操作作作作原原原原始始始始记记记记录录录录，以以以以保保保保证证证证防范措施能正确实施。防范措施能正确实施。防范措施能正确实施。防范措施能正确实施。 4.拟进行的实验操作拟进行的实验操作www.pptcn.com485. 涉及动物的病原微生物实验l l动动动动物物物物实实实实验验验验室室室室涉涉涉涉及及及及病病病病原原原原微微微微生生生生物物物物，需需需需要要要要考考考考虑虑虑虑的的的的因因因因素素素素包包包包括括括括：正正正正常常常常传传传传播播播播途途途途径径径径，使使使使用用用用的的的的容容容容量量量量和和和和浓浓浓浓度度度度，接接接接种种种种途途途途径径径径，能能能能否否否否和和和和以以以以何何何何种途径被排出。种途径被排出。种途径被排出。种途径被排出。l l关关关关于于于于动动动动物物物物实实实实验验验验室室室室中中中中使使使使用用用用的的的的动动动动物物物物，需需需需要要要要考考考考虑虑虑虑的的的的因因因因素素素素包包包包括括括括：动动动动物物物物的的的的自自自自然然然然特特特特性性性性，亦亦亦亦即即即即动动动动物物物物的的的的攻攻攻攻击击击击性性性性和和和和抓抓抓抓咬咬咬咬倾倾倾倾向向向向性性性性，自自自自然然然然存存存存在在在在的的的的体体体体内内内内外外外外寄寄寄寄生生生生虫虫虫虫，易易易易感感感感的的的的动动动动物物物物疾疾疾疾病病病病，播播播播散散散散过过过过敏敏敏敏原原原原的的的的可可可可能性等。能性等。能性等。能性等。l l对使用野外捕捉的野生动物应考虑潜伏感染的可能性。对使用野外捕捉的野生动物应考虑潜伏感染的可能性。对使用野外捕捉的野生动物应考虑潜伏感染的可能性。对使用野外捕捉的野生动物应考虑潜伏感染的可能性。www.pptcn.com49 l l应应应应对对对对所所所所有有有有涉涉涉涉及及及及病病病病原原原原微微微微生生生生物物物物操操操操作作作作的的的的工工工工作作作作人人人人员员员员的的的的知知知知识识识识背背背背景景景景、工工工工作作作作经经经经验验验验、工工工工作作作作能能能能力力力力、个个个个人人人人心心心心理理理理素素素素质质质质以以以以及及及及健健健健康康康康状状状状态态态态进进进进行行行行评评评评估。估。估。估。l l对对对对实实实实验验验验室室室室管管管管理理理理者者者者还还还还应应应应进进进进行行行行管管管管理理理理能能能能力力力力与与与与处处处处理理理理紧紧紧紧急急急急事事事事故故故故能能能能力力力力的测评。的测评。的测评。的测评。6.工作人员的素质工作人员的素质www.pptcn.com50 (四) 评估结论 评估结论应考虑的要点：评估结论应考虑的要点： 各种实验活动的危害程度及其防护措施；各种实验活动的危害程度及其防护措施； 感染控制与医疗监测方案感染控制与医疗监测方案 应采取的消毒灭菌方案应采取的消毒灭菌方案 www.pptcn.com51得出评估结论主要步骤 1.1.1.1.根据实验的内容与对各实验环节的分析，根据实验的内容与对各实验环节的分析，根据实验的内容与对各实验环节的分析，根据实验的内容与对各实验环节的分析，明确明确明确明确危害来源和危害因素；危害来源和危害因素；危害来源和危害因素；危害来源和危害因素；2.2.2.2.进进进进行行行行固固固固有有有有风风风风险险险险评评评评估估估估，即即即即未未未未采采采采取取取取任任任任何何何何控控控控制制制制措措措措施施施施之之之之前前前前，如如如如果果果果事事事事故故故故发发发发生生生生可可可可能能能能面面面面临临临临的的的的风风风风险险险险，确确确确定定定定危危危危害害害害产产产产生生生生的的的的后后后后果果果果和和和和产产产产生生生生后后后后果果果果的的的的可可可可能能能能性性性性。在在在在评评评评估估估估中中中中后后后后果果果果的的的的严严严严重重重重程程程程度度度度是是是是重重重重要要要要指指指指标标标标，对对对对可可可可能能能能产产产产生生生生灾灾灾灾难难难难性性性性后后后后果果果果的的的的，无无无无论论论论发发发发生生生生频频频频率率率率多多多多低低低低，均均均均视视视视为为为为高高高高度度度度风风风风险险险险。危危危危害害害害发发发发生生生生可可可可能能能能性性性性的的的的高高高高低低低低也也也也应应应应予予予予以以以以重重重重视视视视，一一一一些些些些产产产产生生生生后后后后果果果果不不不不严严严严重重重重但但但但发发发发生生生生几几几几率率率率大大大大的的的的危危危危害害害害，也也也也属属属属于于于于高高高高度度度度风风风风险险险险。对对对对高高高高度度度度风风风风险险险险的的的的需需需需要要要要立立立立即即即即采采采采取取取取行行行行动动动动，对对对对中中中中度度度度风风风风险险险险的的的的必必必必须须须须明明明明确确确确后后后后续续续续处处处处理理理理时时时时各各各各人人人人的的的的职职职职责责责责，对对对对低低低低度度度度风风风风险险险险的的的的采采采采用用用用常常常常规规规规程程程程序处理。序处理。序处理。序处理。3.3.3.3.进进进进行行行行残残残残余余余余风风风风险险险险评评评评估估估估，即即即即采采采采用用用用旨旨旨旨在在在在降降降降低低低低风风风风险险险险的的的的控控控控制制制制措措措措施施施施后后后后仍仍仍仍然然然然存存存存在在在在的的的的风风风风险险险险因因因因素素素素，列列列列出出出出表表表表格格格格上上上上登登登登录录录录的的的的针针针针对对对对每每每每项项项项危危危危险险险险因因因因素素素素的的的的现现现现有有有有控控控控制制制制措措措措施施施施，进进进进行行行行评评评评估估估估和和和和监监监监督检查，以确定现有控制措施的可靠性。督检查，以确定现有控制措施的可靠性。督检查，以确定现有控制措施的可靠性。督检查，以确定现有控制措施的可靠性。4.4.4.4.确确确确定定定定残残残残余余余余风风风风险险险险。在在在在采采采采取取取取有有有有效效效效风风风风险险险险控控控控制制制制措措措措施施施施后后后后，如如如如效效效效果果果果很很很很好好好好可可可可使使使使固固固固有有有有高高高高风风风风险险险险降降降降低低低低为为为为中中中中等等等等风风风风险险险险；如如如如果果果果固固固固有有有有风风风风险险险险控控控控制制制制措措措措施施施施不不不不足足足足，则则则则固固固固有有有有低低低低风风风风险险险险潜潜潜潜在在在在危危危危险险险险将将将将增增增增大大大大。残残残残余余余余风风风风险险险险是是是是高高高高度度度度的的的的立立立立即即即即给给给给予予予予关关关关注注注注并并并并解解解解决决决决，残残残残余余余余风风风风险险险险是是是是中中中中度度度度的的的的应应应应制制制制定定定定改进措施短期内给予解决，残余风险是轻度的要长期给予关注。改进措施短期内给予解决，残余风险是轻度的要长期给予关注。改进措施短期内给予解决，残余风险是轻度的要长期给予关注。改进措施短期内给予解决，残余风险是轻度的要长期给予关注。www.pptcn.com52 二、针对不同类型实验活动危害评估的原则www.pptcn.com53 对对于于同同一一病病原原微微生生物物而而言言，从从事事不不同同的的实实验验活活动动，操操作作者者接接触触微微生生物物的的数数量量、浓浓度度、可可能能的的感感染染途途径径是是不不同同的的，一一旦旦暴暴露露，其其后后果果也也是是不不同同的的，所所以以对对于于不不同同的的实实验验活活动动均均应应进进行行危危害害评评估估，以以指指导操作者采取合适的生物安全防护。导操作者采取合适的生物安全防护。 www.pptcn.com54 对对对对使使使使用用用用已已已已分分分分离离离离并并并并鉴鉴鉴鉴定定定定的的的的，或或或或来来来来源源源源清清清清晰晰晰晰的的的的购购购购买买买买或或或或赠赠赠赠送送送送的的的的病病病病原原原原微微微微生生生生物物物物，可可可可根根根根据据据据对对对对该该该该病病病病原原原原微微微微生生生生物物物物实实实实验验验验室室室室研研研研究究究究、疾疾疾疾病病病病监监监监测测测测和和和和流流流流行行行行病病病病学学学学研研研研究究究究以以以以及及及及相相相相关关关关教教教教科科科科书书书书或或或或其其其其他他他他资资资资料料料料进进进进行行行行危危危危害评价害评价害评价害评价。 （一）含已知的病原微生物的物质（一）含已知的病原微生物的物质www.pptcn.com55 在在待待检检样样品品信信息息不不足足时时，可可以以利利用用病病人人的的医医学学资资料料、流流行行病病学学资资料料（发发病病率率和和病病死死率率资资料料、可可疑疑的的传传播播途途径径、其其他他有有关关暴暴发发的的调调查查资资料料）以以及及有有关关标标本本来来源源地地的的信信息息，帮帮助助确确定定处处理理这这些些样样本本的的危危害害程程度度，同同时时应应当当谨谨慎慎地地采采取取一一些些较较为保守的标本处理方法。为保守的标本处理方法。l 对对于于取取自自病病人人的的标标本本，均均应应当当遵遵循循标标准准防防护护方方法法，并并采采用用隔离防护措施（如手套、防护服、眼睛保护等）。隔离防护措施（如手套、防护服、眼睛保护等）。l 基础防护基础防护-处理此类标本时最低需要二级生物安全水平。处理此类标本时最低需要二级生物安全水平。l 标本的运送应当遵循国家和或国际的规章和规定。标本的运送应当遵循国家和或国际的规章和规定。l 在在暴暴发发病病因因不不明明的的疾疾病病时时，应应根根据据国国家家主主管管部部门门和和或或WHO WHO 制制订订的的专专门门指指南南，进进行行标标本本的的运运输输并并按按规规定定的的生生物物安安全全等级进行相关操作。等级进行相关操作。（二）含未知的病原微生物的物质（二）含未知的病原微生物的物质www.pptcn.com56 对对对对临临临临床床床床检检检检验验验验或或或或疾疾疾疾病病病病监监监监测测测测实实实实验验验验室室室室，在在在在日日日日常常常常工工工工作作作作中中中中无无无无法法法法判判判判明明明明可可可可能能能能分分分分离离离离何何何何种种种种病病病病原原原原微微微微生生生生物物物物时时时时，应应应应根根根根据据据据回回回回顾顾顾顾性性性性资资资资料料料料，对对对对既既既既往往往往已已已已分分分分离离离离的的的的病病病病原原原原微微微微生生生生物物物物资资资资料料料料以以以以及及及及当当当当地地地地流流流流行行行行病病病病学学学学资资资资料料料料进进进进行行行行分分分分析析析析，推推推推测测测测可可可可能能能能分分分分离离离离的的的的病病病病原原原原微微微微生生生生物物物物并并并并进进进进行行行行危危危危害害害害评评评评估估估估。在在在在没没没没有有有有病病病病原原原原微微微微生物存在与否的确切信息时，需要采用常规的预防措施。生物存在与否的确切信息时，需要采用常规的预防措施。生物存在与否的确切信息时，需要采用常规的预防措施。生物存在与否的确切信息时，需要采用常规的预防措施。（三）可能含有或未含有未知的病原微生物的物质（三）可能含有或未含有未知的病原微生物的物质（三）可能含有或未含有未知的病原微生物的物质（三）可能含有或未含有未知的病原微生物的物质www.pptcn.com57 l l 所所所所有有有有基基基基因因因因技技技技术术术术重重重重组组组组DNADNA技技技技术术术术涉涉涉涉及及及及到到到到组组组组合合合合不不不不同同同同来来来来源源源源的的的的遗遗遗遗传传传传信信信信息息息息，从从从从而而而而创创创创造造造造自自自自然然然然界界界界以以以以前前前前可可可可能能能能从从从从未未未未存存存存在在在在过过过过的的的的遗遗遗遗传传传传修修修修饰饰饰饰生生生生物物物物体体体体。如如如如果果果果这这这这些些些些生生生生物物物物体体体体可可可可能能能能具具具具有有有有不不不不可可可可预预预预测测测测的的的的不不不不良良良良性性性性状状状状，一一一一旦旦旦旦从从从从实实实实验验验验室逸出将带来生物学危害。室逸出将带来生物学危害。室逸出将带来生物学危害。室逸出将带来生物学危害。l l 涉及到构建或使用涉及到构建或使用涉及到构建或使用涉及到构建或使用GMOGMO的实验应首先进行生物安全评估。的实验应首先进行生物安全评估。的实验应首先进行生物安全评估。的实验应首先进行生物安全评估。l l 与与与与该该该该生生生生物物物物体体体体有有有有关关关关的的的的病病病病原原原原特特特特性性性性和和和和所所所所有有有有潜潜潜潜在在在在危危危危害害害害可可可可能能能能都都都都是是是是新新新新型型型型的的的的，没没没没有有有有确确确确定定定定的的的的。供供供供体体体体生生生生物物物物的的的的特特特特性性性性、将将将将要要要要转转转转移移移移的的的的DNADNA序序序序列列列列的的的的性质、受体生物的特性以及环境特性等都需要进行评估。性质、受体生物的特性以及环境特性等都需要进行评估。性质、受体生物的特性以及环境特性等都需要进行评估。性质、受体生物的特性以及环境特性等都需要进行评估。（四）产生遗传修饰生物体的实验活动（四）产生遗传修饰生物体的实验活动www.pptcn.com58三、病原微生物实验活动危害的再评估三、病原微生物实验活动危害的再评估 1.1.1.1.在生物安全实验室建造之前的危害评估主要用于帮助生物安全实验室设计者与使在生物安全实验室建造之前的危害评估主要用于帮助生物安全实验室设计者与使在生物安全实验室建造之前的危害评估主要用于帮助生物安全实验室设计者与使在生物安全实验室建造之前的危害评估主要用于帮助生物安全实验室设计者与使用者确定实验室的规模、设施与合理布局，其评估结果可能不够详细，与实际使用者确定实验室的规模、设施与合理布局，其评估结果可能不够详细，与实际使用者确定实验室的规模、设施与合理布局，其评估结果可能不够详细，与实际使用者确定实验室的规模、设施与合理布局，其评估结果可能不够详细，与实际使用有差距。因此，在生物安全实验室用有差距。因此，在生物安全实验室用有差距。因此，在生物安全实验室用有差距。因此，在生物安全实验室正式启用前正式启用前正式启用前正式启用前，应根据实际工作进行再评估。，应根据实际工作进行再评估。，应根据实际工作进行再评估。，应根据实际工作进行再评估。2.2.2.2.当收集到资料表明所从事病原微生物的致病性、毒力或传染方式当收集到资料表明所从事病原微生物的致病性、毒力或传染方式当收集到资料表明所从事病原微生物的致病性、毒力或传染方式当收集到资料表明所从事病原微生物的致病性、毒力或传染方式发生变化时发生变化时发生变化时发生变化时，应，应，应，应对其背景资料及时变更，并对其实验操作的安全性进行重新评估。对其背景资料及时变更，并对其实验操作的安全性进行重新评估。对其背景资料及时变更，并对其实验操作的安全性进行重新评估。对其背景资料及时变更，并对其实验操作的安全性进行重新评估。3.3.3.3.在实验室活动中，如在实验室活动中，如在实验室活动中，如在实验室活动中，如增加新的研究项目增加新的研究项目增加新的研究项目增加新的研究项目，应对该项目的实验活动进行评估。，应对该项目的实验活动进行评估。，应对该项目的实验活动进行评估。，应对该项目的实验活动进行评估。4.4.4.4.在实验活动中分离到原评估报告中在实验活动中分离到原评估报告中在实验活动中分离到原评估报告中在实验活动中分离到原评估报告中未涉及的高致病性未涉及的高致病性未涉及的高致病性未涉及的高致病性病原微生物，应进行危害评病原微生物，应进行危害评病原微生物，应进行危害评病原微生物，应进行危害评估。估。估。估。5.5.5.5.生物安全实验室操作人员在进行实验活动中，发现其实验过程存在原评估报告中生物安全实验室操作人员在进行实验活动中，发现其实验过程存在原评估报告中生物安全实验室操作人员在进行实验活动中，发现其实验过程存在原评估报告中生物安全实验室操作人员在进行实验活动中，发现其实验过程存在原评估报告中未发现的隐患未发现的隐患未发现的隐患未发现的隐患，或者在检查与督察过程中发现存在生物安全问题，应进行再评估。，或者在检查与督察过程中发现存在生物安全问题，应进行再评估。，或者在检查与督察过程中发现存在生物安全问题，应进行再评估。，或者在检查与督察过程中发现存在生物安全问题，应进行再评估。6.6.6.6.在实验活动中在实验活动中在实验活动中在实验活动中发生微生物逃逸、泄露或人员感染发生微生物逃逸、泄露或人员感染发生微生物逃逸、泄露或人员感染发生微生物逃逸、泄露或人员感染等意外情况时，应立即进行再评等意外情况时，应立即进行再评等意外情况时，应立即进行再评等意外情况时，应立即进行再评估。估。估。估。www.pptcn.com59一. 危害程度评估的要素（一）危害程度分类（一）危害程度分类（一）危害程度分类（一）危害程度分类（二）病原微生物背景资料（二）病原微生物背景资料（二）病原微生物背景资料（二）病原微生物背景资料（三）拟从事实验活动的危险分析（三）拟从事实验活动的危险分析（三）拟从事实验活动的危险分析（三）拟从事实验活动的危险分析（四）评估结论（四）评估结论（四）评估结论（四）评估结论评估小结评估小结评估小结评估小结www.pptcn.com60 二、针对不同类型实验活动危害评估的原则（一）含已知的病原微生物的物质（一）含已知的病原微生物的物质（二）含未知的病原微生物的物质（二）含未知的病原微生物的物质（三）可能含有或未含有未知的病原微生物的物质（三）可能含有或未含有未知的病原微生物的物质（四）产生遗传修饰生物体的实验活动（四）产生遗传修饰生物体的实验活动评估小结评估小结www.pptcn.com61三、病原微生物实验活动危害的再评估三、病原微生物实验活动危害的再评估 1.1.1.1.在生物安全实验室在生物安全实验室在生物安全实验室在生物安全实验室正式启用前正式启用前正式启用前正式启用前，应根据实际工作进行再评估。，应根据实际工作进行再评估。，应根据实际工作进行再评估。，应根据实际工作进行再评估。2.2.2.2.当收集到资料表明所从事病原微生物的致病性、毒力或传染方式当收集到资料表明所从事病原微生物的致病性、毒力或传染方式当收集到资料表明所从事病原微生物的致病性、毒力或传染方式当收集到资料表明所从事病原微生物的致病性、毒力或传染方式发生变化时发生变化时发生变化时发生变化时，应，应，应，应对其背景资料及时变更，并对其实验操作的安全性进行重新评估。对其背景资料及时变更，并对其实验操作的安全性进行重新评估。对其背景资料及时变更，并对其实验操作的安全性进行重新评估。对其背景资料及时变更，并对其实验操作的安全性进行重新评估。3.3.3.3.在实验室活动中，如在实验室活动中，如在实验室活动中，如在实验室活动中，如增加新的研究项目增加新的研究项目增加新的研究项目增加新的研究项目，应对该项目的实验活动进行评估。，应对该项目的实验活动进行评估。，应对该项目的实验活动进行评估。，应对该项目的实验活动进行评估。4.4.4.4.在实验活动中分离到原评估报告中在实验活动中分离到原评估报告中在实验活动中分离到原评估报告中在实验活动中分离到原评估报告中未涉及的高致病性未涉及的高致病性未涉及的高致病性未涉及的高致病性病原微生物，应进行危害评病原微生物，应进行危害评病原微生物，应进行危害评病原微生物，应进行危害评估。估。估。估。5.5.5.5.生物安全实验室操作人员在进行实验活动中，发现其实验过程存在原评估报告中生物安全实验室操作人员在进行实验活动中，发现其实验过程存在原评估报告中生物安全实验室操作人员在进行实验活动中，发现其实验过程存在原评估报告中生物安全实验室操作人员在进行实验活动中，发现其实验过程存在原评估报告中未发现的隐患未发现的隐患未发现的隐患未发现的隐患，或者在检查与督察过程中发现存在生物安全问题，应进行再评估。，或者在检查与督察过程中发现存在生物安全问题，应进行再评估。，或者在检查与督察过程中发现存在生物安全问题，应进行再评估。，或者在检查与督察过程中发现存在生物安全问题，应进行再评估。6.6.6.6.在实验活动中在实验活动中在实验活动中在实验活动中发生微生物逃逸、泄露或人员感染发生微生物逃逸、泄露或人员感染发生微生物逃逸、泄露或人员感染发生微生物逃逸、泄露或人员感染等意外情况时，应立即进行再评等意外情况时，应立即进行再评等意外情况时，应立即进行再评等意外情况时，应立即进行再评估。估。估。估。评估小结评估小结评估小结评估小结www.pptcn.com62生物安全柜标准和使用www.pptcn.com63安全柜各类标准：安全柜各类标准：EN12469:2000(欧盟生物安全柜统一标准欧盟生物安全柜统一标准)NSF49:2002(美国生物安全柜标准美国生物安全柜标准-二级生物安二级生物安全柜全柜)JISK3800:2000(日本生物安全柜标准日本生物安全柜标准)SFDAYY0569-2005(中国国家食品药品监中国国家食品药品监督管理局生物安全柜标准督管理局生物安全柜标准) www.pptcn.com64执行标准：执行标准：医药行业标准医药行业标准YY0569_2005本标准为强制性标准本标准为强制性标准-2006-06-01实施实施本标准参考本标准参考:1) NSF/ANSI49-2002(美国) 2) EN12469:2000(欧洲) 国家食品药品监督管理局发布国家食品药品监督管理局发布 www.pptcn.com65www.pptcn.comYY0569-2005标准制定背景SARS之后，中国政府加强了对生物安全的管理力度，出台了一系列的生物实验室相关政策法规及国家/行业标准YY0569-2005生物安全柜也在此背景下由全国医用临床检验实验室和体外诊断系统标准化委员会提出，由北京医疗器械检验所及部分国内外厂家代表起草YY0569-2005 生物安全柜由国家食品药品监督管理局于2005年7月18日发布；于2006年6月1日正式实施www.pptcn.com 标准针对中国用户的实际情况，综合借鉴了NSF49和EN12469的要求和检测手段:采用了NSF49标准对二级生物安全柜的分类要求，分为A1、A2、B1、B2四种类型借鉴了EN12469中针对人员防护检测的特色检测方法KI-Discus(碘化钾)测试法针对中国市场的现状，参考两大标准提出了部分性能要求，例如:实时气流显示警报系统工作区三面一体成型及负压设计以及年度维护性能检测的要求YY0569-2005 YY0569-2005 简介简介www.pptcn.com68 该标准共分为9个章节和6个附录,其中附录A和B为资料性附录;附录C、D、E、F为规范性附录。其目的是控制生物安全柜的生产质量，确保安全。 该标准规定了安全柜的术语和定义、分类、材料、结构和性能要求 ，试验方法、检测规则、标志标签、说明书、包装、运输和储存的要求。 生物安全柜标准内容www.pptcn.com69生物安全柜分类：生物安全柜分类：级生物安全柜级分为（A1、A2、B1、B2）级为全封闭，排出的气体经两道HEPA或通过一道HEPA过滤后再经焚烧处理www.pptcn.com70 生物安全柜分类级别级别 类型类型 排风排风 循环空气比例循环空气比例% % 柜内气流柜内气流 工作窗口进风平均速度工作窗口进风平均速度m/s m/s 保护对象保护对象 I I级级 可向室内排风可向室内排风乱流乱流0.400.40使用者、环境使用者、环境IIII级级 A1A1型型可向室内排风可向室内排风7070单向流单向流0.400.40使用者、受试样本使用者、受试样本和环境和环境A2A2型型可向室内排风可向室内排风7070单向流单向流0.500.50B1B1型型不可向室内排风不可向室内排风3030单向流单向流0.500.50B2B2型型不可向室内排风不可向室内排风0 0单向流单向流0.500.50级级 不可向室内排风不可向室内排风0 0单向流单向流无工作窗进风口时，当一只无工作窗进风口时，当一只手套筒取下时，手套口风速手套筒取下时，手套口风速0.70.7主要是使用者和环主要是使用者和环境，有时兼顾受试境，有时兼顾受试样本样本www.pptcn.com71BSC-1示意（WHO)BSC-1级生物安全柜原理图。级生物安全柜原理图。A：前开口，B：可视窗，C：排风HEPA过滤器，D：压力排风系统。www.pptcn.com72级A1型安全柜(30%)-前窗操作口流入气流的最低平均流速为0.40m/s;-柜内的污染部位可处于正压状态,且可以无负压区域 包围;级级A1A1安全柜不能用于安全柜不能用于有挥发性有毒化学品有挥发性有毒化学品和挥发性放射性核素的实验和挥发性放射性核素的实验www.pptcn.com73级A2型安全柜(30%)-前窗操作口流入气流的最低平均流速为0.50m/s;-柜内所有的污染部位均处于负压状态,或被负压通道 和负压通风系统环绕. 级级A1A1安全柜用于微量挥发性有毒化学品和安全柜用于微量挥发性有毒化学品和痕量挥发性放射性核素为辅助剂的微生物实验时痕量挥发性放射性核素为辅助剂的微生物实验时必须连接功能合适的排气罩必须连接功能合适的排气罩. .www.pptcn.com74 级A2型生物安全柜型生物安全柜1、空气流入速度至少空气流入速度至少-应该达达0.38-0.51 m/s2 2、TypeA2TypeA2带带排排排排风风管路管路管路管路www.pptcn.com75级B1型生物安全柜型生物安全柜 适用于：适用于：含有微量含有微量挥发性有毒化学物性有毒化学物质或或痕量放射性核素的微生物学研究痕量放射性核素的微生物学研究A：前开口；：前开口；B：窗口；：窗口；C：排排风HEPA过滤器；器；D：供供风HEPA过滤器；器；E：负压压力排力排风系系统；F：风机；机；G：送：送风过滤器器安全柜需要有与建筑物排安全柜需要有与建筑物排风系系统相相连接的排接的排风接口接口www.pptcn.com76级B1型安全柜(70%)-前窗操作口流入气流的最低平均流速为0.50m/s;-柜内所有的污染部位均处于负压状态,或被负压通道 和负压通风系统环绕级级B1B1安全柜用于微量挥发性有毒化学品和安全柜用于微量挥发性有毒化学品和痕量挥发性放射性核素为辅助剂的微生物实验痕量挥发性放射性核素为辅助剂的微生物实验www.pptcn.com77级级A1、A2和和B1型生物安全工作原理图型生物安全工作原理图洁净空气室内空气污染空气www.pptcn.com78级B2型安全柜(100%)-前窗操作口流入气流的最低平均流速为0.50m/s;-柜内所有的污染部位均处于负压状态,或被直接排气的 负压通道和负压通风系统环绕级级B2B2安全柜用于挥发性有毒化学品和安全柜用于挥发性有毒化学品和挥发性放射性核素为辅助剂的微生物实验挥发性放射性核素为辅助剂的微生物实验www.pptcn.com79污染空气室内空气洁净空气级B2型生物安全工作原理图www.pptcn.com80性能柜体防泄漏HEPA完整性 噪声照度振动www.pptcn.com81噪声测试噪声噪声- 67dB1）打开风机和照明灯，在安全柜前面中心水平向外300；工作台上方380 处测量。2）关闭风机和照明灯，如有室外排气风机则继续运行，在相同位置测量背景噪声。www.pptcn.com82照度测试平均照度不小于平均照度不小于650lx,每个照度每个照度实测值不小于实测值不小于430lx。1）在工作台上，沿两内侧壁中心连线设置测量点，点间距离不超过300 ，与侧壁最小距离150 ；2）关灯，从一侧依次测背景照度；3）打开灯，启动风机，从一侧依次测量照度。www.pptcn.com83振动测试 频率在频率在10Hz-10KHz之间，在范围内的净振动小于之间，在范围内的净振动小于5m。测量安全柜气流流速在标称值0.015m/s范围内运行时的振动www.pptcn.com84人员保护试验人员保护测试用微生物法或碘化钾法,仲裁时用微仲裁时用微生物法。生物法。www.pptcn.com85从从6个个AGI-30采样器回收采样器回收到枯草芽孢杆菌的到枯草芽孢杆菌的CFU数量，数量，在每次检测时不得超过在每次检测时不得超过10个。采样时间达个。采样时间达30 min时，时，裂隙式空气采样器的平板计裂隙式空气采样器的平板计数不得超过数不得超过5个菌落。必须个菌落。必须重复重复3次试验。对照平板必次试验。对照平板必须是阳性结果。当平板含有须是阳性结果。当平板含有300个以上的枯草芽孢杆菌个以上的枯草芽孢杆菌菌落时，即为阳性。菌落时，即为阳性。www.pptcn.com86人员保护试验www.pptcn.com87产品保护测试在工作台面上排满敞开的在工作台面上排满敞开的琼脂培养皿琼脂培养皿每次试验中，在琼脂平板每次试验中，在琼脂平板上枯草芽孢杆菌的菌落数上枯草芽孢杆菌的菌落数不得超过不得超过5个。必须重复个。必须重复3次试验。对照平板必须是次试验。对照平板必须是阳性结果。当平板含有阳性结果。当平板含有300个以上的枯草芽孢杆个以上的枯草芽孢杆菌菌落时，即为阳性。菌菌落时，即为阳性。www.pptcn.com88产品保护试验www.pptcn.com89防交叉污染试验从攻击侧壁到距离侧壁14 in（36 cm）之间的一些琼脂平板可以得到枯草芽孢杆菌菌落，它们用作阳性对照。每次测试时，在大于14 in（38 cm）中心处的琼脂平板所得到的菌落总数不得超过2个。在安全柜的左侧和右侧各做3次重复实验。 www.pptcn.com90柜体抗变形试验www.pptcn.com91柜体抗变形试验www.pptcn.com92工作台面抗变形www.pptcn.com93前窗负载抗前倾试验www.pptcn.com94下降气流流速测量试验www.pptcn.com95A型安全柜计算流入气流流速www.pptcn.com96B1型安全柜计算流入气流流速www.pptcn.com97B2型安全柜计算流入气流流速www.pptcn.com98安装检验安装检验安装检验： 安全柜安装完成、位置移动后、进行安装检验。 检验项目中出现一项不符合要求，将判定该安 全柜为安装检验不合格。 维护检验：维护检验： 当安全柜更换过滤器和内部部件维修后要进行检验。 www.pptcn.com99性能检测和验证 生物安全柜安装后安全性能生物安全柜安装后安全性能根据试验和实验室调查,我国实验室的排风过滤、生物安全柜，安装后经常规方法检测大部分是合格的，但是也有相当大的部分生物检测是不合格者,经过反复试验才能达到使用要求,对生物安全参数这是不允许的。某单位一个进口二级生物安全柜物理现场检测合格，但经生物检测发现其排风过滤器有严重泄漏，经检查发现过滤有明显伤痕。某单位进口生物安全柜在个人保护试验验证检查时发现效果非常差，经厂家反复调试才合格。某单位进口二级生物安全柜物理参数现场检测虽然达到了标准,但生物检测个人保护根本不合格。对几家国产生物安全柜检测结果也证明，物理检测不能完全保证“零泄漏”。其中包括过滤器泄漏,安全柜内污染从操作口泄漏超标等。www.pptcn.com100 柜体泄漏测试目的_测试安全柜柜体的防泄漏性能 a) 压力计，量程为0-600Pa，精确5Pab) 肥皂溶液，由25g/L的软肥皂的微温蒸馏 水溶液组成www.pptcn.com101方法压力衰减法压力衰减法: : a)将安全柜的前窗和排气孔封好，使安全柜成为一密封系统；b)给安全柜增压到500Pa，封闭加压空气，30min后测定压力。 允许初始压力下降10%，如果安全柜不能保持500Pa压力， 用肥皂泡法查找泄漏位置； www.pptcn.com102方法肥皂泡法肥皂泡法: : 沿安全柜压力通风系统的所有焊缝、衬垫、套接处和封口处的外表面喷或涂刷检漏仪液体，小的泄漏会出现气泡，如果从孔中吹出检测液体而未形成泡，则可能发生大的泄漏，可通过轻微的气流感觉和声音来发现www.pptcn.com103HEPA过滤器系统泄漏测试 目的:测定安全柜过滤器安装结构的完整性其中包括:1) 下降气流HEPA过滤器、2) 排气HEPA过滤器、3) 过滤器外罩4) 框架www.pptcn.com1041)邻苯二甲酸二辛酯（DOP）;2)或与之相当的液体即可以产生与DOP气溶胶颗粒尺寸分布相同气溶胶颗粒的液体;如：聚-烯烃（PAO）、二(2-乙基已基)癸二酸酯、聚乙二醇，以及药物级的轻矿物油。 试剂www.pptcn.com105检测仪器 a) 线性或对数标尺的气溶胶光度计，标示出含100%上升气流的10g/L多分散气溶胶微粒的浓度，能检测110-3%同一气溶胶的微粒，光度计应按其生产商的使用说明进行校准；b) 气溶胶发生器，发生器压力计的最大量程为0-550 kPa，分辨率和精确度为7kPa。 发生器压力计由生产厂家校准或按照厂家的使用说明校准。www.pptcn.com106试验方法 将气溶胶发生器的压力调至最小140kPa，使用DOP或与之相当的液体产生气溶胶。注意:发生器喷嘴浸入液体的深度应不超过25mm。）打开安全柜的风机和灯（A1/A2和B2类型安全柜：下降气流过滤器测试），去掉过滤器的扩散装置和保护盖，放置发生器，将气溶胶引入安全柜。使产生均匀分布的HEPA过滤器的上升气流。引入气溶胶的方式应确保其在安全柜气流中充分混合；www.pptcn.com107试验方法b) 打开光度计，按厂商使用说明进行调整；c) 对HEPA过滤器含有气溶胶的上升气流进行 取样,证实该浓度的气溶胶的光散射强度至少应等于10g/L DOP的光散射强度；www.pptcn.comNSF 49 vs. YY 0569www.pptcn.comNSF 49 vs. YY 0569要求NA气流警气流警报作为生物挑战备用检测NA碘化碘化钾人人员保保护检测工作台面以上36cm工作台面以上36cm人人员保保护喷雾器的位置要求器的位置要求要求要求微生物挑微生物挑战异常气流异常气流检测型式检测出厂检测+型式检测压力力检测适用性适用性500 Pa500 Pa柜体完整性柜体完整性/压力力检测要求要求气流模式气流模式检测/烟烟雾示踪示踪工作台面几何中心工作台面几何中心振振动检测方法方法工作台面以上38 cm, 柜体前方30 com 工作台面以上38 cm, 柜体前方30 com 噪音取点要求噪音取点要求67 dBA67 dBA噪音合格要求噪音合格要求距侧壁15cm, 检测点间距30 cm距侧壁15cm, 检测点间距30 cm照度照度检测方法方法650 lux, 背景照度110 lux 50 lux650 lux, 背景照度110 lux 50 lux照度要求照度要求采用DOP/PAO模拟气溶胶进行检测采用DOP/PAO模拟气溶胶进行检测过滤器完整性器完整性检测160-250cmN.A 前窗高度要求前窗高度要求 20% or 0.08 m/s 20% or 0.08 m/s 下沉气流均匀度下沉气流均匀度0.25 0.50m/sNA下沉气流范下沉气流范围0.50 m/s0.50 m/s最小最小进气流气流SFDAYY0569-2005NSF49:2002检测项目目www.pptcn.com生物安全柜现场性能生物安全柜现场性能鉴定检测项目与意义鉴定检测项目与意义www.pptcn.com生物安全柜现场性能检测v根据NSF49和YY0569生物安全柜标准，生物安全柜需要进行以下全部或部分的现场性能检测：进气流下沉气流照度噪音震动过滤器扫描（气溶胶挑战）可视化气流模式压力检测现场安装评估及警报系统检验www.pptcn.com112生物安全柜维护检测意义来自国内外的诸多事实证明，购买生物安全柜并不是实验室生物安全的最终解决方案。严格的生物安全柜现场性能鉴定检测以及有效的生物安全管理及培训制度对保障实验室生物安全是至关重要的来自NSF的数据证实：大约20%的生物安全柜无法通过现场性能鉴定检测，原因包括高效过滤器的负载电气系统老化或损坏实验室排风系统设计安装不合理安全柜的移位或维修这些安全柜需要厂家进行进一步维护和重新调试校准，性能达标后才可投入使用www.pptcn.com113生物安全柜相关检测与维护事项生物安全柜相关检测与维护事项www.pptcn.com114安全柜的摆放要求充分清除与充分清除与维护空空间最佳安全柜最佳安全柜摆设地点取决于安全柜所受到的外在气流干地点取决于安全柜所受到的外在气流干扰减到最小减到最小： 避免高流量通道 远离空调排气口，排气扇 限制安全柜的数量 根据 ANSI/NSF49:49 和英国标准BS5726:1992推荐安装指南www.pptcn.com115安装地点的选择No.1 地点1是远离周遭的气流扰动因素，是适当安装的地点。No.2 地点2 太靠近门、走道以及空调出风口，影响安全柜的气流。No.3 地点3的空调出风口会影响安全柜的气流。No.4 地点4是太靠近门，侧面太要紧墙壁。No.5 如果毗邻的回风口气流不影响安全柜的气流。那地点5的位置适合安装安全柜。www.pptcn.com116安全柜顶部空间要求比安全柜顶部至少高出100mmwww.pptcn.com117检测实验室供电电压www.pptcn.com118B2生物安全柜的安装建议使用专用的排气系统不建议使用支管/总管设计如使用支管，请只用B2型组对，不要B2与A2共用（因为很难平衡）外置风机达到额定排气要求外置风机应可克服排气管道内的压力损耗管道连接处需安装节流装置：节流蝶阀或频率控制器清除污染时需要气密的节流阀 （福尔马林，甲醛溶液）www.pptcn.com119生物安全柜的净化与灭菌当需要对生物安全柜任何被污染的部位进行日常维护、更换过滤器以及现场性能测试时，都必须进行灭菌处理。l一般是采用多聚甲醛或甲醛熏蒸的方法来杀灭潜在生物危害物质。l安全柜在灭菌前需要用特殊灭菌袋进行仔细密封，所在实验室门上应贴上生物危害警告标志以避免人员进入。l通过可设置程序的福尔马林灭菌器进行福尔马林灭菌和氨水中和的过程，整个过程历时大约10-15个小时l 由于福尔马林的毒性，此过程必须由厂家或者专业机构受过培训的技术人员来进行www.pptcn.com120安全柜灭菌与过滤器更换www.pptcn.com121生物安全柜的使用 www.pptcn.com122www.pptcn.com123生物安全柜内感染性材料溢洒的处理生物安全柜内感染性材料溢洒的处理当当当当发发发发生生生生少少少少量量量量溢溢溢溢洒洒洒洒时时时时，应应应应用用用用吸吸吸吸收收收收纸纸纸纸巾巾巾巾立立立立即即即即处处处处理理理理，并并并并立立立立即即即即用用用用浸浸浸浸满满满满消消消消毒毒毒毒液液液液的的的的毛毛毛毛巾巾巾巾或或或或纱纱纱纱布布布布对对对对生生生生物物物物安安安安全全全全柜柜柜柜及及及及其其其其内内内内部部部部的的的的所所所所以以以以物物物物品品品品进进进进行行行行擦擦擦擦洗洗洗洗。工工工工作作作作面面面面消消消消毒毒毒毒后后后后应应应应更更更更换换换换手手手手套套套套，不不不不论论论论是是是是摘摘摘摘下下下下手手手手套套套套还还还还是是是是更更更更换换换换手套都要洗手。手套都要洗手。手套都要洗手。手套都要洗手。若若若若发发发发生生生生大大大大量量量量溢溢溢溢洒洒洒洒，液液液液体体体体会会会会通通通通过过过过生生生生物物物物安安安安全全全全柜柜柜柜前前前前面面面面或或或或后后后后面面面面的的的的格格格格栅栅栅栅流流流流到到到到下下下下面面面面去去去去，生生生生物物物物安安安安全全全全柜柜柜柜内内内内所所所所有有有有的的的的物物物物品品品品都都都都应应应应该该该该进进进进行行行行表表表表面面面面消消消消毒毒毒毒并并并并拿拿拿拿出出出出生生生生物物物物安安安安全全全全柜柜柜柜，在在在在确确确确保保保保生生生生物物物物安安安安全全全全柜柜柜柜的的的的排排排排水水水水阀阀阀阀被被被被关关关关闭闭闭闭后后后后，可可可可将将将将消消消消毒毒毒毒液液液液倒倒倒倒在在在在工工工工作作作作台台台台面面面面上上上上，使使使使液液液液体体体体通通通通过过过过格格格格栅栅栅栅流流流流到到到到排排排排水水水水盘盘盘盘上上上上。所有接触溢出物品的材料都要进行消毒和所有接触溢出物品的材料都要进行消毒和所有接触溢出物品的材料都要进行消毒和所有接触溢出物品的材料都要进行消毒和/ / / /或高压灭菌处理。或高压灭菌处理。或高压灭菌处理。或高压灭菌处理。www.pptcn.com124