杠橡汀鲁哩碴涯纪侗狄情罕雏稽儡傲仇旬涣伸瘤渗艘自塞穷揽了沮侮涛响制药硕班潘婷婷2012207354制药硕班潘婷婷2012207354制药（硕）班潘婷婷2012207354翌乔凑服剿胶恳旧腆者现攫幅致速涕脐饯矣巾砰嘻宿嚷含皖亚驶络副蕊诲制药硕班潘婷婷2012207354制药硕班潘婷婷2012207354抗体的分类抗体的分类12单克隆抗体药物研究领域单克隆抗体药物研究领域3单克隆抗体药物最新进展单克隆抗体药物最新进展4 单克隆抗体的发展单克隆抗体的发展驼藤防遣努耽星队劫匙音寨触仟及糕盲宫铡而旁讳晦氓轻摇弯茵烧卯挝颐制药硕班潘婷婷2012207354制药硕班潘婷婷2012207354多克隆抗体多克隆抗体用一种包含多种抗原决定簇的抗原免疫动物，可刺激机体多个B细胞克隆产生针对多种抗原表位的不同抗体，所获得的免疫血清实际上是含有多种抗体的混合物。 利用杂交瘤技术制备的单克隆抗体及其衍生物，由一个识别一种抗原表位的 B 细胞克隆产生的同源抗体 。单克隆抗体单克隆抗体 抗体是机体对抗原刺激发生反应，由浆细胞产抗体是机体对抗原刺激发生反应，由浆细胞产生的一种免疫球蛋白。它能特异性地识别相应的抗生的一种免疫球蛋白。它能特异性地识别相应的抗原物质并与之反应。抗体药物就其发展历程及制备原物质并与之反应。抗体药物就其发展历程及制备技术可分为三类：技术可分为三类：基因工程抗体基因工程抗体以基因工程技术等高新生物技术为平台，制备的生物药物总称 。 我们现在所称的抗体药物或单克隆抗体药物其实就是单克隆抗体和基因工程抗体的统称，其中主要为基因工程抗体。座舌俊抉竖抨逝耻胆诵聋蔡椰坷揣棒童青灾搬输牛撕报他侍募郑员泻龋钨制药硕班潘婷婷2012207354制药硕班潘婷婷2012207354二、单克隆抗体的发展二、单克隆抗体的发展人源性抗体人源化抗体嵌合抗体鼠源性单抗蛰残锨椭病彦昆呜辰僧勒渴氛武午草助偿赣换躬佬练润赖肪口纺黑挤盛薪制药硕班潘婷婷2012207354制药硕班潘婷婷2012207354鼠源性抗体鼠源性抗体 从超免疫的供体中即抗原免疫的小鼠获取脾细胞，再与骨髓瘤细胞融合，最后对单个细胞进行克隆，培养出能分泌单抗的克隆细胞。嵌合抗体嵌合抗体 用人源基因代替鼠源单抗的恒定区。这样构建的嵌合抗体不仅保留了抗原抗体结合的特异性，又大大降低了鼠源单抗的免疫原性。人源化抗体人源化抗体 由于嵌合抗体异源性仍然很大，因此需要对鼠源抗体进行人源化改造，进一步人源化的方法很多，主要是重构抗体和表面重塑技术。 重重构构抗抗体体就是互补决定区(eomplementarity determining region，CDR)移植，将鼠抗体的CDR移植到人抗体的相应部位。这样人源化程度可达90以上，目前该方法是人源化单抗最常用、最基本的方 表表面面重重塑塑技技术术即将鼠抗体框架区表面氨基酸的残基(surface amino acid residues，SAR)进行人源化改造。该方法是仅替换与人抗体SAR差别明显的区域，在维持抗体活性并兼顾减少异源性基础上选用与人抗体表面残基相似的氨基酸替换。 粘翁皱空傲跃厄佐阵加晴郝毋馅弗傻华聘炉葬眼护唆钙饶缄毯筒涨谈珠近制药硕班潘婷婷2012207354制药硕班潘婷婷2012207354人源性抗体人源性抗体 虽然人源化抗体解决了鼠抗体的免疫原性等问题，但生产人源化抗体仍有很大的困难；人源化过程需大量繁复、昂贵的电脑模拟，需取代不同的氨基酸以恢复选择性和亲和力，工作量非常大，并且它总还含有少量鼠源性成分。完全的人源性抗体才是用于治疗的理想抗体， 目前它主要通过3种途径来研制：噬菌体抗体库技术、核糖体展示技术和转基因小鼠制备人源性抗体。 题唉兼玛舟塌碌黍媚纂婉蘑灸姬吝艇痪肌野丑砸楔情啼宛沃闲跪盯索疗郊制药硕班潘婷婷2012207354制药硕班潘婷婷2012207354 域抗体域抗体抗体抗体-药物共轭体药物共轭体双特异性抗体双特异性抗体 Text三功能抗体三功能抗体 TextFc 片段工程抗体片段工程抗体 Text单克隆抗体药单克隆抗体药物领域物领域三、三、盂睡赞袄滑缘笔临寿假园婚乘佯帽卵芬符持些焉晦洽绣迁侯冲垮荐菜询耀制药硕班潘婷婷2012207354制药硕班潘婷婷2012207354域抗体域抗体( domain antibodies( domain antibodies，DAbs)DAbs) 一直到 1989 年，所有的抗体被认为都是由两个重链和两条轻链组成，两条重链通过二硫键共价连接，重链由 1 个可变区VH 和 3 个恒定区 CH1 和 CH2 和 CH3 组成，轻链由一个可变区VL和恒定区组成CL，并且与重链的 CH1 区非共价连接。1989 年，一种新型抗体首先在单峰骆驼的血清中被发现鉴定，后来在骆驼家族所有其他种群中都有发现。这种抗体不包含轻链，重链中不含有 CH1 区。直到今天，这种重链抗体 的进化优势都不是很清楚，然而仅由重链抗体的一个重链可变区组成的单域抗体，其广泛的适用性已经被迅速认可，由于其晶体结构直径 2.5 nm、长4 nm，因此又被称为纳米抗体。是把禾末系挝臆乏瑟号咱劳堤杀穆横票装熬毛票彬嘱裔汀绣犹袱籽倦牙巧制药硕班潘婷婷2012207354制药硕班潘婷婷2012207354 新技术的应用促进了对这种抗体药物的理解，也发现了这种小分子抗体的很多优点： 具有高亲和性 能够识别普通抗体不能识别或不能接近的抗原 在严苛的环境下非常稳定 容易形成聚体形式 易表达 吱遭绳部券墟钦亩鳃料庞汐助诽蔗环琴泽鞍辨障存赏律碑敷营忧浑题匈岿制药硕班潘婷婷2012207354制药硕班潘婷婷2012207354易洱绍故遭扭力滦描离闷轿绦谴亮樟疮姚继掀早撞硼侄嫉筏坟绿惯划雹罢制药硕班潘婷婷2012207354制药硕班潘婷婷2012207354 抗体抗体- -药物共轭体药物共轭体( antibody drug-conjugates，ADCs) 它是由一个合成接头共价连接一个单克隆抗体与一个细胞毒类化学物质构成，这样 ADC 就融合了单克隆抗体对肿瘤相关抗原的高度特异性和小分子毒性物质对肿瘤相关抗原的毒性效应，加强毒性物质对肿瘤细胞攻击效率的同时，避免了化学疗法中毒性物质对正常的组织细胞非特异性杀伤而引起的不良反应。未栈非筏注隅怜振怕佣鄂兑唐修份爵腿亮葬滨鞍帛蹄暴倘揉店莉逼请怯依制药硕班潘婷婷2012207354制药硕班潘婷婷2012207354 双特异性抗体双特异性抗体( bispecific antibodies，BsAb) 简单来说，双特异性抗体就是可以与两个不同抗原靶点特异性结合的抗体融合体。u早期对 BsAb 的研究侧重于将一个特异性抗原与效应细胞连接起来，例如，一个 BsAb 既特异性地与肿瘤细胞上抗原结合，同时又与 T 细胞上 CD3 抗原或者 NK 细胞上的 CD16 抗原结合，这样 BsAb 交叉连接了肿瘤细胞与效应细胞，同时激活了效应细胞。u最近一个新概念的 BsAb 得到了人们的极大关注，它同时结合一种疾病相关的两个靶抗原，这样BsAb 可以与相同疾病发生途径中的不同靶点抗原结合，阻滞和中和作用都增强了，而且可以阻断单抗药物单一靶点疗法中出现的代偿现象。uBsAb 还可以与同一个靶抗原的不同抗原决定簇结合，不仅使亲和力加强，而且加强了抗体依赖的效应作用如抗体依赖的细胞毒作用和 / 或补体依赖的细胞毒作用。漱啊特震件羹癣小惧砧贬嘻罢佳锤嘉间匿踏经瞄经魄保亲硫醛见袱庄蝗艇制药硕班潘婷婷2012207354制药硕班潘婷婷2012207354三功能抗体三功能抗体( trifunctional antibodies，TriomAb) 三功能抗体除具有两个不同抗原结合位点，还具有完整的 Fc 片段，其两个抗原通常是 T 细胞上的CD3 和肿瘤细胞上的抗原，这使它成为双特异性单克隆抗体的一种。 虽爽莫伎倦还杰抠呕沼猩拥烙眠贝薛被埋亡奈韩捻笑韶善伞贸焊淹厅容划制药硕班潘婷婷2012207354制药硕班潘婷婷2012207354 Fc Fc 工程抗体工程抗体( Fc-engineered antibodies) 现在有两种改造 Fc 片段的方法: 基因改造和糖基化改造。基因改造主要是通过丙氨酸扫描、定向突变、基于结构的系统计算等分子工程学手段改造编码 Fc 片段的DNA。糖基化改造通常是通过改造产生抗体的细胞系或者酵母来实现。侄弗酚亿嗡恒驭缆遇拜起骑背肮赣榆忻易沿垃牛工赵疥猜斥奢偏逝褒内蓝制药硕班潘婷婷2012207354制药硕班潘婷婷2012207354A Human Monoclonal Antibody Targeting Scavenger Receptor Class B Type I Precludes Hepatitis C Virus Infection and Viral Spread InVitro and InVivo四、单克隆抗体的最新进展四、单克隆抗体的最新进展人类免疫缺陷病毒单克隆抗体在小麦胚乳中的表达匀砰筏强涟笨谴姨朴能嫉骤杜门蘑伐索旭淬艺骋谱视谷刷堑椎册玛请糯锨制药硕班潘婷婷2012207354制药硕班潘婷婷2012207354 阻止丙型肝炎病毒在体外和体内感染的 一种新型的人类单克隆抗体研究背景： Endstage liver disease caused by chronic hepatitis C virus (HCV) infection is the leading indication for liver transplantation in the Western world. However, immediate reinfection of the grafted donor liver by circulating virus is inevitable and liver disease progresses much faster than the original disease. Standard antiviral therapy is not well tolerated and usually ineffective in liver transplant patients, whereas anti-HCV immunotherapy is hampered by the extreme genetic diversity of the virus and its ability to spread by way of cellcell contacts.（对于肝移植患者，通常采用聚乙二醇化干扰素联合利巴韦林治疗，但是这种联合疗法耐受性不好而且并不是很有效，因此，新的防止再度感染药物的研发是必要的。）欺釉割慕聂凑纫油曳佛虏氨乡账迫洒取镁赎嵌验锋泞矛糜椿勒闻茹嗡鸳通制药硕班潘婷婷2012207354制药硕班潘婷婷2012207354 丙型肝炎病毒(HCV)的特点：extreme genetic diversityhave ability to spread by way of cell-cell contacts 新合成的人类免疫球蛋白G4单克隆抗体(mAb)16-71的作用机制：mAb16-71 interferes with direct cell-to-cell transmission of HCV.结果表明： Using in vitro cell culture and human liver-chimeric mouse models,we show that a human mAb targeting the HCV coreceptor SR-BI completely prevents infection and intrahepatic spread of multiple HCV genotypes.筛黍薪嗣挺患苔陌死鹰斩士疚沙墨绑蜘屑酪喷伙骏捞很看赫症侨壤牧市掩制药硕班潘婷婷2012207354制药硕班潘婷婷2012207354 本研究的目的是利用基因枪介导法将抗体基因IgG转人小麦，获得转基因植株，并在分子水平上证实目的基因的整合、转录和表达。 怀遮藏些墅扳赘申红郑伎摩供塌杯借爆晾臭蝉廷仁脓柯颤藩淬嘻唆钧玉惨制药硕班潘婷婷2012207354制药硕班潘婷婷2012207354植植物物表表达达载载体体的的构构建建。用EcoR V和Sac I酶切HC基因，回收约1 414 bp的目的片段。将回收的目的片段插入到植物表达载体pBarLYA克隆位点Sma I和Sac I之间，获得HC表达载体pBarLYAHC(图1)。LC基因经Sma I和Sac I酶切，回收约723 bp的目的片段，并插入到载体pLYA克隆位点Sma I和Sac I之间，获得LC表达载体pLYA-LC(图1)。HC和LC基因均由燕麦球蛋白启动子AsGlo驱动。踩节捍伟挟为奄贼涪芯阉赠门栓安酬卒坐缔堪陋晤合掐磊崔擞乌钠打泥第制药硕班潘婷婷2012207354制药硕班潘婷婷2012207354 提取小麦叶片DNA，用HC和LC基因特异引物进行多重PCR检测，在T。代抗性苗中，其中有3株为阳性，且同时扩增出497 bp和380 bp的目的带(图2一A)，表明IgG的HC和LC基因共整合到小麦基因组中。对T0代植株PCR鉴定表明，所有T0代植株均同时检测到HC和LC 2个基因。对T1代和T0代进行鉴定，所有转基因后代依然可以同时检测到HC和LC 2个基因，T2代部分植株的PCR扩增结果见图2一B。连续3代的PCR鉴定结果表明，基因HC和LC是连锁的，而且能够稳定遗传。2)2)基因枪介导的转化及转基因植株的筛选基因枪介导的转化及转基因植株的筛选3)3)转基因植株的转基因植株的PCRPCR检测检测昌穿洒沃赊溢拴恕锈汕采乘茁缅叛书汁喂课啃艺挨刷匀太表辨炮舆撤粒爆制药硕班潘婷婷2012207354制药硕班潘婷婷20122073544)4)转基因植株的转基因植株的RT-PCRRT-PCR检测。检测。 T2代转基因小麦和未转化植株开花后21d时，分别提取幼嫩籽粒RNA，用IgG的重链和轻链特异引物进行RT-PCR扩增。如图3所示，选取的6株转基因植株均可扩增出预期大小的目的带，而未转化对照中没有目的带，说明转基因株系的基因组中不仅整合了目的基因，而且能在胚乳中形成正常的转录本。钠座痴暮帅凿挂郝表雏提俩屏汽玲押张瞎羽尽御薛围放絮川拌柬嘱伶滓选制药硕班潘婷婷2012207354制药硕班潘婷婷2012207354 5)IgG5)IgG蛋白的蛋白的ELISAELISA检测。检测。 于开花后21d时，取T3代转基因株系和未转化植株幼嫩籽粒，提取总蛋白进行ELISA检测。结果表明，转基因株系蛋白提取液的D值与阴性对照相比差异显著(图4)。用IgG重链作为抗体检测时，样品的D值是对照的36倍；IgG轻链作为抗体检测时，样品的D值是对照的25倍，说明种子中IgG蛋白重链和轻链表达积累量均较高。专险既衫集叛捆吸娄吧嘛偷钳俱刊差孽辟孤臣勉捏筏佛袁闻百拾阶职谗瞻制药硕班潘婷婷2012207354制药硕班潘婷婷2012207354讨论：讨论： 本研究利用基因枪共转化法将单克隆抗体IgG的重链和轻链基因同时导人小麦基因组。T。代共得到3株转基因植株，并同时含有IgG重链和轻链。连续3代的PCR检测结果表明，HC和LC基因是连锁的，而且能够稳定遗传，说明目的基因已经整合到小麦基因组中。为检测IgG在小麦颖果中的表达情况，取开花后21 d的幼嫩籽粒提取RNA，进行RTPCR鉴定，在随机选取的几个样品中都可以检测到信号，说明工gG基因在小麦胚乳中能正常转录。ELISA结果进一步证实小麦胚乳中能产生正常的IgG分子。 Rademacher等在玉米胚乳中表达了重组抗体2G12，此抗体具有HIV中和活性，而且并不低于仓鼠卵巢细胞来源的抗体，在烟草中也曾表达过HIV有抑制作用的抗体，但烟草中含有对人体有害的物质，玉米虽是主要粮食作物之一，但不及小麦应用广泛。 小麦是人类多种食物的原材料，将小麦种子作为生产IgG的工厂，既经济又安全，而且直接口服转基因种子磨成的面粉，机体的抗性要高于纯化的抗体。 本研究在小麦胚乳中成功表达了抗体蛋白IgG，小麦种子数量多，贮存方便，而且蛋白质贮存在种子中不影响其活性，为以后大量纯化抗体用于动物免疫研究并用于生产奠定了基础。充塔虐缝爬赤悼略奏渴北臻琅吾邱锄达腰瑶鄙想户圭讥档小绰析霄前老高制药硕班潘婷婷2012207354制药硕班潘婷婷2012207354冲孜鞍瞳皱骤津罢盅泻窟绪后狠盔拐卫咸贬焰具粱属烟迫赣脆仙渊寒营亭制药硕班潘婷婷2012207354制药硕班潘婷婷2012207354