实验六实验六 酵母菌细胞酵母菌细胞的形态观察、死活细胞的形态观察、死活细胞的鉴别的鉴别一、目的和要求一、目的和要求 n1 1观察酵母菌的出芽繁殖方式，学习区分观察酵母菌的出芽繁殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。酵母菌死活细胞的实验方法。n2 2掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。的区别。 二、基本原理二、基本原理 n1 1形态观察：形态观察：酵母菌是不运动的单细胞真酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，通常比常见细胞大几倍甚至十核微生物，通常比常见细胞大几倍甚至十几倍。大多数酵母菌以出芽方式进行无性几倍。大多数酵母菌以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过接繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。合产生子囊孢子。n2 2死活鉴定：死活鉴定：美蓝是一种无毒性的染料，美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型呈无色。用美它的氧化型呈蓝色，还原型呈无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。的还原型。因此，具有还原能力的酵母活因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则成蓝色或淡蓝色。的衰老细胞则成蓝色或淡蓝色。啤酒酵母酵母出芽酵母出芽酵母菌出芽繁殖及芽体三、器材三、器材 n1 1、染液：、染液：吕氏碱性美蓝染液吕氏碱性美蓝染液n2 2、菌种：、菌种：酿酒酵母的斜面培养物酿酒酵母的斜面培养物n3 3、仪器和其他用具：、仪器和其他用具： 显微镜、载玻片、显微镜、载玻片、盖玻片等盖玻片等四、操作步骤四、操作步骤 n1 1、美蓝浸片的观察：、美蓝浸片的观察： 1 1）在载玻片中央加一滴）在载玻片中央加一滴0.1%0.1%吕氏碱性美蓝吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作用接种环挑取少染色液，然后按无菌操作用接种环挑取少量少量酵母菌苔放在染液中，混合均匀。量少量酵母菌苔放在染液中，混合均匀。染液不宜过多或过少，否则在盖上盖玻片染液不宜过多或过少，否则在盖上盖玻片时菌液会溢出或出现大量气泡而影响观察。时菌液会溢出或出现大量气泡而影响观察。 2 2）用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液）用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。液上。盖玻片不宜平放着放下，以免产生盖玻片不宜平放着放下，以免产生气泡影响观察。气泡影响观察。3 3）将制片放置约）将制片放置约3min3min后镜检，先用低倍镜然后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并据颜色来区别死活细胞。据颜色来区别死活细胞。4 4）染色约）染色约0.5h0.5h后再次进行观察，注意死活细后再次进行观察，注意死活细胞数量是否增加。胞数量是否增加。5 5）用）用0.05%0.05%吕氏碱性美蓝染液重复上述操作。吕氏碱性美蓝染液重复上述操作。n2 2、水、水- -碘液浸片的观察碘液浸片的观察 在载玻片中央加一小滴革兰氏染色用碘液，在载玻片中央加一小滴革兰氏染色用碘液，然后在其上加三滴水，取少量酵母菌苔放然后在其上加三滴水，取少量酵母菌苔放在水在水- -碘液中混匀，盖上盖玻片镜检。碘液中混匀，盖上盖玻片镜检。五、实验报告五、实验报告 n1 1、绘图说明所观察的酵母菌的形态特征。、绘图说明所观察的酵母菌的形态特征。n 酵母死活细胞的对比酵母死活细胞的对比六、思考题n（1 1）吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的）吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响？试不同，对酵母菌死细胞数量有何影响？试分析其原因。分析其原因。 （2 2）在显微镜下，酵母菌有哪些突出的）在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌？特征区别于一般细菌？