第四章第四章 微生物的生长与环境条件微生物的生长与环境条件2021/6/161微生物的生长与环境条件微生物的生长与环境条件一、微生物生长测定一、微生物生长测定二、微生物的生长规律二、微生物的生长规律三、微生物的培养三、微生物的培养四、微生物生长的环境条件四、微生物生长的环境条件五、消毒与灭菌五、消毒与灭菌2021/6/162第一节、微生物生长测定第一节、微生物生长测定u一、测定单细胞微生物数量u（一）总菌数测定法1.计数板测定法2.比浊法(二)活菌数测定法1.平板菌落计数法2.液体稀释测定法3.膜过滤计数法2021/6/163二、测定微生物生长量和生理指标u1.干重法u2.蛋白质含量测定法u3.其他生理指标测定法2021/6/164(一一) 微生物数量的测定微生物数量的测定 1、显微镜直接计数法、显微镜直接计数法 使用细菌计数板或血球计数板在显微镜下直接计数。使用细菌计数板或血球计数板在显微镜下直接计数。 优点优点：操作简便，计数直观。：操作简便，计数直观。一、微生物生长量的测定一、微生物生长量的测定2021/6/165(一一) 微生物数量的测定微生物数量的测定 2、稀释平板计数法、稀释平板计数法 对样品稀释培养，据形成的菌落数计数。对样品稀释培养，据形成的菌落数计数。 优点优点：传统计数方法。对设备要求不高。：传统计数方法。对设备要求不高。一、微生物生长量的测定一、微生物生长量的测定10-310-510-410-62021/6/166(一一) 微生物数量的测定微生物数量的测定 、比浊计数法、比浊计数法根据细菌悬浮液的吸光度测定其数量。根据细菌悬浮液的吸光度测定其数量。 优点优点：简便，直接。：简便，直接。一、微生物生长量的测定一、微生物生长量的测定2021/6/167(二二) 微生物重量的测定微生物重量的测定 1、称重法、称重法 用离心或过滤的方法将菌体从培养基中分离、冼净，称湿重或干重。用离心或过滤的方法将菌体从培养基中分离、冼净，称湿重或干重。 优优 点：点：简单可靠。简单可靠。 一、微生物生长量的测定一、微生物生长量的测定第二节第二节 微生物纯培养群体生长规律微生物纯培养群体生长规律在活性污泥法中采用的指标：在活性污泥法中采用的指标：（1）混合液悬浮固体）混合液悬浮固体(MLSS)（粗放测定）（粗放测定） 污泥污泥干燥干燥-称重称重(W1)（2）挥发性悬浮固体）挥发性悬浮固体(MLVSS)（相对准确）（相对准确） 上述已称重污泥上述已称重污泥-马福炉马福炉(500度度2小时小时)-冷却冷却-称重称重(W2)2021/6/168(二二) 微生物重量的测定微生物重量的测定 2、蛋白质含量蛋白质含量测定法测定法 根据样品中菌体蛋白质含量计算微生物重量的方法。根据样品中菌体蛋白质含量计算微生物重量的方法。 一、微生物生长量的测定一、微生物生长量的测定原理原理：（：（1）微生物蛋白质含量稳定）微生物蛋白质含量稳定 （2）氮是蛋白质的稳定成分）氮是蛋白质的稳定成分 (蛋白质量蛋白质量=6.25总含总含N量量)优点优点：测定准确。：测定准确。2021/6/169微生物的生长规律u一、无分支单细胞微生物的群体生长规律（一）生长曲线1.延滞期2.对数期3.稳定期4.衰亡期（二）生长曲线对发酵生产的指导意义（略）2021/6/1610 根据细菌生长繁殖速率将生长曲线分四个阶段：根据细菌生长繁殖速率将生长曲线分四个阶段：第二节第二节 微生物纯培养群体生长规律微生物纯培养群体生长规律缓慢期缓慢期 对数期对数期 稳定期稳定期 衰亡期衰亡期二、细菌分批培养群体生长规律二、细菌分批培养群体生长规律2021/6/1611第二节第二节 微生物纯培养群体生长规律微生物纯培养群体生长规律缓慢期（缓慢期（延迟期、滞留适应期）滞留适应期滞留适应期二、细菌分批培养群体生长规律二、细菌分批培养群体生长规律特特 点：点：分裂迟缓、代谢活跃。分裂迟缓、代谢活跃。产生原因：产生原因：（2） 细胞分裂必需因子的缺乏细胞分裂必需因子的缺乏（1）接种时的机械损伤引）接种时的机械损伤引2021/6/1612第二节第二节 微生物纯培养群体生长规律微生物纯培养群体生长规律缓慢期（缓慢期（延迟期、滞留适应期）4、菌株的遗传性、菌株的遗传性滞留适应期滞留适应期二、细菌分批培养群体生长规律二、细菌分批培养群体生长规律研究滞留适期长短的意义？研究滞留适期长短的意义？影响滞留适应期长短的因素影响滞留适应期长短的因素1、培养基成分、培养基成分2、接种物菌龄、接种物菌龄3、接种量、接种量2021/6/1613第二节第二节 微生物纯培养群体生长规律微生物纯培养群体生长规律对数期对数期（指数生长期）指数生长期）特点：特点： （1）代谢活性强）代谢活性强 （2）世代时短而稳定）世代时短而稳定对数生长期对数生长期二、细菌分批培养群体生长规律二、细菌分批培养群体生长规律2021/6/1614第二节第二节 微生物纯培养群体生长规律微生物纯培养群体生长规律对数期对数期（指数生长期）指数生长期）对数生长期对数生长期二、细菌分批培养群体生长规律二、细菌分批培养群体生长规律见教材见教材P93Nt=2n N0n=3.33(lgNt-lgN0) G=t/n=0.301t/(lgNt-lgN0) n繁殖代数繁殖代数 G世代时世代时(每繁殖一代所需的时间每繁殖一代所需的时间) N0对数生长期开始微生物数量对数生长期开始微生物数量 Nt对数生长期经过时间对数生长期经过时间t后微生物数量后微生物数量2021/6/1615第二节第二节 微生物纯培养群体生长规律微生物纯培养群体生长规律稳定期稳定期（最高生长量期）（最高生长量期）最高生长量期最高生长量期特特 点：点：1、细菌数量增加率为、细菌数量增加率为0。2、部分细菌大量积累代谢产物。、部分细菌大量积累代谢产物。细菌数量增加率为细菌数量增加率为0的原因的原因?二、细菌分批培养群体生长规律二、细菌分批培养群体生长规律2021/6/1616第二节第二节 微生物纯培养群体生长规律微生物纯培养群体生长规律衰亡期衰亡期特特 点：菌体活性降低、大量死亡；点：菌体活性降低、大量死亡； 细胞畸变、自溶细胞畸变、自溶 革兰氏染色不稳定革兰氏染色不稳定衰亡期衰亡期二、细菌分批培养群体生长规律二、细菌分批培养群体生长规律2021/6/1617第第三三节节 微生物纯培养微生物纯培养一、微生物纯培养的概念一、微生物纯培养的概念实验室条件下，实验室条件下，由一个微生物细胞或一种细胞由一个微生物细胞或一种细胞群繁殖得到的后代。群繁殖得到的后代。2021/6/1618第第三三节节 微生物纯培养微生物纯培养二、微生物纯培养技术二、微生物纯培养技术纯培养基本步骤：纯培养基本步骤：稀释平皿法稀释平皿法划线法划线法单细胞挑取法单细胞挑取法纯培养方法纯培养方法 (2) 培养培养(1) 分离分离2021/6/1619第第三三节节 微生物纯培养微生物纯培养二、微生物纯培养技术二、微生物纯培养技术1、稀释平板分离法、稀释平板分离法：倾注平板法和涂布平板法。：倾注平板法和涂布平板法。 基本过程：（基本过程：（1）梯度稀释过程；（）梯度稀释过程；（2）分离培养过程）分离培养过程涂布涂布倾注倾注梯梯 度度 稀稀 释释 过过 程程10-110-210-310-410-510-62021/6/1620第第三三节节 微生物纯培养微生物纯培养二、微生物纯培养技术二、微生物纯培养技术4) 操作要点：操作要点： 无菌操作无菌操作稀释平板分离法使用过程中的几个问题稀释平板分离法使用过程中的几个问题1) 梯度稀释度的确定：梯度稀释度的确定： 需分离微生物在样品中的数量需分离微生物在样品中的数量2) 选择菌落接种的依据：选择菌落接种的依据： a、菌落特征；、菌落特征； b、菌体的特征、菌体的特征3) 微生物纯培养的标准：微生物纯培养的标准： 菌落特征一致性菌落特征一致性2021/6/16212、单细胞挑取法：、单细胞挑取法： 从待分离材料中挑取从待分离材料中挑取一个细胞来培养，从而获一个细胞来培养，从而获得纯培养的过程。得纯培养的过程。第第三三节节 微生物纯培养微生物纯培养二、微生物纯培养技术二、微生物纯培养技术2021/6/16223、平皿划线法、平皿划线法 (P图图-) 用接种环沾少许待分离的材料，在培养基表面进行多次平行划线，使微用接种环沾少许待分离的材料，在培养基表面进行多次平行划线，使微生物细胞分开生长以获得微生物纯培养的过程。生物细胞分开生长以获得微生物纯培养的过程。第第三三节节 微生物纯培养微生物纯培养二、微生物纯培养技术二、微生物纯培养技术2021/6/1623第第三三节节 微生物纯培养微生物纯培养三、目标微生物纯培养筛选的基本思路三、目标微生物纯培养筛选的基本思路、待分离样品的确定、培养基的选择、纯化过程环境条件的控制（温度、空气、P、抑制剂）（）2021/6/1624（一）纯培养的保存（一）纯培养的保存试管斜面培养基低温、干燥、隔绝空气试管斜面培养基低温、干燥、隔绝空气第第三三节节 微生物纯培养微生物纯培养四、纯培养的保存与复壮四、纯培养的保存与复壮1、灭菌彻底、灭菌彻底2、棉塞大小要合适、棉塞大小要合适 3、无菌操作、无菌操作保存过程的注意点保存过程的注意点：防止杂菌污染。：防止杂菌污染。2021/6/1625（二）纯培养的衰退与复壮（二）纯培养的衰退与复壮第第三三节节 微生物纯培养微生物纯培养四、纯培养的保存与复壮四、纯培养的保存与复壮衰退的原因：衰退的原因：衰老、变异衰老、变异衰退的表现：衰退的表现：生长缓慢生长缓慢优良性状的丧失优良性状的丧失抗逆性下降抗逆性下降衰退的预防：衰退的预防：控制继代频率控制继代频率创造良好的培养条件创造良好的培养条件采取有效的保存方式采取有效的保存方式复壮复壮狭义（被动）狭义（被动）广义（主动）广义（主动）复壮方法：复壮方法：选优选优汰劣汰劣2021/6/1626第第四四节节 微生物的生活环境微生物的生活环境极端环境条件对微生物的影响极端环境条件对微生物的影响 死死 亡亡环境条件一定范围的变化，影响环境条件一定范围的变化，影响形态形态生理生理生长生长繁殖繁殖温度温度O2氧化还原电位氧化还原电位水分水分辐射辐射化学药物化学药物pH影响微生物生长的主要环境因子影响微生物生长的主要环境因子2021/6/1627第第四四节节 微生物的生活环境微生物的生活环境一、温度一、温度1、温度对微生物生长的影响、温度对微生物生长的影响微生物的生长温度类型微生物的生长温度类型低低 温温 型型中中 温温 型型高高 温温 型型温度对微生物生长的影响温度对微生物生长的影响高温：蛋白质变性高温：蛋白质变性 酶失活酶失活 核糖体解体核糖体解体 致死时间、致死温度致死时间、致死温度低温：酶活性下降、新陈代谢缓慢低温：酶活性下降、新陈代谢缓慢微生物的三种基本温度微生物的三种基本温度最低生长温度最低生长温度最高生长温度最高生长温度最适生长温度最适生长温度2021/6/1628第第四四节节 微生物的生活环境微生物的生活环境2、高温灭菌、高温灭菌一、温度一、温度高温灭菌高温灭菌湿热灭菌湿热灭菌干热灭菌：干燥条件，干热灭菌：干燥条件，160维持维持1-2h。高压蒸汽灭菌法：密闭条件下，水加热蒸发形成高压高压蒸汽灭菌法：密闭条件下，水加热蒸发形成高压 的同时产生高温。利用高温杀死菌。的同时产生高温。利用高温杀死菌。巴斯德消毒法：采用巴斯德消毒法：采用60-70的温度处理的温度处理15-30min 的消毒方法。的消毒方法。间歇灭菌法：间歇灭菌法：100，30-60min 冷却，冷却，37培养培养1d反复三次反复三次2021/6/1629第第四四节节 微生物的生活环境微生物的生活环境3、低温保藏、低温保藏一、温度一、温度菌种保存（试管斜面或孢子砂土管）菌种保存（试管斜面或孢子砂土管）食品保藏食品保藏特例：流感杆菌、脑膜炎球菌特例：流感杆菌、脑膜炎球菌2021/6/1630第第四四节节 微生物的生活环境微生物的生活环境二、二、氧气氧气p94专性好氧菌专性好氧菌 Eh0.1V，而以，而以0.3-0.4v为宜为宜兼性厌氧菌兼性厌氧菌Eh0.1v行好气呼吸行好气呼吸厌氧菌厌氧菌Eh值值0.1V以下以下 耐氧菌微好氧菌2021/6/1631专性好氧菌（专性好氧菌（strict aerobe）必须在有分子氧的条件下才能生长，有完整的呼吸链，以分子氧作为最终氢受体，细胞含有超氧物歧化酶（SOD，superoxide dismutase）和过氧化氢酶。在有氧或无氧条件下均能生长，但有氧情况下生长得更好，在有氧时靠呼吸产能，无氧时接发酵或无氧呼吸产能；细胞含有SOD和过氧化氢酶。微好氧菌（微好氧菌（microaerophilic bacteria）只能较低的氧分压下才能正常生长，通过呼吸链并以氧为最终氢受体而产能兼性好氧菌（兼性好氧菌（facultative aerobe）2021/6/1632耐氧菌（耐氧菌（aerotolerant anaerobe）可在分子氧存在下进行厌氧生活的厌氧菌。生活不需可在分子氧存在下进行厌氧生活的厌氧菌。生活不需要氧，分子氧也对它无毒害。不具有呼吸链，依靠专性发酵要氧，分子氧也对它无毒害。不具有呼吸链，依靠专性发酵获得能量。细胞内存在获得能量。细胞内存在SOD和过氧化物酶，但缺乏过氧化和过氧化物酶，但缺乏过氧化氢酶。氢酶。厌氧菌（厌氧菌（anaerobe）分子氧对它有毒害，短期接触空气，也会抑制其生长甚分子氧对它有毒害，短期接触空气，也会抑制其生长甚至致死；在空气或含有至致死；在空气或含有10%CO2的空气中，在固体培养基表的空气中，在固体培养基表面上不能生长，只有在其深层的无氧或低氧化还原电势的面上不能生长，只有在其深层的无氧或低氧化还原电势的环境下才能生长；生命活动所需能量通过发酵、无氧呼吸、环境下才能生长；生命活动所需能量通过发酵、无氧呼吸、循环光合磷酸化或甲烷发酵提供；细胞内缺乏循环光合磷酸化或甲烷发酵提供；细胞内缺乏SOD和细胞和细胞色素氧化酶，大多数还缺乏过氧化氢酶。色素氧化酶，大多数还缺乏过氧化氢酶。2021/6/1633第第四四节节 微生物的生活环境微生物的生活环境三、水分三、水分1、水分对微生物生长的影响：、水分对微生物生长的影响： 细菌最适水的活度值：细菌最适水的活度值：0.93-0.99 酵母菌最适水的活度值：酵母菌最适水的活度值：0.88-0.91 霉菌最适水的活度值：霉菌最适水的活度值： 0.802、应用：、应用：干燥法保存物品干燥法保存物品 食品的冷冻干燥食品的冷冻干燥水的活度小于水的活度小于0.60-0.70时时休眠、部分出现细胞脱水、蛋白质变性休眠、部分出现细胞脱水、蛋白质变性(多数微生物多数微生物)2021/6/1634第第四四节节 微生物的生活环境微生物的生活环境三、辐三、辐 射射 辐射：能量通过空间传递的一种物理现象。辐射：能量通过空间传递的一种物理现象。 1、可见光：（、可见光：（400nm800nm） 对微生物的作用：对微生物的作用：光氧化作用：光氧化作用：有氧条件下，光线被细胞有氧条件下，光线被细胞内色素吸收，使酶或其它敏感成分失活内色素吸收，使酶或其它敏感成分失活引起的微生物死亡。引起的微生物死亡。（3）光氧化作用。）光氧化作用。（1）能源）能源（2）刺激担子菌子实体形成）刺激担子菌子实体形成2021/6/16352、紫外线：、紫外线：杀菌波长范围：杀菌波长范围：240300nm 杀菌力最强范围：杀菌力最强范围： 255265nm 三、辐三、辐 射射紫外线杀菌特点：紫外线杀菌特点： 穿透力弱，用作穿透力弱，用作表面消毒表面消毒或或空气灭菌空气灭菌第第四四节节 微生物的生活环境微生物的生活环境2021/6/1636 3、电离辐射、电离辐射第第四四节节 微生物的生活环境微生物的生活环境三、辐三、辐 射射高能电磁波照射后发生的电离作用。高能电磁波照射后发生的电离作用。电离辐射对微生物的作用：电离辐射对微生物的作用： 粮食、果蔬、畜禽产品、饮料以及卫生材料杀菌处理粮食、果蔬、畜禽产品、饮料以及卫生材料杀菌处理低剂量低剂量(500伦琴伦琴)：促进生长、诱发变异：促进生长、诱发变异高剂量（高剂量（10万伦琴）：杀菌作用万伦琴）：杀菌作用实际应用：实际应用：（X射线、射线、射线等）射线等）2021/6/1637第第四四节节 微生物的生活环境微生物的生活环境四、化学药物四、化学药物1、重金属盐类、重金属盐类 杀菌机理：杀菌机理：杀菌机理：杀菌机理：与带阴电荷的菌体蛋白质结合使其变性与带阴电荷的菌体蛋白质结合使其变性（Hg、Ag盐，与细菌酶蛋白的盐，与细菌酶蛋白的巯基巯基结合）结合）2、有机化合物、有机化合物（酚、醇、醛）（酚、醇、醛）蛋白质变性蛋白质变性损伤细胞壁和膜损伤细胞壁和膜抑制酶系统抑制酶系统(脱氢酶、氧化酶等脱氢酶、氧化酶等)；2021/6/1638第第四四节节 微生物的生活环境微生物的生活环境四、化学药物四、化学药物杀菌机理：杀菌机理： 使蛋白质巯基氧化使蛋白质巯基氧化(成二硫基成二硫基) 2RSH+2X RSSR+2XH 杀菌机理：杀菌机理： 漂白粉漂白粉Ca(OCl)2及氯气及氯气 ：产生：产生次氯酸盐次氯酸盐和和原子氧原子氧； 碘：与酶分子中的酪氨酸结合。碘：与酶分子中的酪氨酸结合。3、氧化剂、氧化剂（高锰酸钾、过氧化氢、过氧乙酸）（高锰酸钾、过氧化氢、过氧乙酸）4、卤素、卤素（Cl、I常见）常见）2021/6/1639 具有降低表面张力效应的物质。具有降低表面张力效应的物质。第第四四节节 微生物的生活环境微生物的生活环境四、化学药物四、化学药物 直接干扰病原微生物的生长繁殖并用于治疗感染性疾病的化学药物。直接干扰病原微生物的生长繁殖并用于治疗感染性疾病的化学药物。 （选择性的杀菌或抑菌）（选择性的杀菌或抑菌）5、表面活性剂（、表面活性剂（新洁尔灭、消毒宁等）新洁尔灭、消毒宁等）杀菌机理：影响细胞生长、分裂杀菌机理：影响细胞生长、分裂6、化学治疗剂、化学治疗剂 抑制抑制叶酸叶酸合成合成 如：磺胺类药物等。如：磺胺类药物等。杀菌机理：杀菌机理：抑制抑制蛋白质蛋白质合成合成 如：链霉素，红霉素、四环素、氯霉素等如：链霉素，红霉素、四环素、氯霉素等抑制抑制肽聚糖肽聚糖合成合成 如：青霉素，万古霉素等。如：青霉素，万古霉素等。2021/6/1640第五节：消毒与灭菌2021/6/1641几个基本概念几个基本概念灭菌（灭菌（sterilization）采用强烈的礼花因素是任何物体内外部的一切微生物永采用强烈的礼花因素是任何物体内外部的一切微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施，称为灭菌。远丧失其生长繁殖能力的措施，称为灭菌。消毒（消毒（disinfection）采用较温和的理化因素，仅杀死物体表面或内部的一部采用较温和的理化因素，仅杀死物体表面或内部的一部分对人体有害的病原菌，而对被处理物体基本无害的措分对人体有害的病原菌，而对被处理物体基本无害的措施，称为消毒。施，称为消毒。防腐（防腐（antisepsis）利用理化因素完全抑制霉腐微生物的生长繁殖，从而达利用理化因素完全抑制霉腐微生物的生长繁殖，从而达到防止物品发生霉腐的措施，称为防腐。到防止物品发生霉腐的措施，称为防腐。化疗（化疗（chemotheraphy）即化学治疗。利用具有高度选择毒力的化学物质抑制宿即化学治疗。利用具有高度选择毒力的化学物质抑制宿主体内病院微生物的生长繁殖，以达到治疗该传染病的主体内病院微生物的生长繁殖，以达到治疗该传染病的一种措施。一种措施。1 1、高温灭菌（消、高温灭菌（消毒）法毒）法是最常是最常用的物理方法。高用的物理方法。高温可引起蛋白质、温可引起蛋白质、核酸等活性大分子核酸等活性大分子氧化或变性失活而氧化或变性失活而导致微生物死亡。导致微生物死亡。 一、常用的灭菌、消毒、抑菌及除菌的物理方法一、常用的灭菌、消毒、抑菌及除菌的物理方法（一）温度（一）温度2021/6/1643干热灭菌法（干热灭菌法（dry heat sterilizationdry heat sterilization）焚烧法（焚烧法（incinerationincineration）：）：是将被灭菌物品在火焰中是将被灭菌物品在火焰中燃烧，使所有的生物质碳化。简单、彻底，但对被灭菌燃烧，使所有的生物质碳化。简单、彻底，但对被灭菌物品的破坏极大。适用于无经济价值的物品灭菌，及不物品的破坏极大。适用于无经济价值的物品灭菌，及不怕烧的实验器具，如接种环、镊子、试管或三角瓶口的怕烧的实验器具，如接种环、镊子、试管或三角瓶口的灭菌等。灭菌等。干燥热空气灭菌法干燥热空气灭菌法( (hot-air oven)hot-air oven)：将物品放入烘箱将物品放入烘箱内，然后升温至内，然后升温至150170 150170 ，维持，维持1212小时。适用小时。适用于玻璃、陶瓷和金属物品的灭菌，不适合液体样品，及于玻璃、陶瓷和金属物品的灭菌，不适合液体样品，及棉花、纸张、纤维和橡胶类物质的灭菌。棉花、纸张、纤维和橡胶类物质的灭菌。特点：由于空气传热穿透力差，菌体在脱水状态下不易特点：由于空气传热穿透力差，菌体在脱水状态下不易杀死，所以温度高、时间长。杀死，所以温度高、时间长。 2021/6/1644湿热法湿热法(moist heat sterilization)(moist heat sterilization) ：特点：温度低、时间短、灭菌效果高特点：温度低、时间短、灭菌效果高原因：原因： 1) 菌体内含水量越高，则凝固温度越低；菌体内含水量越高，则凝固温度越低； 2) 蒸汽冷凝会放出潜热；蒸汽冷凝会放出潜热； 3) 饱和水蒸汽穿透力强；饱和水蒸汽穿透力强； 4) 湿热易破坏细胞内蛋白质大分子的稳定湿热易破坏细胞内蛋白质大分子的稳定 性，主要破坏氢键结构。性，主要破坏氢键结构。2021/6/1645高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌法利用水的沸点随水蒸气压力的增加而上升，以达到利用水的沸点随水蒸气压力的增加而上升，以达到100 100 以上高温灭菌的方法。以上高温灭菌的方法。 方法：方法：121121（1kg/cm1kg/cm2 2或或1515磅磅/ /英寸英寸2 2）维持）维持1515-20min-20min。 112 112（0 0.5.5kg/cmkg/cm2 2或或8 8磅磅/ /英寸英寸2 2）2020- -3 30min0min。 11 115 5（0.750.75kg/cmkg/cm2 2或或1111磅磅/ /英寸英寸2 2）2020- -3 30min0min。应根据灭菌物品的性质或成分选择灭菌温度应根据灭菌物品的性质或成分选择灭菌温度例如：例如：生理盐水、营养琼脂等培养基用生理盐水、营养琼脂等培养基用121 121 。 含葡萄糖、乳糖、氨基酸等培养基用含葡萄糖、乳糖、氨基酸等培养基用112 112 。适用：适用：耐高温物品，玻璃仪器、含水或不含水的物品。耐高温物品，玻璃仪器、含水或不含水的物品。 2021/6/1646高高 压压 蒸蒸 汽汽 灭灭 菌菌 锅锅注意事项：注意事项：排净冷空气；排净冷空气； 灭菌终了，缓慢降压；灭菌终了，缓慢降压； 灭菌结束，趁热取出物品。灭菌结束，趁热取出物品。2021/6/1647消毒p1002021/6/1648煮沸消毒法煮沸消毒法将水加热至将水加热至100100，煮沸，煮沸1515min30minmin30min，可杀死所有营养细胞可杀死所有营养细胞和部分芽孢，达到消毒物的目的。和部分芽孢，达到消毒物的目的。巴斯德消毒法（巴斯德消毒法（PasteurizationPasteurization）：）：用较低的温度来杀死其中的病源微生物，这样既保持用较低的温度来杀死其中的病源微生物，这样既保持食品的营养风味，又进行了消毒食品的营养风味，又进行了消毒该法一般是将待消毒的液体食品置于该法一般是将待消毒的液体食品置于6262处理处理3030minmin，然后迅然后迅速冷却。即可达到消毒目的。速冷却。即可达到消毒目的。低温长时法低温长时法( (Low temperature long time,LTLT)Low temperature long time,LTLT)；62.930min62.930min处理牛奶处理牛奶高温瞬时法（高温瞬时法（HightemperatureshorttimeHightemperatureshorttime,HTST):,HTST):71.615s71.615s处理牛奶处理牛奶超高温巴斯德灭菌法超高温巴斯德灭菌法( (UltrapasteurizationUltrapasteurization):):让液体食品停让液体食品停留在留在140140左右左右3-43-4s s，急剧冷却至急剧冷却至7575，经匀质化后冷却至，经匀质化后冷却至2020。2021/6/1649间歇灭菌法：间歇灭菌法： 将待灭菌物品在将待灭菌物品在8080-100-100蒸煮蒸煮15-6015-60minmin，冷冷却后搁置室温（却后搁置室温（28-3728-37）下过夜，并重复以上）下过夜，并重复以上过程三遍以上。过程三遍以上。其蒸煮过程可杀死微生物的营养体，但不能杀其蒸煮过程可杀死微生物的营养体，但不能杀死芽胞，室温过夜促使残留的芽孢萌发成营养死芽胞，室温过夜促使残留的芽孢萌发成营养体，再经蒸煮过程可杀死新的营养体；循环三体，再经蒸煮过程可杀死新的营养体；循环三次以上可保证彻底灭菌的目的。次以上可保证彻底灭菌的目的。适用于不耐高温的物品灭菌，如不适于高压灭适用于不耐高温的物品灭菌，如不适于高压灭菌的特殊培养基、药品的灭菌。菌的特殊培养基、药品的灭菌。 缺点是麻烦、缺点是麻烦、费时。费时。2021/6/1650二、常用的控菌方法二、常用的控菌方法消毒剂消毒剂: :可以抑制或杀灭微生物，但对人体也可能产生有害作用可以抑制或杀灭微生物，但对人体也可能产生有害作用的化学试剂的化学试剂.主要用于抑制或杀灭物体表面、器械、排泄物和主要用于抑制或杀灭物体表面、器械、排泄物和环境中的微生物。环境中的微生物。防腐剂防腐剂: :可以抑制或阻止微生物生长，但对人体或动物体的毒性可以抑制或阻止微生物生长，但对人体或动物体的毒性较低的化学药剂较低的化学药剂.用于肌体表面，如皮肤、粘膜、伤口等处用于肌体表面，如皮肤、粘膜、伤口等处防止感染，也有的用于食品、饮料药品的防腐作用。防止感染，也有的用于食品、饮料药品的防腐作用。但现时消毒剂和防腐剂间的界限已并不很严格但现时消毒剂和防腐剂间的界限已并不很严格. .消毒防腐剂的作用机理消毒防腐剂的作用机理一般有下列三种方式一般有下列三种方式: :使微生物蛋白质凝固变性使微生物蛋白质凝固变性, ,发生沉淀发生沉淀. .如酒精等如酒精等. .破坏菌体的酶系统破坏菌体的酶系统, ,影响菌体代谢影响菌体代谢. .如过氧化氢等如过氧化氢等. .降低微生物表面张力降低微生物表面张力, ,增加细胞膜的通透性增加细胞膜的通透性, ,使细胞发生破裂使细胞发生破裂或溶解或溶解. .如来苏儿等酚类物质如来苏儿等酚类物质. .（一）一）消毒剂和防腐剂消毒剂和防腐剂2021/6/1651 类型 名称及使用方法 作用原理 应用范围 醇类70%75%乙醇脱水、蛋白质变性皮肤、器皿 醛类0.5%10%甲醛2%戊二醛（pH=8） 蛋白质变性房间、物品消毒（不适合食品厂） 酚类3%5%石炭酸 2%来苏儿3%5%来苏儿破坏细胞膜、蛋白质变性地面、器具皮肤地面、器具氧化剂 0.1%高锰酸钾3%过氧化氢0.2%0.5%过氧乙酸氧化蛋白质活性基团，酶失活皮肤、水果、蔬菜皮肤、物品表面水果、蔬菜、塑料等常用的消毒防腐剂及其应用常用的消毒防腐剂及其应用2021/6/1652常用的消毒防腐剂及其应用常用的消毒防腐剂及其应用类型 名称及使用方法 作用原理 应用范围重金属盐类0.05%0.1%升汞2%红汞0.1%1%硝酸银0.1%0.5%硫酸铜蛋白质变性、酶失活变性、沉淀蛋白蛋白质变性、酶失活非金属器皿皮肤、粘膜、伤口皮肤、新生儿眼睛防治植物病害表面活性剂0.05%0.1% 新洁尔灭0.05%0.1% 杜灭芬蛋白变性、破坏细胞膜皮肤、粘膜、器械皮肤、金属、棉织品、塑料2021/6/1653常用的消毒防腐剂及其应用常用的消毒防腐剂及其应用类型 名称及使用方法 作用原理 应用范围卤素及其化合物0.20.5mg/L氯气10%20%漂白粉0.5%1%漂白粉2.5%碘酒破坏细胞膜、蛋白质饮水、游泳池水地面水、空气等皮肤 染料2%4%龙胆紫与蛋白质的羧基结合皮肤、伤口 酸类 0.1%苯甲酸 0.1%山梨酸食品防腐食品防腐2021/6/1654 结束语结束语若有不当之处，请指正，谢谢！若有不当之处，请指正，谢谢！