目录一、一、认识认识微生物微生物二、化二、化妆妆品中的微生物指品中的微生物指标标三、三、简简述化述化妆妆品极易受到微生物品极易受到微生物污污染的原因染的原因四、化四、化妆妆品品污污染后的后果染后的后果五、五、污污染途径染途径六、六、讨论讨论2021/6/161一、认识微生物2021/6/162微生物分类(实用型)： 大肠菌群 粪(耐热)大肠菌群（卫生领域） 大肠杆菌（细菌学）种类多2021/6/163微生物分类(了解)：五（六）界学说：三域学说：病毒界2021/6/164体积小2021/6/165微生物(化妆品)定义：是广泛存在于自然界的形体微小、数量繁多、肉眼看不见，需借助于光学显微镜或电子显微镜放大数百倍、上千倍甚至数万倍才能观察到的低等生物体。2021/6/166微生物（狭义三大类）及其特点 及化妆品中检测的微生物1）非非细胞型微生物胞型微生物：为形体最小，仅含有一种核酸RNA或DNA，或仅为传染性蛋白粒子，具有超级寄生性，包括病毒、朊病毒等。（只做了解） 2）原核原核细胞型微生物胞型微生物：为单细胞微生物，其细胞分化不完善，无完整细胞核及核膜、核仁，拟核或称核质构成。包括细菌（化化妆品有要求品有要求）、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体和放线菌等6类医学3）真核真核细胞型微生物胞型微生物：为多细胞或单细胞微生物（真菌（化化妆品中霉菌酵母菌品中霉菌酵母菌），有细胞核和各种细胞器，易在体外生长繁殖。2021/6/167 微生物的特征与化妆品中相关事项主要特征主要特征体小面大体小面大一个体积恒定的物体，被切割的越小，其相对表面积越大。微生物体积很小，如一个典型的球菌，其体积约1mm，可是其表面积却很大。这个特征也是赋予微生物其他如代谢快等特性的基础。吸多吸多转快快微生物通常具有极其高效的生物化学生物化学转化能力化能力。据研究，乳糖菌在1个小时之内能够分解其自身重量1000-10000倍的乳糖，产朊假丝酵母菌的蛋白合成能力是大豆蛋白合成能力的100倍。极易将化妆品中的营养成分代谢完，产生不可逆的损害。生生长繁殖快繁殖快相比于大型动物，微生物具有极高的生长繁殖速度。大肠杆菌能够在12.5-20分钟内繁殖1次。不妨计算一下，1个大肠杆菌假设20分钟分裂1次，1小时3次，1昼夜24小时分裂243=72次，大概可产生4722366500万亿个（2的72次方），这是非常巨大的数字。但事实上，由于各种条件的限制，如营养缺失、竞争加剧、生存环境恶化等原因，微生物无法完全达到这种指数级增长。 已知大多数微生物生长的最佳pH范围为7.0 (6.67.5)7.0 (6.67.5)附近附近，部分则低于4.0。导致微生物复测的意义不大，只能代表每次的测试结果。因而对检测人员要求严格！微生物的这一特性使其在工业上有广泛的应用，如发酵、单细胞蛋白等。微生物是人类不可或缺的好朋友。但是对化妆品生产而言就带来挑战。2021/6/168如何控制微生物的污染染及抑制？微生物的生长条件包括物理因素和营养（化学及生物）因素。 物理因素包括pH值，温度，氧浓度，湿度，静水压，渗透压和辐射。营养因素包括碳源，氮源，无机盐，能源，生长因子和水。 2021/6/169物理因素：物理因素：1.pH值微生物在正常生长过程中，它们所需要的pH有一定的范围，在这个pH 范围内又有很小的适应生长繁殖的pH区域，在这个区域内，微生物生长繁殖最好，因而称之为最适pH 。使料体pH值不处在微生物的最适pH值。2021/6/1610各种微生物的最适各种微生物的最适pHpH和和pHpH范围范围微生物微生物 最适最适pHpH值值 pH pH 范围范围细菌细菌 6.5 6.57.57.5 3.8 3.81212放线菌放线菌 7.5 7.58.08.0 5 51010霉菌霉菌 4.0 4.05.85.8 1.5 1.58.58.5酵母菌酵母菌 3.8 3.86.06.0 2.5 2.58.08.0从表可以看出，细菌和放线菌所需要的pH在中性偏碱，而霉菌和酵母菌所需要的pH在偏酸性。但是微生物对pH要求挺宽的。问题1配制培养基注意什么？2021/6/1611氢离子浓度影响微生物生长主要有以下几个方面：氢离子浓度影响微生物生长主要有以下几个方面：（1 1）影响微生物细胞中原生质膜的电荷，因而影响了微生物对营）影响微生物细胞中原生质膜的电荷，因而影响了微生物对营养物质的吸收；养物质的吸收；（2 2）影响微生物酶的活性；）影响微生物酶的活性；（3 3）影响微生物的代谢产物；）影响微生物的代谢产物；同时微生物的生长发育也影响环境的同时微生物的生长发育也影响环境的pHpH变化：变化：实验时：微生物在生长繁殖过程中，产生实验时：微生物在生长繁殖过程中，产生酸性或碱性物质，酸性或碱性物质，从而改从而改变了环境中的变了环境中的PHPH值，所以在培养基中加入一些缓冲剂（值，所以在培养基中加入一些缓冲剂（CaCOCaCO3 3）或或磷酸盐，从而使环境中磷酸盐，从而使环境中pHpH变化不大。培养基中的有机物质如变化不大。培养基中的有机物质如蛋白胨、蛋白胨、氨基酸氨基酸也都有一定缓冲能力。培养基不得变质。也都有一定缓冲能力。培养基不得变质。抑制微生物手段：抑制微生物手段：范围较广（范围较广（5.0-9.05.0-9.0），产品的，产品的pHpH值没有极酸和值没有极酸和极碱，因此极碱，因此pHpH不能作为化妆品微生物控制条件不能作为化妆品微生物控制条件2021/6/16122. 2.温度（温度（最重要因素之一）最重要因素之一）具体表现在：具体表现在：影响影响酶活性酶活性，温度变化影响酶促反应速率，最终影响细，温度变化影响酶促反应速率，最终影响细胞合成。胞合成。影响细胞膜的影响细胞膜的流动性流动性，温度高，流动性大，有利于物质，温度高，流动性大，有利于物质的运输，温度低，流动性降低，不利于物质运输，因此，的运输，温度低，流动性降低，不利于物质运输，因此，温度变化影响营养物质的吸收与代谢产物的分泌。温度变化影响营养物质的吸收与代谢产物的分泌。影响物质的影响物质的溶解度溶解度，对生长有影响。，对生长有影响。2021/6/1613（一）微生物生长的三个温度基点（一）微生物生长的三个温度基点从微生物整体来看从微生物整体来看:生长的温度范围一般在生长的温度范围一般在-10 100 极端下限为极端下限为-30 ，极端上限为，极端上限为105300 但对于特定的某一种微生物：但对于特定的某一种微生物：只能在一定温度范围内生长，在这个范围内，每种微生物都有自己只能在一定温度范围内生长，在这个范围内，每种微生物都有自己的的生长温度三基点生长温度三基点，即，即最低、最适、最高生长温度最低、最适、最高生长温度处于最适生长温度时，生长速度最快，代时最短。处于最适生长温度时，生长速度最快，代时最短。超过最低生长温度时，微生物不生长，温度过低，甚至会死亡。超过最低生长温度时，微生物不生长，温度过低，甚至会死亡。超过最高生长温度时，微生物不生长，温度过高，甚至会死亡。超过最高生长温度时，微生物不生长，温度过高，甚至会死亡。2021/6/1614绝大多数微生物都属于这一类，它们最适绝大多数微生物都属于这一类，它们最适温度在温度在25372537，体温性微生物体温性微生物中温性微生物中温性微生物室温性微生物室温性微生物25253030，主主要要是是腐腐生生性微生物。性微生物。3737，它它们们主主要要是是哺哺乳乳动动物物的的寄寄生生性性微微生生物。物。2021/6/16153.氧气：作为了解化妆品中检测的全部为有氧环境下测试。偶尔会出现鼓包极有可能是存在厌氧菌。 专性好氧菌专性好氧菌: : 好氧菌好氧菌 微好氧菌：微好氧菌： 兼性厌氧菌兼性厌氧菌 耐氧厌氧菌：耐氧厌氧菌： 厌氧菌厌氧菌 ( (专性专性) )厌氧菌：厌氧菌：微微生生物物2021/6/16164.光及射线太太阳阳光光除除可可见见光光线线外外，还还有有长长光光波波的的红红外外线线和和短短光光波波的的紫紫外外线线以以及及更更短短的的电电磁磁波波包包括括X X射线和射线和（Co60Co60电子流辐照）电子流辐照）射线。射线。它它们们都都具具有有杀杀菌菌的的作作用用，波波长长越越短短，杀杀菌菌作作用越强。用越强。2021/6/16174.1紫外线紫紫外外线线的的波波长长范范围围在在136136nmnm390nm390nm，不不同同波波长长的的紫紫外外线线，具具有有不不同同的的杀杀菌菌力力，250250nmnm（254nm254nm）280280nmnm波波长长的的杀杀菌力最强。菌力最强。作作用用原原理理：主主要要是是细细胞胞中中的的核核酸酸（DNADNA）具具有有吸吸收收紫紫外外线线的的能能力力，使使核核酸酸中中的的碱碱基基配配对对发发生生错错误误，从从而而影影响响了了DNADNA的复制，轻则发生突变，重则造成死亡。的复制，轻则发生突变，重则造成死亡。2021/6/16184.2X X射线和射线和射线射线 （了解不实用）（了解不实用）X X射射线线和和射射线线具具有有更更短短波波长长，也也具具有有强强的的杀杀菌菌作用，作用，作作用用的的原原理理引引起起物物质质电电离离，如如水水的的电电离离，使使水水形形成成H H和和OHOH的自由基；的自由基；自自由由离离子子与与溶溶液液中中经经常常存存在在的的氧氧分分子子产产生生一一些些具具有有氧氧化化性性的的过过氧氧化化物物如如H H2 2O O2 2（过过氧氧化化氢氢）等等，而而使使细细胞胞受受到损伤甚至死亡。到损伤甚至死亡。 2021/6/1619微微生生物物细细胞胞含含水水量量在在707080%80%，因因此此它它们们需需要要生活在含水的培养基质中或潮湿的空气中。生活在含水的培养基质中或潮湿的空气中。5.5.湿度（水分）湿度（水分）微微生生物物和和其其它它生生物物一一样样，必必须须有有水水才才能能进进行行代代谢活动以及生长和繁殖。谢活动以及生长和繁殖。微微生生物物在在干干燥燥环环境境中中将将引引起起代代谢谢活活动动的的停停止止以以致死亡。致死亡。日日常常生生活活中中常常用用、烘烘干干、晒晒干干和和熏熏干干的的方方法法来保存食物。来保存食物。仓库车间等温湿度监控的意义仓库车间等温湿度监控的意义2021/6/16206. 6.化学物化学物质（防腐（防腐剂研研发部部门比比较熟悉）熟悉）很很多多化化学学药药物物对对微微生生物物有有杀杀菌菌作作用用和和抑抑制制生生长长作用。作用。低低剂剂量量的的化化学学药药物物对对微微生生物物起起抑抑制制或或防防腐腐作作用，用，高剂量的化学药物对微生物起杀菌作用。高剂量的化学药物对微生物起杀菌作用。 化化学学药药物物杀杀菌菌剂剂种种类类很很多多，现现分分如如下下几几大大类类进行讨论。进行讨论。2021/6/16216.1重金属盐类重金属盐类有有无无机机和和有有机机的的重重金金属属盐盐类类，如如汞汞、银银、铅铅、锌锌、铜铜等等重重金金属属元元素素的的化化合合物物都都有有很很强强的的毒毒性性杀菌作用很强。杀菌作用很强。 杀杀菌菌原原理理：主主要要使使细细胞胞中中蛋蛋白白质质凝凝固固变变性性或或与与酶酶以以及及某某些些活活性性物物质质的的活活性性基基团团结结合合，妨妨碍碍这这些些基基团团的的正正常常作作用用，而而起起抑抑制制细细胞胞生生长长的作用的作用。对人皮肤和身体都有人皮肤和身体都有严重重伤害，基本上不能作害，基本上不能作为化化妆品常品常规防腐防腐剂2021/6/16226.26.2氧化剂氧化剂 过过氧氧化化氢氢（H H2 2O O2 2）、高高锰锰酸酸钾钾（KMnOKMnO4 4）次次氯氯化化钙钙 CaCa（OClOCl）ClCl或或CaCa（OClOCl）2 2 以以及及齿齿素素如如游游离离的的氯氯、溴溴、碘碘、氟氟和和它它们们的的化化合合物物等等，都都是是氧化剂。氧化剂。 杀杀菌菌原原理理：是是破破坏坏原原生生质质结结构构或或氧氧化化细细胞胞结结构中的一些活性基团而发生杀菌作用。构中的一些活性基团而发生杀菌作用。2021/6/16236.36.3还原剂还原剂硫硫酸酸亚亚铁铁（FeSOFeSO4 4）、甲甲醛醛（HCHOHCHO）都都是是常常用用的的还还原原消消毒毒剂剂，甲甲醛醛是是气气体体，但但能能溶溶解解于于水水中中，因因而而市市场场售售的的一一般般都都是是303040%40%的的水水溶液甲醛。溶液甲醛。 杀杀菌菌原原理理：主主要要能能与与蛋蛋白白质质的的酰酰基基或或巯巯基基起起反应，引起蛋白质变性，而死亡。反应，引起蛋白质变性，而死亡。尽量不用甲醛毒性大易造成中毒。2021/6/16246.46.4表面活性物质表面活性物质 乙乙醇醇、甲甲酚酚、来来苏苏尔尔、石石碳碳酸酸（酚酚）、新新洁洁尔尔灭、肥皂等都是表面活性洁净消毒剂。灭、肥皂等都是表面活性洁净消毒剂。 杀杀菌菌原原理理：降降底底细细胞胞的的表表面面张张力力；能能使使蛋蛋白白质质变变性性和和损损伤伤胞胞壁壁以以及及质质膜膜的的作作用用；是破坏细胞膜的渗透性。是破坏细胞膜的渗透性。最常用的消毒和灭菌的方式。2021/6/1625乙醇： 乙醇能够渗入细菌体内，使组成细菌的蛋白质凝固。所以酒精在医疗卫生上常用它作消毒杀菌剂。当使用95%的纯酒精消毒时，因为酒精浓度过高，使蛋白质凝固的作用越强。当高浓度的酒精与细菌接触时，就能使得菌体表面迅速凝固（浓硫酸在钢铁表面钝化类似），形成一层薄膜，阻止了酒精继续向菌体内部渗透，细菌内部的细胞没能彻底杀死。有的细菌遇到高浓度酒精时，会迅速产生防护反应，形成有坚硬外壳的孢子，以对抗酒精的伤害。待到适当时机，薄膜内的细胞将重新复活。因此，使用浓酒精达不到消毒杀菌的目的。如果使用如果使用7075的酒精的酒精，既能使组成细菌的蛋白质凝固，又不能形成薄膜，能使酒精继续向内部渗透，而使其彻底消毒杀菌。若酒精的浓度低于70，也不能彻底杀死细菌。2021/6/1626乙醇浓度的影响(重点)：2021/6/16276.56.5无机碱类和酸类无机碱类和酸类 氢氢氧氧化化钾钾（KOHKOH）、硫硫酸酸（H H2 2SOSO4 4）、氢氢氧氧化化钠钠（NaOHNaOH）物质，都能起杀菌作用。物质，都能起杀菌作用。 杀杀菌菌原原理理：引引起起细细胞胞物物质质的的水水解解和和凝凝结结，例例如，如，1%1%HCl HCl 、1%NaOH1%NaOH起杀菌作用。起杀菌作用。为什么化学试剂不会出现霉变等问题2021/6/16286.66.6毒性物质毒性物质二二氧氧化化硫硫（SOSO2 2）、硫硫化化氢氢（H H2 2S S）、一一氧氧化化碳碳（COCO）和氰化物（和氰化物（HCNHCN）。）。O O3 3 杀杀菌菌原原理理：对对原原生生质质中中的的一一些些活活性性基基团团或或辅辅酶酶成成分分能能发发生生专专性性结结合合，使使其其失失活活，降降低低代代谢谢活活动动或或使代谢不能进行，达到杀菌作用。使代谢不能进行，达到杀菌作用。空气消毒：20mg/m3臭氧浓度（有效浓度）作用30min 消毒后通风30min（半衰退期为2030分钟）0.16mg/m3方可进入。2021/6/16296.76.7染料染料 ( (培养基中较多微量物质培养基中较多微量物质) ) 结结晶晶紫紫、碱碱性性复复红红、孔孔雀雀绿绿等等染染料料都都有有一一定定杀杀菌作用。菌作用。 杀杀菌菌原原理理：主主要要是是染染料料中中有有发发色色团团和和助助色色团团，能能和和原原生生质质中中的的电电荷荷结结合合，使使蛋蛋白白质质变变性性，而而达达到到杀杀菌菌作作用用，低低浓浓度度可可起起到到抑抑制制微微生生物物生长的作用。生长的作用。2021/6/1630二、化妆品中的微生物指标2021/6/1631化妆品安全技术规范中有关微生物相关检测项目的定义 2016年12月1日起施行2021/6/16321.菌落总数：化妆品检样经过处理，在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度、培养时间、pH值、需氧性质等），1g（1mL）检样中所含菌落的总数。所得结果只包括一群本方法规定的条件下生长的嗜中温的需氧性和兼性厌氧菌落总数。厌氧菌可能会导致面膜袋鼓包面膜原液腐败。2021/6/16332.霉菌和酵母菌总数（真菌）：化妆品检样在一定条件下培养后，1g或1mL化妆品中所污染的活的霉菌和酵母菌数量，藉以判明化妆品被霉菌和酵母菌污染程度及其一般卫生状况。本方法根据霉菌和酵母菌特有的形态和培养特性，在虎红培养基上，置282培养5d，计算所生长的霉菌和酵母菌数（ATCC10231、ATCC16404）2021/6/16343.耐热大肠菌群(粪大肠菌群):系一群需氧及兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌，在44.5培养24h48h能发酵乳糖产酸并产气。该菌主要来自人和温血动物粪便，可作为粪便污染指标来评价化妆品的卫生质量, 推断化妆品中有否污染肠道致病菌的可能。（大肠埃希氏菌（大肠杆菌）ATCC8739）4.金黄色葡萄球菌ATCC6538：为革兰氏阳性球菌，呈葡萄状排列，无芽胞，无荚膜，能分解甘露醇，血浆凝固酶阳性。5.铜绿假单胞菌（绿脓杆菌ATCC9027）：属于假单胞菌属，为革兰氏阴性杆菌，氧化酶阳性，能产生绿脓菌素。此外还能液化明胶，还原硝酸盐为亚硝酸盐，在421条件下能生长。2021/6/1635相应微生物的宏观和微观形态细菌宏观霉菌宏观酵母菌宏观接种划线2021/6/1636 电子显微镜下 显微镜铜绿假单菌ATCC9027 大肠杆菌ATCC8739金黄色葡萄球菌ATCC65382021/6/1637三、三、简述化述化妆品极易品极易受到微生物受到微生物污染的原因染的原因2021/6/16382021/6/1639四、化妆品污染后的后果直接影响外观2021/6/1640重要安全影响及品牌影响2021/6/1641五、污染途径：人员2021/6/16422021/6/16432021/6/1644因此：1.化妆品生产过程中微生物的控制是重要且必要的。2.环境监控的必要性和操作。2021/6/1645心中疑问和现象共同讨论：1.检测出来的产品结果均是10CFU/g？（防腐剂作用但是防腐剂效果毕竟有限）？2021/6/16462.车间人员、设备、水等管控不严，结果还是好的(已经不具有代表性了)。极有可能会导致产品后续的客诉等等。可能污染的微生物因防腐体系的存在被杀灭但同时消耗了营养物质和产生了毒素，使用效果不好了。2021/6/1647 谢 谢 大 家 参 与！2021/6/1648 结束束语若有不当之处，请指正，谢谢！若有不当之处，请指正，谢谢！