中药对视神经损伤修复的影响项目简介实验背景目前的治疗手段实验目的研究内容和拟解决的问题实验步骤实验结果预测实验意义本实验创新之处实验背景自1982年已有报道视神经切断的再生实验，将青蛙的视神经切断，3个月内，视神经再生，视力恢复。以及1985年Aguago动物实验和1987年Vidal等动物实验均证实视神经具有再生功能。可是由于视神经损伤的病理过程复杂，再生过程受到诸多因素的影响。近10年已从起解剖、生理、生物化学等方面进行研究，并已经得到一些明确的结论。有实验表明，复明中药可能通过其扩张血管增血流动功能，促进组织的新陈代谢，从而改善是神经组织的内环境，加强神经细胞的合成，促进视神经的再生。 通过测定某些药物对视神经损伤修复的作用，筛选出来的具有促进作用的药物。并且通过这个实验有助于了解中药的作用机制，为中药的临床应用提供现代理论依据。视神经损伤修复的重要性视神经损伤导致： 1、视力下降甚至是失明 2、直接光反射消失、间接光反射正常现象 3、双眼的视力受损和视野缺损症状 所以，视神经损伤有效的治疗就显得急需和迫切。目前主要治疗手段早期药物治疗： 脱水剂、糖皮质激素、血管扩张剂、钙离子通道阻滞剂以及维生素C、E、B等药物，以及维生素B1、ATP以及辅酶A，地巴唑、菸酸、维生素E、复方丹参、维脑路通等等。实验目的探究并测定哪些中药单体对视神经损伤具有修复作用，以及筛选出对视神经节细胞再生最具促进作用的新药。为正处在视神经损伤造成的视力下降，甚至丧失视力的患者带来福音。研究内容和拟解决的问题研究内容：1、用视神经横断伤法将老鼠的视神经自视交叉前任一部位切断，以至所有视网膜神经节细胞（RGC）轴突完全断离。2、分别给各组老鼠注射几种不同的中药，分35期进行观察记录各组老鼠的视神经节细胞的再生情况，以及视力恢复情况。拟解决的问题1、明确视交叉的解剖位置，为断离视神经节细胞轴突，制备动物模型提供解剖学依据。2、熟悉各种直接或间接检测老鼠视力情况的科学方法。1、动物分组1、选取条件相似的小鼠设为对照组及实验组1、2、3 指标 组视神经纤维积光密度视神经髓鞘积光密度视神经胶质细胞对照组实验组1实验组2实验组32、视神经损伤鼠模型的建立视神经横断伤法建立视神经损伤动物模型概念： 此法是将视神经沿眶上切迹切断，使视网膜神经节细胞（RGC）和中枢神经系统完全断离。优点： 各实验动物致伤量一致，观察再生时不会受残留未受损的轴突影响，并且试验具有可重复性，各组间可进行对照，期间，药物可进行平行筛选。视神经损伤鼠模型的建立结扎剪断上直肌：于结膜穹窿部93点钟位剪开结膜，向上分离暴露上直肌，用5-缝线结扎上直肌肌止端，剪断上直肌。暴露视神经：用眼脸拉钩牵拉上脸，向框外和下方牵拉上直肌残端的缝线，同时用斜视钩伸向球后，向框外球下方轻拉眼球，以暴露视神经。横断视神经：用手术剪将暴露出的视神经剪断术后处理：缝合结膜，同时注射庆大霉1千U，涂金霉素眼膏。术前准备：术眼结膜囊冲洗，手术部位剃毛消毒铺巾。 3、注入各种中药 实验组在角膜缘后睫状体部位用性注射器向眼球内垂直刺入，注入中药，同时前房水放出等量的房水，以保证眼球内压不变，对照组不做处理注入放回笼中。 分别于3、7、14天，取实验鼠1、2、3组的小鼠的视网膜作免疫荧光，以及取出视神经，送至病理科检查， 染色检查以下指标：视神经纤维积光密度、视神经髓鞘积光密度、视神经胶质细胞。4、记录在案，并进行整理、统计、分析各指标的检测结果分别比较视神经纤维积光密度、视神经髓鞘积光密度、视神经胶质细胞三项指标。视神经损伤后应有视神经纤维减少、视神经纤维脱髓鞘和神经胶质细胞增生等病理改变。通过比较三项指标可以确认哪种中药对视神经的再生影响最大。5年度研究计划和预期进展2011年11月2011年1月：查文献、资料，预实验。2012年2月2012年4月： 1、制备动物模型 2、使用免疫荧光法检测三种中药 3、分析数据并记录在案2012年5月2012年6月： 1、制备动物模型 2、使用F-VEP检测三种中药 3、分析数据并记录在案2012年7月2012年8月 1、制备动物模型 2、使用病理形态学检查三种中药 3、分析数据并记录在案2012年9月2012年11月： 补充整理资料，撰写论文，提交总结报告，请专家组验收。（上述安排可根据实际情况适当调整和总体安排） 实验结果预测 某些中药对视神经损伤修复有促进作用；某些药物对视神经损伤修复有抑制作用;某些药物对视神经损伤修复没有作用。 预期研究成果与提交成果方式（1） 为视神经损伤后的再生提供科学的药物治疗。（2）争取在省级以上期刊发表论文（3）向学院提交总结报告，请专家鉴定验收（4）参加相关的学术交流会，推广成果；为临床上更好地推广该药物提供依据。实验意义通过测定某些药物对视神经损伤修复的影响，筛选出最有效的中药，并为临床治疗视神经损伤拓宽道路。这个实验有助于了解中药的作用机制，为中药的临床应用提供现代理论基础，还给视神经患者一个光明的未来。 本实验创新之处 区别于其他实验者给予神经营养因子、区别于其他实验者给予神经营养因子、周围神经移植、靶组织共培养、移植纯化周围神经移植、靶组织共培养、移植纯化的的 PN S 髓鞘细胞、运用胶质细胞抑制剂和髓鞘细胞、运用胶质细胞抑制剂和上调上调RGC bcl22 表达等已试用于增强轴突表达等已试用于增强轴突损伤损伤RGC 的存活的方法，本实验通过使用的存活的方法，本实验通过使用新的中药单体改变新的中药单体改变RGC生存的微环境，并生存的微环境，并筛选出具有促进视神经再生功能的中药，筛选出具有促进视神经再生功能的中药，来治愈视神经损伤。来治愈视神经损伤。 实验可行性1 、昆明医学院实验室拥有进行实验所必须的仪器装备，可以减少不必要的经费。 2、指导老师有丰富的研究经验和知识储备。