-玉米赤霉烯酮标准操作规程玉米赤霉烯酮标准操作规程1 1、目的目的为了规范亲和柱净化样本中玉米赤霉烯酮的操作流程，特制订本操作规程。2 2、范围范围本标准适用于粮食、饲料、食品中玉米赤霉烯酮的检测。3 3、检出限和定量限检出限和定量限岛津项目样本检出限（g/kg）ZEN2.96安捷伦样本检出限（g/kg）75.9样本定量限（g/kg）8.96样本定量限（g/kg）253.24 4、职责职责部门职责1、2、负责本制度的实施。负责本制度的监督执行。部门名称质量管理部5 5、程序程序5.15.1原理原理测定的基础是抗原、抗体反应，抗体连接在柱体内，样品经过提取、过滤后，缓慢的通过玉米赤霉烯酮免疫亲和柱，在免疫亲和柱内毒素与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。用甲醇洗脱玉米赤霉烯酮，然后注入到高效液相色谱仪中用于检测。5.25.2溶液配制溶液配制5.2.1提取液：80%乙腈-用量筒移取 800mL 乙腈，加入超纯水定容至至 1L。5.2.2稀释液：0.01M PBST 溶液-称取 8g NaCl、0.2g KCl、0.2g KH2PO4和 1.16g Na2HPO4.12H2O，加入 800mL 超纯水溶解，加入 2mL Tween-20，定容至 1L。5.2.3玉米赤霉烯酮标准工作液：用色谱级甲醇将储备工作液分别稀释到 1000 ng/ml、500 ng/ml、200ng/ml、100 ng/ml、50 ng/ml。5.35.3 样品前处理样品前处理-20g0.01g 样品（固体样品需粉碎，并过 2mm 分样筛）加入 100mL 提取液（80%-乙腈-水溶液）混匀；-高速均质（10,000r/min）1min，或摇床（200r/min300r/min）剧烈振荡 20min，用快速定性滤纸过滤，收集滤液；-取 10mL 滤液加入 40mL 稀释液稀释，再用微纤维滤纸过滤，并收集滤液作为上样液；-取 25mL 上样液过免疫亲和柱净化。稀释倍数：15.45.4净化净化-取出免疫亲和柱，将上方塞子取出斜剪断，再插回亲和柱上；(3mL 的免疫亲和柱去掉上方塞子，安装上转接头，将转接头另一端与注射器固定后使用)-将柱子与气控操作架上的注射器连接固定，取适量处理后的溶液上样；-去掉亲和柱下方堵头，调节开关，使液体以 12 滴/秒速度流出；-待液体排干后，用 10mL 去离子水洗涤 2 次，流速 23 滴/秒；-待液体排干后，上样 1mL 甲醇，流速 1 滴/秒，收集洗脱液并定容至 1mL；-洗脱液用 0.22m 微孔滤器过滤后转移至样品瓶用于 HPLC 分析。* 每次上样前都要将上次液体完全排干。* 谷物样本也适用于 GB/T 5009.209-20085.55.5液相测定液相测定5.5.1液相色谱条件C18 柱：250mm（长）4.6mm（直径） ，填料粒径 5m；流动相：60%乙腈流速：1.0 mL/min；柱温：40；进样体积：20L荧光检测器 ：激发波长：274nm发射波长：440nm5.5.2色谱定量分别取相同体积样液和标准工作液注入高效液相色谱仪， 在上述色谱条件下测定试样的响应值（峰高或峰面积） ，以标准品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标做标准曲线，将未知样本中玉米赤霉烯酮的峰面积带入标准曲线，得到试样中玉米赤霉烯酮的浓度，标准品色谱图参考下图：-数据文件名:ZEN-500ppb.lcd样品名 :ZEN-500ppbZENmV25检测器 A Ex:274nm,Em:440nm201510500.01.02.03.04.05.06.07.08.09.010.011.012.0min附图：附图：ZEN-500ppbZEN-500ppb 标准品液相图谱标准品液相图谱5.65.6注意事项注意事项-使用前，免疫亲和柱需回至室温（2225） 。-亲和柱 28储存，不得冻存。-不要使用过了有效日期的免疫亲和柱。-取样量：根据需要可以适当增加或减少取样量，注意提取液量要相应改变。-柱容量：2000ng，当样本中待检毒素的含量除以稀释倍数高于柱容量时，需要适当降低上样液的体积，重新检测。-pH： 亲和柱的上样溶液 pH 需在 68 之间， 若偏离此范围需要用盐酸或氢氧化钠调节 pH。-玉米赤霉烯酮可致癌，应戴手套操作。-使用过的容器及标准品溶液最好用次氯酸钠溶液（5%V/V）浸泡过夜。-上机检测时的溶剂与流动相保持一致，可以消除溶剂效应的影响。6 6、相关文件相关文件免疫亲和柱检验标准免疫亲和柱检验操作规程岛津液相色谱仪标准操作规程安捷伦液相色谱仪标准操作规程7 7、相关记录相关记录N/A8 8、附件附件N/A9 9、修改历史记录修改历史记录变更类型修改条款及主要内容修改人修改日期编号-01AN/A魏丹丹2016.2.26变更类型：A新起草M - 修订-