实验四实验四 球菌球菌v引起人类化脓性感染的主要细菌，又称化脓性球菌v葡萄球菌属链球菌属肠球菌属奈瑟菌属实验四五六球菌课件菌种菌种v葡萄球菌属：金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌v链球菌属：甲型溶血型链球菌、乙型溶血性链球菌、肺炎链球菌v奈瑟氏菌属：微黄奈瑟氏菌v肠球菌属实验四五六球菌课件葡萄球菌属葡萄球菌属菌种：金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌实验四五六球菌课件实验目的实验目的v掌握葡萄球菌属的分离培养方法与鉴定方法v掌握葡萄球菌属的菌落特点菌体形态及染色性实验四五六球菌课件v细菌菌落形态及色素的观察v做GS染色，镜下形态的观察v接种血平板，观察细菌的生长表现、色素及溶血v生化反应：1.触酶试验2.血浆凝固酶试验3.甘露醇试验实验内容实验内容实验四五六球菌课件实验器材验器材v菌种、血平板、血浆、3%H2O2、甘露醇培养基、滤纸片、玻片、擦镜纸、吸水纸、污物缸等实验四五六球菌课件细菌菌落形态及色素的观察细菌菌落形态及色素的观察: 单个菌落为中等大小单个菌落为中等大小,圆形圆形,表面光表面光滑滑,边缘整齐边缘整齐,不透明不透明,产脂溶性色素产脂溶性色素.金黄色葡萄球菌呈金黄色菌落,有-溶血环实验四五六球菌课件葡萄球菌镜下形态的观察葡萄球菌镜下形态的观察革兰阳性,无芽胞无鞭毛,葡萄堆状排列实验四五六球菌课件生化反应生化反应v触酶试验：原理原理：某些细菌能产生过氧化氢酶，将对细菌有害的H2O2分解成H2O、O2方法方法：在洁净载玻片上，滴加3%H2O2溶液12d,用接种环挑取普通琼脂上的菌落，观察结果。结果结果：产生大量气泡者（+），不产生气泡者（）鉴别鉴别：葡萄球菌（+）、链球菌（）实验四五六球菌课件v血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验： 原理：原理：金黄色葡萄球菌能产生血浆凝固酶，可使血浆中可溶性的纤维蛋白原变为不溶性的纤维蛋白，结合型血浆凝固酶附着于细菌表面，在玻片上形成凝块；游离型的血浆凝固酶则可使试管中的血浆发生凝固。试管法37孵育0.5h.方法（玻片法）：方法（玻片法）：对照区试验区生理盐水血浆细菌细菌结果：出现凝集现象者为阳性。结果：出现凝集现象者为阳性。鉴别鉴别: (金金+表表-腐腐-)实验四五六球菌课件v甘露醇发酵试验：甘露醇发酵试验： 原理原理：致病性葡萄球菌多能发酵甘露醇产酸，使培养基由紫色变为黄色方法方法: 将3种细菌分别接种于甘露醇发酵管，35孵育1824h,观察结果。结果判断结果判断：培养基浑浊，由紫色变为黄色（+）仍为紫色（-）鉴别：鉴别：金黄色葡萄球菌（+）表皮葡萄球菌（-）腐生葡萄球菌（-）实验四五六球菌课件v思考题思考题：v为什么甘露醇试验阳性是黄色？实验四五六球菌课件链球菌属v菌种：甲型溶血型链球菌乙型溶血型链球菌肺炎链球菌实验四五六球菌课件实验目的v掌握链球菌属的分离培养与鉴定方法v掌握链球菌的菌落特点、菌体形态及染色性实验四五六球菌课件实验器材v菌种、GS染液、血平板、菊糖发酵管、10%去氧胆酸钠溶液、optochin药敏纸片、杆菌肽药敏纸片、小鼠、1ml注射器、剪刀镊子、滤纸片、玻片、吸水纸、擦镜纸、牛皮纸、棉签等实验四五六球菌课件实验内容v细菌菌落形态及溶血的观察v做GS染色，镜下形态的观察v生化反应试验：1.杆菌肽敏感试验2.CAMP试验3.Optochin试验4.胆汁溶菌试验5.菊糖发酵试验6.小白鼠毒力试验实验四五六球菌课件v细菌菌落形态及溶血的观察细菌菌落形态及溶血的观察1.灰白色、圆形凸起、表面光滑、边缘整齐的针尖样大小菌落，菌落周围出现不同的溶血2.根据血平板上的溶血情况分：甲型():草绿色溶血环实验四五六球菌课件v丙型():无溶血环乙型():透明溶血环实验四五六球菌课件v细菌镜下形态观察革兰阳性球菌、圆形或卵圆形、成双或呈链状排列4肺炎链球菌成双排列，细菌形似矛头，周围有空晕，此为荚膜。实验四五六球菌课件生化反应v1.杆菌肽敏感试验：原理原理：A群化脓性链球菌对杆菌肽几乎100%敏感，而其他链球菌对杆菌肽通常耐药。故此试验可对A群化脓性链球菌进行鉴别。方法：方法：挑取被检的链球菌菌落，密集涂布于血琼脂平板上，将杆菌肽纸片贴于血琼脂平板上，35孵育1824h观察结果(培养不需要放CO2)。结果结果：在杆菌肽纸片周围出现抑菌环为敏感，A群（+），其他群链球菌（-）实验四五六球菌课件v2.CAMP试验：原理原理：B群溶血性链球菌能产生“CAMP”因子，该物质可促进金黄色葡萄球菌溶血素的活性，故在血琼脂平板上两种细菌交界处溶血能力增强，形成箭头状透明那个溶血区。方法方法：在血平板上，用金葡菌划种一条横线，再将被检菌距金葡菌接种线3mm处呈直角接种一短线，35培1824h观察结果。结果结果：如图实验四五六球菌课件v3.Optochin敏感试验：原理原理：Optochin（乙基氢化羟基奎宁），能干扰肺炎链 球菌叶酸合成，抑制该菌的生长，故肺炎链球菌对Optochin敏感，而其它链球菌对其耐药。方法方法：挑取待检菌密集划线接种于血琼脂平板上，贴放Optochin纸片，35孵育1824h，观察抑菌环。结果结果：抑菌圈直径14mm为敏感，肺炎链球菌（+）抑菌圈直径14mm时，参照胆汁溶菌试验判断是肺炎链球菌还是甲型溶血性链球菌实验四五六球菌课件v4.胆汁溶菌试验胆汁溶菌试验 原理：原理：胆汁或胆盐能活化肺炎链球菌的自溶酶，促进细菌细胞膜破损或菌体裂解而自溶。 方法（平板法）：方法（平板法）：在血琼脂平板上选择出待检的呈草绿色溶血的菌落，观察记录菌落特点，然后于菌落上滴1滴100g/L去氧胆酸钠溶液，35孵育1530min观察结果。 结果结果：菌落消失为阳性，菌落不消失为阴性。肺炎链球菌（+）、甲型链球菌（-）实验四五六球菌课件v5.菊糖发酵试验：菊糖发酵试验：原理原理：各种细菌含有分解不同糖（醇、苷）类的酶，因而对各种糖（醇、苷）类的代谢能力也各不相同，即使能分解某种糖（醇、苷）类，其代谢产物可因菌种而异。检查细菌对培养基中所含糖（醇、苷）降解后产酸或产酸产气的能力，可用以鉴定细菌种类。方法方法：将待检的细菌分别接种到菊糖培养基中，置35，5%CO2条件下，孵育1824h观察结果。结果结果：能分解糖（醇、苷）产酸的细菌，培养基中的指示剂呈酸性反应（如酚红变为黄色），不分解糖则无变化。肺炎链球菌（+）、甲型链球菌（-）实验四五六球菌课件v6.小白鼠毒力试验小白鼠毒力试验：原理原理：小白鼠对肺炎链球菌十分敏感，少量有荚膜的肺炎链球菌可使小白鼠感染致死。方法方法:将平板上的肺炎链球菌用无菌生理盐水洗下，取0.1ml注射于小白鼠腹腔，饲养12d，观察小白鼠情况。结果结果：若小白鼠在12d内死亡为阳性，解剖腹膜印片、革兰染色法镜检可见革兰阳性、有荚膜的双球菌。实验四五六球菌课件奈瑟氏菌属v菌种：微黄奈瑟菌（代替脑膜炎奈瑟菌）v实验目的：掌握脑膜炎奈瑟菌的形态和培养特性。v实验内容：1.培养特性和菌落观察：营养要求高，接种血平v板或巧克力平板，置35，5%CO2条件下，v孵育1824h观察结果，可见圆形突起、光滑湿v润、无色透明、边缘整齐、似露滴状，直径v为23mm。2.GS染色，形态观察：G-双球菌、肾形、成双排列、凹面相对。3.生化反应：氧化酶试验。4.淋病奈瑟菌示教片。实验器材：菌种、氧化酶试剂、滤纸片等实验四五六球菌课件v氧化酶试验氧化酶试验:原理：原理：某些细菌具有氧化酶，能将盐酸二甲基对苯二胺或（盐酸四甲基对苯二胺）氧化成紫红色（蓝色）的醌类化合物。 方法方法：用滤纸条蘸取被检菌落少许，用滴管吸取氧化酶试剂，滴加于滤纸条菌落上，观察颜色变化。 结果结果：阳性者立刻出现红色(蓝色)，继而逐渐加深，阴性不变色。脑膜炎奈瑟菌（+）实验四五六球菌课件淋病奈瑟菌示教革兰染色阴性、肾形双球菌，无芽胞无鞭毛。实验四五六球菌课件总结v球菌的鉴定程序实验四五六球菌课件