专题2微生物的培养与应用考点一考点一微生物的微生物的实验室培养室培养【核心知【核心知识通关】通关】1.1.无菌技无菌技术的主要方法及适用的主要方法及适用对象象( (连一一连) )：2.2.制制备牛肉膏蛋白牛肉膏蛋白胨固体培养基：固体培养基：一定体一定体积称量称量纸称量称量纸蛋白蛋白胨琼脂脂pHpH高高压蒸汽蒸汽1211211515303050503.3.纯化大化大肠杆菌：杆菌：(1)(1)原理：在培养基上将原理：在培养基上将细菌稀菌稀释或分散成或分散成_细胞，胞，使其使其长成成单个的菌落，个的菌落，这个菌落就是个菌落就是纯化的化的细菌菌落。菌菌落。单个个(2)(2)主要方法：下主要方法：下图甲可表示用甲可表示用_法接种法接种获得得的平板；下的平板；下图乙可表示用乙可表示用_法接种法接种获得的得的平板。平板。(3)(3)纯化原理：上化原理：上图甲菌体的分散是通甲菌体的分散是通过一系列的一系列的_操作操作实现的；上的；上图乙菌体的分散是通乙菌体的分散是通过一系列的一系列的_和和_操作操作实现的。的。平板划平板划线稀稀释涂布平板涂布平板连续划划线梯度稀梯度稀释涂布平板涂布平板4.4.菌种的保存方法：菌种的保存方法：(1)(1)对于于频繁使用的菌种，可以采用繁使用的菌种，可以采用_的方的方法。法。(2)(2)对于需要于需要长期保存的菌种，可以采用期保存的菌种，可以采用_的的方法。方法。临时保藏保藏甘油管藏甘油管藏【特【特别提醒】提醒】(1)(1)培养基中培养基中营养物养物质的确定方法。的确定方法。自养型微生物所需的主要自养型微生物所需的主要营养物养物质是无机物，碳源是无机物，碳源可来自大气中的可来自大气中的COCO2 2，氮源可由含氮无机，氮源可由含氮无机盐提供。提供。异养型微生物所需的异养型微生物所需的营养物养物质主要是有机物，即碳主要是有机物，即碳源必源必须由含碳有机物提供，氮源也主要由有机物提供，由含碳有机物提供，氮源也主要由有机物提供，部分异养型微生物也可以利用无机氮源。部分异养型微生物也可以利用无机氮源。(2)(2)选择无菌技无菌技术的原的原则。考考虑无菌技无菌技术的效果：的效果：灭菌的效果比消毒要好。菌的效果比消毒要好。考考虑操作操作对象的承受能力：活体生物材料、操作者象的承受能力：活体生物材料、操作者的手等只能采用消毒，而不能用的手等只能采用消毒，而不能用灭菌。菌。(3)(3)纯化大化大肠杆菌的两种方法的异同。杆菌的两种方法的异同。相同点：平板划相同点：平板划线法和稀法和稀释涂布平板法都能涂布平板法都能获得得单细胞菌落。胞菌落。不同点：平板划不同点：平板划线法不能法不能对微生物微生物计数，而稀数，而稀释涂涂布平板法能布平板法能对微生物微生物计数。数。【思【思维拓展】拓展】培养基的培养基的“三大成分三大成分”与与“三种分三种分类”(1)(1)培养基的培养基的“三大成分三大成分”：营养养成分成分作用作用来源来源碳源碳源能能为微生物提供微生物提供所需碳元素的所需碳元素的营养物养物质无机碳源：无机碳源：COCO2 2、NaHCONaHCO3 3等等有机碳源：糖有机碳源：糖类、脂肪酸、脂肪酸、花生粉花生粉饼、石油等、石油等营养养成分成分作用作用来源来源氮源氮源能能为微生物提供微生物提供所需氮元素的所需氮元素的营养物养物质无机氮源：无机氮源：N N2 2、氨、氨、铵盐、硝酸硝酸盐等等有机氮源：尿素、牛肉膏、有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白蛋白胨、氨基酸等、氨基酸等特殊特殊营养物养物质微生物生微生物生长不可不可缺少的微量有机缺少的微量有机物物牛肉膏、蛋白牛肉膏、蛋白胨、动植物植物组织提取液等提取液等(2)(2)培养基的培养基的“三种分三种分类”：分分类依据依据种种类特点特点应用用物理物理性性质液体液体培养基培养基不加凝固不加凝固剂工工业生生产半固体半固体培养基培养基加凝固加凝固剂( (少少) )观察微生物的运察微生物的运动、分、分离、离、鉴定定固体固体培养基培养基加凝固加凝固剂( (多多) )微生物的分离、微生物的分离、鉴定，定，活菌活菌计数、保藏数、保藏分分类依据依据种种类特点特点应用用化学化学成分成分天然天然培养基培养基含化学成分不明的天然物含化学成分不明的天然物质工工业生生产合成合成培养基培养基培养基成分明确或用一定化培养基成分明确或用一定化学物学物质配制配制分分类、鉴定定用途用途选择培养基培养基添加某物添加某物质，抑制，抑制杂菌生菌生长，促促进所需微生物生所需微生物生长培养分离出培养分离出特定微生物特定微生物鉴别培养基培养基根据微生物的代根据微生物的代谢特点，在特点，在培养基中加入某种指示培养基中加入某种指示剂鉴别微生物微生物【高考模【高考模拟精精练】1.(20131.(2013全国卷全国卷)临床使用抗生素前，有床使用抗生素前，有时需要做需要做细菌耐菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上，首先要从病人身上获取少量取少量样本，然后按照一定的本，然后按照一定的实验步步骤操作，以确定某致病操作，以确定某致病菌菌对不同抗生素的敏感性。不同抗生素的敏感性。回答下列回答下列问题：(1)(1)为了从了从样本中本中获取致病菌取致病菌单菌落，可用菌落，可用_法或法或_法将法将样本接种于固体培养基表面，本接种于固体培养基表面，经过选择培养、培养、鉴别等步等步骤获得。得。(2)(2)取取该单菌落适当稀菌落适当稀释，用，用_法接种于固体法接种于固体培养基表面，在培养基表面，在3737培养箱中培养培养箱中培养24 h24 h，使其均匀生，使其均匀生长，布，布满平板。平板。(3)(3)为了了检测该致病菌致病菌对于抗生素的敏感性，将分于抗生素的敏感性，将分别含含有有A A、B B、C C、D D四种抗生素的四种抗生素的滤纸片均匀置于片均匀置于该平板上平板上的不同位置，培养一段的不同位置，培养一段时间后，含后，含A A的的滤纸片周片周围出出现透明圈，透明圈，说明明该致病菌致病菌对抗生素抗生素A_A_；含；含B B的的滤纸片周片周围没有出没有出现透明圈，透明圈，说明明该致病菌致病菌对抗生素抗生素B_B_；含；含C C的的滤纸片周片周围的透明圈比含的透明圈比含A A的的小，小，说明明_；含；含D D的的滤纸片周片周围的透明圈也比含的透明圈也比含A A的小，且透明圈中出的小，且透明圈中出现了一个了一个菌落，在排除菌落，在排除杂菌菌污染的情况下，此菌落很可能是抗染的情况下，此菌落很可能是抗生素生素D D的的_。(4)(4)根据上述根据上述实验结果，果，为达到抗菌目的，最好达到抗菌目的，最好应选用用抗生素抗生素_。【解题指南】【解题指南】本题主要考查微生物培养，解答本题可本题主要考查微生物培养，解答本题可从以下两个方面着手：从以下两个方面着手：(1)(1)分离微生物方法：平板划线法和稀释涂布分离微生物方法：平板划线法和稀释涂布( (平板平板) )法。法。(2)(2)透明圈的大小表示此种抗生素抗菌能力的强弱。透明圈的大小表示此种抗生素抗菌能力的强弱。【解析】【解析】本题考查微生物接种和抗生素抗菌能力判断。本题考查微生物接种和抗生素抗菌能力判断。(1)(1)在微生物的培养过程中，常用来分离微生物的方法在微生物的培养过程中，常用来分离微生物的方法是稀释涂布是稀释涂布( (平板平板) )法或平板划线法。法或平板划线法。(2)(2)为了使微生物在培养基上能够均匀分布，一般用涂为了使微生物在培养基上能够均匀分布，一般用涂布法将微生物接种在培养基上。布法将微生物接种在培养基上。(3)(3)在抗药性检验过程中，如果在抗生素周围出现透明在抗药性检验过程中，如果在抗生素周围出现透明的圆圈，说明此种抗生素可抑制该细菌生长；透明圈的圆圈，说明此种抗生素可抑制该细菌生长；透明圈的大小表示此种抗生素抗菌能力的强弱，据此可判断的大小表示此种抗生素抗菌能力的强弱，据此可判断A A、B B、C C抗菌能力强弱依次是抗菌能力强弱依次是A A、C C、B B；D D的透明圈中出现的透明圈中出现了一个菌落，说明该菌落对此种抗生素具有耐药性。了一个菌落，说明该菌落对此种抗生素具有耐药性。(4)(4)实验结果表明抗生素实验结果表明抗生素A A对该致病菌的抗菌效果最好。对该致病菌的抗菌效果最好。答案：答案：(1)(1)划线稀释涂布划线稀释涂布( (平板平板)()(或涂布或涂布) )(2)(2)涂布涂布(3)(3)敏感不敏感该致病菌对敏感不敏感该致病菌对C C的敏感性比对的敏感性比对A A的弱的弱耐药菌耐药菌(4)A(4)A2.(20162.(2016西安模西安模拟) )某小某小组同学同学为了了调查湖水中湖水中细菌菌的的污染情况而染情况而进行了行了实验。实验包括制包括制备培养基、培养基、灭菌、接种及培养、菌落菌、接种及培养、菌落观察察计数。数。请回答与此回答与此实验相相关的关的问题。(1)(1)培养基中含有的蛋白培养基中含有的蛋白胨、淀粉、淀粉为细菌培养提供了碳菌培养提供了碳源和氮源。除此之外，培养基源和氮源。除此之外，培养基还必必须含有的基本成分含有的基本成分是是_和和_。(2)(2)为了尽快了尽快观察到察到细菌培养的菌培养的实验结果，果，应将接种了将接种了湖水湖水样品的平板置于品的平板置于_中培养，培养的温度中培养，培养的温度设定在定在3737。要使。要使该实验所得所得结果可靠，果可靠，还应该同同时在在另一平板上接种另一平板上接种_作作为对照照实验。(3)(3)培养培养2020小小时后，后，观察到平板上有形察到平板上有形态和和颜色不同的色不同的_，这说明湖水明湖水样品中有多种品中有多种细菌。一般来菌。一般来说，菌落，菌落总数越多，湖水遭受数越多，湖水遭受细菌菌污染的程度越染的程度越_(_(填填“高高”或或“低低”)”)。(4)(4)某同学在某同学在纯化土壤中的化土壤中的细菌菌时，发现培养基上的菌培养基上的菌落落连成一片，最可能的原因是成一片，最可能的原因是_，应当怎当怎样操作？操作？_。【解题指南】【解题指南】(1)(1)题干关键词：培养基的题干关键词：培养基的“基本成分基本成分”“”“形态和颜色形态和颜色”。(2)(2)关键方法：接种无菌水的空白对照可以判断培养基关键方法：接种无菌水的空白对照可以判断培养基制作是否合格。制作是否合格。【解析】【解析】(1)(1)蛋白胨富含蛋白质，主要为微生物提供氮蛋白胨富含蛋白质，主要为微生物提供氮源；淀粉作为微生物的碳源，培养基中还应含有水和源；淀粉作为微生物的碳源，培养基中还应含有水和无机盐。无机盐。(2)(2)微生物的培养在恒温培养箱中进行。要使该实验所微生物的培养在恒温培养箱中进行。要使该实验所得结果可靠，还应设置对照实验，即同时在另一平板得结果可靠，还应设置对照实验，即同时在另一平板上接种无菌水作为对照实验，以判断培养基制作是否上接种无菌水作为对照实验，以判断培养基制作是否合格。合格。(3)(3)培养培养2020小时后，不同微生物在平板培养基上会形成小时后，不同微生物在平板培养基上会形成形态和颜色不同的菌落。菌落总数越多，说明湖水中形态和颜色不同的菌落。菌落总数越多，说明湖水中的微生物数量越多，即湖水遭受细菌污染的程度越高。的微生物数量越多，即湖水遭受细菌污染的程度越高。(4)(4)培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是菌液浓培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是菌液浓度过高或培养过程被杂菌污染，可以通过增大稀释倍度过高或培养过程被杂菌污染，可以通过增大稀释倍数或严格无菌操作的方法解决。数或严格无菌操作的方法解决。答案：答案：(1)(1)无机盐水无机盐水(2)(2)恒温培养箱无菌水恒温培养箱无菌水(3)(3)菌落高菌落高(4)(4)菌液浓度过高菌液浓度过高( (或培养过程被杂菌污染或培养过程被杂菌污染) )增大稀释增大稀释倍数倍数( (或严格无菌操作，原因与操作要对应或严格无菌操作，原因与操作要对应) )3.(20163.(2016安安庆模模拟) )据据报道，从部分企道，从部分企业生生产的速的速冻食品中食品中检出葡萄球菌超出葡萄球菌超标，“细菌菌门”事件引起公众事件引起公众普遍关注。葡萄球菌能分解卵黄中的卵磷脂，在含卵普遍关注。葡萄球菌能分解卵黄中的卵磷脂，在含卵黄的固体培养基上形成的菌落周黄的固体培养基上形成的菌落周围会出会出现特有的乳白特有的乳白色的乳色的乳浊环。某。某兴趣小趣小组欲欲检测某果汁某果汁类食品中是否食品中是否含有葡萄球菌，含有葡萄球菌，进行了如下行了如下实验。回答下列。回答下列问题：(1)(1)配制培养基：称取适量的牛肉膏、蛋白配制培养基：称取适量的牛肉膏、蛋白胨、NaClNaCl、琼脂等，加入蒸脂等，加入蒸馏水，水，搅拌加拌加热至完全溶解后至完全溶解后调节pHpH，分装到，分装到锥形瓶后形瓶后进行行_，在无菌状，在无菌状态下下加入卵黄液加入卵黄液摇匀后立即倒平板。培养基中的牛肉膏和匀后立即倒平板。培养基中的牛肉膏和蛋白蛋白胨为葡萄球菌生葡萄球菌生长和繁殖提供和繁殖提供_。葡。葡萄球菌能耐受高萄球菌能耐受高浓度的度的NaClNaCl溶液，所以在配制培养基溶液，所以在配制培养基时加入高加入高浓度的度的NaClNaCl溶液可以将它分离出来，此培养溶液可以将它分离出来，此培养基属于基属于_培养基。培养基。(2)(2)接种：取待接种：取待检测果汁果汁2.5 mL2.5 mL加入加入22.5 mL22.5 mL灭菌生理菌生理盐水中，制成接种水中，制成接种样液。液。实验组：将接种：将接种样液用平板划液用平板划线法接种在含卵黄的法接种在含卵黄的固体培养基上。固体培养基上。对照照组：将：将_用平板划用平板划线法接种在法接种在含卵黄的固体培养基上或不接种作含卵黄的固体培养基上或不接种作为_对照。照。(3)(3)培养：将上述接种后的培养皿同培养：将上述接种后的培养皿同时放在放在3636的恒温的恒温箱中培养箱中培养48 h48 h。(4)(4)观察：培养基表面察：培养基表面_。(5)(5)结论。若培养基上若培养基上_，则该果汁果汁类食品食品中含有葡萄球菌。中含有葡萄球菌。若培养基上若培养基上_，则该果汁果汁类食品食品中不含有葡萄球菌。中不含有葡萄球菌。【解题指南】【解题指南】(1)(1)关键信息：关键信息：葡萄球菌能分解卵黄中的卵磷脂，在含卵黄的固体葡萄球菌能分解卵黄中的卵磷脂，在含卵黄的固体培养基上形成的菌落周围会出现特有的乳白色的乳浊培养基上形成的菌落周围会出现特有的乳白色的乳浊环。环。接种样液是用灭菌生理盐水稀释的。接种样液是用灭菌生理盐水稀释的。对照组用平板划线法接种。对照组用平板划线法接种。(2)(2)必备知识：对照实验除自变量不同，其他均相同。必备知识：对照实验除自变量不同，其他均相同。【解析】【解析】(1)(1)培养基的制备流程：计算培养基的制备流程：计算称量称量溶化溶化灭菌灭菌倒平板。培养基中的牛肉膏可以为葡萄球菌生倒平板。培养基中的牛肉膏可以为葡萄球菌生长和繁殖提供氮源、磷酸盐和维生素，蛋白胨可以为长和繁殖提供氮源、磷酸盐和维生素，蛋白胨可以为葡萄球菌生长和繁殖提供碳源、氮源和维生素。加入葡萄球菌生长和繁殖提供碳源、氮源和维生素。加入高浓度的高浓度的NaClNaCl溶液的培养基可以抑制大多数微生物的溶液的培养基可以抑制大多数微生物的生长繁殖，因此该培养基属于选择培养基。生长繁殖，因此该培养基属于选择培养基。(2)(2)比较实验组和对照组可知，实验的自变量为是否接比较实验组和对照组可知，实验的自变量为是否接种接种样液。对照组接种无菌生理盐水，或不接种，种接种样液。对照组接种无菌生理盐水，或不接种，为空白对照。为空白对照。(4)(4)根据题干关键信息根据题干关键信息“葡萄球菌能分解卵黄中的卵磷葡萄球菌能分解卵黄中的卵磷脂，在含卵黄的固体培养基上形成的菌落周围会出现脂，在含卵黄的固体培养基上形成的菌落周围会出现特有的乳白色的乳浊环特有的乳白色的乳浊环”可知，观察是否出现周围有可知，观察是否出现周围有乳浊环的菌落可以判断果汁中是否含有葡萄球菌。乳浊环的菌落可以判断果汁中是否含有葡萄球菌。(5)(5)果汁中存在葡萄球菌时，培养基上会出现周围有乳果汁中存在葡萄球菌时，培养基上会出现周围有乳浊环的菌落；果汁中不存在葡萄球菌时，培养基上不浊环的菌落；果汁中不存在葡萄球菌时，培养基上不会出现周围有乳浊环的菌落，因此可以根据是否出现会出现周围有乳浊环的菌落，因此可以根据是否出现周围有乳浊环的菌落判断是否存在葡萄球菌。周围有乳浊环的菌落判断是否存在葡萄球菌。答案：答案：(1)(1)灭菌灭菌( (高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌) )碳源、氮源、磷酸盐碳源、氮源、磷酸盐和维生素选择和维生素选择(2)(2)无菌生理盐水空白无菌生理盐水空白(4)(4)是否出现周围有乳浊环的菌落是否出现周围有乳浊环的菌落(5)(5)出现周围有乳浊环的菌落出现周围有乳浊环的菌落不出现周围有乳浊环的菌落不出现周围有乳浊环的菌落【方法【方法规律】律】正确判断培养基制作与接种操作是否合正确判断培养基制作与接种操作是否合格的方法格的方法(1)(1)从培养基制作是否合格上判断：如果未接种的培养从培养基制作是否合格上判断：如果未接种的培养基在恒温箱中保温基在恒温箱中保温1 12 d2 d后无菌落生后无菌落生长，说明培养基明培养基的制的制备是成功的，否是成功的，否则需要重新制需要重新制备。(2)(2)从接种操作是否符合无菌要求上判断：从接种操作是否符合无菌要求上判断：如果培养基上生如果培养基上生长的菌落的的菌落的颜色、形状、大小基本色、形状、大小基本一致，并符合接种菌菌落的特点，一致，并符合接种菌菌落的特点，说明接种操作是符明接种操作是符合要求的；合要求的；如果培养基上出如果培养基上出现了其他菌落，了其他菌落，则说明接种明接种过程中，程中，无菌操作无菌操作还未达到要求，需要分析原因，重新操作。未达到要求，需要分析原因，重新操作。考点二考点二土壤中分解尿素的土壤中分解尿素的细菌的分离与菌的分离与计数数【核心知【核心知识通关】通关】1.1.筛选菌株：菌株：(1)(1)寻找目的菌株的原找目的菌株的原则：根据它：根据它对_的要求，的要求，到相到相应的的环境中去境中去寻找。找。(2)(2)实验室室筛选尿素分解菌的方法：使用以尿素分解菌的方法：使用以_为唯唯一氮源的一氮源的_培养基培养基进行培养。行培养。生存生存环境境尿素尿素选择(3)(3)选择培养基：在微生物学中，将允培养基：在微生物学中，将允许_的的微生物生微生物生长，同，同时_其他种其他种类微生物生微生物生长的的培养基。培养基。特定种特定种类抑制或阻止抑制或阻止2.2.微生物的微生物的计数：常用的方法有数：常用的方法有显微微计数法和数法和_。稀稀释涂布平板法涂布平板法表表层 3030300300稀稀释涂布平板涂布平板303037375 57 7252528283 34 4菌落菌落(7)(7)计算：根据公式算：根据公式“每克每克样品中的菌落数品中的菌落数=(CV) M=(CV) MCC代表某一稀代表某一稀释度下平板上生度下平板上生长的平均菌落数，的平均菌落数，V V代表代表涂布平板涂布平板时所用的稀所用的稀释液的体液的体积(mL)(mL)，M M代表稀代表稀释倍数倍数”进行行计算算4.4.分解尿素的分解尿素的细菌的菌的鉴定：定：(1)(1)方法：在以尿素方法：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入唯一氮源的培养基中加入_指示指示剂培养分解尿素的培养分解尿素的细菌。菌。酚酚红(2)(2)原理：原理：脲酶酶2NH2NH3 35.5.设置置对照和重复：照和重复：比比较项目目对照照重复重复目的目的排除非排除非测试因素因素对实验结果的影响果的影响排除偶然因素排除偶然因素对实验结果的影响果的影响实例例空白空白对照：确定培养基照：确定培养基制作是否合格制作是否合格同一稀同一稀释度涂布至度涂布至少少3 3个平板个平板【特【特别提醒】提醒】“选择菌落数在菌落数在3030300300的平板的平板”的两个提醒的两个提醒(1)(1)只得到只得到1 1个菌落数在个菌落数在3030300300的平板是的平板是错误的，原因的，原因是不符合是不符合实验的重复原的重复原则，易受到偶然因素的影响。，易受到偶然因素的影响。(2)(2)得到得到3 3个或个或3 3个以上菌落数在个以上菌落数在3030300300的平板，也不的平板，也不一定正确，原因是如果不同平板一定正确，原因是如果不同平板间差异差异较大，如得到大，如得到3 3个平板，菌落数分个平板，菌落数分别为230230、3434、240240，虽然菌落数均然菌落数均在在“30“30300”300”，但由于，但由于3434与另外两个平板差异与另外两个平板差异较大，大，应找出原因并重新找出原因并重新实验。【思【思维拓展】拓展】微生物微生物计数的两种方法数的两种方法比比较项目目间接接计数法数法( (稀稀释涂布平板法涂布平板法) )直接直接计数法数法( (显微微计数法数法) )原理原理当当样品的稀品的稀释度足度足够高高时，培养基表面生，培养基表面生长的的一个菌落，来源于一个菌落，来源于样品品稀稀释液中的一个活菌，液中的一个活菌，通通过统计平板上的菌落平板上的菌落数，就能推数，就能推测出出样品中品中大大约含有多少活菌含有多少活菌利用特定利用特定细菌菌计数板或数板或血血细胞胞计数板，在数板，在显微微镜下下计算一定容算一定容积的的样品中微生物的数量品中微生物的数量比比较项目目间接接计数法数法( (稀稀释涂布平板法涂布平板法) )直接直接计数法数法( (显微微计数法数法) )公式公式每克每克样品中的菌落数：品中的菌落数：(CV)M(CV)MC C：某稀：某稀释度下平板上生度下平板上生长的平均菌落数；的平均菌落数；V V：涂：涂布平板布平板时所用的稀所用的稀释液的液的体体积(mL)(mL)；M M：稀：稀释倍数倍数每毫升原液所含每毫升原液所含细菌菌数：每小格平均数：每小格平均细菌菌数数40010 00040010 000稀稀释倍数倍数比比较项目目间接接计数法数法( (稀稀释涂布平板法涂布平板法) )直接直接计数法数法( (显微微计数法数法) )缺点缺点当两个或多个菌体当两个或多个菌体连在一在一起起时，平板上，平板上观察到的只察到的只是一个菌落是一个菌落不能区分不能区分细胞死活胞死活结果果比比实际值偏小偏小比比实际值偏大偏大【高考模【高考模拟精精练】1.(20151.(2015全国卷全国卷节选) )已知微生物已知微生物A A可以可以产生油脂，生油脂，微生物微生物B B可以可以产生脂肪生脂肪酶酶。脂肪。脂肪酶酶和油脂可用于生物柴和油脂可用于生物柴油的生油的生产。回答有关。回答有关问题：(1)(1)显微微观察察时，微生物，微生物A A菌体中的油脂通常可用菌体中的油脂通常可用_染色。微生物染色。微生物A A产生的油脂不易生的油脂不易挥发，可，可选用用_(_(填填“萃取法萃取法”或或“水蒸气蒸水蒸气蒸馏法法”)”)从菌体中提取。从菌体中提取。(2)(2)为了从自然界中了从自然界中获得能得能产生脂肪生脂肪酶酶的微生物的微生物B B的的单菌落，可从含有油料作物种子腐菌落，可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取物的土壤中取样，并并应选用以用以_为碳源的固体培养基碳源的固体培养基进行培行培养。养。(3)(3)为了确定微生物了确定微生物B B产生的脂肪生的脂肪酶酶的最适温度，某同的最适温度，某同学学测得相同得相同时间内，在内，在3535、4040、4545温度下降解温度下降解10 g10 g油脂所需油脂所需酶酶量依次量依次为4 mg4 mg、1 mg1 mg、6 mg6 mg，则上述上述三个温度中，三个温度中，_条件下条件下该酶酶活力最小。活力最小。为了了进一步确定一步确定该酶酶的最适温度，的最适温度，应围绕_设计后后续实验。【解题指南】【解题指南】(1)(1)题干关键词：不易挥发。题干关键词：不易挥发。(2)(2)关键知识：提取油脂的方法、分解油脂的微生物的关键知识：提取油脂的方法、分解油脂的微生物的分离、测定微生物数量的方法和探究酶的最适温度的分离、测定微生物数量的方法和探究酶的最适温度的方法。方法。【解析】【解析】(1)(1)脂肪可被苏丹脂肪可被苏丹()()染液染成橘黄色染液染成橘黄色( (红红色色) )，题干中说明微生物，题干中说明微生物A A产生的油脂不易挥发，则可产生的油脂不易挥发，则可以采用萃取法提取微生物以采用萃取法提取微生物A A中的油脂。中的油脂。(2)(2)油脂为有机化合物，富含碳元素，故为了从自然界油脂为有机化合物，富含碳元素，故为了从自然界获得能够分解油脂的单菌落，应以油脂为唯一碳源来获得能够分解油脂的单菌落，应以油脂为唯一碳源来配制培养基。在该培养基上，能分解油脂的微生物可配制培养基。在该培养基上，能分解油脂的微生物可以正常生长，其他微生物不能正常生长。以正常生长，其他微生物不能正常生长。(3)(3)在在4545下，降解下，降解10 g10 g油脂所需酶量最多，则该温度油脂所需酶量最多，则该温度下酶活性最低；由题干信息可知，下酶活性最低；由题干信息可知，4040下降解下降解10 g10 g油油脂所需的酶量最少。应围绕脂所需的酶量最少。应围绕4040设置不同温度梯度来设置不同温度梯度来探究酶的最适温度。探究酶的最适温度。答案：答案：(1)(1)苏丹苏丹(或苏丹或苏丹)萃取法萃取法(2)(2)油脂油脂( (其他合理答案也可其他合理答案也可) )(3)45(3)4540402.(20142.(2014全国卷全国卷)为了了调查某河流的水某河流的水质状况，某状况，某研究小研究小组测定了定了该河流水河流水样中的中的细菌含量，并菌含量，并进行了行了细菌分离等工作。回答下列菌分离等工作。回答下列问题：(1)(1)该小小组采用稀采用稀释涂布平板法涂布平板法检测水水样中中细菌含量。菌含量。在涂布接种前，随机取若干在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培菌后的空白平板先行培养了一段养了一段时间，这样做的目的是做的目的是_；然后，将然后，将1 mL1 mL水水样稀稀释100100倍，在倍，在3 3个平板上用涂布法个平板上用涂布法分分别接入接入0.1 mL0.1 mL稀稀释液；液；经适当培养后，适当培养后，3 3个平板上的个平板上的菌落数分菌落数分别为3939、3838和和3737，据此可得出每升水，据此可得出每升水样中的中的活菌数活菌数为_。(2)(2)该小小组采用平板划采用平板划线法分离水法分离水样中的中的细菌。操作菌。操作时，接种接种环通通过_灭菌，在第二次及以后的划菌，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划是从上一次划线的末端开始划的末端开始划线，这样做的目做的目的是的是_。(3)(3)示意示意图A A和和B B中，中，_表示的是用稀表示的是用稀释涂布平板涂布平板法接种培养后得到的法接种培养后得到的结果。果。(4)(4)该小小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分部分进行静置培养，另一部分行静置培养，另一部分进行振行振荡培养。培养。结果果发现：振振荡培养的培养的细菌比静置培养的菌比静置培养的细菌生菌生长速度快。分析其速度快。分析其原因是：振原因是：振荡培养能提高培养液中培养能提高培养液中_的含量，的含量，同同时可使菌体与培养液充分接触，提高可使菌体与培养液充分接触，提高_的利的利用率。用率。【解题指南】【解题指南】(1)(1)题干关键词：题干关键词：“先行培养先行培养”“”“振荡培振荡培养养”。(2)(2)隐含信息：隐含信息：A A图中菌落是采用平板划线法培养的结图中菌落是采用平板划线法培养的结果，果，B B图中菌落分布相对均匀，为稀释涂布平板法接种图中菌落分布相对均匀，为稀释涂布平板法接种培养的结果。培养的结果。(3)(3)关键知识：稀释涂布平板法检测细菌含量、平板划关键知识：稀释涂布平板法检测细菌含量、平板划线法分离细菌。线法分离细菌。【解析】【解析】本题考查微生物培养、细菌分离的相关知识。本题考查微生物培养、细菌分离的相关知识。(1)(1)为了确定培养基的灭菌是否合格，微生物学实验一为了确定培养基的灭菌是否合格，微生物学实验一般会设置空白对照：随机取若干灭菌后的空白平板培般会设置空白对照：随机取若干灭菌后的空白平板培养一段时间，观察培养基上是否有菌落生成；利用平养一段时间，观察培养基上是否有菌落生成；利用平板菌落计数法的计算公式估算水样中的活菌数：板菌落计数法的计算公式估算水样中的活菌数：(2)(2)接种时接种环需要灼烧灭菌；在第二次及以后划线接种时接种环需要灼烧灭菌；在第二次及以后划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，这样做的目时，总是从上一次划线的末端开始划线，这样做的目的是通过划线次数的增加，使每次划线时菌体的数目的是通过划线次数的增加，使每次划线时菌体的数目逐渐减少，以便得到单个菌落。逐渐减少，以便得到单个菌落。(3)(3)根据示意图根据示意图A A和和B B中生长出的菌落形态，判定中生长出的菌落形态，判定B B图中图中为稀释涂布平板法接种培养的结果为稀释涂布平板法接种培养的结果( (菌落分布相对均匀菌落分布相对均匀) )。(4)(4)振荡培养可以增加液体培养基溶解氧的含量，促进振荡培养可以增加液体培养基溶解氧的含量，促进好氧型微生物的生长；另外振荡培养还可以使菌体与好氧型微生物的生长；另外振荡培养还可以使菌体与培养液充分接触，提高营养物质的利用率。培养液充分接触，提高营养物质的利用率。答案：答案：(1)(1)检测培养基平板灭菌是否合格检测培养基平板灭菌是否合格3.8103.8107 7(2)(2)灼烧将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落灼烧将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落(3)B(3)B(4)(4)溶解氧营养物质溶解氧营养物质【易【易错提醒】提醒】本本题第第(1)(1)题第第2 2空易空易错答答为3.8103.8104 4。出出错原因是忽原因是忽视了了单位，位，课本本计算公式是每克算公式是每克样品中品中的的细菌数，而本菌数，而本题要要计算每升水算每升水样中的活菌数，中的活菌数，应再再乘以乘以10103 3。3.(20163.(2016石家庄模石家庄模拟) )同学同学们为了探究土壤中的微生了探究土壤中的微生物物对尿素是否有分解作用，尿素是否有分解作用，设计了以下了以下实验，并成功，并成功筛选到能高效降解尿素的到能高效降解尿素的细菌菌( (目的菌目的菌) )。培养基成分。培养基成分如下表所示，如下表所示，实验步步骤如下如下图所示。所示。请分析回答分析回答问题：KHKH2 2POPO4 41.4 g1.4 gNaNa2 2HPOHPO4 42.1 g2.1 gMgSOMgSO4 47H7H2 2O O0.2 g0.2 g葡萄糖葡萄糖10.0 g10.0 g尿素尿素1.0 g1.0 g琼脂脂15.0 g15.0 g将上述物将上述物质溶解后，用蒸溶解后，用蒸馏水定容到水定容到1 000 mL1 000 mL(1)(1)培养基中加入尿素的目的是培养基中加入尿素的目的是筛选目的菌，目的菌，这种培养种培养基属于基属于_培养基。培养基。(2)(2)目的菌生目的菌生长所需的氮源和碳源分所需的氮源和碳源分别来自培养基中的来自培养基中的_和和_，实验中需要振中需要振荡培养，培养，原因是原因是_。(3)(3)关于下关于下图的操作方法和的操作方法和结果，叙述正确的是果，叙述正确的是_。A.A.操作前要将接种操作前要将接种环放在火焰放在火焰边灼灼烧灭菌菌B.B.划划线操作必操作必须在火焰上在火焰上进行行C.C.在在5 5区域中才可以得到所需菌落区域中才可以得到所需菌落D.D.在在1 1、2 2、3 3、4 4、5 5区域中划区域中划线前后都要前后都要对接种接种环灭菌菌【解析】【解析】(1)(1)培养基中加入尿素形成以尿素为唯一氮源培养基中加入尿素形成以尿素为唯一氮源的培养基，只有尿素分解菌能够以尿素为氮源进行生的培养基，只有尿素分解菌能够以尿素为氮源进行生活，而其他微生物不能生活，该培养基属于选择培养活，而其他微生物不能生活，该培养基属于选择培养基。基。(2)(2)尿素分解菌所需要的氮源是尿素，碳源是培养基中尿素分解菌所需要的氮源是尿素，碳源是培养基中的葡萄糖，尿素分解菌的代谢类型是异养需氧型，所的葡萄糖，尿素分解菌的代谢类型是异养需氧型，所以实验中需要振荡培养为其提供更多的氧气。以实验中需要振荡培养为其提供更多的氧气。(3)(3)操作前要将接种环放在火焰上灼烧灭菌，操作前要将接种环放在火焰上灼烧灭菌，A A项错误。项错误。划线操作必须在火焰附近进行，划线操作必须在火焰附近进行，B B项错误。经划线操作项错误。经划线操作后，出现单细胞菌落的区域不一定只是后，出现单细胞菌落的区域不一定只是5 5区域，如果第区域，如果第一次挑取菌种时接种环上菌体较少，可能在一次挑取菌种时接种环上菌体较少，可能在3 3、4 4区域区域就出现单细胞菌落，就出现单细胞菌落，C C项错误。每次划线前后均要对接项错误。每次划线前后均要对接种环灭菌，种环灭菌，D D项正确。项正确。答案：答案：(1)(1)选择选择(2)(2)尿素葡萄糖为目的菌提供氧气尿素葡萄糖为目的菌提供氧气(3)D(3)D【方法技巧】【方法技巧】选择培养基的培养基的设计方法方法(1)(1)营养缺陷型养缺陷型选择培养基：通培养基：通过控制培养基的控制培养基的营养成养成分，使分，使营养缺陷型微生物不能正常生养缺陷型微生物不能正常生长。(2)(2)添加抑菌物添加抑菌物质的的选择培养基：在完全培养基中加入培养基：在完全培养基中加入某些化学物某些化学物质，利用加入的化学物，利用加入的化学物质对非目的微生物非目的微生物产生的抑制作用生的抑制作用选择目的菌。目的菌。(3)(3)特殊培养条件的特殊培养条件的选择培养基：改培养基：改变微生物的培养条微生物的培养条件件( (如高温、特殊如高温、特殊pHpH等等) )。【加固【加固训练】 尿素是一种重要的尿素是一种重要的农业肥料，但若不肥料，但若不经细菌的分菌的分解，就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生解，就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种物种类和数量繁多，某同学和数量繁多，某同学试图从土壤中从土壤中筛选出能高出能高效降解尿素的效降解尿素的细菌菌( (目的菌目的菌) )，表中所示是，表中所示是该同学配制同学配制的培养基成分：的培养基成分：成分成分含量含量成分成分含量含量KHKH2 2POPO4 41.4 g1.4 gNaNa2 2HPOHPO4 42.1 g2.1 gMgSOMgSO4 47H7H2 2O O0.2 g0.2 g葡萄糖葡萄糖10.0 g10.0 g(NH(NH4 4) )2 2SOSO4 41.0 g1.0 g琼脂脂15.0 g15.0 g蒸蒸馏水水定容到定容到1 000 mL1 000 mL(1)(1)该培养基中的主要培养基中的主要营养物养物质包括包括_。从。从物理性物理性质上看，上看，该培养基属于培养基属于_培养基。培养基。(2)(2)在微生物的培养中，一般要在微生物的培养中，一般要对配制的培养基采用高配制的培养基采用高压蒸汽蒸汽灭菌，其中菌，其中“高高压”是是为了了_。(3)(3)若培养从土壤中分离出来的目的菌，若培养从土壤中分离出来的目的菌，该培养基成分培养基成分如何如何调整？整？_，依据是，依据是_。【解析】【解析】(1)(1)从培养基的成分看，该培养基中包含微生从培养基的成分看，该培养基中包含微生物生长所需的氮源物生长所需的氮源(NH(NH4 4) )2 2SOSO4 4 、碳源、碳源( (葡萄糖葡萄糖) )、水和、水和多种无机盐，并且培养基中还有琼脂作为凝固剂，因多种无机盐，并且培养基中还有琼脂作为凝固剂，因此从物理性质上看，该培养基属于固体培养基。此从物理性质上看，该培养基属于固体培养基。(2)(2)微生物的芽孢耐受性强，高压可以杀死培养基中的微生物的芽孢耐受性强，高压可以杀死培养基中的细菌芽孢。细菌芽孢。(3)(3)从土壤中分离降解尿素的细菌，应用以尿素为唯一从土壤中分离降解尿素的细菌，应用以尿素为唯一氮源的选择培养基，因此应将该培养基中的氮源的选择培养基，因此应将该培养基中的(NH(NH4 4) )2 2SOSO4 4换成尿素。换成尿素。答案：答案：(1)(1)氮源、碳源、无机盐和水固体氮源、碳源、无机盐和水固体(2)(2)杀死培养基中的细菌芽孢杀死培养基中的细菌芽孢(3)(3)将将(NH(NH4 4) )2 2SOSO4 4换成尿素要筛选出降解尿素的细菌，换成尿素要筛选出降解尿素的细菌，只能以尿素作为唯一的氮源只能以尿素作为唯一的氮源考点三考点三分解分解纤维素的微生物的分离素的微生物的分离【核心知【核心知识通关】通关】1.1.纤维素素酶酶：(1)(1)组成：成：纤维素素酶酶是一种是一种_，一般，一般认为它至少它至少包括三种包括三种组分，即分，即_。复合复合酶酶C C1 1酶酶、C CX X酶酶和葡萄糖苷和葡萄糖苷酶酶(2)(2)作用：作用：纤维二糖二糖葡萄糖葡萄糖2.2.纤维素分解菌的素分解菌的筛选：(1)(1)培养基：培养基：_的的选择培养基。培养基。(2)(2)筛选原理：原理：(3)(3)筛选方法：挑方法：挑选菌落周菌落周围出出现_的的菌落。菌落。 富含富含纤维素素红色复合物色复合物透明圈透明圈不不变红的透明圈的透明圈3.3.实验流程：流程：(1)(1)土壤取土壤取样：富含：富含_的的环境境(2)(2)选择培养：用培养：用_的的选择培养基培养，以培养基培养，以增加增加纤维素分解菌的素分解菌的浓度度纤维素素富含富含纤维素素(3)(3)梯度稀梯度稀释：制：制备系列稀系列稀释液，目的是使液，目的是使纤维素分解素分解菌的菌的细胞分散开，以胞分散开，以获得得_的菌落的菌落(4)(4)涂布平板：将涂布平板：将样品涂布到品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养素分解菌的培养基上基上(5)(5)挑挑选产生生_的菌落的菌落单个个透明圈透明圈【特【特别提醒】提醒】(1)(1)纤维素分解菌的素分解菌的选择培养基中并不只有培养基中并不只有纤维素一种素一种碳源。碳源。(2)(2)纤维素分解菌的素分解菌的选择培养基上生培养基上生长的并不只是的并不只是纤维素分解菌。素分解菌。(3)(3)纤维素分解菌菌落周素分解菌菌落周围的透明圈的大小与的透明圈的大小与纤维素分素分解菌分解解菌分解纤维素的能力呈正相关。素的能力呈正相关。【思【思维拓展】拓展】筛选微生物的三种方法微生物的三种方法(1)(1)单菌落挑取法：利用平板划菌落挑取法：利用平板划线法或稀法或稀释涂布平板法涂布平板法接种到固体平板培养基表面，直接根据微生物菌落的接种到固体平板培养基表面，直接根据微生物菌落的特征利用特征利用单菌落挑取的方法菌落挑取的方法获得目的微生物。得目的微生物。(2)(2)选择培养法：利用培养法：利用选择培养基培养基对微生物微生物进行行选择培培养，直接养，直接获得目的微生物。得目的微生物。(3)(3)鉴定培养法：利用定培养法：利用鉴别培养基使目的微生物菌落呈培养基使目的微生物菌落呈现特有的特征，然后特有的特征，然后筛选目的微生物。目的微生物。【高考模【高考模拟精精练】1.(20141.(2014全国卷全国卷)植物秸植物秸秆秆中的中的纤维素可被某些微素可被某些微生物分解。回答下列生物分解。回答下列问题：(1)(1)分解秸分解秸秆秆中中纤维素的微生物能分泌素的微生物能分泌纤维素素酶酶，该酶酶是由是由3 3种种组分分组成的复合成的复合酶酶，其中的葡萄糖苷，其中的葡萄糖苷酶酶可将可将_分解成分解成_。(2)(2)在含在含纤维素的培养基中加入素的培养基中加入刚果果红(CR)(CR)时，CRCR可与可与纤维素形成素形成_色复合物。用含有色复合物。用含有CRCR的的该种培种培养基培养养基培养纤维素分解菌素分解菌时，培养基上会出，培养基上会出现以以该菌的菌的菌落菌落为中心的中心的_。(3)(3)为从富含从富含纤维素的土壤中分离素的土壤中分离获得得纤维素分解菌的素分解菌的单菌落，某同学菌落，某同学设计了甲、乙两种培养基了甲、乙两种培养基( (成分成分见下表下表) )：注：注：“+”“+”表示有，表示有，“-”“-”表示无。表示无。酵母膏酵母膏 无机无机盐 淀粉淀粉纤维素粉素粉琼脂脂CRCR溶液溶液水水培养基甲培养基甲+ + + + +- -+ + +培养基乙培养基乙+ + + +- -+ + + +据表判断，培养基甲据表判断，培养基甲_(_(填填“能能”或或“不能不能”)”)用于分离和用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是素分解菌，原因是_；培养基乙；培养基乙_(_(填填“能能”或或“不能不能”)”)用于分离和用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是素分解菌，原因是_。【解题指南】【解题指南】(1)(1)题干关键词：题干关键词：“纤维素酶纤维素酶”“”“刚果红刚果红”。(2)(2)隐含信息：两种培养基中有琼脂的为固体培养基，隐含信息：两种培养基中有琼脂的为固体培养基，无琼脂的为液体培养基；淀粉是微生物的碳源，不含无琼脂的为液体培养基；淀粉是微生物的碳源，不含纤维素粉不能作为分离和鉴别纤维素分解菌实验的选纤维素粉不能作为分离和鉴别纤维素分解菌实验的选择培养基。择培养基。(3)(3)关键知识：土壤中某些微生物的分解作用和筛选纤关键知识：土壤中某些微生物的分解作用和筛选纤维素分解菌的方法。维素分解菌的方法。【解析】【解析】本题主要考查纤维素酶的作用、刚果红染色本题主要考查纤维素酶的作用、刚果红染色法、分离和鉴别纤维素分解菌的方法。法、分离和鉴别纤维素分解菌的方法。(1)(1)纤维素是一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合纤维素是一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，是含量最丰富的多糖类物质。纤维素能被纤维素物，是含量最丰富的多糖类物质。纤维素能被纤维素酶分解为葡萄糖，如图：酶分解为葡萄糖，如图：(2)(2)刚果红与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维刚果红与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，出现以纤维素分素酶分解后，红色复合物无法形成，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，可以通过是否产生透明圈来筛解菌为中心的透明圈，可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。选纤维素分解菌。(3)(3)分离和鉴别纤维素分解菌的培养基为固体培养基，分离和鉴别纤维素分解菌的培养基为固体培养基，且需要以纤维素为唯一碳源。且需要以纤维素为唯一碳源。答案：答案：(1)(1)纤维二糖葡萄糖纤维二糖葡萄糖(2)(2)红透明圈红透明圈(3)(3)不能液体培养基不能分离单菌落不能培养基不能液体培养基不能分离单菌落不能培养基乙中没有纤维素，不会形成乙中没有纤维素，不会形成CR-CR-纤维素红色复合物，即纤维素红色复合物，即使出现单菌落也不能确定其为纤维素分解菌使出现单菌落也不能确定其为纤维素分解菌2.(20152.(2015江江苏高考高考) )人工瘤胃模仿了牛羊等反人工瘤胃模仿了牛羊等反刍动物物的胃，可用来的胃，可用来发酵酵处理秸理秸秆秆，提高秸，提高秸秆秆的的营养价养价值。为了增了增强强发酵效果，研究人酵效果，研究人员从牛胃中从牛胃中筛选纤维素素酶酶高高产菌株，并菌株，并对其降解其降解纤维素能力素能力进行了研究。行了研究。请回回答下列答下列问题：(1)(1)在在样品稀品稀释和涂布平板步和涂布平板步骤中，下列中，下列选项不需要的不需要的是是_(_(填序号填序号) )。酒精灯酒精灯培养皿培养皿显微微镜无菌水无菌水(2)(2)在涂布平板在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌，滴加到培养基表面的菌悬液量不宜液量不宜过多的原因是多的原因是_。(3)(3)向向试管内分装含管内分装含琼脂的培养基脂的培养基时，若，若试管口粘附有管口粘附有培养基，需要用酒精棉球擦培养基，需要用酒精棉球擦净的原因是的原因是_。(4)(4)刚果果红可以与可以与纤维素形成素形成红色复合物，但并不与色复合物，但并不与纤维素降解素降解产物物纤维二糖和葡萄糖二糖和葡萄糖发生生这种反种反应。研究。研究人人员在在刚果果红培养基平板上，培养基平板上，筛选到了几株有透明降到了几株有透明降解圈的菌落解圈的菌落( (见下下图) )。图中降解圈大小与中降解圈大小与纤维素素酶酶的的_有关。有关。图中降解中降解纤维素能力最素能力最强强的菌株是的菌株是_(_(填填图中序号中序号) )。(5)(5)研究人研究人员用用筛选到的到的纤维素素酶酶高高产菌株菌株J1J1和和J4J4，在，在不同温度和不同温度和pHpH条件下条件下进行行发酵，酵，测得得发酵液中酵液中酶酶活性活性的的结果果见下下图，推，推测菌株菌株_更适合用于人更适合用于人工瘤胃工瘤胃发酵，理由是酵，理由是_。【解析】【解析】本题主要考查微生物的分离和培养。本题主要考查微生物的分离和培养。(1)(1)样品样品稀释和涂布平板的操作过程不需要显微镜。稀释和涂布平板的操作过程不需要显微镜。(2)(2)涂布平涂布平板时，若培养基表面的菌悬液过多会出现积液，造成板时，若培养基表面的菌悬液过多会出现积液，造成菌体堆积，影响分离效果。菌体堆积，影响分离效果。(3)(3)试管口粘附的培养基，试管口粘附的培养基，需要用酒精棉球擦净，避免培养基污染棉塞。需要用酒精棉球擦净，避免培养基污染棉塞。(4)(4)菌株菌株产生的降解纤维素酶的量越多、活性越高，会使降解产生的降解纤维素酶的量越多、活性越高，会使降解圈越大。降解纤维素能力最强的菌株是圈越大。降解纤维素能力最强的菌株是，因其菌株，因其菌株菌落小，但降解圈大。菌落小，但降解圈大。(5)(5)分析图中曲线可知，分析图中曲线可知，J4J4菌株菌株在较高温度和酸性环境下酶的活性更高，而发酵过程在较高温度和酸性环境下酶的活性更高，而发酵过程会产热和产酸，所以会产热和产酸，所以J4J4菌株更适合用于人工瘤胃发酵。菌株更适合用于人工瘤胃发酵。答案：答案：(1)(1)(2)(2)培养基表面的菌悬液会出现积液，培养基表面的菌悬液会出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果导致菌体堆积，影响分离效果(3)(3)避免培养基污染棉塞避免培养基污染棉塞(4)(4)量与活性量与活性(5)J4(5)J4发酵过程会产热和产酸，发酵过程会产热和产酸，J4J4菌株在较高温度和菌株在较高温度和酸性环境下酶的活性更高酸性环境下酶的活性更高3.(20163.(2016湛江模湛江模拟) )随着随着环境境污染的加染的加剧和石油危机和石油危机出出现，越来越多的国家开始，越来越多的国家开始选择使用乙醇作使用乙醇作为代替燃代替燃料，生料，生产中玉米和麦草的秸中玉米和麦草的秸秆秆可以用来生可以用来生产燃料乙醇。燃料乙醇。已知秸已知秸秆秆的主要成分是的主要成分是纤维素，回答下列素，回答下列问题：(1)(1)人人们首先利用首先利用纤维素分解菌将素分解菌将纤维素分解，素分解，纤维素分素分解菌多分布在解菌多分布在_的土壤中，的土壤中，该微生物微生物产生的生的纤维素素酶酶是一种复合是一种复合酶酶，一般包括三种成分：，一般包括三种成分：_，_和和_。前两种。前两种酶酶能使能使纤维素分解成素分解成纤维二糖，二糖，第三种第三种酶酶将将纤维二糖分解成葡萄糖。二糖分解成葡萄糖。(2)(2)从土壤中从土壤中筛选纤维素分解菌需要配制素分解菌需要配制_培养基，培养基，该培养基中需要加入培养基中需要加入纤维素粉作素粉作为_。(3)(3)经过梯度稀梯度稀释后，要将后，要将样品均匀涂布在用于品均匀涂布在用于鉴别纤维素分解菌的培养基上，在素分解菌的培养基上，在该培养基中需要加入的特培养基中需要加入的特殊染料是殊染料是_，当形成菌落以后可以根据菌落，当形成菌落以后可以根据菌落周周围是否是否产生生_来来筛选纤维素分解菌。素分解菌。(4)(4)在利用涂布器涂布平板之后，需要在利用涂布器涂布平板之后，需要对涂布器涂布器进行行_(_(填填“消毒消毒”或者或者“灭菌菌”)”)处理。理。【解析】【解析】(1)(1)纤维素分解菌多分布在富含纤维素的土壤纤维素分解菌多分布在富含纤维素的土壤中，纤维素酶包含三种成分：中，纤维素酶包含三种成分：C C1 1酶、酶、C Cx x酶和葡萄糖苷酶。酶和葡萄糖苷酶。(2)(2)筛选纤维素分解菌的培养基为选择培养基，其中添筛选纤维素分解菌的培养基为选择培养基，其中添加的纤维素粉是由加的纤维素粉是由C C、H H、O O三种元素组成的多糖，只能三种元素组成的多糖，只能为微生物提供碳源。为微生物提供碳源。(3)(3)鉴别纤维素分解菌时要在培养基中添加刚果红作为鉴别纤维素分解菌时要在培养基中添加刚果红作为指示剂，刚果红能与纤维素形成红色复合物，当纤维指示剂，刚果红能与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素分解菌分解后，红色复合物就不能形成，素被纤维素分解菌分解后，红色复合物就不能形成，其菌落周围就会产生不变红的透明圈。其菌落周围就会产生不变红的透明圈。(4)(4)微生物接种工具在接种前和接种后均要进行灭菌处微生物接种工具在接种前和接种后均要进行灭菌处理。接种前灭菌的目的是防止杂菌污染，接种后灭菌理。接种前灭菌的目的是防止杂菌污染，接种后灭菌的目的是防止微生物污染环境或感染操作者。的目的是防止微生物污染环境或感染操作者。答案：答案：(1)(1)富含纤维素富含纤维素C C1 1酶酶C Cx x酶葡萄糖苷酶酶葡萄糖苷酶(2)(2)选择碳源选择碳源(3)(3)刚果红透明圈刚果红透明圈(4)(4)灭菌灭菌【加固【加固训练】 (2015 (2015临沂模沂模拟) )莠去津是一种含氮莠去津是一种含氮农药，在土，在土壤中不易降解，壤中不易降解，为修复被其修复被其污染的土壤，可按下面程染的土壤，可按下面程序序选育能降解莠去津的育能降解莠去津的细菌菌( (目的菌目的菌) )。请据据图回答：回答：( (已知莠去津在水中溶解度低，含已知莠去津在水中溶解度低，含过量莠去津的固体培量莠去津的固体培养基不透明养基不透明) )(1)(1)由由图推断，从推断，从A A瓶到瓶到C C瓶液体培养的瓶液体培养的过程称程称为_，目的是目的是_。(2)(2)在将在将C C瓶菌种接种到固体培养基之前通常要瓶菌种接种到固体培养基之前通常要进行行_，将菌种接种到固体培养基的方法有，将菌种接种到固体培养基的方法有平板划平板划线法和法和_法，从法，从图中看本中看本实验采用采用的是的是_(_(填填“前者前者”或或“后者后者”)”)。(3)(3)一段一段时间后，培养基出后，培养基出现无透明圈和有透明圈两种无透明圈和有透明圈两种菌落，我菌落，我们筛选的目的菌是菌落中的目的菌是菌落中_的的细菌，菌，该菌落生菌落生长所需的氮元素主要来自所需的氮元素主要来自_。(4)(4)为弄清固体培养基中的非目的菌落来自弄清固体培养基中的非目的菌落来自C C瓶菌种瓶菌种还是培养基，是培养基，应如何如何设置置对照照组？_。【解题指南】【解题指南】(1)(1)关键信息：关键信息：“莠去津是一种含氮农药莠去津是一种含氮农药”“”“含过量莠去津的固体培养基不透明含过量莠去津的固体培养基不透明”。(2)(2)隐含信息：隐含信息：无氮培养基无氮培养基+ +过量莠去津为以莠去津为唯一氮源的选过量莠去津为以莠去津为唯一氮源的选择培养基。择培养基。图中菌落分布均匀的培养基是利用稀释涂布平板法图中菌落分布均匀的培养基是利用稀释涂布平板法接种获得的。接种获得的。【解析】【解析】(1)(1)图中从图中从A A瓶到瓶到C C瓶液体培养的过程称为选择瓶液体培养的过程称为选择培养，目的是初步选择能降解莠去津的细菌培养，目的是初步选择能降解莠去津的细菌( (目的菌目的菌) )并提高其密度。并提高其密度。(2)(2)将菌种接种到固体培养基的方法有平板划线法和稀将菌种接种到固体培养基的方法有平板划线法和稀释涂布平板法两种，由图中固体培养基上的菌落分布释涂布平板法两种，由图中固体培养基上的菌落分布可知，该接种方法是稀释涂布平板法，包括梯度稀释可知，该接种方法是稀释涂布平板法，包括梯度稀释操作和涂布平板操作。操作和涂布平板操作。(3)(3)根据题目信息根据题目信息“莠去津在水中溶解度低，含过量莠莠去津在水中溶解度低，含过量莠去津的固体培养基不透明去津的固体培养基不透明”可知，能够降解莠去津的可知，能够降解莠去津的目的菌分解莠去津，使菌落周围出现透明圈，因此可目的菌分解莠去津，使菌落周围出现透明圈，因此可以选择菌落周围存在透明圈的细菌。由于培养基中只以选择菌落周围存在透明圈的细菌。由于培养基中只有莠去津一种氮源，因此分解莠去津的微生物所需的有莠去津一种氮源，因此分解莠去津的微生物所需的氮元素主要由莠去津提供。氮元素主要由莠去津提供。(4)(4)为弄清固体培养基中的非目的菌落来自为弄清固体培养基中的非目的菌落来自C C瓶菌种还瓶菌种还是培养基，应设置灭菌后不接种菌种的培养基，与实是培养基，应设置灭菌后不接种菌种的培养基，与实验组放在相同条件下培养，若培养基上无菌落出现，验组放在相同条件下培养，若培养基上无菌落出现，则非目的菌落一定来自则非目的菌落一定来自C C瓶菌种，若培养基上出现菌落，瓶菌种，若培养基上出现菌落，则说明非目的菌落可能来自培养基。则说明非目的菌落可能来自培养基。答案：答案：(1)(1)选择培养初步选择能降解莠去津的细菌选择培养初步选择能降解莠去津的细菌( (目的菌目的菌) )并提高其密度并提高其密度(2)(2)梯度稀释稀释涂布平板后者梯度稀释稀释涂布平板后者(3)(3)有透明圈莠去津有透明圈莠去津(4)(4)配制的培养基灭菌后不接种菌种，与实验组放在相配制的培养基灭菌后不接种菌种，与实验组放在相同条件下培养同条件下培养