原料药中杂质的控制与案例分析原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所中国药品生物制品检定所原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤杂质质控理念的变迁杂质质控理念的变迁u uImpurity ProfileImpurity Profile （杂质谱杂质谱）: A description of the : A description of the identified and unidentified impurities present in a identified and unidentified impurities present in a drug substance. drug substance. 对存在于药品中所有已知杂质和对存在于药品中所有已知杂质和对存在于药品中所有已知杂质和对存在于药品中所有已知杂质和未知杂质的总的描述。未知杂质的总的描述。未知杂质的总的描述。未知杂质的总的描述。第一次飞跃第一次飞跃第二次飞跃第二次飞跃纯度控制纯度控制杂质控制杂质控制杂质谱杂质谱控制控制原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤头孢泊肟酯有关物质分析的头孢泊肟酯有关物质分析的HPLC色谱图色谱图1=头孢泊肟，2=去甲氧基头孢泊肟酯异构体A，3=头孢泊肟酯异构体A，4=去甲氧基头孢泊肟酯异构体B+3异构体，5=头孢泊肟酯异构体B+反式头孢泊肟酯A，6=反式头孢泊肟酯B，7=N-甲酰基头孢泊肟酯异构体A，8=NAC-CPOD-PRX异构体A，9=N-甲酰基头孢泊肟酯异构体B，10=N-乙酰基头孢泊肟酯异构体B，11=头孢泊肟酯开环二聚体A，12=头孢泊肟酯开环二聚体B杂质谱控制与杂质控制的区别？杂质谱控制与杂质控制的区别？原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤杂质谱控制的整体解决方案杂质谱控制的整体解决方案原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤原料药杂质控制的相关法规原料药杂质控制的相关法规u uQ3A： 新原料药中的杂质新原料药中的杂质u uQ3B： 新药制剂中的杂质新药制剂中的杂质u uQ3C： 残留溶剂残留溶剂 化学药品杂质研究的技术指导原则化学药品杂质研究的技术指导原则化学药品杂质研究的技术指导原则化学药品杂质研究的技术指导原则原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤对新原料药中的杂质如何进行阐述？对新原料药中的杂质如何进行阐述？u u化学方面化学方面化学方面化学方面 分类与鉴定分类与鉴定分类与鉴定分类与鉴定 报告报告报告报告 杂质的控制（检查项目、限度）杂质的控制（检查项目、限度）杂质的控制（检查项目、限度）杂质的控制（检查项目、限度） 分析方法分析方法分析方法分析方法u u安全性方面安全性方面安全性方面安全性方面 对安全性研究及临床研究中存在的潜在杂质对安全性研究及临床研究中存在的潜在杂质对安全性研究及临床研究中存在的潜在杂质对安全性研究及临床研究中存在的潜在杂质（在当时的实验样品中不存在或含量极低的杂（在当时的实验样品中不存在或含量极低的杂（在当时的实验样品中不存在或含量极低的杂（在当时的实验样品中不存在或含量极低的杂质）的安全性评估质）的安全性评估质）的安全性评估质）的安全性评估原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤杂质的分类杂质的分类u u有机杂质有机杂质有机杂质有机杂质 反应起始物、副产物、中间体、降解产物、试反应起始物、副产物、中间体、降解产物、试反应起始物、副产物、中间体、降解产物、试反应起始物、副产物、中间体、降解产物、试剂、配位体、催化剂等剂、配位体、催化剂等剂、配位体、催化剂等剂、配位体、催化剂等u u无机杂质无机杂质无机杂质无机杂质 试剂、配位体、催化剂、重金属、无机盐及过试剂、配位体、催化剂、重金属、无机盐及过试剂、配位体、催化剂、重金属、无机盐及过试剂、配位体、催化剂、重金属、无机盐及过滤介质、活性炭等滤介质、活性炭等滤介质、活性炭等滤介质、活性炭等u u残留溶剂残留溶剂残留溶剂残留溶剂 常用的有常用的有常用的有常用的有6969种种种种原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤基本术语基本术语u uQualificationQualification( (界定界定界定界定) )：是获得和评价：是获得和评价：是获得和评价：是获得和评价与研发新药相关的与研发新药相关的与研发新药相关的与研发新药相关的杂质的杂质的杂质的杂质的数据的数据的数据的数据的过程过程过程过程，这些数据用于建立新药的安全阈，这些数据用于建立新药的安全阈，这些数据用于建立新药的安全阈，这些数据用于建立新药的安全阈值（水平），单个的或一些已确定的杂质的含量在这值（水平），单个的或一些已确定的杂质的含量在这值（水平），单个的或一些已确定的杂质的含量在这值（水平），单个的或一些已确定的杂质的含量在这个阈值下可以确保药品的生物安全性。个阈值下可以确保药品的生物安全性。个阈值下可以确保药品的生物安全性。个阈值下可以确保药品的生物安全性。u uReporting threshold Reporting threshold 或或或或 Reporting level Reporting level ( (报告阈值或报报告阈值或报报告阈值或报报告阈值或报告水平）：新药注册时杂质应被报告的限度。告水平）：新药注册时杂质应被报告的限度。告水平）：新药注册时杂质应被报告的限度。告水平）：新药注册时杂质应被报告的限度。u uIdentified thresholdIdentified threshold ( (鉴别阈值）：新药注册时杂质应鉴别阈值）：新药注册时杂质应鉴别阈值）：新药注册时杂质应鉴别阈值）：新药注册时杂质应被鉴别的限度。被鉴别的限度。被鉴别的限度。被鉴别的限度。u uQualificated thresholdQualificated threshold ( (界定阈值）：新药注册时杂质界定阈值）：新药注册时杂质界定阈值）：新药注册时杂质界定阈值）：新药注册时杂质应被界定的限度。应被界定的限度。应被界定的限度。应被界定的限度。原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤新药原料药的杂质限度新药原料药的杂质限度 最大日剂量最大日剂量最大日剂量最大日剂量报告阈值报告阈值报告阈值报告阈值鉴定阈值鉴定阈值鉴定阈值鉴定阈值界定阈值界定阈值界定阈值界定阈值2g2g2g2g0.05%0.05%0.05%0.05%0.10%0.10%0.10%0.10%或或或或1.0mg1.0mg1.0mg1.0mg( ( ( (取最小值取最小值取最小值取最小值) ) ) )0.15%0.15%0.15%0.15%或或或或1.0mg1.0mg1.0mg1.0mg( ( ( (取最小值取最小值取最小值取最小值) ) ) )2g2g2g2g0.03%0.03%0.03%0.03%0.05%0.05%0.05%0.05%0.05%0.05%0.05%0.05%（以原料药的响应因子计）（以原料药的响应因子计）原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤如何合理的对原料药中的杂质如何合理的对原料药中的杂质进行报告和控制？进行报告和控制？原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤研究报告中对有机杂质的基本要求研究报告中对有机杂质的基本要求1. 1.对新原料药在合成、精制和储存过程中最可能产生的那对新原料药在合成、精制和储存过程中最可能产生的那对新原料药在合成、精制和储存过程中最可能产生的那对新原料药在合成、精制和储存过程中最可能产生的那些些些些实际存在的杂质和潜在的杂质实际存在的杂质和潜在的杂质实际存在的杂质和潜在的杂质实际存在的杂质和潜在的杂质进行综述。进行综述。进行综述。进行综述。根据合成工艺中化学反应的原理，结合反应条件等，阐述合成根据合成工艺中化学反应的原理，结合反应条件等，阐述合成根据合成工艺中化学反应的原理，结合反应条件等，阐述合成根据合成工艺中化学反应的原理，结合反应条件等，阐述合成工艺中可能产生的副产物；工艺中可能产生的副产物；工艺中可能产生的副产物；工艺中可能产生的副产物；根据起始原料的结构及来源，阐述可能由起始原料引入的有关根据起始原料的结构及来源，阐述可能由起始原料引入的有关根据起始原料的结构及来源，阐述可能由起始原料引入的有关根据起始原料的结构及来源，阐述可能由起始原料引入的有关物质；物质；物质；物质；根据起始原料、中间体、产物的结构特点，产生合成中可能产根据起始原料、中间体、产物的结构特点，产生合成中可能产根据起始原料、中间体、产物的结构特点，产生合成中可能产根据起始原料、中间体、产物的结构特点，产生合成中可能产生的降解产物；生的降解产物；生的降解产物；生的降解产物；根据产物及杂质的结构特点，结合纯化精制工艺，阐述去除杂根据产物及杂质的结构特点，结合纯化精制工艺，阐述去除杂根据产物及杂质的结构特点，结合纯化精制工艺，阐述去除杂根据产物及杂质的结构特点，结合纯化精制工艺，阐述去除杂质的关键工艺。质的关键工艺。质的关键工艺。质的关键工艺。原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤头孢噻肟钠（头孢噻肟钠（Cefotaxime Sodium）杂质的控制杂质的控制u u以头孢菌素以头孢菌素以头孢菌素以头孢菌素C C为起始物，先经化学或酶催化反应生成为起始物，先经化学或酶催化反应生成为起始物，先经化学或酶催化反应生成为起始物，先经化学或酶催化反应生成7-7-氨氨氨氨基头孢烯酸（基头孢烯酸（基头孢烯酸（基头孢烯酸（7-ACA7-ACA），然后进行酰化反应生成头孢噻），然后进行酰化反应生成头孢噻），然后进行酰化反应生成头孢噻），然后进行酰化反应生成头孢噻肟酸（肟酸（肟酸（肟酸（CTAXCTAX），最后生成头孢噻肟钠（），最后生成头孢噻肟钠（），最后生成头孢噻肟钠（），最后生成头孢噻肟钠（CTAX-NaCTAX-Na）。）。）。）。原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤头孢菌素的各种可能的降解反应类型头孢菌素的各种可能的降解反应类型 1. 1. - -内酰胺环的降解内酰胺环的降解内酰胺环的降解内酰胺环的降解 2. 2.氢化噻嗪环的双键异构（氢化噻嗪环的双键异构（氢化噻嗪环的双键异构（氢化噻嗪环的双键异构（-异构）异构）异构）异构）原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤3. 63. 6、7 7位氢的反向异构位氢的反向异构位氢的反向异构位氢的反向异构 原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤4. 74. 7位碳相连的侧链反应位碳相连的侧链反应位碳相连的侧链反应位碳相连的侧链反应 分子结构中7位碳侧链上有-氨基的头孢菌素，如头孢氨苄、头孢羟氨苄、头孢拉定、头孢来星、头孢克罗等药物，还可发生分子内亲核反应，生成哌嗪二酮衍生物的降解物 原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤具有苯苷氨酸侧链的-内酰胺抗生素可以降解为2-羟基-3-苯基吡嗪衍生物，这种化合物具有荧光特性，头孢克洛、氯碳头孢均会产生这种降解产物。 原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤5. 5. 发生在发生在发生在发生在R3R3取代基的反应取代基的反应取代基的反应取代基的反应 当3位碳上的取代基为乙酰氧甲基时，易脱去乙酰基，形成脱乙酰基降解物。在加热、酸性等条件下，可进一步进行分子内部环和，此时生成的主要降解产物为内酯。 原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤6. 6. 双键顺反式异构（双键顺反式异构（E-E-异构）异构）7. 7. 酯的水解酯的水解 8. 8. 聚合反应聚合反应9. 9. 其它反应其它反应头孢曲松、头孢噻肟、头孢它啶、头孢地尼等有甲氧亚氨键的头孢菌素均会产生E-异构体，多数在光照的情况易发生此类反应。 原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤基于降解反应的杂质分析基于降解反应的杂质分析发生在头孢菌素发生在头孢菌素发生在头孢菌素发生在头孢菌素R3R3取代基的降解反应取代基的降解反应取代基的降解反应取代基的降解反应 当3位碳上的取代基为乙酰氧甲基时，易脱去乙酰基，形成脱乙酰基降解物。在加热、酸性等条件下，可进一步进行分子内部环和，此时生成的主要降解产物为内酯。 1.杂质杂质B、杂质、杂质E可以源于头孢噻肟的降解可以源于头孢噻肟的降解原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤杂质谱分析杂质谱分析杂质谱分析杂质谱分析u u头孢噻肟有关物质分子结构头孢噻肟有关物质分子结构头孢噻肟有关物质分子结构头孢噻肟有关物质分子结构原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤u u头孢噻肟钠的合成工艺头孢噻肟钠的合成工艺头孢噻肟钠的合成工艺头孢噻肟钠的合成工艺原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤u u由于起始物头孢菌素由于起始物头孢菌素由于起始物头孢菌素由于起始物头孢菌素C C含有含有含有含有DAO-CCDAO-CC、DA-DA-CCCC和和和和CC-LTCC-LT等杂质，等杂质，等杂质，等杂质，在半合成步骤中发生在半合成步骤中发生在半合成步骤中发生在半合成步骤中发生相同的反应，分别生相同的反应，分别生相同的反应，分别生相同的反应，分别生成成成成DAO-ACADAO-ACA、DA-DA-ACAACA和和和和ACA-LTACA-LT，进，进，进，进而生成而生成而生成而生成DAO-CTAXDAO-CTAX、DA-CTAXDA-CTAX和和和和CTAX-CTAX-LTLT等杂质。等杂质。等杂质。等杂质。 2.2.杂质杂质杂质杂质EE可以源于起始原料可以源于起始原料可以源于起始原料可以源于起始原料3.3.杂质杂质杂质杂质EE可以源于合成中的可以源于合成中的可以源于合成中的可以源于合成中的任一中间过程任一中间过程任一中间过程任一中间过程原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤杂质谱分析杂质谱分析杂质谱分析杂质谱分析u u头孢噻肟有关物质典型色谱图（头孢噻肟有关物质典型色谱图（头孢噻肟有关物质典型色谱图（头孢噻肟有关物质典型色谱图（235nm235nm235nm235nm）原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤杂质谱分析杂质谱分析杂质谱分析杂质谱分析u u头孢噻肟有关物质头孢噻肟有关物质头孢噻肟有关物质头孢噻肟有关物质 杂质杂质杂质杂质B B B B含量最大，杂质含量最大，杂质含量最大，杂质含量最大，杂质C C C C含量最低含量最低含量最低含量最低 合成副产物：杂质合成副产物：杂质合成副产物：杂质合成副产物：杂质A A A A、杂质、杂质、杂质、杂质E E E E和杂质和杂质和杂质和杂质G G G G 降解杂质：杂质降解杂质：杂质降解杂质：杂质降解杂质：杂质F F F F原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤u u生产工艺中产生的杂质生产工艺中产生的杂质生产工艺中产生的杂质生产工艺中产生的杂质原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤u u阐述清楚阐述清楚产品中可能存在那些杂质产品中可能存在那些杂质产品中可能存在那些杂质产品中可能存在那些杂质杂质的来源杂质的来源杂质的来源杂质的来源生产工艺中通过何种手段去除或控制这生产工艺中通过何种手段去除或控制这生产工艺中通过何种手段去除或控制这生产工艺中通过何种手段去除或控制这些杂质的产生些杂质的产生些杂质的产生些杂质的产生实际产品中这些的杂质水平及变化实际产品中这些的杂质水平及变化实际产品中这些的杂质水平及变化实际产品中这些的杂质水平及变化原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤加替沙星及其十种杂质对照品的色谱图加替沙星及其十种杂质对照品的色谱图加替沙星注射液杂质谱分析加替沙星注射液杂质谱分析 色谱条件：以三乙胺磷酸溶液 三乙胺溶液（1100），用磷酸调节pH值至4.30.05-乙腈（87：13）为流动相，检测波长为325nm，柱温为30，流速为每分钟1ml。 色谱柱:SHISEIDO CAPCELL PAK C18原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤加替沙星及加替沙星及10个已知杂质的结构式个已知杂质的结构式 原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤主要杂质是杂质主要杂质是杂质3和杂质和杂质8生产工艺杂质生产工艺杂质原料的杂质谱分析原料的杂质谱分析原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤光照稳定性评价光照稳定性评价 比较光照前后各杂质含量的变化比较光照前后各杂质含量的变化 按随机取按随机取19批样品批样品 UV灯下照射灯下照射10天天 杂质杂质2、杂质杂质4是与光照稳定性密切相关的杂质是与光照稳定性密切相关的杂质 大多数喹喏酮类抗生素对光不稳定，什么是光降解杂质？大多数喹喏酮类抗生素对光不稳定，什么是光降解杂质？原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤如何合理的对原料药中的杂质如何合理的对原料药中的杂质进行报告和控制？进行报告和控制？依据合成依据合成/降解反应机理，鉴别可能杂质！降解反应机理，鉴别可能杂质！全过程跟踪杂质在合成工艺中的变化！全过程跟踪杂质在合成工艺中的变化！原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤杂质控制方法杂质控制方法u u直接测定直接测定 色谱法色谱法色谱法色谱法 HPLCHPLC TLCTLC HPCEHPCE GCGCu u间接测定间接测定 溶液的颜色检查溶液的颜色检查溶液的颜色检查溶液的颜色检查原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤杂质分析方法的选择杂质分析方法的选择u方法互补原则方法互补原则了解不同方法间的相关性了解不同方法间的相关性了解不同方法间的相关性了解不同方法间的相关性u u所有的分析方法必须进行验证所有的分析方法必须进行验证（validation)原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤药品质控药品质控RP-HPLC方法方法u u上市后（仿制）药品上市后（仿制）药品 分析方法的有效性分析方法的有效性分析方法的有效性分析方法的有效性 分析方法的最优化分析方法的最优化分析方法的最优化分析方法的最优化 分析方法的耐用性分析方法的耐用性分析方法的耐用性分析方法的耐用性u u新药研发新药研发 如何确定分离对象如何确定分离对象如何确定分离对象如何确定分离对象原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤u u所有的杂质在所选择的所有的杂质在所选择的RP-HPLC系统中被有效的检出了吗？系统中被有效的检出了吗？是否有杂质吸附到色谱柱上未被洗脱？是否有杂质吸附到色谱柱上未被洗脱？是否有杂质吸附到色谱柱上未被洗脱？是否有杂质吸附到色谱柱上未被洗脱？是否有杂质在色谱柱上未被保留？是否有杂质在色谱柱上未被保留？是否有杂质在色谱柱上未被保留？是否有杂质在色谱柱上未被保留？是否所检测到的色谱峰存在共出峰？是否所检测到的色谱峰存在共出峰？是否所检测到的色谱峰存在共出峰？是否所检测到的色谱峰存在共出峰？原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤新方法新方法分析方法的有效性（氨苄西林钠分析方法的有效性（氨苄西林钠/ /舒巴坦钠）舒巴坦钠）原方法原方法中国抗生素杂志，中国抗生素杂志，中国抗生素杂志，200920092009，343434：734734734在对各国药典方法比较的基础在对各国药典方法比较的基础在对各国药典方法比较的基础在对各国药典方法比较的基础上确定分析方法上确定分析方法上确定分析方法上确定分析方法原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤u u所有的杂质在所选择的所有的杂质在所选择的RP-HPLC系统中被有效的检出了吗？系统中被有效的检出了吗？是否有杂质吸附到色谱柱上未被洗脱？是否有杂质吸附到色谱柱上未被洗脱？是否有杂质吸附到色谱柱上未被洗脱？是否有杂质吸附到色谱柱上未被洗脱？是否有杂质在色谱柱上未被保留？是否有杂质在色谱柱上未被保留？是否有杂质在色谱柱上未被保留？是否有杂质在色谱柱上未被保留？是否所检测到的色谱峰存在共出峰？是否所检测到的色谱峰存在共出峰？是否所检测到的色谱峰存在共出峰？是否所检测到的色谱峰存在共出峰？如何验证？如何验证？如何验证？如何验证？采用采用采用采用采用采用HPCE/HPTLCHPCE/HPTLCHPCE/HPTLC方法方法方法方法方法方法验证验证验证验证验证验证RP-HPLCRP-HPLCRP-HPLC方法的有效性方法的有效性方法的有效性方法的有效性方法的有效性方法的有效性原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤HPCEHPCE分析分析分析分析 - -内酰胺抗生素杂质谱内酰胺抗生素杂质谱内酰胺抗生素杂质谱内酰胺抗生素杂质谱最佳分离模式的选择最佳分离模式的选择最佳分离模式的选择最佳分离模式的选择JCPSJCPS，20102010，1919（44）：）：285292285292头孢菌素有关物质测定中头孢菌素有关物质测定中头孢菌素有关物质测定中头孢菌素有关物质测定中MEKCMEKC是是是是HPLCHPLC分析的最有效验证方法分析的最有效验证方法分析的最有效验证方法分析的最有效验证方法原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤MEKC与与HPLC测定头孢菌素有关测定头孢菌素有关物质的互补性分析物质的互补性分析 u uMEKC具有较强的杂质分离能力，但其检具有较强的杂质分离能力，但其检测限（测限（LOD）较高。）较高。u u借助于加速实验，将借助于加速实验，将MEKC分离出的杂质分离出的杂质峰数目与峰数目与HPLC分离出的含量大于分离出的含量大于MEKC LOD的杂质峰数目进行比较，当两者基本的杂质峰数目进行比较，当两者基本相对时，可以认为相对时，可以认为HPLC方法具有较满意方法具有较满意的分离能力。的分离能力。 原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤药物分析杂志，待发表药物分析杂志，待发表原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤HPLCHPLC与与HPTLCHPTLC分析庆大霉素的比较分析庆大霉素的比较u uHPTLCHPTLC中的中的9 9号和号和1010号斑点在号斑点在HPLCHPLC中被检出了吗？中被检出了吗？庆大霉素供试品庆大霉素供试品庆大霉素供试品庆大霉素供试品HPTLCHPTLC色谱图色谱图色谱图色谱图及对应的及对应的及对应的及对应的UVUV扫描图谱扫描图谱扫描图谱扫描图谱1.UK1 2.UK2 3.UK3 4.UK4 5.1.UK1 2.UK2 3.UK3 4.UK4 5.C1a C1a 6.UK5 6.UK5 7. 7.C2a+C2C2a+C2 8. 8.C1C1原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤药品质控药品质控RP-HPLC方法方法u u上市后（仿制）药品上市后（仿制）药品 分析方法的有效性分析方法的有效性分析方法的有效性分析方法的有效性 分析方法的最优化分析方法的最优化分析方法的最优化分析方法的最优化 分析方法的耐用性分析方法的耐用性分析方法的耐用性分析方法的耐用性u u新药研发新药研发 如何确定分离对象如何确定分离对象如何确定分离对象如何确定分离对象原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤基于基于实验设计理念实验设计理念的的HPLC方法优化理论方法优化理论JPBA，2009, 49(5): 11921202原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤洛伐他定和辛伐他定有关物质洛伐他定和辛伐他定有关物质洛伐他定和辛伐他定有关物质洛伐他定和辛伐他定有关物质HPLCHPLC分析方法的优化分析方法的优化分析方法的优化分析方法的优化原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤 新优化出的方法比新优化出的方法比新优化出的方法比新优化出的方法比新优化出的方法比新优化出的方法比USPUSPUSP的分离度更好，比的分离度更好，比的分离度更好，比的分离度更好，比的分离度更好，比的分离度更好，比EPEPEP分离出的杂质峰更分离出的杂质峰更分离出的杂质峰更分离出的杂质峰更分离出的杂质峰更分离出的杂质峰更多，比多，比多，比多，比多，比多，比ChPChPChP所用的分离时间更短，并达到了更好的分离效果所用的分离时间更短，并达到了更好的分离效果所用的分离时间更短，并达到了更好的分离效果所用的分离时间更短，并达到了更好的分离效果所用的分离时间更短，并达到了更好的分离效果所用的分离时间更短，并达到了更好的分离效果 原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤药品质控药品质控RP-HPLC方法方法u u上市后（仿制）药品上市后（仿制）药品 分析方法的有效性分析方法的有效性分析方法的有效性分析方法的有效性 分析方法的最优化分析方法的最优化分析方法的最优化分析方法的最优化 分析方法的耐用性分析方法的耐用性分析方法的耐用性分析方法的耐用性u u新药研发新药研发 如何确定分离对象如何确定分离对象如何确定分离对象如何确定分离对象原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤基于QbD理念的杂质控制策略JPBA，2008, 46(3):431-441原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤药物杂质的可能来源药物杂质的可能来源原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤阿奇霉素的合成途经阿奇霉素的合成途经阿奇霉素的合成途经阿奇霉素的合成途经原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤1.原料：原料：红霉素 A、红霉素 B、红霉素 C、红霉素D、红霉素 E、红霉素 F、阿奇霉素B、阿奇霉素C、阿奇霉素E、阿奇霉素F2.中间体：中间体：红霉素A肟（Z）、6，9-亚胺醚、氮红霉素A、红霉素A肟（E）、红霉素 C肟（E）、9，11-亚胺醚、红霉素C 6，9-亚胺醚、红霉素A内酰胺 3.副产物：副产物：红霉素-N-氧化物、N-去甲基红霉素A、N-去甲基阿奇霉素A、氨基阿奇霉素A、N-甲酰基-N去甲基阿奇霉素A、N-去甲基-N-苯磺酰基阿奇霉素、阿奇霉素N-氧化物、3-去（二甲氨基）- 3,4-去氢阿奇霉素、 O-甲苯磺酰基红霉素肟、红霉素Z肟重排物、氮红霉素11，12-硼酸酯、 N，N-去二甲基N-甲酰基阿奇霉素A、丙基阿奇霉素、3-N， N-去二甲基氨基-酮基阿奇霉素A、阿奇霉素11，12-硼酸酯4.降解产物：降解产物：去克拉克定糖阿奇霉素A、去克拉克定糖氮红霉素、红霉素8， 9-脱水-6，9-半缩酮、红霉素6，9：9，12-螺缩酮阿奇霉素中可能存在的杂质：阿奇霉素中可能存在的杂质：阿奇霉素中可能存在的杂质：阿奇霉素中可能存在的杂质：3737种种种种原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤模拟模拟色谱图色谱图色谱图色谱图实际色谱图实际色谱图实际色谱图实际色谱图原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤杂质杂质名称名称log P(8.3)log P(8.3)log klog kk kTR=T0TR=T0（1+k1+k）去克拉克定糖阿奇霉素去克拉克定糖阿奇霉素A A1.281.280.920.928.268.2613.8913.89红红霉素霉素A A内内酰酰胺胺1.351.350.950.958.948.9414.9014.90阿奇霉素阿奇霉素C C2.22.21.371.3723.2023.2030.3030.303-N3-N，N-N-去二甲基氨基去二甲基氨基- -酮酮基阿奇霉素基阿奇霉素A A2.242.241.391.3924.2724.2737.9037.90红红霉素霉素C C肟肟（E E）2.382.381.451.4528.4028.4044.0944.093-3-去（二甲氨基）去（二甲氨基）-3,4-3,4-去去氢氢阿奇霉素阿奇霉素2.792.791.651.6544.9944.9968.9868.98红红霉素霉素A A肟肟（Z Z）2.82.81.661.6645.5045.5069.7569.75红红霉素霉素A A肟肟（E E）2.82.81.661.6645.5045.5069.7569.75丙基阿奇霉素丙基阿奇霉素3.163.161.831.8368.1568.15103.73103.73阿奇霉素阿奇霉素E E3.543.542.022.0270.4070.40107.10107.10N-N-去甲基去甲基-N-N-苯磺苯磺酰酰基阿奇霉素基阿奇霉素4.984.982.722.7275.4075.40114.60114.60原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤采用有效的方法证明杂质不存在，采用有效的方法证明杂质不存在，而不是陈述杂质不存在！而不是陈述杂质不存在！原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤 -内酰胺抗生素内酰胺抗生素聚合物的控制聚合物的控制原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤SephadexG-10凝胶色谱系统典型分离图样品样品对照对照Kav=0原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤高效凝胶色谱系统高效凝胶色谱系统1. 1.TSKTSK高效凝胶色谱系统高效凝胶色谱系统高效凝胶色谱系统高效凝胶色谱系统2. 2.Superdex pipted Superdex pipted 高效凝胶色谱系统高效凝胶色谱系统高效凝胶色谱系统高效凝胶色谱系统3. 3.高效疏水凝胶色谱系统高效疏水凝胶色谱系统高效疏水凝胶色谱系统高效疏水凝胶色谱系统原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤高效疏水凝胶色谱系统高效疏水凝胶色谱系统u uTSK Gel G2500 HXLTSK Gel G2500 HXL凝胶柱（填充剂为苯乙烯凝胶柱（填充剂为苯乙烯凝胶柱（填充剂为苯乙烯凝胶柱（填充剂为苯乙烯二乙烯基苯共聚物）二乙烯基苯共聚物）二乙烯基苯共聚物）二乙烯基苯共聚物）3007.8mm i.d;3007.8mm i.d;u u流动相流动相流动相流动相: :含含含含0.260.26溴化锂的溴化锂的溴化锂的溴化锂的N,N-N,N-二甲基甲酰胺溶液；二甲基甲酰胺溶液；二甲基甲酰胺溶液；二甲基甲酰胺溶液；u u流速流速流速流速0.4ml/min;0.4ml/min;u u检测波长为检测波长为检测波长为检测波长为280nm280nm。 原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤 - -内酰胺抗生素内酰胺抗生素聚合物杂质分析聚合物杂质分析头孢地嗪钠头孢地嗪钠 头孢呋辛酯头孢呋辛酯 TSKgel G2000HHR 头孢丙烯头孢丙烯 TSKgel G2500PWXL 法罗培南法罗培南 TSKgel G2000HHR TSKgel G2000SWXL TSKgel G2000SWXL 原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤Sephadex G10 与TSK柱比较62G10柱结果与TSK柱结果的相关性Sephadex G10 TSK聚合物其他聚合物二聚物头孢噻肟钠聚合物分析头孢噻肟钠聚合物分析原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤HPLC反相色谱系统控制高分子杂质反相色谱系统控制高分子杂质 通过对指针性杂质的测定，表征药品中通过对指针性杂质的测定，表征药品中通过对指针性杂质的测定，表征药品中通过对指针性杂质的测定，表征药品中高分子杂质总量。高分子杂质总量。高分子杂质总量。高分子杂质总量。原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤头孢泊肟酯有关物质分析的头孢泊肟酯有关物质分析的HPLC色谱图色谱图1=头孢泊肟，2=去甲氧基头孢泊肟酯异构体A，3=头孢泊肟酯异构体A，4=去甲氧基头孢泊肟酯异构体B+3异构体，5=头孢泊肟酯异构体B+反式头孢泊肟酯A，6=反式头孢泊肟酯B，7=N-甲酰基头孢泊肟酯异构体A，8=NAC-CPOD-PRX异构体A，9=N-甲酰基头孢泊肟酯异构体B，10=N-乙酰基头孢泊肟酯异构体B，11=头孢泊肟酯开环二聚体头孢泊肟酯开环二聚体A，12=头孢泊肟酯开环二聚体头孢泊肟酯开环二聚体B原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤 （A AA）阿莫西林钠在）阿莫西林钠在）阿莫西林钠在）阿莫西林钠在）阿莫西林钠在）阿莫西林钠在Superdex PeptideSuperdex PeptideSuperdex Peptide高效凝胶色谱系统中的色谱图高效凝胶色谱系统中的色谱图高效凝胶色谱系统中的色谱图高效凝胶色谱系统中的色谱图高效凝胶色谱系统中的色谱图高效凝胶色谱系统中的色谱图 （B BB）各色谱峰切换到）各色谱峰切换到）各色谱峰切换到）各色谱峰切换到）各色谱峰切换到）各色谱峰切换到BPBPBP有关物质有关物质有关物质有关物质有关物质有关物质HPLCHPLCHPLC分析系统后的色谱图分析系统后的色谱图分析系统后的色谱图分析系统后的色谱图分析系统后的色谱图分析系统后的色谱图中国新药杂志中国新药杂志 ,2008,17(24):23 ,2008,17(24):23原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤uuu在溶液中（阿莫西林钠易形成聚合物），阿莫西林闭环二聚在溶液中（阿莫西林钠易形成聚合物），阿莫西林闭环二聚在溶液中（阿莫西林钠易形成聚合物），阿莫西林闭环二聚在溶液中（阿莫西林钠易形成聚合物），阿莫西林闭环二聚在溶液中（阿莫西林钠易形成聚合物），阿莫西林闭环二聚在溶液中（阿莫西林钠易形成聚合物），阿莫西林闭环二聚体和二酮哌嗪阿莫西林（体和二酮哌嗪阿莫西林（体和二酮哌嗪阿莫西林（体和二酮哌嗪阿莫西林（体和二酮哌嗪阿莫西林（体和二酮哌嗪阿莫西林（2 22S SS）的含量与各类阿莫西林聚合）的含量与各类阿莫西林聚合）的含量与各类阿莫西林聚合）的含量与各类阿莫西林聚合）的含量与各类阿莫西林聚合）的含量与各类阿莫西林聚合物含量之和（主峰后杂质总量）呈一定的相关性物含量之和（主峰后杂质总量）呈一定的相关性物含量之和（主峰后杂质总量）呈一定的相关性物含量之和（主峰后杂质总量）呈一定的相关性物含量之和（主峰后杂质总量）呈一定的相关性物含量之和（主峰后杂质总量）呈一定的相关性 中国药学杂志中国药学杂志, 2009, 2009，4444（2323）：）：18211821原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤柱切换技术柱切换技术反冲模式反冲模式(Back flushing mode)(Back flushing mode)柱前富集模式柱前富集模式(on-column focusing)(on-column focusing)原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤盐酸头孢替安聚合物分析方法的比较盐酸头孢替安聚合物分析方法的比较Sephadex G-10系统系统TSK-Gel G2000swxl系统系统 柱切换技术柱切换技术0.8ml/minTSK系统系统0.5ml/minC18系统系统原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤u u对对对对 - -内酰胺抗生素中的内酰胺抗生素中的内酰胺抗生素中的内酰胺抗生素中的聚合物重点在于研聚合物重点在于研聚合物重点在于研聚合物重点在于研究，证明所采用的工艺是否可能导致样品究，证明所采用的工艺是否可能导致样品究，证明所采用的工艺是否可能导致样品究，证明所采用的工艺是否可能导致样品聚合物变化！聚合物变化！聚合物变化！聚合物变化！u u应采用适宜的方法对应采用适宜的方法对应采用适宜的方法对应采用适宜的方法对 - -内酰胺抗生素中的内酰胺抗生素中的内酰胺抗生素中的内酰胺抗生素中的聚合物进行控制，而不要仅局限于聚合物进行控制，而不要仅局限于聚合物进行控制，而不要仅局限于聚合物进行控制，而不要仅局限于Sephadex G10Sephadex G10系统！系统！系统！系统！原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤样品中杂质含量的报告样品中杂质含量的报告原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤批次及批量批次及批量批次及批量批次及批量生产日期生产日期生产日期生产日期生产地点生产地点生产地点生产地点生产工艺生产工艺生产工艺生产工艺产品中单个杂质含量及杂质总量产品中单个杂质含量及杂质总量产品中单个杂质含量及杂质总量产品中单个杂质含量及杂质总量批次用途批次用途批次用途批次用途使用的分析方法使用的分析方法使用的分析方法使用的分析方法原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤u u报告研制过程中所有批次样品的检验结果；报告研制过程中所有批次样品的检验结果；报告研制过程中所有批次样品的检验结果；报告研制过程中所有批次样品的检验结果；u u检验结果应用详细记录，而不是简单描述为检验结果应用详细记录，而不是简单描述为检验结果应用详细记录，而不是简单描述为检验结果应用详细记录，而不是简单描述为“ “符合规定符合规定符合规定符合规定” ”； 分别记录单个杂质（已知杂质、未知杂质）、总杂质的含分别记录单个杂质（已知杂质、未知杂质）、总杂质的含分别记录单个杂质（已知杂质、未知杂质）、总杂质的含分别记录单个杂质（已知杂质、未知杂质）、总杂质的含量；量；量；量； 所有的杂质应编号，如根据保留时间等所有的杂质应编号，如根据保留时间等所有的杂质应编号，如根据保留时间等所有的杂质应编号，如根据保留时间等 小于小于小于小于1.0%1.0%的杂质，表示为两位小数，如的杂质，表示为两位小数，如的杂质，表示为两位小数，如的杂质，表示为两位小数，如0.13%, 0.06%0.13%, 0.06% 大于大于大于大于1.0%1.0%的杂质，表示为一位少数，如的杂质，表示为一位少数，如的杂质，表示为一位少数，如的杂质，表示为一位少数，如1.31.3原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤u u在新药研发过程中，采用统一的编号系统，在新药研发过程中，采用统一的编号系统，在新药研发过程中，采用统一的编号系统，在新药研发过程中，采用统一的编号系统，表征杂质的变化！表征杂质的变化！表征杂质的变化！表征杂质的变化！原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤u u如果新药研发过程中杂质分析方法改变，如果新药研发过程中杂质分析方法改变，应分别给出其验证资料并对不同方法的应分别给出其验证资料并对不同方法的相关性进行评价。相关性进行评价。色谱图的相关性比较是必须的。色谱图的相关性比较是必须的。色谱图的相关性比较是必须的。色谱图的相关性比较是必须的。原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤利用色谱相关光谱法追踪色利用色谱相关光谱法追踪色谱峰不同色谱系统中的位置谱峰不同色谱系统中的位置原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤杂质数据的积累是制定药品质量杂质数据的积累是制定药品质量标准的重要依据标准的重要依据原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤国内新药研发中对有关物质控国内新药研发中对有关物质控制的误区制的误区1. 1.重指标，轻方法重指标，轻方法重指标，轻方法重指标，轻方法2. 2.方法的有效性与样品的现状方法的有效性与样品的现状方法的有效性与样品的现状方法的有效性与样品的现状3. 3.对杂质结构的鉴别重视不够对杂质结构的鉴别重视不够对杂质结构的鉴别重视不够对杂质结构的鉴别重视不够原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤如何确定微量杂质的结构？如何确定微量杂质的结构？ 根据杂质来源，产生条件，结合根据杂质来源，产生条件，结合根据杂质来源，产生条件，结合根据杂质来源，产生条件，结合母核的母核的母核的母核的质谱裂解规律质谱裂解规律质谱裂解规律质谱裂解规律推断杂质的可能结构推断杂质的可能结构推断杂质的可能结构推断杂质的可能结构原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤头孢菌素类抗生素质谱裂解的一头孢菌素类抗生素质谱裂解的一般规律般规律 青霉素类抗生素质谱裂解的一青霉素类抗生素质谱裂解的一般规律般规律 原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤鉴定未知同系物结构的策略1对于具有相同母核的化合物：对于具有相同母核的化合物：对于具有相同母核的化合物：对于具有相同母核的化合物： 紫外光谱图可以得到有关母核结构的信息；紫外光谱图可以得到有关母核结构的信息；紫外光谱图可以得到有关母核结构的信息；紫外光谱图可以得到有关母核结构的信息； 一级质谱得到分子量信息；一级质谱得到分子量信息；一级质谱得到分子量信息；一级质谱得到分子量信息； 二级质谱得到碎片峰信息二级质谱得到碎片峰信息二级质谱得到碎片峰信息二级质谱得到碎片峰信息, ,可以推测出有关各可以推测出有关各可以推测出有关各可以推测出有关各取代基的情况；取代基的情况；取代基的情况；取代基的情况； 利用色谱保留行为来验证推测结果是否正确利用色谱保留行为来验证推测结果是否正确利用色谱保留行为来验证推测结果是否正确利用色谱保留行为来验证推测结果是否正确。原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤ACAACA，535535：89-99, 200589-99, 2005分析化学，分析化学，分析化学，分析化学，分析化学，分析化学，343434（1 1 1）：）：）：）：）：）：95-9995-9995-99，200620062006药学学报，药学学报，药学学报，药学学报，药学学报，药学学报，414141（5 5 5）：）：）：）：）：）：475-480475-480475-480，200620062006原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤鉴定未知降解杂质结构的策略2对于反应机理已知的降解杂质对于反应机理已知的降解杂质对于反应机理已知的降解杂质对于反应机理已知的降解杂质： 根据反应原理设计加速实验；根据反应原理设计加速实验；根据反应原理设计加速实验；根据反应原理设计加速实验； 一级质谱得到分子量信息；一级质谱得到分子量信息；一级质谱得到分子量信息；一级质谱得到分子量信息； 二级质谱得到碎片峰信息二级质谱得到碎片峰信息二级质谱得到碎片峰信息二级质谱得到碎片峰信息, , 进一步推测降解进一步推测降解进一步推测降解进一步推测降解物的结构；物的结构；物的结构；物的结构； 利用利用利用利用UVUVUVUV特征和色谱保留行为来验证推测结果特征和色谱保留行为来验证推测结果特征和色谱保留行为来验证推测结果特征和色谱保留行为来验证推测结果是否正确是否正确是否正确是否正确。原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤确定未知杂质的策略3u u推测杂质的可能结构推测杂质的可能结构推测杂质的可能结构推测杂质的可能结构u u反合成推测的可能杂质反合成推测的可能杂质反合成推测的可能杂质反合成推测的可能杂质u uLC/MSLC/MS通过质谱裂解规律和色谱保留时间通过质谱裂解规律和色谱保留时间通过质谱裂解规律和色谱保留时间通过质谱裂解规律和色谱保留时间确定所推测杂质结构的准确性确定所推测杂质结构的准确性确定所推测杂质结构的准确性确定所推测杂质结构的准确性原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤微量组分的毒性评价微量组分的毒性评价原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤毒性快速评价平台毒性快速评价平台u u斑马鱼斑马鱼毒性快速评价平台，对杂质的胚胎毒性、神经毒性快速评价平台，对杂质的胚胎毒性、神经毒性快速评价平台，对杂质的胚胎毒性、神经毒性快速评价平台，对杂质的胚胎毒性、神经毒性，心脏毒性等进行评价。毒性，心脏毒性等进行评价。毒性，心脏毒性等进行评价。毒性，心脏毒性等进行评价。u u优点： 杂质用量少杂质用量少杂质用量少杂质用量少 无需知道杂质结构无需知道杂质结构无需知道杂质结构无需知道杂质结构 实验周期短实验周期短实验周期短实验周期短（3 34 4天一个周期）天一个周期）天一个周期）天一个周期）原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤Figure 4. Effects of MMTD and TDA on the zebrafish embryonic development (3-dpf). A-D: The embryos treated with MMTD at 10 g/ml (A), 100 g/ml (B), 300 g/ml (C) and at 500 g/ml (D). E-H: the embryos treated with TDA at 100 g/ml (E,F), 300 g/ml (G) and at 500 g/ml (H); I,J: normal embryos as controls at a lateral view (I) and a dorsal view (J). Hemorrhage of brain areas is indicated by white arrow, opaque yolk and YE by red arrow, deficient eyes are by slight-blue arrows, colorless and cord-like hearts and enlarged pericardial sacs by yellow arrows, ripple-like notochords by orange arrows.原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤雌二醇对斑马鱼胚胎的心脏毒性雌二醇对斑马鱼胚胎的心脏毒性原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤斑马鱼作为药物耳毒性检测模型斑马鱼侧线神经丘毛细胞斑马鱼侧线神经丘毛细胞: : (A) 5dpf 幼体头部侧面，示 眼窝上 (SO1 and SO2), 耳囊(O1) 和枕部的 (OC1)的神经丘；(B) O1神经丘毛细胞双染色FM 1-43(红) 和 Yo-Pro-1 (绿). (C) FM 1-43染色； (D). Yo-Pro-1 染色。 Scale bar = 50 um (A); 10 um (BD).Hearing Research 213 (2006) 2533Hearing Research 213 (2006) 2533原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤药物耳毒性检测药物耳毒性检测利用一种特殊染料对斑马鱼幼体头部耳蜗区神经丘毛细胞的染色，检测毛细胞的存活状态，来判断检测物的耳毒性。下图中红色圈示耳蜗区域；给药组中红色箭头示给药后毛细胞减少，黄色圈示给药后1神经丘消失。给药后给药后系统对照组系统对照组（正常幼体）（正常幼体）原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤杂质安全性的界定（评估）杂质安全性的界定（评估）原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤u u申报者应对所制定的质量标准中的杂质限度申报者应对所制定的质量标准中的杂质限度申报者应对所制定的质量标准中的杂质限度申报者应对所制定的质量标准中的杂质限度提供安全性方面的理由。提供安全性方面的理由。提供安全性方面的理由。提供安全性方面的理由。 对于一个通过充分的安全性研究和临床研究的新对于一个通过充分的安全性研究和临床研究的新对于一个通过充分的安全性研究和临床研究的新对于一个通过充分的安全性研究和临床研究的新原料药，其中任何一个杂质的水平被认为是已经原料药，其中任何一个杂质的水平被认为是已经原料药，其中任何一个杂质的水平被认为是已经原料药，其中任何一个杂质的水平被认为是已经经过评价的；经过评价的；经过评价的；经过评价的； 对于与动物和对于与动物和对于与动物和对于与动物和/ /或人体内的重要代谢物结构相同的或人体内的重要代谢物结构相同的或人体内的重要代谢物结构相同的或人体内的重要代谢物结构相同的杂质，被认为是经过评价的；杂质，被认为是经过评价的；杂质，被认为是经过评价的；杂质，被认为是经过评价的； 杂质的实际含量如果低于杂质的界定阈值，也被杂质的实际含量如果低于杂质的界定阈值，也被杂质的实际含量如果低于杂质的界定阈值，也被杂质的实际含量如果低于杂质的界定阈值，也被认为是合理的。认为是合理的。认为是合理的。认为是合理的。原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤对结构已知但含量大对结构已知但含量大对结构已知但含量大对结构已知但含量大于界定限的杂质；于界定限的杂质；于界定限的杂质；于界定限的杂质；结构未知且含量大于结构未知且含量大于结构未知且含量大于结构未知且含量大于鉴别限的杂质，鉴别限的杂质，鉴别限的杂质，鉴别限的杂质，如对杂质的安全性不确如对杂质的安全性不确如对杂质的安全性不确如对杂质的安全性不确定，均需要对杂质进定，均需要对杂质进定，均需要对杂质进定，均需要对杂质进行界定。行界定。行界定。行界定。原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤头孢西酮钠杂质限度的评估头孢西酮钠杂质限度的评估u u头孢西酮钠杂质限度头孢西酮钠杂质限度头孢西酮钠杂质限度头孢西酮钠杂质限度定为定为定为定为“MMTD“MMTD不得过不得过不得过不得过1.0%1.0%，其它最大杂质，其它最大杂质，其它最大杂质，其它最大杂质不得过不得过不得过不得过2.0%2.0%，杂质总，杂质总，杂质总，杂质总量不得过量不得过量不得过量不得过4.04.0” ”。 原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤如何对杂质限度进行评估？如何对杂质限度进行评估？u u头孢西酮的主要降解杂质？头孢西酮的主要降解杂质？头孢西酮的主要降解杂质？头孢西酮的主要降解杂质？u u头孢西酮的主要毒性功能基团？头孢西酮的主要毒性功能基团？头孢西酮的主要毒性功能基团？头孢西酮的主要毒性功能基团？u u头孢西酮的主要毒性杂质？头孢西酮的主要毒性杂质？头孢西酮的主要毒性杂质？头孢西酮的主要毒性杂质？原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤头孢西酮钠毒性功能基团分析头孢西酮钠毒性功能基团分析原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤MMTD结构是头孢西酮的主要毒结构是头孢西酮的主要毒性功能基团性功能基团u u头孢西酮钠的毒性反应与头孢唑林钠相当头孢西酮钠的毒性反应与头孢唑林钠相当头孢西酮钠的毒性反应与头孢唑林钠相当头孢西酮钠的毒性反应与头孢唑林钠相当, ,其在斑其在斑其在斑其在斑马鱼胚胎发育中表现出的畸形与母环马鱼胚胎发育中表现出的畸形与母环马鱼胚胎发育中表现出的畸形与母环马鱼胚胎发育中表现出的畸形与母环7-ACA7-ACA及三及三及三及三位侧链结构无关，与位侧链结构无关，与位侧链结构无关，与位侧链结构无关，与MMTDMMTD的结构关系较大。其的结构关系较大。其的结构关系较大。其的结构关系较大。其畸形表型提示，相关化合物可能主要干扰了胚胎畸形表型提示，相关化合物可能主要干扰了胚胎畸形表型提示，相关化合物可能主要干扰了胚胎畸形表型提示，相关化合物可能主要干扰了胚胎的外胚层（神经系统和表皮色素）组织器官和中的外胚层（神经系统和表皮色素）组织器官和中的外胚层（神经系统和表皮色素）组织器官和中的外胚层（神经系统和表皮色素）组织器官和中胚层的心脑血管系统的发育。胚层的心脑血管系统的发育。胚层的心脑血管系统的发育。胚层的心脑血管系统的发育。原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤头孢西酮钠降解溶液的头孢西酮钠降解溶液的HPLCHPLC色谱图色谱图原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤头孢西酮的氧化产物主要有两个氧化降解杂质，其头孢西酮的氧化产物主要有两个氧化降解杂质，其头孢西酮的氧化产物主要有两个氧化降解杂质，其头孢西酮的氧化产物主要有两个氧化降解杂质，其RRTRRT分别为分别为分别为分别为0.5720.572和和和和0.6720.672，含量以头孢西酮计分别为，含量以头孢西酮计分别为，含量以头孢西酮计分别为，含量以头孢西酮计分别为1.751.75、6.276.27；与降解前样品比较，头孢西酮含量约为降解前的；与降解前样品比较，头孢西酮含量约为降解前的；与降解前样品比较，头孢西酮含量约为降解前的；与降解前样品比较，头孢西酮含量约为降解前的8080。头孢西酮的酸降解产物主要有一个工艺头孢西酮的酸降解产物主要有一个工艺头孢西酮的酸降解产物主要有一个工艺头孢西酮的酸降解产物主要有一个工艺&降解杂质和一个降解杂质和一个降解杂质和一个降解杂质和一个降解杂质，其降解杂质，其降解杂质，其降解杂质，其RRTRRT分别为分别为分别为分别为0.2530.253和和和和0.3260.326，含量以头孢西酮，含量以头孢西酮，含量以头孢西酮，含量以头孢西酮计分别为计分别为计分别为计分别为0.290.29、0.420.42；与降解前样品比较，头孢西酮；与降解前样品比较，头孢西酮；与降解前样品比较，头孢西酮；与降解前样品比较，头孢西酮含量约为降解前的含量约为降解前的含量约为降解前的含量约为降解前的9090。头孢西酮的碱降解产物较多，主要有头孢西酮的碱降解产物较多，主要有头孢西酮的碱降解产物较多，主要有头孢西酮的碱降解产物较多，主要有1 1个工艺个工艺个工艺个工艺&降解杂质降解杂质降解杂质降解杂质和和和和4 4个降解杂质，它们的个降解杂质，它们的个降解杂质，它们的个降解杂质，它们的RRTRRT分别为分别为分别为分别为0.1860.186、0.244(?0.244(?头孢西头孢西头孢西头孢西酮酸酮酸酮酸酮酸) )、0.725(MMTD)0.725(MMTD)、0.9130.913、1.1721.172，含量以头孢西酮，含量以头孢西酮，含量以头孢西酮，含量以头孢西酮计分别为计分别为计分别为计分别为0.860.86、9.279.27、4.154.15、1.011.01、10.0710.07；与；与；与；与降解前样品比较，头孢西酮含量约为降解前的降解前样品比较，头孢西酮含量约为降解前的降解前样品比较，头孢西酮含量约为降解前的降解前样品比较，头孢西酮含量约为降解前的7070。 原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤MMTD是主要毒性杂质是主要毒性杂质原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤头孢西酮钠杂质限度的评估头孢西酮钠杂质限度的评估u u头孢西酮钠的毒性反应与头孢唑林钠相当头孢西酮钠的毒性反应与头孢唑林钠相当头孢西酮钠的毒性反应与头孢唑林钠相当头孢西酮钠的毒性反应与头孢唑林钠相当, ,其在斑其在斑其在斑其在斑马鱼胚胎发育中表现出的畸形与母环马鱼胚胎发育中表现出的畸形与母环马鱼胚胎发育中表现出的畸形与母环马鱼胚胎发育中表现出的畸形与母环7-ACA7-ACA及三及三及三及三位侧链结构无关，与位侧链结构无关，与位侧链结构无关，与位侧链结构无关，与MMTDMMTD的结构关系较大。其的结构关系较大。其的结构关系较大。其的结构关系较大。其畸形表型提示，相关化合物可能主要干扰了胚胎畸形表型提示，相关化合物可能主要干扰了胚胎畸形表型提示，相关化合物可能主要干扰了胚胎畸形表型提示，相关化合物可能主要干扰了胚胎的外胚层（神经系统和表皮色素）组织器官和中的外胚层（神经系统和表皮色素）组织器官和中的外胚层（神经系统和表皮色素）组织器官和中的外胚层（神经系统和表皮色素）组织器官和中胚层的心脑血管系统的发育。胚层的心脑血管系统的发育。胚层的心脑血管系统的发育。胚层的心脑血管系统的发育。 u uMMTDMMTD是头孢西酮钠的主要降解毒性杂质，其致是头孢西酮钠的主要降解毒性杂质，其致是头孢西酮钠的主要降解毒性杂质，其致是头孢西酮钠的主要降解毒性杂质，其致畸毒性较头孢西酮大畸毒性较头孢西酮大畸毒性较头孢西酮大畸毒性较头孢西酮大10102020倍，如将其含量控制倍，如将其含量控制倍，如将其含量控制倍，如将其含量控制在在在在1 1以下，毒性作用基本可以忽略。以下，毒性作用基本可以忽略。以下，毒性作用基本可以忽略。以下，毒性作用基本可以忽略。BPBP中，头孢中，头孢中，头孢中，头孢唑林钠的杂质唑林钠的杂质唑林钠的杂质唑林钠的杂质E E就是就是就是就是MMTDMMTD，其限量也是，其限量也是，其限量也是，其限量也是1 1。 原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤谢谢！www.antibiotic.cn原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤原料药中杂质的控制与案例分析中国药品生物制品检定所胡昌勤