专题13生物技术实践直击考纲1.酶在洗涤等方面的应用(A)。2.制备和应用固相化酶(A)。3.发酵食品加工的基本方法(A)。4.微生物的分离和培养(A)。5.实验：(1)探究酶在洗涤方面的应用(b)；(2)酵母细胞的固定化技术(b)；(3)腐乳的制作(a)；(4)果酒和果醋的制作(b)；(5)微生物的分离与培养(b)；(6)DNA的粗提取与鉴定(b)。真题重温知能回归典题特训考点39微生物的利用真题重温1.判断下列有关微生物的培养与应用的叙述判断下列有关微生物的培养与应用的叙述(1)常常用用液液体体培培养养基基分分离离获获得得细细菌菌单单菌菌落落(2012大大纲纲全全国国，5B)()(2)用用蒸蒸馏馏水水配配制制牛牛肉肉膏膏蛋蛋白白胨胨培培养养基基，经经高高温温、高高压压灭灭菌菌后后倒平板倒平板(2009安徽，安徽，6A)()(3)纯纯化化菌菌种种时时，为为了了得得到到单单菌菌落落，常常采采用用的的接接种种方方法法有有平平板板划线法和稀释涂布平板法划线法和稀释涂布平板法(2011新课标全国，新课标全国，39节选节选)()(4)测测定定培培养养液液中中微微生生物物数数量量，可可选选用用显显微微镜镜直直接接计计数数法法计计数数(2010山东，山东，34节选节选)()(5)玉玉米米秸秸秆秆中中的的纤纤维维素素经经充充分分水水解解后后的的产产物物可可被被酵酵母母菌菌利利用用发发酵酵生生产产酒酒精精。培培养养酵酵母母菌菌时时，该该水水解解产产物物为为酵酵母母菌菌的的生生长长提提供供碳碳源源。发发酵酵过过程程中中检检测测酵酵母母菌菌数数量量可可采采用用显显微微镜镜直接计数法或稀释涂布平板法计数直接计数法或稀释涂布平板法计数(2014山东，山东，35节选节选)()2.(2013新新课课标标全全国国，39)临临床床使使用用抗抗生生素素前前，有有时时需需要要做做细细菌菌耐耐药药实实验验。实实验验时时，首首先先要要从从病病人人身身上上获获取取少少量量样样本本，然然后后按按照照一一定定的的实实验验步步骤骤操操作作，以以确确定定某某致致病病菌菌对对不不同抗生素的敏感性。回答下列问题：同抗生素的敏感性。回答下列问题：(1)为为了了从从样样本本中中获获取取致致病病菌菌单单菌菌落落，可可用用_法法或或_法法将将样样本本接接种种于于固固体体培培养养基基表表面面，经经过选择培养、鉴别等步骤获得。过选择培养、鉴别等步骤获得。解析微微生生物物纯纯化化的的方方法法主主要要有有平平板板划划线线法法和和稀稀释释涂涂布布平平板法。板法。划线划线(平板划线平板划线)稀释涂布稀释涂布(或涂布或涂布)(2)取取该该单单菌菌落落适适当当稀稀释释，用用_法法接接种种于于固固体体培培养养基基表表面面，在在37培培养养箱箱中中培培养养24h，使使其其均均匀匀生生长长，布布满满平板。平板。解析根根据据微微生生物物的的特特点点对对其其进进行行一一系系列列浓浓度度梯梯度度稀稀释释，然然后后用用涂涂布布法法接接种种于于固固体体培培养养基基表表面面，再再在在适适宜宜条条件件下下培养。培养。涂布涂布(3)为为了了检检测测该该致致病病菌菌对对于于抗抗生生素素的的敏敏感感性性，将将分分别别含含有有A、B、C、D四四种种抗抗生生素素的的滤滤纸纸片片均均匀匀置置于于该该平平板板上上的的不不同同位位置置，培培养养一一段段时时间间后后，含含A的的滤滤纸纸片片周周围围出出现现透透明明圈圈，说说明明该该致致病病菌菌对对抗抗生生素素A_；含含B的的滤滤纸纸片片周周围围没没有有出出现现透透明明圈圈，说说明明该该致致病病菌菌对对抗抗生生素素B_；含含C的的滤滤纸纸片片周周围围的的透透明明圈圈比比含含A的的小小，说说明明_；含含D的的滤滤纸纸片片周周围围的的透透明明圈圈也也比比含含A的的小小，且且透透明明圈圈中中出出现现了了一一个个菌菌落落，在在排排除除杂杂菌菌污污染染的的情情况况下下，此此菌菌落落很很可可能能是是抗抗生素生素D的的_。解析对对某某种种抗抗生生素素越越敏敏感感的的致致病病菌菌，在在该该抗抗生生素素存存在在的的范范围围内内越越不不易易生生存存，形形成成的的透透明明圈圈就就越越大大。故故含含A的的滤滤纸纸片片周周围围出出现现透透明明圈圈，说说明明有有抗抗生生素素A的的地地方方该该致致病病菌菌受受到到抑抑制制；B的的周周围围没没有有透透明明圈圈，说说明明致致病病菌菌对对抗抗生生素素B不不敏敏感感，通通过过含含C的的透透明明圈圈要要比比A的的透透明明圈圈小小，说说明明该该致致病病菌菌对对C的的敏敏感感性性比比A的的弱弱；D出出现现了了透透明明圈圈，说说明明该该致致病病菌菌对对D敏敏感感，但但是是在在透透明明圈圈上上出出现现一一个个菌菌落落，又又排排除除杂杂菌菌污污染染，判断此菌落的微生物对抗生素判断此菌落的微生物对抗生素D产生了耐药性。产生了耐药性。答案敏感不敏感该致病菌对敏感不敏感该致病菌对C的敏感性比对的敏感性比对A的弱的弱耐药菌耐药菌(4)根根据据上上述述实实验验结结果果，为为达达到到抗抗菌菌目目的的，最最好好应应选选用用抗生素抗生素_。解析根根据据以以上上分分析析，为为达达到到抗抗菌菌的的目目的的，最最好好选选择择抗生素抗生素A。A3.(2013四四川川，10节节选选)普普通通酵酵母母菌菌直直接接利利用用淀淀粉粉的的能能力力很很弱弱，有有人人将将地地衣衣芽芽孢孢杆杆菌菌的的-淀淀粉粉酶酶基基因因转转入入酵酵母母菌菌中中，经经筛筛选选得得到到了了可可高高效效利利用用淀淀粉粉的的工工程程酵酵母母菌菌菌菌种种(过过程程如如图甲所示图甲所示)。(1)图甲中，过程图甲中，过程需要的酶有需要的酶有_。为为达达到到筛筛选选目目的的，平平板板内内的的固固体体培培养养基基应应以以_作为唯一碳源。作为唯一碳源。、过程需重复几次，目的是过程需重复几次，目的是_。解析图图甲甲中中过过程程为为构构建建基基因因表表达达载载体体，需需要要的的酶酶有有限限制制性性核核酸酸内内切切酶酶及及DNA连连接接酶酶；欲欲筛筛选选可可直直接接利利用用淀淀粉粉的的菌菌种种，宜宜制制备备以以淀淀粉粉为为唯唯一一碳碳源源的的选选择择培培养养基基；图图示示、过过程程需需重重复复几几次次，其其作作用用在在于于“纯纯化化”，从从而而进进一一步步筛筛选出分解淀粉能力更强的酵母菌。选出分解淀粉能力更强的酵母菌。限制性核酸内切酶、限制性核酸内切酶、DNA连接酶连接酶淀粉淀粉进一步筛进一步筛选纯化获得分解淀粉能力强的酵母菌选纯化获得分解淀粉能力强的酵母菌(2)某某同同学学尝尝试试过过程程的的操操作作，其其中中一一个个平平板板经经培培养养后后的的菌菌落落分分布布如如图图乙乙所所示示。该该同同学学的的接接种种方方法法是是_；推推测测该该同同学学接接种种时时可能的操作失误是可能的操作失误是_。解析图图乙乙所所示示培培养养基基平平板板中中的的菌菌落落呈呈分分散散分分布布，应应为为采采用用稀稀释释涂涂布布平平板板法法接接种种的的结结果果，然然而而，该该平平板板上上菌菌落落并并非非“均均匀匀分分布布”而而是是相相对对集中于左侧，这可能是由于制作平板时集中于左侧，这可能是由于制作平板时“涂布不均匀涂布不均匀”所致。所致。稀释涂布平板法稀释涂布平板法涂布不均匀涂布不均匀(3)以以淀淀粉粉为为原原料料，用用工工程程酵酵母母菌菌和和普普通通酵酵母母菌菌在在相相同同的的适适宜宜条条件件下下密密闭闭 发发 酵酵 ， 接接 种种 _菌菌 的的 发发 酵酵 罐罐 需需 要要 先先 排排 气气 ， 其其 原原 因因 是是_。解析若若以以“淀淀粉粉”为为原原料料，则则相相对对于于普普通通菌菌种种，工工程程酵酵母母菌菌因因转转入入了了-淀淀粉粉酶酶基基因因，其其利利用用淀淀粉粉的的能能力力将将更更强强，故故发发酵酵产产生生CO2的的能能力力更强，因此需要先排气。更强，因此需要先排气。工程酵母工程酵母工程酵母菌分解淀粉产生葡萄糖的能力强，导工程酵母菌分解淀粉产生葡萄糖的能力强，导致酒精发酵产生致酒精发酵产生CO2的速率更快的速率更快1.微生物的培养微生物的培养知能回归(1)无菌技术：主要包括消毒和灭菌。无菌技术：主要包括消毒和灭菌。消毒方法：常用煮沸消毒法、巴氏消毒法。消毒方法：常用煮沸消毒法、巴氏消毒法。常常用用灭灭菌菌方方法法：灼灼烧烧灭灭菌菌接接种种环环、接接种种针针等等金金属属器器具具；干干热热灭灭菌菌主主要要针针对对玻玻璃璃器器皿皿等等；高高压压蒸蒸汽汽灭灭菌菌主主要要针对培养基等。针对培养基等。(2)如如图图为为倒倒平平板板操操作作过过程程，操操作作时时要要待待培培养养基基冷冷却却至至50左右时，在酒精灯火焰附近进行。左右时，在酒精灯火焰附近进行。制制备备固固体体培培养养基基最最后后要要将将平平板板倒倒置置，其其主主要要目目的的是是防防止止培培养皿盖上的水珠滴入培养基造成污染。养皿盖上的水珠滴入培养基造成污染。(3)平板划线操作平板划线操作(4)稀稀释释涂涂布布平平板板法法：先先将将菌菌液液进进行行一一系系列列梯梯度度稀稀释释后后涂涂布布平平板板，在在稀稀释释度度足足够够高高的的菌菌液液里里，聚聚集集在在一一起起的的微微生生物物将将被被分分散散成成单单个个细细胞胞，从从而而在在培培养养基基表表面面形形成成单单个个菌菌落。如图所示：落。如图所示：2.某种微生物的分离与计数某种微生物的分离与计数(1)分离分离选择培养基选择培养基培养基中加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌。培养基中加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌。培养基中加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌。培养基中加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌。培养基中缺乏氮源时，可以分离得到固氮微生物。培养基中缺乏氮源时，可以分离得到固氮微生物。当培养基的某种营养成分为特定化学成分时，也具有分离效果。当培养基的某种营养成分为特定化学成分时，也具有分离效果。改改变变微微生生物物的的培培养养条条件件，也也可可以以达达到到分分离离微微生生物物的的目目的的，如如将将培培养养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物。基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物。(2)计数计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数a.筛选菌株：利用以尿素为唯一氮源的选择培养基筛选菌株。筛选菌株：利用以尿素为唯一氮源的选择培养基筛选菌株。b.计计数数方方法法：活活菌菌计计数数法法和和显显微微镜镜直直接接计计数数法法。前前者者为为了了增增强强实实验验的的说说服服力力和和准准确确性性，则则需需设设置置重重复复组组，一一般般选选择择菌菌落数在落数在30300的平板进行计数。的平板进行计数。c.过程：土壤取样过程：土壤取样样品的稀释样品的稀释微生物的培养与观察。微生物的培养与观察。分解纤维素的微生物的分离分解纤维素的微生物的分离a.实验原理实验原理即：可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。即：可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。b.流流程程：土土壤壤取取样样选选择择培培养养梯梯度度稀稀释释涂涂布布平平板板挑挑选菌落。选菌落。(3)鉴定方法鉴定方法鉴定分解尿鉴定分解尿素的细菌素的细菌含含酚酚红红指指示示剂剂的的尿尿素素为为唯唯一一氮氮源源的的培培养养基基细细菌菌指指示示剂剂变变红红，则则该该菌菌能能分解尿素分解尿素鉴定纤维素鉴定纤维素分解菌分解菌1.下下列列有有关关实实验验室室中中微微生生物物培培养养和和分分离离的的叙叙述述，错错误误的的是是()A.获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵B.高温灭菌的目的是杀死所有微生物高温灭菌的目的是杀死所有微生物C.划线分离可在培养基上获得均匀分布的单菌落划线分离可在培养基上获得均匀分布的单菌落D.稀释涂布平板法可用于计数活菌数目稀释涂布平板法可用于计数活菌数目典题特训解析微微生生物物培培养养过过程程中中要要进进行行无无菌菌操操作作，防防止止外外来来杂杂菌菌的的入侵，入侵，A正确；正确；高温灭菌可杀死所有微生物，高温灭菌可杀死所有微生物，B正确；正确；划线分离可在培养基上获得逐渐变稀分布的单菌落，划线分离可在培养基上获得逐渐变稀分布的单菌落，C错误；错误；稀释涂布平板法中根据菌落的数目可计数活菌数目，稀释涂布平板法中根据菌落的数目可计数活菌数目，D正确。正确。答案C2.某某学学者者欲欲研研究究被被石石油油污污染染过过的的土土壤壤中中细细菌菌数数量量，并并从从中筛选出能分解石油的细菌。下列操作错误的是中筛选出能分解石油的细菌。下列操作错误的是()A.利用平板划线法对细菌进行计数利用平板划线法对细菌进行计数B.以石油为唯一碳源的培养基筛选以石油为唯一碳源的培养基筛选C.采用稀释涂布平板法分离菌种采用稀释涂布平板法分离菌种D.称取和稀释土壤时应在火焰旁称取和稀释土壤时应在火焰旁解析稀稀释释涂涂布布平平板板法法有有利利于于将将细细菌菌分分离离形形成成单单个个菌菌落落，利利于于计计数数，因因此此，如如果果是是通通过过菌菌落落数数来来估估算算细细菌菌的的数数量量，应应该该采用稀释涂布平板法对细菌进行计数；采用稀释涂布平板法对细菌进行计数；要要筛筛选选出出能能分分解解石石油油的的细细菌菌，应应该该采采用用选选择择培培养养基基，即即以以石石油油作作为为唯唯一一碳碳源源进进行行培培养养，在在这这种种培培养养基基上上只只有有能能分分解解石石油油的细菌才能生长繁殖；的细菌才能生长繁殖；操作时要无菌操作，称取和稀释土壤应在火焰旁。操作时要无菌操作，称取和稀释土壤应在火焰旁。答案A3.下列关于微生物的营养，说法正确的是下列关于微生物的营养，说法正确的是(多多选选)()A.对一些微生物来说，同一种物质既可作碳源又可作氮源对一些微生物来说，同一种物质既可作碳源又可作氮源B.凡是碳源都能提供能量凡是碳源都能提供能量C.除水以外的无机物仅提供无机盐除水以外的无机物仅提供无机盐D.无机氮源也可能提供能量无机氮源也可能提供能量解析此此题题考考查查我我们们对对微微生生物物的的营营养养和和能能源源的的理理解解。对对一一些些微微生生物物来来说说，含含C、H、O、N的的化化合合物物既既是是碳碳源源，又又是是氮氮源源。CO2是是光光能能自自养养细细菌菌的的碳碳源源，但但不不能能提提供供能能量量。CO2和和N2是是无无机机物物，也也是是微微生生物物的的碳碳源源和和氮氮源源。硝硝化化细细菌菌所所利利用用的的氮氮源源是是无无机机氮源氨，同时氨也为硝化细菌提供用以化能合成作用的能源。氮源氨，同时氨也为硝化细菌提供用以化能合成作用的能源。AD4.下下列列对对无无菌菌操操作作转转接接培培养养物物的的操操作作顺顺序序的的叙叙述述，正正确确的的是是()接接种种环环在在火火焰焰上上灼灼烧烧灭灭菌菌在在火火焰焰旁旁冷冷却却接接种种环环，并并打打开开棉棉塞塞打打开开棉棉塞塞的的试试管管口口通通过过火火焰焰将将已已冷冷却却的的接接种种环环伸伸入入菌菌液液，沾沾取取一一环环菌菌液液转转移移到到一一装装有有无无菌菌培培养养基基的试管中的试管中将试管口塞上棉塞将试管口塞上棉塞接种环再次灼烧灭菌接种环再次灼烧灭菌A.B.C.D.C5.(2014新新课课标标全全国国，39)为为了了调调查查某某河河流流的的水水质质状状况况，某某研研究究小小组组测测定定了了该该河河流流水水样样中中的的细细菌菌含含量量，并并进进行行了了细细菌菌分分离离等工作。回答下列问题：等工作。回答下列问题：(1)该该小小组组采采用用稀稀释释涂涂布布平平板板法法检检测测水水样样中中的的细细菌菌含含量量。在在涂涂布布接接种种前前，随随机机取取若若干干灭灭菌菌后后的的空空白白平平板板先先行行培培养养了了一一段段时时间间，这这样样做做的的目目的的是是_；然然后后，将将1mL水水样样稀稀释释100倍倍，在在3个个平平板板上上用用涂涂布布法法分分别别接接入入0.1mL稀稀释释液液；经经适适当当培培养养后后，3个个平平板板上上的的菌菌落落数数分分别别为为39、38和和37。据此可得出每升水样中的活菌数为据此可得出每升水样中的活菌数为_。解析为为了了检检测测培培养养基基平平板板灭灭菌菌是是否否合合格格，可可在在涂涂布布接接种种前前，随随机机取取灭灭菌菌后后的的空空白白平平板板先先行行培培养养一一段段时时间间。0.1mL稀稀释释液液中中平平均均有有(393837)/338个个活活菌菌，则则每每毫毫升升稀稀释释液液中中活活菌菌的的数数目目为为38/0.1380，则则稀稀释释前前每每毫毫升升水水样样中中活活菌菌数数目目为为3801003.8104，则则每每升升水样中活菌数目为水样中活菌数目为3.810410003.8107。答案检测培养基平板灭菌是否合格检测培养基平板灭菌是否合格3.8107(2)该该小小组组采采用用平平板板划划线线法法分分离离水水样样中中的的细细菌菌。操操作作时时，接接种种环环通通过过_灭灭菌菌，在在第第二二次次及及以以后后的的划划线线时时，总总是是从从上上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是一次划线的末端开始划线。这样做的目的是_。解析接接种种环环、接接种种针针等等金金属属用用具具可可直直接接在在酒酒精精灯灯火火焰焰的的充充分分燃燃烧烧层层灼灼烧烧，以以达达到到迅迅速速彻彻底底灭灭菌菌的的目目的的。在在第第二二次次及及以以后后的的划划线线时时，总总是是从从上上一一次次划划线线的的末末端端开开始始划划线线，其其目的是将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落。目的是将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落。灼烧灼烧将聚集的菌体将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落逐步稀释以便获得单个菌落(3)示示意意图图A和和图图B中中，_表表示示的的是是用用稀稀释释涂涂布布平平板板法法接种培养后得到的结果。接种培养后得到的结果。解析比比较较图图A和和图图B可可以以看看出出：A培培养养基基中中细细菌菌的的分分布布呈呈线线性性，是是用用平平板板划划线线法法接接种种培培养养后后得得到到的的结结果果；B培培养养基基中中细细菌均匀分布，是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。菌均匀分布，是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。B(4)该该小小组组将将得得到到的的菌菌株株接接种种到到液液体体培培养养基基中中并并混混匀匀，一一部部分分进进行行静静置置培培养养，另另一一部部分分进进行行振振荡荡培培养养。结结果果发发现现：振振荡荡培培养养的的细细菌菌比比静静置置培培养养的的细细菌菌生生长长速速度度快快。分分析析其其原原因因是是：振振荡荡培培养养能能提提高高培培养养液液中中_的的含含量量，同同时时可可使菌体与培养液充分接触，提高使菌体与培养液充分接触，提高_的利用率。的利用率。解析振振荡荡培培养养可可以以提提高高培培养养液液中中溶溶解解氧氧的的含含量量，还还可可以以使使菌菌体体与与培培养养液液充充分分接接触触，提提高高了了营营养养物物质质的的利利用用率率，因因此振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。此振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。溶解氧溶解氧营养物质营养物质6.(2014四四川川，10)有有机机农农药药苯苯磺磺隆隆是是一一种种除除草草剂剂，长长期期使使用用会会污污染染环环境境。研研究究发发现现，苯苯磺磺隆隆能能被被土土壤壤中中某某些些微微生生物物降降解解。分分离离降降解解苯苯磺磺隆隆的的菌菌株株和和探探索索其其降降解解机机制制的的实实验验过过程如图甲、图乙所示。程如图甲、图乙所示。(1)微微生生物物生生长长繁繁殖殖所所需需的的主主要要营营养养物物质质有有碳碳源源、水水、_四四类类，该该实实验验所所用用的的选选择择培培养养基基只只能能以以苯苯磺磺隆作为唯一碳源，其原因是隆作为唯一碳源，其原因是_。解析微微生生物物生生长长繁繁殖殖需需要要的的主主要要营营养养物物质质包包括括碳碳源源、氮氮源源、水水和和无无机机盐盐四四类类。根根据据题题意意可可知知，土土壤壤中中某某些些微微生生物物有有降降解解苯苯磺磺隆隆的的能能力力，该该实实验验的的目目的的是是探探索索其其降降解解机机制制，因因此此，需需要要分分离离出出有有降降解解苯苯磺磺隆隆能能力力的的土土壤壤中中的的某某些些微微生生物物，故故选选择择培培养养时时为为了了排排除除其其他他碳碳源源的的干干扰扰，培培养养基基中中唯唯一碳源只能是苯磺隆。一碳源只能是苯磺隆。氮源和无机盐氮源和无机盐只有能利用苯磺隆的微生物能只有能利用苯磺隆的微生物能正常生长繁殖正常生长繁殖(2)与与微微生生物物培培养养基基相相比比，植植物物组组织织培培养养的的培培养养基基常常需需添添加加生生长长素素和和_，这这些些植植物物激激素素一一般般需需要要事事先单独配制成先单独配制成_保存备用。保存备用。解析与与微微生生物物培培养养基基相相比比，植植物物组组织织培培养养的的培培养养基基需需要要添添加加生生长长素素和和细细胞胞分分裂裂素素，用用于于调调节节植植物物细细胞胞再再分分化化；这些植物激素一般需要事先单独配制成母液保存备用。这些植物激素一般需要事先单独配制成母液保存备用。细胞分裂素细胞分裂素母液母液(3)纯纯化化菌菌株株时时，通通常常使使用用的的划划线线工工具具是是_。划划线线的的某某个个平平板板培培养养后后，第第一一划划线线区区域域的的划划线线上上都都不不间间断断地地长长满满了了菌菌，第第二二划划线线区区域域所所划划的的第第一一条条线线上上无无菌菌落落，其其他他划划线线上上有有菌菌落落。造造成成划划线线无无菌菌落落可可能能的的操操作失误有作失误有_。解析纯纯化化菌菌株株时时，通通常常使使用用的的划划线线工工具具是是无无菌菌接接种种环环。划划线线的的平平板板培培养养后后，发发现现第第一一划划线线区区域域的的划划线线上上不不间间断断地地长长满满了了菌菌，第第二二划划线线区区域域所所划划的的第第一一条条线线上上无无菌菌落落，而而其其他他划划线线上上有有菌菌落落。造造成成此此现现象象的的原原因因可可能能有有两两个个：一一是是接接种种环环灼灼烧烧后后未未冷冷却却，菌菌种种接接触触到到高高温温的的接接种种环环而而死死亡亡；二二是划第二划线区域第一条线时未从第一区域末端开始。是划第二划线区域第一条线时未从第一区域末端开始。答案接接种种环环接接种种环环灼灼烧烧后后未未冷冷却却；划划线线未未从从第第一一区域末端开始区域末端开始(4)为为探探究究苯苯磺磺隆隆的的降降解解机机制制，将将该该菌菌种种的的培培养养液液过过滤滤离离心心，取上清液做图乙所示实验。该实验的假设是取上清液做图乙所示实验。该实验的假设是_，该该实实验验设设计计是是否否合合理理？为为什什么么？_。解析根根据据图图乙乙所所示示实实验验中中的的上上清清液液加加入入蛋蛋白白酶酶溶溶液液推推测测，实实验验目目的的是是探探究究目目的的菌菌株株是是否否能能分分泌泌降降解解苯苯磺磺隆隆的的蛋蛋白白质质，实实验验设设计计不不合合理理之之处处是是缺缺少少不不加加蛋蛋白白酶酶溶溶液液、其其他他条条件件同同图乙的空白对照。图乙的空白对照。泌降解苯磺隆的蛋白质泌降解苯磺隆的蛋白质不合理，缺少空白对照不合理，缺少空白对照目的菌株能分目的菌株能分7.研研究究被被石石油油污污染染过过的的土土壤壤中中细细菌菌数数量量，并并从从中中筛筛选选出出能能分分解解石石油油的的细细菌菌。为为了了分分离离和和纯纯化化高高效效分分解解石石油油的的细细菌菌，科研人员利用被石油污染过的土壤进行如图科研人员利用被石油污染过的土壤进行如图A所示的实验。所示的实验。(1)配配制制好好的的培培养养基基通通常常可可以以使使用用_法法灭灭菌菌。与与步步骤骤中中培培养养基基成成分分相相比比，步步骤骤中中培培养养基成分的最大区别是基成分的最大区别是_。解析培培养养基基灭灭菌菌用用高高压压蒸蒸汽汽灭灭菌菌，为为筛筛选选出出能能分分解石油的细菌，所以石油是唯一碳源。解石油的细菌，所以石油是唯一碳源。高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌石油是唯一碳源石油是唯一碳源(2)接种细菌常用的方法有接种细菌常用的方法有_。若若经经过过过过程程后后获获得得的的结结果果为为图图B所所示示，则则所所操操作作方方法法如如图图_所示。所示。解析接接种种细细菌菌常常用用的的方方法法有有平平板板划划线线法法和和稀稀释释涂涂布布平平板板法。图法。图B为平板划线法，如图甲所示。为平板划线法，如图甲所示。平板划线法和稀释涂布平板法平板划线法和稀释涂布平板法甲甲(3)步骤步骤后取样测定石油含量的目的是后取样测定石油含量的目的是_。对步骤对步骤某瓶中细菌计数的方法有两种，一种方法是某瓶中细菌计数的方法有两种，一种方法是_，其菌落数可代表活菌数；另一种方法是，其菌落数可代表活菌数；另一种方法是_，该该方方法法需需要要借借助助一块特殊的载玻片，其名称为一块特殊的载玻片，其名称为_。解析步步骤骤进进一一步步操操作作是是为为筛筛选选出出分分解解石石油油能能力力最最好好的的细细菌菌，微微生生物物计计数数可可用用稀稀释释涂涂布布平平板板法法和和显显微微镜镜直直接接计计数数法法(血细胞计数板计数法血细胞计数板计数法)。筛选出分解石油筛选出分解石油能力最好的细菌能力最好的细菌稀释稀释涂布平板法涂布平板法显显微镜直接计数微镜直接计数(血细胞计数板计数法血细胞计数板计数法)血细胞计数板血细胞计数板(血球计数板血球计数板)真题重温知能回归典题特训微微生生物物在在传传统统发发酵酵技技术术中中的的应应用用考点401.判断下列有关传统发酵技术的叙述判断下列有关传统发酵技术的叙述(1)在果酒发酵后期拧开瓶盖的间隔时间可延长在果酒发酵后期拧开瓶盖的间隔时间可延长(2012江苏，江苏，21A)()(2)在在家家庭庭中中用用鲜鲜葡葡萄萄制制作作果果酒酒时时，让让发发酵酵装装置置接接受受光光照照并并放放在在45处处(2010北京，北京，1AD)()(3)在在果果酒酒和和果果醋醋制制作作过过程程中中，果果酒酒的的制制作作过过程程是是在在缺缺氧氧条条件件下下，而果醋整个制作过程一直处于有氧条件下而果醋整个制作过程一直处于有氧条件下(2010江苏，江苏，7AC改编改编)()真题重温(4)与与果果醋醋、果果酒酒制制作作相相比比，腐腐乳乳的的制制作作所所需需要要的的适适宜宜温温度度最最高，所用菌种为乳酸菌高，所用菌种为乳酸菌(2011江苏，江苏，3AC改编改编)()(5)在在腐腐乳乳制制作作过过程程中中必必须须有有能能产产生生蛋蛋白白酶酶的的微微生生物物参参与与，所所用用豆豆腐腐的的含含水水量量为为70%左左右右，水水分分过过多多腐腐乳乳不不易易成成形形(2008江苏，江苏，17AB改编改编)()2.(2013江江苏苏，14)某某研研究究性性学学习习小小组组以以樱樱桃桃番番茄茄为为材材料料进进行果酒、果醋发酵实验。下列相关叙述正确的是行果酒、果醋发酵实验。下列相关叙述正确的是()A.酵母菌是嗜温菌，所以果酒发酵所需的最适温度较高酵母菌是嗜温菌，所以果酒发酵所需的最适温度较高B.先供氧进行果醋发酵，然后隔绝空气进行果酒发酵先供氧进行果醋发酵，然后隔绝空气进行果酒发酵C.与人工接种的发酵相比，自然发酵获得的产品品质更好与人工接种的发酵相比，自然发酵获得的产品品质更好D.适当加大接种量可以提高发酵速率、抑制杂菌生长繁殖适当加大接种量可以提高发酵速率、抑制杂菌生长繁殖解析醋醋酸酸菌菌是是嗜嗜热热菌菌，果果醋醋发发酵酵所所需需的的最最适适温温度度较较高高，A错误；错误；进进行行果果酒酒、果果醋醋发发酵酵实实验验，要要先先隔隔绝绝空空气气进进行行果果酒酒发发酵酵，再供氧进行果醋发酵，再供氧进行果醋发酵，B错误；错误；人人工工接接种种的的菌菌种种品品质质更更好好，且且不不容容易易存存在在杂杂菌菌污污染染，故故比比自然发酵获得的产品品质更好，自然发酵获得的产品品质更好，C错误；错误；适适当当加加大大接接种种量量，让让菌菌体体快快速速形形成成优优势势菌菌群群，可可以以抑抑制制杂杂菌生长，提高发酵速率，菌生长，提高发酵速率，D正确。正确。答案D微生物在传统发酵技术中的应用微生物在传统发酵技术中的应用知能回归项目内容项目内容果酒和果醋的制作果酒和果醋的制作腐乳制作腐乳制作作用菌类作用菌类果酒：酵母菌果酒：酵母菌果醋：醋酸菌果醋：醋酸菌毛霉毛霉原理原理(1)酵母菌在无氧条件下将葡萄酵母菌在无氧条件下将葡萄糖氧化成乙醇；糖氧化成乙醇；(2)醋酸菌在有醋酸菌在有氧条件下将乙醇氧化为醋酸氧条件下将乙醇氧化为醋酸毛霉将蛋白质、脂肪分毛霉将蛋白质、脂肪分解成小分子有机物解成小分子有机物原料选择原料选择新鲜葡萄新鲜葡萄(或苹果或苹果)豆腐豆腐实验实验流程流程让豆腐上长出毛霉让豆腐上长出毛霉加盐腌加盐腌制制加卤汤装瓶加卤汤装瓶密封腌制密封腌制操作注操作注意事项意事项材料选择与处理；材料选择与处理；防防止止发酵液污染，控制好发酵条发酵液污染，控制好发酵条件件材料用量；材料用量；防止杂菌污防止杂菌污染；染；控制温度及酒精含量控制温度及酒精含量共同点共同点都是天然的发酵，利用了微生物新陈代谢过程中代谢产物都是天然的发酵，利用了微生物新陈代谢过程中代谢产物的作用或直接获取代谢产物的作用或直接获取代谢产物1.下下列列有有关关传传统统果果酒酒、果果醋醋发发酵酵和和腐腐乳乳制制作作的的比比较较不不正正确确的的是是(多多选选)()A.果酒、腐乳发酵的主要微生物属于真核生物，果醋发酵菌种属果酒、腐乳发酵的主要微生物属于真核生物，果醋发酵菌种属于原核生物于原核生物B.果酒制成后只需将装置转移至温度较高的环境中即可制作果醋果酒制成后只需将装置转移至温度较高的环境中即可制作果醋C.果酒和果醋发酵在无氧环境下进行，腐乳发酵在有氧条件下果酒和果醋发酵在无氧环境下进行，腐乳发酵在有氧条件下进行进行D.果酒、果醋和腐乳制作过程利用的都是微生物胞内酶果酒、果醋和腐乳制作过程利用的都是微生物胞内酶典题特训解析果果酒酒发发酵酵的的微微生生物物是是酵酵母母菌菌，为为真真核核生生物物，腐腐乳乳发发酵酵的的微微生生物物是是毛毛霉霉，为为真真核核生生物物，果果醋醋发发酵酵的的微微生生物物为为醋醋酸酸菌菌，为为原核生物，故原核生物，故A正确；正确；果果酒酒制制成成后后转转移移至至较较高高温温度度的的环环境境中中，还还需需要要通通入入氧氧气气，才才可可以制作果醋，故以制作果醋，故B错误；错误；果果酒酒发发酵酵在在无无氧氧条条件件下下进进行行，而而果果醋醋和和腐腐乳乳发发酵酵都都需需要要有有氧氧条条件，故件，故C错误；错误；制制作作果果酒酒、果果醋醋利利用用的的是是微微生生物物的的胞胞内内酶酶，腐腐乳乳利利用用的的是是微微生生物的胞外酶物的胞外酶(主要是毛霉分泌的蛋白酶和脂肪酶主要是毛霉分泌的蛋白酶和脂肪酶)，故，故D错误。错误。答案BCD2.利用如图装置制作果酒和果醋，下列叙述正确的是利用如图装置制作果酒和果醋，下列叙述正确的是(多多选选)()A.制作果酒时应关闭阀制作果酒时应关闭阀b，适时打开阀，适时打开阀a几秒钟几秒钟B.制作果酒时如果关闭阀制作果酒时如果关闭阀a，打开阀，打开阀b，会导致爆瓶，会导致爆瓶C.制作果醋时需打开阀制作果醋时需打开阀a通气，打开阀通气，打开阀b排气排气D.制作果醋时把发酵装置放到制作果醋时把发酵装置放到3035环境中比较适宜环境中比较适宜解析图图示示装装置置中中，阀阀a控控制制排排气气，阀阀b控控制制进进气气，所所以以制制作作果酒时应关闭阀果酒时应关闭阀b，适时打开阀，适时打开阀a几秒钟以排出产生的气体；几秒钟以排出产生的气体；如如果果关关闭闭阀阀a，打打开开b，产产生生的的气气体体不不能能排排出出，会会使使发发酵酵液液从从右侧导管排出，不会导致爆瓶；右侧导管排出，不会导致爆瓶；制作果醋时，打开阀制作果醋时，打开阀a是为了排气，打开阀是为了排气，打开阀b是为了通气；是为了通气；制作果醋时发酵装置应放到制作果醋时发酵装置应放到3035环境中比较适宜。环境中比较适宜。答案AD3.下列关于腐乳制作的叙述中，错误的是下列关于腐乳制作的叙述中，错误的是()A.毛霉可利用蛋白酶将蛋白质分解成小分子肽和氨基酸毛霉可利用蛋白酶将蛋白质分解成小分子肽和氨基酸B.豆腐胚表面有毛霉、青霉、曲霉等微生物，它们之间豆腐胚表面有毛霉、青霉、曲霉等微生物，它们之间存在竞争关系存在竞争关系C.腐乳的前期制作温度应控制在腐乳的前期制作温度应控制在1518环境条件下环境条件下D.加入较多的香辛料既能调味又能缩短腐乳成熟的时间加入较多的香辛料既能调味又能缩短腐乳成熟的时间解析制制作作腐腐乳乳主主要要是是利利用用毛毛霉霉等等微微生生物物产产生生的的蛋蛋白白酶酶和和脂脂肪肪酶酶将将豆豆腐腐内内的的蛋蛋白白质质分分解解成成小小分分子子肽肽和和氨氨基基酸酸，脂脂肪肪分分解解成甘油和脂肪酸，从而改变豆腐的成分和口味；成甘油和脂肪酸，从而改变豆腐的成分和口味；豆豆腐腐胚胚表表面面长长有有毛毛霉霉、青青霉霉、曲曲霉霉等等微微生生物物，它它们们都都利利用用豆豆腐内的营养来维持生命活动，因而存在竞争关系；腐内的营养来维持生命活动，因而存在竞争关系；毛霉生长的适宜温度是毛霉生长的适宜温度是1518；加加入入较较多多的的香香辛辛料料能能调调味味，杀杀菌菌防防腐腐，酒酒精精含含量量越越高高，对对蛋蛋白酶的抑制作用也越大，使腐乳成熟期延长。白酶的抑制作用也越大，使腐乳成熟期延长。答案D4.用用酵酵母母菌菌使使葡葡萄萄汁汁产产生生葡葡萄萄酒酒，当当酒酒精精含含量量达达到到12%16%时，发酵就停止了。有关叙述不正确的是时，发酵就停止了。有关叙述不正确的是()A.酒精对酵母菌有毒害作用，后期细胞生命活动减弱酒精对酵母菌有毒害作用，后期细胞生命活动减弱B.产生酒精的同时也有产生酒精的同时也有CO2生成，所以发酵过程中需拧松生成，所以发酵过程中需拧松瓶盖放气瓶盖放气C.产物积累使产物积累使pH值下降，同时营养物质减少，种群数量值下降，同时营养物质减少，种群数量下降下降D.氧气过少导致其无法呼吸，细胞中即无法合成氧气过少导致其无法呼吸，细胞中即无法合成ATP解析酒酒精精具具有有消消毒毒的的作作用用，对对酵酵母母菌菌同同样样有有毒毒害害作作用用，A正确；正确；产产生生酒酒精精的的同同时时也也有有CO2生生成成，所所以以发发酵酵过过程程中中需需拧拧松松瓶瓶盖放气，盖放气，B正确；正确；酒酒精精发发酵酵过过程程中中，产产物物积积累累使使pH值值发发生生改改变变，营营养养物物质质减少，种群数量下降，减少，种群数量下降，C正确；正确；酒精发酵是在无氧条件下，不需要氧气，酒精发酵是在无氧条件下，不需要氧气，D错误。错误。答案D5.某某生生物物兴兴趣趣小小组组的的同同学学利利用用新新鲜鲜苹苹果果榨榨取取果果汁汁并并制制作作果果酒，简要流程如下：酒，简要流程如下：发酵发酵果酒果酒(1)实实验验过过程程中中，有有同同学学发发现现榨榨取取的的果果汁汁非非常常浑浑浊浊，解解决决的方法是的方法是_。(2)分分离离酵酵母母菌菌应应使使用用_培培养养基基，固固定定化化酵酵母母细细胞胞常常采采用用_法。法。新鲜苹果新鲜苹果清洗干净清洗干净去掉果核去掉果核榨汁机榨汁榨汁机榨汁果汁果汁从成品果酒中分离酵母菌从成品果酒中分离酵母菌扩大培养扩大培养固定化酵母细胞固定化酵母细胞解析(1)果果胶胶是是植植物物细细胞胞壁壁以以及及胞胞间间层层的的主主要要组组成成成成分分之之一一，若若发发现现榨榨取取的的果果汁汁非非常常浑浑浊浊，用用果果胶胶酶酶处处理理，可使果汁变得澄清。可使果汁变得澄清。(2)分分离离酵酵母母菌菌应应使使用用选选择择培培养养基基，因因为为细细胞胞比比酶酶分分子子大大，故制备固定化细胞时常采用包埋法。故制备固定化细胞时常采用包埋法。答案(1)用果胶酶处理用果胶酶处理(2)选择包埋选择包埋(3)酵酵母母菌菌的的酒酒精精发发酵酵过过程程一一般般控控制制在在_温温度度范范围围最最适合酵母菌繁殖，请简要说明理由适合酵母菌繁殖，请简要说明理由_。(4)在在酸酸性性条条件件下下，可可用用_来来检检测测发发酵酵产产物物中中是是否否有有酒酒精精产产生生。若若想想进进一一步步检检测测所所得得果果酒酒中中酵酵母母菌菌的的密密度度，可可采采用用_法。法。解析(3)酵母菌进行酒精发酵的适宜温度是酵母菌进行酒精发酵的适宜温度是1825，(4)果果汁汁发发酵酵后后，可可以以用用重重铬铬酸酸钾钾来来检检验验是是否否有有酒酒精精生生成成，在在酸酸性性条条件件下下，重重铬铬酸酸钾钾与与酒酒精精反反应应呈呈灰灰绿绿色色，稀稀释释涂涂布布平平板板法能用于酵母菌的计数。法能用于酵母菌的计数。1825在此温度下，酶的活性最在此温度下，酶的活性最强，代谢最旺盛强，代谢最旺盛重铬酸钾重铬酸钾稀释涂布平板稀释涂布平板(5)果汁为酵母菌的生长和繁殖提供的营养成分是果汁为酵母菌的生长和繁殖提供的营养成分是_。(6)发发酵酵完完成成后后，生生物物兴兴趣趣小小组组同同学学制制作作的的果果酒酒品品质质非非常常好好。为为了方便后续年级使用，可将菌液了方便后续年级使用，可将菌液_保存。保存。解析(5)微微生生物物的的营营养养物物质质有有碳碳源源、氮氮源源、水水、无无机机盐盐和和生生长长因因子子等等，故故果果汁汁为为酵酵母母菌菌的的生生长长和和繁繁殖殖提提供供的的营营养养成成分分是是碳碳源源、氮源、水、无机盐和生长因子等。氮源、水、无机盐和生长因子等。(6)长长期期保保存存菌菌种种应应将将菌菌种种转转移移到到甘甘油油中中，与与甘甘油油充充分分混混合合后后，放在放在20的冷藏箱中。的冷藏箱中。碳源、氮源、碳源、氮源、水、无机盐和生长因子等水、无机盐和生长因子等转移到甘油中，与甘油充分转移到甘油中，与甘油充分混合后，放在混合后，放在20的冷藏箱中的冷藏箱中6.葡葡萄萄糖糖经经酒酒精精发发酵酵可可以以产产生生葡葡萄萄酒酒，进进一一步步经经醋醋酸酸发发酵酵可以产生葡萄醋，请利用相关的知识回答问题：可以产生葡萄醋，请利用相关的知识回答问题：(1)从从将将葡葡萄萄汁汁装装入入发发酵酵瓶瓶到到酒酒精精发发酵酵完完毕毕的的过过程程中中，酵酵母母菌进行的细胞呼吸方式是菌进行的细胞呼吸方式是_。解析利利用用葡葡萄萄汁汁制制作作葡葡萄萄酒酒，装装入入发发酵酵瓶瓶后后，一一开开始始酵酵母母菌菌进进行行有有氧氧呼呼吸吸，迅迅速速增增加加数数量量，随随着着氧氧气气消消耗耗，后后期期进行无氧呼吸，产生酒精。进行无氧呼吸，产生酒精。有氧呼吸、无氧呼吸有氧呼吸、无氧呼吸(2)甲甲、乙乙两两位位同同学学将将葡葡萄萄榨榨成成汁汁后后分分别别装装入入相相应应的的发发酵酵瓶瓶中中，在温度等适宜的条件下进行发酵，如下图所示。在温度等适宜的条件下进行发酵，如下图所示。在在排排气气口口要要通通过过一一个个长长而而弯弯曲曲的的胶胶管管与与瓶瓶身身连连接接，其其目目的的是是_。请请找找出出图图中中实实验验操操作作的的错错误误：甲甲图图中中的的错错误误是是_，乙图中的错误是，乙图中的错误是_。解析为为防防止止空空气气中中的的微微生生物物污污染染发发酵酵瓶瓶，在在排排气气口口要要通通过过一一个个长长而而弯弯曲曲的的胶胶管管与与瓶瓶身身连连接接。甲甲图图中中未未夹夹住住发发酵酵瓶瓶的的进进气气管管，这这样样酵酵母母菌菌会会一一直直进进行行有有氧氧呼呼吸吸，不不能能产产生生酒酒精精；乙乙图图中中瓶瓶中中发发酵酵液液过过多多，淹淹没没了了排排气气管管在在瓶瓶内内的的管管口口，这样不能排出气体，可能会排出发酵液。这样不能排出气体，可能会排出发酵液。答案 防防止止空空气气中中的的微微生生物物污污染染发发酵酵瓶瓶甲甲：未未夹夹住住发发酵酵瓶瓶的的进进气气管管乙乙：瓶瓶中中发发酵酵液液过过多多，淹淹没没了了排排气气管管在在瓶内的管口瓶内的管口(3)为为了了提提高高果果酒酒的的品品质质，更更好好地地抑抑制制其其他他微微生生物物的的生生长长，常常常常加加入入人人工工培培养养的的酵酵母母菌菌。为为了了分分离离纯纯化化酵酵母母菌菌，最最简便的接种方法是简便的接种方法是_。(4)若若果果汁汁中中混混杂杂有有醋醋酸酸菌菌，在在果果酒酒发发酵酵旺旺盛盛时时，醋醋酸酸菌菌_(能能/不不能能)将将果果汁汁中中的的糖糖发发酵酵形形成成醋醋酸酸，其其原原因因是是_。解析(3)分离纯化酵母菌，常用的接种方法是平板划线法。分离纯化酵母菌，常用的接种方法是平板划线法。(4)醋醋酸酸菌菌进进行行有有氧氧呼呼吸吸，若若果果汁汁中中混混杂杂有有醋醋酸酸菌菌，在在果果酒酒发发酵酵旺旺盛盛时时，果果酒酒发发酵酵时时的的缺缺氧氧环环境境能能抑抑制制醋醋酸酸菌菌生生长长，同同时时果果酒酒发发酵酵的的最最适适温温度度也也低低于于醋醋酸酸菌菌生生长长的的最最适适温温度度，所以醋酸菌不能将果汁中的糖发酵形成醋酸。所以醋酸菌不能将果汁中的糖发酵形成醋酸。答案(3)平板划线法平板划线法(4)不不能能果果酒酒发发酵酵时时的的缺缺氧氧环环境境能能抑抑制制醋醋酸酸菌菌生生长长，果果酒酒发酵的最适温度也低于醋酸菌生长的最适温度发酵的最适温度也低于醋酸菌生长的最适温度7.腐腐乳乳是是我我国国古古代代劳劳动动人人民民创创造造出出的的一一种种经经过过微微生生物物发发酵酵的大豆食品。下面是腐乳制作的流程示意图：的大豆食品。下面是腐乳制作的流程示意图：让豆腐上长出毛霉让豆腐上长出毛霉加盐腌制加盐腌制加卤汤装瓶加卤汤装瓶密封腌制密封腌制(1)现现代代科科学学研研究究表表明明，许许多多种种微微生生物物参参与与了了豆豆腐腐的的发发酵酵，其中起主要作用的是毛霉，毛霉是一种其中起主要作用的是毛霉，毛霉是一种_状真菌。状真菌。解析毛霉是一种丝状真菌。毛霉是一种丝状真菌。丝丝(2)腐乳制作的原理是腐乳制作的原理是_。解析腐腐乳乳的的制制作作原原理理是是毛毛霉霉等等微微生生物物产产生生的的蛋蛋白白酶酶能能将将豆豆腐腐中中的的蛋蛋白白质质分分解解成成小小分分子子的的肽肽和和氨氨基基酸酸，脂脂肪酶能将脂肪水解成甘油和脂肪酸。肪酶能将脂肪水解成甘油和脂肪酸。毛毛霉霉等等微微生生物物产产生生的的蛋蛋白白酶酶能能将将豆豆腐腐中中的的蛋蛋白白质质分分解解成成小小分分子子的的肽肽和和氨氨基基酸酸，脂脂肪肪酶酶能能将将脂脂肪肪水解成甘油和脂肪酸水解成甘油和脂肪酸(3)传统的制作过程中，豆腐块上生长的毛霉来自传统的制作过程中，豆腐块上生长的毛霉来自_。而而现现代代的的腐腐乳乳生生产产是是在在严严格格的的无无菌菌条条件件下下，将将优优良的毛霉菌种接种在豆腐上，这样可以良的毛霉菌种接种在豆腐上，这样可以_。解析传传统统的的腐腐乳乳制制作作过过程程中中，不不接接种种微微生生物物，只只能能来来自自空空气气中中的的毛毛霉霉孢孢子子；现现代代的的腐腐乳乳生生产产在在无无菌菌条条件件下进行操作，可以防止杂菌污染，保证产品质量。下进行操作，可以防止杂菌污染，保证产品质量。空气中的毛空气中的毛避免其他菌种的污避免其他菌种的污霉孢子霉孢子染，保证产品的质量染，保证产品的质量(4)加盐的作用是加盐的作用是_和和_。(5)卤汤是由酒及各种香辛料配制而成的，加酒的作用是卤汤是由酒及各种香辛料配制而成的，加酒的作用是_和和_。解析(4)制制作作腐腐乳乳的的过过程程中中，加加盐盐的的作作用用有有两两方方面面：析析出出豆豆腐腐中中的水分，使豆腐变硬；抑制微生物的生长，避免豆腐腐败变质。的水分，使豆腐变硬；抑制微生物的生长，避免豆腐腐败变质。(5)卤卤汤汤中中加加酒酒的的作作用用有有两两方方面面：抑抑制制微微生生物物的的生生长长和和使使腐腐乳乳具具有有独特的风味。独特的风味。析出豆腐中的水分，使豆腐变硬析出豆腐中的水分，使豆腐变硬抑制微生抑制微生物的生长，避免豆腐腐败变质物的生长，避免豆腐腐败变质抑制微抑制微生物的生长生物的生长使腐乳具有独特的风味使腐乳具有独特的风味真题重温知能回归典题特训酶的应用考点41判断下列关于酶的叙述判断下列关于酶的叙述(1)玉玉米米淀淀粉粉经经酶酶解解形形成成的的葡葡萄萄糖糖可可在在葡葡萄萄糖糖异异构构酶酶的的作作用用下下转转化化成成果果糖糖。利利用用固固定定化化技技术术可可使使葡葡萄萄糖糖异异构构酶酶重重复复利利用用，从从而而降低生产成本降低生产成本(2014山东，山东，35改编改编)()(2)反应产物对固定化酶的活性没有影响反应产物对固定化酶的活性没有影响(2013江苏，江苏，6B)()(3)相相同同pH时时加加酶酶洗洗衣衣粉粉洗洗涤涤效效果果好好于于普普通通洗洗衣衣粉粉(2012江江苏苏，16C)()真题重温(4)利利用用固固定定化化酵酵母母细细胞胞进进行行发发酵酵，糖糖类类的的作作用用只只是是作作为为反反应底物应底物(2009江苏，江苏，3D)()(5)刚刚溶溶化化的的海海藻藻酸酸钠钠应应迅迅速速与与活活化化的的酵酵母母菌菌混混合合制制备备混混合合液液(2010江苏，江苏，25A)()(6)在在酶酶的的制制备备和和应应用用中中，透透析析、电电泳泳和和酸酸解解等等方方法法常常用用于于酶的分离与纯化酶的分离与纯化(2011江苏，江苏，15B)()1.加酶洗衣粉的洗涤原理加酶洗衣粉的洗涤原理知能回归种类种类洗涤原理洗涤原理洗涤实例洗涤实例蛋白酶蛋白酶可可将将蛋蛋白白质质分分解解为为易易溶溶解解或或分分散散于于洗洗涤涤液液中中的的小小分分子的肽或氨基酸子的肽或氨基酸血渍、奶渍及各种食品血渍、奶渍及各种食品中的蛋白质污垢中的蛋白质污垢脂肪酶脂肪酶把把脂脂肪肪水水解解为为较较易易溶溶解解的的甘油和游离的脂肪酸甘油和游离的脂肪酸食品的油渍、人体皮脂、食品的油渍、人体皮脂、口红口红淀粉酶淀粉酶能使淀粉迅速分解为可溶性的麦芽糖、能使淀粉迅速分解为可溶性的麦芽糖、葡萄糖等葡萄糖等来自面条、巧来自面条、巧克力等的污垢克力等的污垢纤维纤维素酶素酶使纤维的结构变得蓬松，从而使渗入使纤维的结构变得蓬松，从而使渗入到纤维深处的尘土和污垢能够与洗衣到纤维深处的尘土和污垢能够与洗衣粉充分接触，达到更好的去污效果粉充分接触，达到更好的去污效果2.固定化酶和固定化细胞的比较固定化酶和固定化细胞的比较固定化酶固定化酶固定化细胞固定化细胞固定酶的种类固定酶的种类一种一种一系列一系列适用方法适用方法化学结合法、物理吸附法化学结合法、物理吸附法包埋法包埋法特特点点优点优点酶既可与反应物结合，又可酶既可与反应物结合，又可与产物分离，固定在载体上与产物分离，固定在载体上的酶可反复利用的酶可反复利用成本低，操作容易成本低，操作容易缺点缺点一种酶只能催化一种或一类一种酶只能催化一种或一类化学反应化学反应可能导致反应效率下降可能导致反应效率下降实例实例固定化葡萄糖异构酶固定化葡萄糖异构酶固定化酵母细胞固定化酵母细胞1.(2014江江苏苏，18)下下列列关关于于加加酶酶洗洗衣衣粉粉的的叙叙述述，正正确确的的是是()A.高温易使酶失活，因此冷水洗涤去污效果应该比温水好高温易使酶失活，因此冷水洗涤去污效果应该比温水好B.洗衣粉中表面活性剂对碱性蛋白酶活性有一定的促进作用洗衣粉中表面活性剂对碱性蛋白酶活性有一定的促进作用C.在在pH低于低于7.0的自来水中，碱性蛋白酶依然能起作用的自来水中，碱性蛋白酶依然能起作用D.洗衣粉中酶主要是通过快速分解溶在水里的污渍发挥作用洗衣粉中酶主要是通过快速分解溶在水里的污渍发挥作用典题特训解析A项项，酶酶有有最最适适温温度度，加加酶酶洗洗衣衣粉粉的的酶酶在在水水温温为为4560C时能充分发挥洗涤效果。时能充分发挥洗涤效果。B项项，如如果果将将酶酶直直接接加加入入到到洗洗衣衣粉粉中中，洗洗衣衣粉粉中中的的表表面面活活性性剂能影响碱性蛋白酶的活性，甚至使酶失活。剂能影响碱性蛋白酶的活性，甚至使酶失活。C项项，加加酶酶洗洗衣衣粉粉中中的的酶酶是是经经过过特特殊殊处处理理的的，能能耐耐酸酸、耐耐碱碱，可忍受表面活性剂和较高的温度。可忍受表面活性剂和较高的温度。D项项，加加酶酶洗洗衣衣粉粉中中的的酶酶的的作作用用是是催催化化衣衣物物上上的的污污渍渍分分解解，使其容易从衣物上脱落下来。使其容易从衣物上脱落下来。答案C2.下列关于生物技术实践的叙述，正确的是下列关于生物技术实践的叙述，正确的是(多选多选)()A.在固定化酵母实验中，溶解海藻酸钠时，最好采用小火在固定化酵母实验中，溶解海藻酸钠时，最好采用小火或持续加热的方法或持续加热的方法B.用加酶洗衣粉洗涤污渍时，浸泡时间不足会造成洗涤效果差用加酶洗衣粉洗涤污渍时，浸泡时间不足会造成洗涤效果差C.利用利用DNA不溶于冷酒精的性质除去溶于酒精的物质，从不溶于冷酒精的性质除去溶于酒精的物质，从而进一步提纯而进一步提纯DNAD.腐乳制作过程中，添加料酒、香辛料和盐，均可以抑制腐乳制作过程中，添加料酒、香辛料和盐，均可以抑制杂菌的生长杂菌的生长解析在在固固定定化化酵酵母母细细胞胞实实验验中中，溶溶解解海海藻藻酸酸钠钠时时，最最好好采采用用小小火火或或间间断断加热的方法，加热的方法，A错误；错误；酶与底物作用存在时间依赖性，酶与底物作用存在时间依赖性，B正确；正确；利用利用DNA不溶于冷酒精而杂质可溶的性质，提纯不溶于冷酒精而杂质可溶的性质，提纯DNA，C正确；正确；含含盐盐量量高高会会使使微微生生物物细细菌菌细细胞胞不不断断失失水水，导导致致细细胞胞脱脱水水致致死死，而而起起到到防防腐腐的作用，的作用，D正确。正确。答案BCD3.下面是制备固定化酵母细胞的实验步骤，请回答：下面是制备固定化酵母细胞的实验步骤，请回答：酵酵母母细细胞胞的的活活化化配配制制CaCl2溶溶液液配配制制海海藻藻酸酸钠钠溶溶液液海海藻酸钠溶液与酵母细胞混合藻酸钠溶液与酵母细胞混合固定化酵母细胞固定化酵母细胞(1)在在_状状态态下下，微微生生物物处处于于休休眠眠状状态态。活活化化就就是是让让处处于于休休眠眠状状态态的的微微生生物物重重新新恢恢复复_状状态态。活活化化前前应应选选择择足足够够大大的的容容器器，因因为为酵酵母母细细胞胞活活化化时时_。固固定定化化细细胞胞技技术术一一般般采采用用_法法，而而固固定定化酶常用化酶常用_法和法和_法。法。解析在在缺缺水水的的状状态态下下，微微生生物物处处于于休休眠眠状状态态。活活化化就就是是让让处处于于休休眠眠状状态态的的微微生生物物重重新新恢恢复复正正常常的的生生活活状状态态。活活化化前前应应选选择择足足够够大大的的容容器器，因因为为酵酵母母细细胞胞活活化化时时体体积积会会增增大大，以以免免涨涨破破容容器器或或溢溢出出。固固定定化化细细胞胞技技术术一一般般采采用用包包埋埋法法，固固定定化化酶酶常常用用化化学学结结合合法法和和物物理理吸吸附附法法。这这是是因因为为细细胞胞体体积积大大，而而酶酶分分子子很很小小；体体积积大大的的细细胞胞难难以以被被吸吸附附或或结结合合，而而体体积积小小的的酶容易从包埋材料中漏出。酶容易从包埋材料中漏出。答案缺水正常的生活体积会增大包埋化学结合缺水正常的生活体积会增大包埋化学结合物理吸附物理吸附(2)影影响响实实验验成成败败的的关关键键步步骤骤是是_。海海藻藻酸酸钠钠溶溶化过程的注意事项是化过程的注意事项是_。如如果果海海藻藻酸酸钠钠浓浓度度过过低低，形形成成的的凝凝胶胶珠珠所所包包埋埋的的酵酵母母细细胞数目胞数目_。如果形成的凝胶珠不是圆形或椭圆形，说明。如果形成的凝胶珠不是圆形或椭圆形，说明_。(3)该实验中该实验中CaCl2溶液的作用是溶液的作用是_。解析(2)影影响响实实验验成成败败的的关关键键是是配配制制海海藻藻酸酸钠钠溶溶液液，这这是是因因为为如如果果海海藻藻酸酸钠钠浓浓度度过过高高，很很难难形形成成凝凝胶胶珠珠；如如果果浓浓度度过过低低，形形成成的的凝胶珠所包埋的酵母细胞的数目少，影响实验结果。凝胶珠所包埋的酵母细胞的数目少，影响实验结果。(3)CaCl2溶液的作用是使胶体聚沉。溶液的作用是使胶体聚沉。配制海藻酸钠溶液配制海藻酸钠溶液小火加热小火加热(或间断加热或小火间断加热或间断加热或小火间断加热)，不，不断搅拌断搅拌较少较少(海藻海藻酸钠浓度偏高酸钠浓度偏高)制作失败制作失败使胶体聚沉使胶体聚沉(或形成稳定的结构或形成稳定的结构)4.某某同同学学为为探探究究加加酶酶洗洗衣衣粉粉的的洗洗涤涤效效果果，按按下下表表的的步步骤骤进行实验操作：进行实验操作：步骤步骤项目项目烧杯烧杯(1000mL)1注入自来水注入自来水500mL500mL500mL500mL2放入带油迹的衣服放入带油迹的衣服一件一件一件一件一件一件一件一件3控制不同水温控制不同水温1010min3010min5010min7010min4加入等量加酶洗衣粉加入等量加酶洗衣粉0.5g0.5g0.5g0.5g5用玻璃棒搅拌用玻璃棒搅拌5min5min5min5min6观察现象观察现象(1)该实验的目的是该实验的目的是_。(2)请请分分析析该该同同学学的的实实验验设设计计中中存存在在的的问问题题，并并提提出出改改进进措措施施。_。(3)步骤步骤3和步骤和步骤4能否调换？并说明理由。能否调换？并说明理由。_。(4)、号号烧烧杯杯中中加加入入的的自自来来水水、洗洗衣衣粉粉、含含油油渍渍的的衣衣服服及及保保温温时时间间、搅搅拌拌速速度度和和时时间间均均相相同同，这这是是为为了了_，以以便得出科学结论。便得出科学结论。解析根根据据题题干干中中的的实实验验操操作作顺顺序序，可可以以判判断断出出该该实实验验的的自自变变量量是是温温度度，即即探探究究不不同同温温度度对对加加酶酶洗洗衣衣粉粉的的洗洗涤涤效效果果的的影影响响。其其他他条条件件应应保保持持一一致致，如如水水量量、水水质质、洗洗衣衣粉粉的的量量、衣衣物物的的质质料料、衣衣物物的的大大小小、污污渍渍量量、浸浸泡泡时时间间和和洗洗涤涤时时间间等等。在在做做实实验验时时，应应先先让让每每一一个个实实验验组组处处于于所所设设置置的的温温度度且且恒恒温温，再再加加入入洗洗衣衣粉粉，以以保保证证酶酶发发挥挥作用时的温度，故步骤作用时的温度，故步骤3与步骤与步骤4不能调换。不能调换。答案(1)探究不同温度对加酶洗衣粉的洗涤效果的影响探究不同温度对加酶洗衣粉的洗涤效果的影响(2)应应选选用用大大小小相相同同的的白白布布，分分别别滴滴加加4滴滴同同种种的的植植物物油油，使使油油渍渍大大小小相相同同；选选择择的的水水温温不不合合适适，考考虑虑洗洗涤涤成成本本，应应根根据据当当地地一一年年中中的的实实际际气气温温变变化化来来确确定定水水温温梯梯度度，如如选选取取5、15、25、35的水温的水温(3)不能调换，因为加酶洗衣粉中的酶在常温时会分解部分油渍不能调换，因为加酶洗衣粉中的酶在常温时会分解部分油渍(4)避避免免因因水水量量、水水质质、洗洗衣衣粉粉的的量量、衣衣物物的的质质料料、衣衣物物的的大大小小、污渍量及浸泡时间和洗涤时间不同给实验结果带来误差污渍量及浸泡时间和洗涤时间不同给实验结果带来误差5.在在20世世纪纪50年年代代，酶酶已已经经大大规规模模地地应应用用于于各各个个生生产产领领域域，到了到了70年代又发明了固定化酶与固定化细胞技术。年代又发明了固定化酶与固定化细胞技术。(1)在实际生产中，固定化酶技术的优点是在实际生产中，固定化酶技术的优点是_。与固定化酶技术相比，固定化细胞技术固定的是与固定化酶技术相比，固定化细胞技术固定的是_。酶既能与反酶既能与反应物接触，又容易与产物分离，且固定在载体上的酶能反复应物接触，又容易与产物分离，且固定在载体上的酶能反复使用使用多酶系统多酶系统(一系列、多种酶一系列、多种酶)(2)制制备备固固定定化化酵酵母母细细胞胞，常常用用的的包包埋埋材材料料是是_，使用了下图中方法使用了下图中方法_(填出号码及名称填出号码及名称)。包埋法包埋法海藻酸钠海藻酸钠(3)制制作作固固定定化化酵酵母母细细胞胞时时，充充分分混混合合均均匀匀的的酵酵母母细细胞胞溶溶液液可可在在饱饱和和_溶溶液液中中形形成成凝凝胶胶珠珠。部部分分同同学学实实验验制制得得的的凝凝胶胶珠珠不不是是圆圆形形或或椭椭圆圆形形，其其主主要要原原因因是是_。海藻酸钠浓度过高海藻酸钠浓度过高(或针筒离液面过近，高度不够或针筒离液面过近，高度不够)CaCl2真题重温知能回归典题特训的粗提取与鉴定考点42DNA1.判断下列有关判断下列有关DNA技术的叙述技术的叙述(1)提提取取细细胞胞中中的的DNA需需用用蒸蒸馏馏水水涨涨破破细细胞胞(2009江江苏苏，23A改编改编)()(2)用用菜菜花花替替代代鸡鸡血血作作为为实实验验材材料料进进行行“DNA的的粗粗提提取取与与鉴定鉴定”实验，其实验操作步骤相同实验，其实验操作步骤相同(2011江苏，江苏，19D改编改编)()真题重温(3)用用不不同同浓浓度度NaCl溶溶液液反反复复溶溶解解与与析析出出DNA可可去去除除蛋蛋白质白质(2009江苏，江苏，23B)()(4)利利用用鸡鸡血血进进行行“DNA的的粗粗提提取取与与鉴鉴定定”的的实实验验中中，将将丝丝状状物物溶溶解解在在2mol/LNaCl溶溶液液中中，加加入入二二苯苯胺胺试试剂剂即即呈呈蓝色蓝色(2011江苏，江苏，19C)()2.(2013江江苏苏，4)某某同同学学用用洋洋葱葱进进行行DNA粗粗提提取取和和鉴鉴定定实实验验，下列操作错误的是下列操作错误的是()A.加入洗涤剂后用力进行快速、充分的研磨加入洗涤剂后用力进行快速、充分的研磨B.用蛋白酶纯化过滤后的研磨液中的用蛋白酶纯化过滤后的研磨液中的DNAC.加入酒精后用玻璃棒轻缓搅拌加入酒精后用玻璃棒轻缓搅拌D.加二苯胺试剂摇匀后沸水浴加热加二苯胺试剂摇匀后沸水浴加热解析本本题题可可用用排排除除法法进进行行解解答答。破破碎碎植植物物细细胞胞时时，加加入入洗洗涤涤剂剂后后，动动作作要要轻轻缓缓、柔柔和和，否否则则容容易易产产生生大大量量的的泡泡沫沫，不不利于后续步骤的操作，利于后续步骤的操作，A错误。错误。A1.实验原理实验原理(1)DNA在在不不同同浓浓度度的的NaCl溶溶液液中中的的溶溶解解度度不不同同，其其中中在物质的量浓度为在物质的量浓度为0.14mol/L时最低。时最低。(2)DNA不不溶溶于于酒酒精精，但但是是细细胞胞中中的的一一些些有有机机物物如如某某些些蛋蛋白质则溶于酒精，因此可以用酒精提纯。白质则溶于酒精，因此可以用酒精提纯。知能回归(3)DNA遇遇二二苯苯胺胺(沸沸水水浴浴)会会被被染染成成蓝蓝色色，因因此此，二二苯苯胺可用来鉴定胺可用来鉴定DNA分子。分子。2.实验流程实验流程选选取取材材料料破破碎碎细细胞胞，获获取取含含DNA的的滤滤液液去去除除滤滤液液中的杂质中的杂质DNA的析出与鉴定。的析出与鉴定。1.下下面面是是某某同同学学用用动动物物肝肝脏脏做做“DNA粗粗提提取取与与鉴鉴定定实实验验”的的操操作作，正确的是正确的是()A.在烧杯中加入肝脏和蒸馏水并进行搅拌，使细胞破裂释放核在烧杯中加入肝脏和蒸馏水并进行搅拌，使细胞破裂释放核物质物质B.调节调节NaCl溶液浓度至溶液浓度至0.14mol/L，过滤后取滤液进行后续步，过滤后取滤液进行后续步骤的操作骤的操作C.在含在含DNA的滤液中加入嫩肉粉，使蛋白质与的滤液中加入嫩肉粉，使蛋白质与DNA分开分开D.向溶有向溶有DNA的的NaCl溶液中加入适量二苯胺试剂后溶液呈蓝色溶液中加入适量二苯胺试剂后溶液呈蓝色典题特训解析因因肝肝脏脏细细胞胞没没有有分分散散开开，在在烧烧杯杯中中加加入入肝肝脏脏和和蒸蒸馏水并进行搅拌，不能使细胞破裂，应研磨；馏水并进行搅拌，不能使细胞破裂，应研磨；DNA在在0.14mol/L的的NaCl溶溶液液中中溶溶解解度度很很低低，过过滤滤后后DNA不在滤液中；不在滤液中；嫩肉粉中有蛋白酶可使蛋白质分解；嫩肉粉中有蛋白酶可使蛋白质分解；向向溶溶有有DNA的的NaCl溶溶液液中中加加入入适适量量二二苯苯胺胺试试剂剂后后需需沸沸水浴加热溶液才能呈蓝色。水浴加热溶液才能呈蓝色。答案C2.下下列列有有关关“DNA粗粗提提取取与与鉴鉴定定”实实验验的的叙叙述述，正正确确的的是是()A.新鲜猪血、菜花等动植物材料均可用于新鲜猪血、菜花等动植物材料均可用于DNA的粗提取的粗提取B.植物材料需先用洗涤剂破坏细胞壁再吸水涨破植物材料需先用洗涤剂破坏细胞壁再吸水涨破C.DNA不溶于不溶于95%的冷酒精而溶于的冷酒精而溶于2mol/L的的NaCl溶液溶液D.溶有溶有DNA的的NaCl溶液中加入二苯胺试剂后即呈蓝色溶液中加入二苯胺试剂后即呈蓝色解析哺哺乳乳动动物物成成熟熟的的红红细细胞胞没没有有细细胞胞核核和和细细胞胞器器，不不含含DNA，不不能能用用于于提提取取DNA，因因此此猪猪血血不不能能用用来来作作为为提提取取DNA的材料，故的材料，故A错误；错误；用用植植物物材材料料提提取取DNA时时，通通过过研研磨磨法法破破坏坏细细胞胞壁壁，用用洗洗涤涤剂瓦解细胞膜，故剂瓦解细胞膜，故B错误；错误；DNA不不溶溶于于95%的的冷冷酒酒精精，但但溶溶于于2mol/L的的NaCl溶溶液液，故故C正确；正确；溶溶有有DNA的的NaCl溶溶液液中中加加入入二二苯苯胺胺试试剂剂后后需需要要沸沸水水浴浴加加热热才能呈蓝色，故才能呈蓝色，故D错误。错误。答案C