细胞生物学实验细胞生物学实验12024/7/231光学显微镜的使用及显微绘图光学显微镜的使用及显微绘图2细胞膜的渗透性观察细胞膜的渗透性观察3液泡系的超活染色与观察液泡系的超活染色与观察4Feulgen反应制作细胞反应制作细胞DNA定性、定定性、定量测定样品量测定样品5减数分裂的观察减数分裂的观察6植物染色体标本的制备植物染色体标本的制备7动物染色体标本的制备动物染色体标本的制备8考马斯亮蓝染色显示细胞考马斯亮蓝染色显示细胞骨架骨架9细胞凝集反应及细胞吞噬细胞凝集反应及细胞吞噬10细胞融合细胞融合11染色体分带技术染色体分带技术实验实验 1光学显微镜的使用光学显微镜的使用及显微绘图及显微绘图 22024/7/23一、目的要求一、目的要求（1）熟悉显微镜的结构和各部件性能。）熟悉显微镜的结构和各部件性能。（2）掌掌握握低低倍倍镜镜/高高倍倍镜镜的的正正确确使使用用方方法法，掌掌 握油镜的使用方法。握油镜的使用方法。（3）掌握显微绘图的基本方法）掌握显微绘图的基本方法（4）了了解解细细胞胞的的基基本本结结构构，动动物物、植植物物和和微微 生物细胞的基本共性和特性生物细胞的基本共性和特性32024/7/23二、仪器设备及材料二、仪器设备及材料1. 光学显微镜光学显微镜/显微照相系统（带油浸物镜）显微照相系统（带油浸物镜）2. 目镜测微尺及镜台测微尺目镜测微尺及镜台测微尺3. 香柏油、二甲苯香柏油、二甲苯4. 永久装片、擦镜纸永久装片、擦镜纸42024/7/23普通生物显微镜普通生物显微镜52024/7/23显微照相系统显微照相系统62024/7/23三、显微镜的构造三、显微镜的构造1 1机械部分机械部分 支持和调节光学系统支持和调节光学系统Charge-coupled Device72024/7/23三、显微镜的构造三、显微镜的构造2 2光学系统光学系统82024/7/23三、显微镜的构造三、显微镜的构造3 3显微镜的能力显微镜的能力 显微镜的能力是质量和性能的标志。显微镜的能力是质量和性能的标志。能力包括分辨率、放大率、焦点深度和视能力包括分辨率、放大率、焦点深度和视场宽度等，其中场宽度等，其中最重要的是分辨率最重要的是分辨率。R：分分辨辨率率（分分辨辨的的两两个个点点的的最最短短距距离离）， R值愈小，分辨率越大。值愈小，分辨率越大。： 照照 明明 光光 线线 的的 波波 长长 (可可 见见 光光 平平 均均 波波 长长 约约550nm）。）。N.A.：物镜的镜口率：物镜的镜口率n：物镜和被检物体之间介质的折射率：物镜和被检物体之间介质的折射率：物物镜镜的的镜镜口口角角（从从物物镜镜光光轴轴上上的的物物点点所所发发出出的的光线与物镜前透镜有效直径边缘所张的角度）。光线与物镜前透镜有效直径边缘所张的角度）。92024/7/23表表1 在在550nm光波下不同物镜的分辨距离光波下不同物镜的分辨距离 放大倍数（放大倍数（）1040100镜口率镜口率（N.A.）0.280.651.25分辨距离（分辨距离（d）1m0.42m0.22m102024/7/23科勒照明科勒照明优点：优点：视场照明均匀，样品不受热，不产生耀眼眩光，影像清晰。视场照明均匀，样品不受热，不产生耀眼眩光，影像清晰。 1893年德国杰出的学者年德国杰出的学者August Kohler提出柯勒照明法。其具体做法：在光源与聚光器之提出柯勒照明法。其具体做法：在光源与聚光器之间，加放一光源聚光镜和视场光阑，光源聚光镜把光线集成光锥，使光源灯成像于聚光器的间，加放一光源聚光镜和视场光阑，光源聚光镜把光线集成光锥，使光源灯成像于聚光器的孔径光阑平面处。同时，聚光器又使视场光阑成像在样品平面处。由此充分地利用了照明光孔径光阑平面处。同时，聚光器又使视场光阑成像在样品平面处。由此充分地利用了照明光源，使点状的光源达到较大的照明，从而使样品得到均匀的照明，并防止了高温。这对显微源，使点状的光源达到较大的照明，从而使样品得到均匀的照明，并防止了高温。这对显微摄影和镜检观察至关重要。摄影和镜检观察至关重要。 112024/7/23四、油镜的原理四、油镜的原理油油镜镜（油油浸浸系系物物镜镜，通通常常有有黑黑圈圈或或Oil的的标标志志），以以香香柏柏油油或或石石蜡蜡油油为为介介质质。这这类类油油的的折折射射率率与与玻玻璃璃的的折折射射率率大大致致相相同同。光光线线从从被被检检物物体体直直接接射射入入物物镜镜，其其间间因因折折射射或或反反射射而而引引起起的的光光线线损损失失很很小小，所所以以可可以以充充分分利利用用镜镜口口角，显著提高物镜的分辨率。角，显著提高物镜的分辨率。油油镜镜（镜镜口口率率一一般般在在1.25左左右右）的的分分辨辨率率在在0.2 m左左右右，这这就就是是光学显微镜的分辨极限。光学显微镜的分辨极限。表表1 几种物质的折射率几种物质的折射率介质介质空气空气水水石蜡油石蜡油香柏油香柏油加拿大树胶加拿大树胶光学玻璃光学玻璃折射率折射率（n）1.0031.331.471.5151.5151.54122024/7/23五、显微镜的使用方法五、显微镜的使用方法使用显微镜的要领就是使用显微镜的要领就是从低倍物镜开始观从低倍物镜开始观察，先粗调后细调察，先粗调后细调。 在低倍物镜下找到要观察的东西后，在低倍物镜下找到要观察的东西后，再逐步加大物镜倍数，仔细观察。再逐步加大物镜倍数，仔细观察。132024/7/23低倍镜的使用低倍镜的使用 （1）检查检查：各部件有无损坏，如发现问题，立即报告教师请求处理。：各部件有无损坏，如发现问题，立即报告教师请求处理。（2）准准备备：将将显显微微镜镜放放于于前前方方略略偏偏左左侧侧以以便便观观察察。打打开开电电源源开开关关，观观察察底底座座的的光光路路中中是是否否有有光光亮亮。慢慢慢慢调调节节同同一一旋旋钮钮，光光线线应应逐逐步步增增强强。转转动动粗粗调调节节钮钮，将将载载物物台台下下降降使使物物镜镜与与载载物物台台距距离离略略拉拉开开。再再旋旋转转物物镜镜转转换换器器，将将低低倍镜倍镜4 X对准载物台中央的通光孔（可听到对准载物台中央的通光孔（可听到“咔哒咔哒”声）。声）。（3）放放标标本本片片：标标本本片片标标签签面面向向上上，用用标标本本夹夹夹夹好好，把把要要观观察察的的部部分分移移到通光孔的正中央到通光孔的正中央。（4）调调节节焦焦距距：边边从从目目镜镜中中观观察察，边边调调节节粗粗聚聚焦焦旋旋钮钮，使使载载物物台台缓缓慢慢上上升升，直直至至视视野野中中出出现现物物像像为为止止。如如物物像像不不太太清清晰晰，可可转转动动细细调调节节钮钮，使使物物像像更加清晰。更加清晰。（5）换换10 X 物镜观察。此时，只须稍稍调节细调节旋钮即可。物镜观察。此时，只须稍稍调节细调节旋钮即可。142024/7/232024/7/2315低倍镜的使用低倍镜的使用 如果按上述操作步骤仍看不到物像时，可能由以下原因造成：如果按上述操作步骤仍看不到物像时，可能由以下原因造成： 转动调节钮太快，超过焦点。应按上述步骤重新调节焦距。转动调节钮太快，超过焦点。应按上述步骤重新调节焦距。 物镜没有对正，应对正后再观察。物镜没有对正，应对正后再观察。 标本没有放到视野内，应移动标本片寻找观察对象。标本没有放到视野内，应移动标本片寻找观察对象。 光光线线太太强强，尤尤其其观观察察比比较较透透明明的的标标本本片片或或没没有有染染色色的的标标本本时时， 易出现这种现象，应将光线调暗一些后，再观察。易出现这种现象，应将光线调暗一些后，再观察。162024/7/23低倍镜的使用低倍镜的使用 高倍镜的使用高倍镜的使用 如如按按上上述述操操作作仍仍看看不不到到物物像像时时，可可能能由由下下列列原原因因造造成：成：观观察察的的部部分分不不在在视视野野内内，应应在在低低倍倍镜镜下下寻寻找找到到后后，移到视野中央，再换高倍镜观察。移到视野中央，再换高倍镜观察。标标本本片片放放反反了了，应应把把标标本本片片放放正正之之后后，再再按按上上述述步骤操作。步骤操作。焦距没调好，应仔细调节焦距。焦距没调好，应仔细调节焦距。如如需需要要更更换换标标本本片片时时，应应该该先先把把载载物物台台下下降降，然然后后把标本片移到载物台前方，再取下。把标本片移到载物台前方，再取下。（1）依照低倍镜操作步骤，先用低倍镜找到清晰物像。）依照低倍镜操作步骤，先用低倍镜找到清晰物像。（2）将需要观察的部分移到视野的中央。）将需要观察的部分移到视野的中央。（3）眼睛从侧面注视物镜，用手移动转换器，换高倍镜）眼睛从侧面注视物镜，用手移动转换器，换高倍镜40X。（4）眼眼睛睛向向目目镜镜内内观观察察，同同时时微微微微上上下下转转动动细细调调节节钮钮，直直至至视视野野内内看看到到清清晰晰的的物物像像为为止止。此此时时应应把把聚聚光光器器的的孔孔径径光光阑阑适适当当调调大大，使使之之与与物物镜镜的的镜镜口口率率相相匹匹配。光源的强度也应调高。配。光源的强度也应调高。172024/7/23油镜的使用油镜的使用应先调低倍镜、高倍镜找到要观察的物像，然后再用油镜观察，操作如下：应先调低倍镜、高倍镜找到要观察的物像，然后再用油镜观察，操作如下：（1）先用低倍镜观察标本，然后更换高倍镜，把待观察的部分移到视野中央。）先用低倍镜观察标本，然后更换高倍镜，把待观察的部分移到视野中央。（2）把载物台下降约把载物台下降约1.5厘米，再把油镜转到工作位置。厘米，再把油镜转到工作位置。（3）在盖玻片上所）在盖玻片上所要观察的位置要观察的位置滴滴一小滴一小滴香柏油。香柏油。（4）细细心心拧拧动动粗粗调调焦焦螺螺旋旋，使使载载物物台台慢慢慢慢上上升升。这这时时要要仔仔细细观观察察物物镜镜前前端端与与标标本本之之间间的的距距离离，先先使使物物镜镜前前端端与与油油滴滴接接触触，然然后后再再慢慢慢慢使使载载物物台台上上升升，至至物物镜镜前前端端接接近近而而没没有有碰碰到到盖盖玻玻片片为为止止。这这步步操操作作要要特特别别小小心心，防防止止油油镜镜压压碎碎标标本本或或损损坏坏油油镜镜（油镜的工作距离约油镜的工作距离约0.2mm）。）。（5）眼眼睛睛要要看看目目镜镜中中，拧拧动动细细调调焦焦螺螺旋旋，使使载载物物台台慢慢慢慢下下降降到到能能看看清清标标本本。这这步操作要特别注意不要把细调焦螺旋的方向拧错，以防压碎标本。步操作要特别注意不要把细调焦螺旋的方向拧错，以防压碎标本。（6）看看清清标标本本后后，把把聚聚光光器器下下的的孔孔径径光光阑阑开开到到它它的的口口径径与与视视场场的的直直径径恰恰好好一一样样大大，使使聚聚光光器器的的镜镜口口率率与与物物镜镜的的镜镜口口率率相相配配合合。如如果果聚聚光光器器的的镜镜口口率率小小于于物物镜镜的的镜镜口率，则物镜的镜口率就不能充分发挥。口率，则物镜的镜口率就不能充分发挥。（7）观观察察完完毕毕后后，下下降降载载物物台台，把把油油镜镜转转离离光光轴轴，立立即即作作清清洁洁工工作作。先先用用干干的的擦擦镜镜纸纸擦擦一一、二二次次，把把大大部部分分油油去去掉掉，再再用用二二甲甲苯苯滴滴湿湿的的擦擦镜镜纸纸擦擦两两次次，最最后后再再用用干干擦擦镜镜纸纸擦擦一一次次。擦擦拭拭时时要要顺顺镜镜头头的的直直径径方方向向，不不要要沿沿镜镜头头的的圆圆周周擦擦。擦擦拭拭要要细细心心，动动作作要要轻轻，不不可可用用力力擦擦。如如果果聚聚光光器器上上有有滴滴油油也也要要同同样样清清洁洁。载载玻玻片片上上的的油油可可用用“拉拉纸纸法法”擦擦净净，即即把把一一小小张张擦擦镜镜纸纸盖盖在在载载玻玻片片油油滴滴上上，在在纸纸上上滴滴一一些些二二甲甲苯苯，趁趁湿湿把纸往外拉，这样连续作把纸往外拉，这样连续作34次，即可干净。次，即可干净。182024/7/23六、显微镜使用的注意事项六、显微镜使用的注意事项 1搬搬动动显显微微镜镜时时，要要一一手手握握镜镜臂臂，一一手手扶扶镜镜座座，两两上上臂臂紧紧靠靠身身体体。切切勿勿一一手手斜斜提提或或前前后后摆动，不要发生太大震动，以防镜头或其他零件跌落。摆动，不要发生太大震动，以防镜头或其他零件跌落。2观察标本时，显微镜离实验台边缘应保持一定距离观察标本时，显微镜离实验台边缘应保持一定距离(5cm)，以免显微镜翻倒落地。，以免显微镜翻倒落地。3使使用用时时要要严严格格按按步步骤骤操操作作，熟熟悉悉显显微微镜镜各各部部件件性性能能，掌掌握握粗粗、细细调调节节钮钮的的转转动动方方向向与与载物台升降关系。转动粗调节钮向下时，眼睛必须注视物镜头。载物台升降关系。转动粗调节钮向下时，眼睛必须注视物镜头。4观察带液体的临时标本时要加盖玻片，以免液体污染镜头。观察带液体的临时标本时要加盖玻片，以免液体污染镜头。5粗粗、细细调调节节钮钮要要配配合合使使用用，细细调调节节钮钮不不能能单单方方向向过过度度旋旋转转，调调节节焦焦距距时时，要要从从侧侧面面注注视载物台，以免压坏标本和镜头视载物台，以免压坏标本和镜头。6禁止随意拧开或调换目镜、物镜和聚光器等零件。禁止随意拧开或调换目镜、物镜和聚光器等零件。7显显微微镜镜光光学学部部件件有有污污垢垢，可可用用擦擦镜镜纸纸或或绸绸布布擦擦净净，切切勿勿用用手手指指、粗粗纸纸或或手手帕帕去去擦擦，以以防损坏镜面。防损坏镜面。8凡凡有有腐腐蚀蚀性性和和挥挥发发性性的的化化学学试试剂剂和和药药品品，如如碘碘、乙乙醇醇溶溶液液、酸酸类类、碱碱类类等等都都不不可可与与显显微镜接触，如不慎污染时，应立即擦干净。微镜接触，如不慎污染时，应立即擦干净。9使使用用油油镜镜观观察察样样品品后后，随随即即用用二二甲甲苯苯将将油油镜镜镜镜头头和和载载玻玻片片擦擦净净，以以防防其其他他的的物物镜镜玻玻璃璃上沾上香柏油。上沾上香柏油。二甲苯有毒，使用后马上洗手。二甲苯有毒，使用后马上洗手。10实实验验完完毕毕，要要将将玻玻片片取取出出，用用擦擦镜镜纸纸将将镜镜头头擦擦拭拭干干净净后后移移开开，不不能能与与通通光光孔孔相相对对。切不可把显微镜放在直射光线下曝晒。切不可把显微镜放在直射光线下曝晒。192024/7/23七、生物显微绘图七、生物显微绘图 对标本进行镜检后，对一些要重点掌握对标本进行镜检后，对一些要重点掌握的内容，需要及时绘图记录观察结果。生物绘图的内容，需要及时绘图记录观察结果。生物绘图不同于一般的美术绘图，要求将所观察标本的外不同于一般的美术绘图，要求将所观察标本的外形和内部结构准确地描绘，然后对各部分分别加形和内部结构准确地描绘，然后对各部分分别加以注字说明。以注字说明。202024/7/23生物绘图方法生物绘图方法1科学性和准确性科学性和准确性2布局好布局好3线条均匀划一线条均匀划一4圆点衬阴，以示深浅。圆点衬阴，以示深浅。5图注用铅笔，用平行线引出。图注用铅笔，用平行线引出。6写明题目、图题和放大倍数。写明题目、图题和放大倍数。212024/7/23222024/7/23八、作业八、作业 1. 画画图图表表示示在在显显微微镜镜下下观观察察到到的的标标本本片片中中的的物物体体（至至少两片）。少两片）。2. 简述使用显微镜的注意事项。简述使用显微镜的注意事项。3. 如如何何判判断断视视野野中中所所见见到到的的污污点点来来源源？显显微微镜镜下下看看到到的的物物像像是是正正像像还还是是反反像像？物物像像与与载载玻玻片片的的移移动动方方向向是是否一致？否一致？232024/7/23242024/7/23柿胚乳细胞柿胚乳细胞252024/7/23马蛔虫受精卵马蛔虫受精卵262024/7/23青霉青霉272024/7/23小鼠肝脏横切小鼠肝脏横切