实验二实验二 小鼠骨髓细胞染色体制备与观察小鼠骨髓细胞染色体制备与观察1各行业实验原理实验原理小鼠骨髓细胞始终保持较强的分裂活性，且细胞小鼠骨髓细胞始终保持较强的分裂活性，且细胞数量较多。数量较多。2各行业秋水仙素，可以抑制细胞分裂时的纺锤体形成，使处于秋水仙素，可以抑制细胞分裂时的纺锤体形成，使处于秋水仙素，可以抑制细胞分裂时的纺锤体形成，使处于秋水仙素，可以抑制细胞分裂时的纺锤体形成，使处于增殖状态的细胞停止在中期。注射到动物活体内，可以增殖状态的细胞停止在中期。注射到动物活体内，可以增殖状态的细胞停止在中期。注射到动物活体内，可以增殖状态的细胞停止在中期。注射到动物活体内，可以收集到较多的中期分裂相的骨髓细胞。收集到较多的中期分裂相的骨髓细胞。收集到较多的中期分裂相的骨髓细胞。收集到较多的中期分裂相的骨髓细胞。3各行业4各行业n n实验目的与要求：实验目的与要求：1.熟悉小鼠骨髓细胞染色体制备方法。熟悉小鼠骨髓细胞染色体制备方法。2.了解小鼠染色体核型。了解小鼠染色体核型。3.认识秋水仙素对细胞增殖的作用。认识秋水仙素对细胞增殖的作用。n n器材与试剂器材与试剂n n内容与方法内容与方法（一）小鼠骨髓细胞染色体制备（一）小鼠骨髓细胞染色体制备预处理预处理预处理预处理取材，收集细胞取材，收集细胞低渗低渗固定、再固定固定、再固定滴片滴片染色染色5各行业v取材前23h，向腹腔内注射秋水仙素。注射浓度随动物种类不同而异。秋水仙素的主要作用是使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，增加中期分裂相的比例。 腹腔内注射秋水仙素腹腔内注射秋水仙素23小时后，颈椎脱臼小时后，颈椎脱臼处死小鼠处死小鼠。6各行业小白鼠骨骼标本小白鼠骨骼标本7各行业8各行业取出小鼠的后肢股骨，注意不要将股骨剪断，取出小鼠的后肢股骨，注意不要将股骨剪断，否则容易造成骨髓细胞的流失。否则容易造成骨髓细胞的流失。9各行业用纱布擦股骨上的肌肉组织，清除干净用纱布擦股骨上的肌肉组织，清除干净注射器抽取生理盐水冲洗骨髓注射器抽取生理盐水冲洗骨髓10各行业收集细胞：收集细胞：暴露骨髓腔，暴露骨髓腔，反复冲洗骨髓腔获得反复冲洗骨髓腔获得骨髓细胞，骨髓细胞，收集到离心管中收集到离心管中,定容至定容至6ml.11各行业滴滴23滴于玻片上，吹气，滴于玻片上，吹气，在酒精灯火焰过火在酒精灯火焰过火8次，次，做记号，凉干，染色做记号，凉干，染色滴片：滴片：滴片后，将片子侵入滴片后，将片子侵入滴片后，将片子侵入滴片后，将片子侵入GiemsaGiemsa染液缸中，染液缸中，染液缸中，染液缸中，10151015分分分分钟，弃去染液，水洗，晾干，镜检。钟，弃去染液，水洗，晾干，镜检。钟，弃去染液，水洗，晾干，镜检。钟，弃去染液，水洗，晾干，镜检。12各行业13各行业14各行业作业与思考题作业与思考题n n1、绘制一个你所观察到的小鼠骨髓细胞染、绘制一个你所观察到的小鼠骨髓细胞染色体中期分裂相。色体中期分裂相。n n2、本实验中秋水仙素、低渗液、固定液各、本实验中秋水仙素、低渗液、固定液各起什么作用？起什么作用？n n3、简述实验中应注意那些关键问题？、简述实验中应注意那些关键问题？15各行业（二）染色体标本片观察（二）染色体标本片观察1.标本片质量评价标本片质量评价（1）细胞密度合适、均匀；）细胞密度合适、均匀；（2）背景干净，细胞核和染色体清晰；）背景干净，细胞核和染色体清晰；（3）有较多的分裂相；）有较多的分裂相；（4）染色体分散较好。）染色体分散较好。16各行业细胞密度细胞密度细胞密度细胞密度17各行业染色体染色体分散度分散度18各行业2.染色体形态特征观察染色体形态特征观察19各行业3.染色体计数染色体计数（1001010010）151699+16+15=401082222+8+10=4020各行业4.细胞增殖指数统计细胞增殖指数统计细胞增殖指数细胞增殖指数=分裂细胞数分裂细胞数分裂细胞数分裂细胞数+间期细胞数间期细胞数100%21各行业实验三实验三 细胞器的观察细胞器的观察一、中心体一、中心体二、高尔基体二、高尔基体22各行业一、中心体（一、中心体（410）n n马蛔虫子宫横切片全貌马蛔虫子宫横切片全貌23各行业中心体（中心体（1010）24各行业中心体（中心体（4010）25各行业二、高尔基体（二、高尔基体（410）n脊神经节切片脊神经节切片26各行业高尔基体（高尔基体（1010）27各行业高尔基体（高尔基体（4010）28各行业高尔基体（高尔基体（4010）29各行业