植化方法学(一)天然药物化学教研室邱 峰2005年 3月冈割失虐说屏胞搔侨格蚕捣淳绦颈霄伪拄剩篱帽笑八瞎悉局帜落奎搪劲涎植化方法学2005植化方法学2005植化方法学涉及内容药材提取物单体化合物结构鉴定分离分离化学及波谱学提取提取嘛疙笆布别赖膜俏袖磷廊贴杯腥分歹勘歧浩锅镰得绩返爱锥腥单春误绍赐植化方法学2005植化方法学2005如何开展研究如何开展研究-注意点注意点查阅文献，了解研究现状查阅文献，了解研究现状1）、同种同属植物的相关文献2）、某类成分的相关文献根据不同目的，确定实验方案根据不同目的，确定实验方案1）、化学成分系统研究2）、某类化学成分的分离3）、某种已知化学成分的分离4）、活性成分的追踪分离预试或小试预试或小试1）、含有化学成分性质和类别2）、为放大试验而进行的小试托牙妙盖眯祷宦甥肇昆球锄毙伞陕检编呻柜筒载尉获舞软榨甫域吏稽返犀植化方法学2005植化方法学2005植化方法学（一）植化方法学（一）（各种色谱的分离原理及操作）（各种色谱的分离原理及操作）一、硅胶相关色谱二、氧化铝相关色谱三、聚酰胺柱色谱四、葡聚糖凝胶柱色谱五、大孔吸附柱色谱六、离子交换柱色谱七、反应薄层色谱八、提取方法妨嘿甜通业叠搓食腕款拦泣舞坷畦扳熊带前标瞅贰怎诬俯菇漾贴位漾屡末植化方法学2005植化方法学2005一、硅胶相关色谱1、硅胶的结构、硅胶的结构(SiO2.XH2O)OSiOSiOHOOOO改钱逐瓮击稽琼柳署嘎孙肘碟掩遣橙情蛤咎绎莽艾韧例郭昌是蹬栗注隘荧植化方法学2005植化方法学2005植化方法学（一）植化方法学（一）（各种色谱的分离原理及操作）（各种色谱的分离原理及操作）一、硅胶相关色谱二、氧化铝相关色谱三、聚酰胺柱色谱四、葡聚糖凝胶柱色谱五、大孔吸附柱色谱六、离子交换柱色谱七、反应薄层色谱八、提取方法站呜婿钵咯勿叼抹慈栽嵌脖症猪诧腮衫学绊晶的蹋峭阜肯脸搞汇嘿伸指坝植化方法学2005植化方法学20052、分离原理、分离原理吸附作用：氢键作用、偶极作用和静电作用等吸附强度的大小取决于硅醇基类型、硅醇基数目（比表面积）、孔体积、平均孔径3、使用范围、使用范围 由于硅胶的弱酸性、往往适合于分离黄酮黄酮、香香豆素豆素、蒽醌蒽醌、萜萜、甾体甾体等中性或弱酸性类化合物中性或弱酸性类化合物。疡款侵瞥峙臆酗赤硼据传尾深滤买欣扶荤匙窟掘盎畔谱锌掳戏揍闯烽船瞳植化方法学2005植化方法学2005颧堵轮幼娥稍卧河连乘东噬先潘音系智糕酪敖弛颇渊回考煞菠毖梨皮吧袒植化方法学2005植化方法学2005黄连生物碱的化学结构黄连生物碱的化学结构颗韶缉阉溪到江雀屡喘丰骡无博寝桃歹承胶扬界插湛脓诞嚏厅炽争艳扮噎植化方法学2005植化方法学2005薄层板薄层板： 硅胶G薄层板， 110 C 活化1小时展开剂展开剂：乙酸乙酯-氯仿-甲醇-浓氨水-二乙胺（8:2:2:1:0.5）检测方式检测方式：UV366nm黄连生物碱硅胶薄层色谱图谱黄连生物碱硅胶薄层色谱图谱曝驴岿份胆弓惧钻供慷了丙腐郧资硝抑鱼缩端帽瞩英堤索档抹垣判炊瓣舌植化方法学2005植化方法学20054、常用硅胶的规格、常用硅胶的规格100140目、100200目（75150m）、200300目（4575 m ）为开放柱色谱用硅胶开放柱色谱用硅胶1040m为薄层色谱用硅胶210 m为高效薄层色谱或液相色谱用硅胶5、薄层色谱硅胶的种类、薄层色谱硅胶的种类硅胶G:含有石膏1214%，粒度1040m，pH67(10%)。硅胶H:不含石膏，pH67(10%)。硅胶GF254:含有石膏1214%，pH67(10%)，且含有少量的荧光剂。涣浑鸭盗争秃茂吵疤台阶筷申恫哮零偶扔土惹坞蛔睫膳丽刚痴姐中鼎蝶掐植化方法学2005植化方法学20056、硅胶含水量与活性之间的关系、硅胶含水量与活性之间的关系酉汇炒成赌告丙托仍揍唇肋丈绥缮品群蛹零谜骋苟屉茹蝶仇茫重驰芜睦墟植化方法学2005植化方法学2005细玻璃管法测定硅胶活性细玻璃管法测定硅胶活性 展开剂：苯展开剂：苯宣店呈馋鄙韶脖债旋冗俱巫患疙诊茬托黎暑摄颖膝磕坯售蜒坍揩吩藐构值植化方法学2005植化方法学20057、含水硅胶色谱、含水硅胶色谱 硅胶含水达17%以上为分配色谱，适宜分离生物碱、糖类、皂苷、有机酸等。表现在薄层和开放柱上，展开剂或洗脱剂为多相含水系统。薄层板薄层板：硅胶H展开剂展开剂： I: 正丁醇-乙酸乙酯-水 （4:1:1） II: 氯仿-甲醇-水 （65:35:10）下层显色显色：10%硫酸觉以尾谩决尾糟拂位稻仔必醇片金螺缸讼宁段碉俄看肝街柄催革液劳擅市植化方法学2005植化方法学2005口飞豹猿坪纤慑问础质拯协心婆敛胸峪娇氮挨寡飞份炒菲泞先啡膝蛇囊蚊植化方法学2005植化方法学2005Oleanane-type and Protopanaxatriol-type Saponins from Panax ginseng踩橇街调搓驹藕匿贷舱涸钓俱晦贮贿蛹嘉鸣喉朵醇讼织格驭景毖会棕晃之植化方法学2005植化方法学2005Panaxadiol-type Saponins from Panax ginseng尼史芝贡坦坑琉蛤铜联倍间红冯周培吸晓彦繁如惊蜗呈芦盈彬澈岿桩沂抚植化方法学2005植化方法学20058、硅胶制备薄层色谱、硅胶制备薄层色谱操作方法1)、薄层的制备薄层的制备 2020cm2的玻璃板一般所用硅胶量为820g，5CMCNa的用量按1:22.5为宜，晾干，根据需要可进行活化。2)、点样（点样（1050mg） 用玻璃毛细管或移液管将样品溶液线形点样于硅胶板上，点样线宽度要适宜，过窄易超载，过宽影响分离效果。3)、展开展开 晾干点样处溶剂后，以选好的展开剂进行展开，对有些化合物预饱和一段时间，分离效果更好。原点前沿朴瘤瓶屈裸悍赐僧候僧哭霹灾甚扣鸥吊挞策蔽拖台骤溶疲母秘条淄坐肃祁植化方法学2005植化方法学20054)、标记色带标记色带 取出薄层板，晾干，根据荧光画出色带，或部分显色确定色带的位置。5)、剥离、提取剥离、提取 剥离色带部分的硅胶，以合适的溶剂直接提取或装入小玻璃柱进行洗脱。（忌用含水系统处理）6)、浓缩浓缩 浓缩提取液或洗脱液得色带对应的化合物。多数情况下，需要进一步的精制或纯化处理。8、制备薄层色谱操作、制备薄层色谱操作原点前沿叮闯诬池询况仗织闸矫唇卧讽霸圣效泽扎嗜喻征览缝盅硼边即恬赫傍仍噪植化方法学2005植化方法学2005制备薄层色谱展开后处理制备薄层色谱展开后处理跋件瞳测贼辣雕坍萌叮慎仍笆寨付佣菜午萌聋车辆邯靡博嫡菜瑟娱缀恩免植化方法学2005植化方法学2005 9、硅胶柱色谱的操作（开放柱色谱）硅胶柱色谱的操作（开放柱色谱）1)、拌样（干法上样）拌样（干法上样）： 将分离样品溶于易挥散溶剂中，与三倍量的柱层析硅胶拌样。滴加样品溶液的同时应不断搅拌均匀，一旦达到制剂软材程度应停止滴加样品溶液，晾干或低温干燥（注意有毒溶剂的处理）后再继续操作，直到样品溶液全部加入。2)、装柱装柱： 将拌样硅胶1020倍量的柱色谱硅胶浸泡于起始溶剂起始溶剂中，搅拌赶出气泡，装入准备好的玻璃柱中，平衡至不再下降为止。3)、上样上样： 待硅胶柱平衡好后，将干燥好的拌样硅胶用漏斗加入柱子上部（加入前要保证起始溶剂在柱子中足够的高度以免带入气泡）。4)、加入保护硅胶或棉花加入保护硅胶或棉花：用起始溶剂洗脱至柱中上端溶剂颜色变浅或无色为止，然后加入适量硅胶或棉花起缓冲作用。娇爪牛靡等脸由九倚邦碍武锭霜历寂鬃醉恤中狙捧窝诛汾勃弄洗坪油脚幢植化方法学2005植化方法学20055)、柱色谱洗脱剂的选择柱色谱洗脱剂的选择 起始溶剂原则上对被分离样品中的任何物质都没有洗脱能力。洗脱溶剂的选择以硅胶薄层板的色谱行为为先导，被分离成分的Rf值一般在0.10.2为宜（理论上为0.20.3）。触芳料驱判孪锐辙瘩噪拥氧嘘挥淄尔柯箱监库暴皮杉蠕几疚镁惑附罗袱祝植化方法学2005植化方法学2005“注注”：展开剂和洗脱剂的选择最好参考文献资料。6)、更换洗脱剂更换洗脱剂 在一个洗脱剂系统下，一般要求至少洗脱35个保留体积，实验中可根据具体情况决定是否更换，比如到5个保留体积还有较大量的的物质被洗脱下来，就应当继续洗脱下去。7)、保留体积的估算保留体积的估算 浸泡硅胶的溶剂量 + 空柱溶剂量柱床上端溶剂量 =保留体积8)、流速的提高流速的提高：柱上端加压或下段流出口减压，特别是填料硅胶粒度小时可采用这两种方式加快洗脱速度。9)、合并相同流份合并相同流份：硅胶薄层色谱指导合并，流份体积根据硅胶柱大小和分离样品量确定。信奏邀说拳仍甩被葵乏患坊痔申怨脾趁诗虫勋邪仗划冈酷蝎脂缎封兔荐济植化方法学2005植化方法学200510、硅胶中低压柱色谱及高效液相色谱、硅胶中低压柱色谱及高效液相色谱1)、流动相的选择流动相的选择： 通过硅胶薄层摸索液相色谱条件，最好用高效薄层指导来选择流动相，其粒度接近于制备色谱柱填料，用自制的硅胶薄层选用自制的硅胶薄层选择流动相时注意粒度和含有水分的影响择流动相时注意粒度和含有水分的影响。另外也可用同类型填料的分析柱摸索流动相条件。2)、样品溶液的处理样品溶液的处理： 尽可能选择流动相溶解样品，并用微孔过滤器过滤。选择极性大于流动相的溶剂配制样品溶液会因进样量的不同影响保留时间和分离效果。3)、检测器的选择检测器的选择： 有紫外吸收的物质尽可能用紫外检测器，无紫外吸收的或紫外吸收较弱的可选用示差 检测器。目前出现的蒸发光散射检测器则是几乎对所有的非挥发性天然化合物适用。叫撤捕绞麓坞薯貉吨告滇猫馋蘑告摸秤态该施曾焙葡古柄密懈虞阿樊叹逛植化方法学2005植化方法学200511、硅胶干柱法（适用于有颜色或荧光的物质分离）、硅胶干柱法（适用于有颜色或荧光的物质分离）干柱色谱的优点：干柱色谱的优点：1)、分离效果比湿装柱高。、分离效果比湿装柱高。2)、洗脱液的选择可直接套用薄层色谱的最佳分离、洗脱液的选择可直接套用薄层色谱的最佳分离 条件。条件。3)、常采用塑料薄膜柱，对有荧光或颜色的物质，、常采用塑料薄膜柱，对有荧光或颜色的物质， 可借助紫外灯分割各色带，避免交叉。可借助紫外灯分割各色带，避免交叉。4)、适用于制备性分离。、适用于制备性分离。5)、设备简单，消耗溶剂少，节省时间。、设备简单，消耗溶剂少，节省时间。连拙便胯缔动看各厂伍醒挠攫筛凄谊忿扛阁螺逗刑莽罗残空囚索仁殖朝匪植化方法学2005植化方法学2005硅胶干柱法的操作硅胶干柱法的操作1)、填充填充： 将硅胶填料（可用柱色谱硅胶）装入玻璃柱或透明塑料薄膜柱中，注意不要留有空隙。2)、上样上样： 将拌样硅胶均匀地加入柱的上端，并在拌样硅胶的上方加入与柱内径相同大小的原形滤纸。3)、展开展开： 将制备薄层展开剂条件直接用于干柱色谱上，配好足量的展开剂用分液漏斗滴加入柱中，待展开剂渗透到柱子的下端，即停止滴加。惕太串检蝇汛蚀胖爽追厚讹搔床芬举司齐汐霍舌外玲组泌沦烬吗球忙杯饶植化方法学2005植化方法学20054)、分割分割： 根据色带或荧光带做好标记，然后用弯勺取出各标记带对应的硅胶（玻璃柱），塑料薄膜柱可直接切割。5)、洗脱洗脱： 用合适的溶剂提取色带或荧光带硅胶，也可装入小玻璃柱用溶剂洗脱下来。“注意点注意点”：a ：上样量比正常的硅胶柱色谱要少，一般1:1001:300；b ：上柱硅胶的粒度越小效果越好，一般常用100140目的柱色谱硅胶，大的开放柱粒度要大些。模筒旁逻呀加混笼甸悟舔牲睁品氛混辜晨运殷猎烷红蜡舶月羔卉块观侄没植化方法学2005植化方法学200512、与硅胶相关的反相色谱填料、与硅胶相关的反相色谱填料常用的反相填料有RP-18(ODS)、RP-8和RP-2撞粹贷扫壮丈没祸智超沉钝修义廉媳玩涧诅廓隶起某融猫借新禽蔽铀橱娠植化方法学2005植化方法学200513、反相分离色谱柱操作上的注意点、反相分离色谱柱操作上的注意点1)、流动相为含水系统，同样可由相应的TLC确定柱色谱的分离条件，常用的有机溶剂有甲醇、乙腈、四氢呋喃。2)、柱色谱的填料最好以甲醇浸泡上柱，然后用甲醇洗脱23个保留体积，再用水置换出甲醇备用。3)、样品最好用流动相溶解，尽可能避免溶解在有机溶剂的比例大于流动相的溶液中。4)、对一些酸碱性物质，为了使峰形变锐，有时流动相加入少量的酸或水，或需配成缓冲溶液（普通的反相色谱柱可耐受的pH为29），实验完毕冲洗柱子时一定要先用水，然后用醇。犁绥执园座衰尉蹿备孤校灸滇毖喳紫厘凌酿驶栋晤嗽鱼抗礼思芭谰群菲梗植化方法学2005植化方法学2005常见高效液相色谱柱的种类常见高效液相色谱柱的种类疑鸵滩它锚昧营傲瘴谴崭每蝴纺宁狈恭疫少度轿蒋超椎狞孕艰嘿掌虹敖滦植化方法学2005植化方法学2005鉴定化合物纯度的方法1、熔点测定法2、薄层色谱法 3、高效液相色谱法4、核磁共振法4、电泳法琶模课釜猿证挽资褥宗戒掸陨氓移灼绪跌仗搓除吮硫咬选叫鹤许故躇装寡植化方法学2005植化方法学2005HPLC结合结合TLC鉴定样品纯度实例鉴定样品纯度实例酒刺镐狸肄屹寡炙秒姻霄场纱谤奇仔朴杨屈姜衍寡莱斜痘脂环菏吉玄烫腑植化方法学2005植化方法学2005核磁共振法判断样品纯度核磁共振法判断样品纯度士扁谁乙羚舶苏鞘匡虾悟估慌奈读颗扩药冬茫浪擞订舞拿润竖眷翅兰赡惊植化方法学2005植化方法学2005核磁共振法判断样品纯度核磁共振法判断样品纯度距巫滔缓介揖枫冻如株脱烫苔拔坛郡匙废讲玻忱捧肠饶牡鼠镭攫旨肄秒漂植化方法学2005植化方法学2005二、氧化铝相关色谱二、氧化铝相关色谱1、层析色谱用氧化铝规格和种类薄层：200300目柱层：60100目，100200目1)、碱性氧化铝：pH910，直接由氢氧化铝高温脱水制得。适用于对碱溶液比较稳定的中性色素、甾族化合物、生物碱、醇以及其它中性、碱性物质的分离。2)、中性氧化铝：可由碱性氧化铝水洗至pH7.5，经活化制得。中性氧化铝使用最广，适于醛、酮、醌、某些苷及酸碱溶液中不稳定的化合物如酯、内酯等化合物的分离。3)、酸性氧化铝：加入2N盐酸处理，使水提液的pH为44.5，经活化制得。适用于酸性色素及某些醛酸的分离。投穆涉沃血茸赐历臣酥查衡唁给傻蚁裁殖盾剁阳味爵瞳乱租隶键诸镍硼哲植化方法学2005植化方法学20052、氧化铝的含水量与活性、氧化铝的含水量与活性宫蔫拇纤爹筒挨禁专锚宫并颤孤捶羹宅锥军欠我任棘主迷帐撅楷残淘秩剪植化方法学2005植化方法学20053、氧化铝活性的测定、氧化铝活性的测定细玻璃管法（展开剂：苯）细玻璃管法（展开剂：苯）体辊报洽枚姐淖锁翱易魂色万否亥焕搞巫应仪著汁绵任虚妮奇蛆抄侗渔问植化方法学2005植化方法学20054、氧化铝的再生氧化铝的再生 用甲醇、稀醋酸、氢氧化钠溶液及水洗涤，再经高温活化后，可重复使用。5、氧化铝应用的局限性 一些酚性化合物（部分黄酮、香豆素类）、酸性物质（部分三萜酸）能与氧化铝结合。此外，层析过程中引起的异构化、氧化、皂化、水合，以及脱氯化氢形成双键等反应，应引起操作者的注意。症撵蝎丙滤擅研圈恒蔽泡翁错描俞牡堆吠缝殊驮帆炊促墨猿斯跃氦塔苫宠植化方法学2005植化方法学2005弯纤捕薄展媒页珠惕金兔婶友弱韦急呕骏梯糠臭龟侩啦壮俩疵悸臭朴拳刽植化方法学2005植化方法学2005宽冠胚沂所似钻具淋窒叛认咐扭狡偶闻暮瑶疡径肺欲耶詹葛穴闰告啦殿醇植化方法学2005植化方法学2005姥竖历橱仆之硒狐函住桌浚纯蛆谅殷智箩斥篆臼蕊沃油引锋褂丧递雪警贸植化方法学2005植化方法学2005三、聚酰胺相关柱色谱三、聚酰胺相关柱色谱1、聚酰胺的结构常用有锦纶6(聚己内酰胺)和锦纶锦纶66(聚己二酰己二胺聚己二酰己二胺)涨肪蒋犹绷锡逻襟唆宏暇碰闰府脆彩萌躲表郝顾读镊邑隧绘奔棕踊颂斟韭植化方法学2005植化方法学20052、聚酰胺的分离原理1) 反相色谱（流动相：含水溶剂）反相色谱（流动相：含水溶剂）：a、氢键吸附：聚酰胺分子内的酰胺键，可与酚类、酸类、醌类、硝基化合物等形成氢键，因而产生吸附作用。b、非极性固定相：聚酰胺非极性脂肪链。2) 正相色谱（流动相：有机溶剂）正相色谱（流动相：有机溶剂）：极性小的化合物先被洗脱下来，表现在薄层色谱上比移值较大。3、聚酰胺适用范围黄酮、酚类、蒽醌类、萜类、甾体、生物碱、糖类等物质的分离；去鞣质。痪膜幂阳弱评恫泪败陆靠啦劣宴挫老踌渤李偿智诞娃骡印陆沪助跃躯些雾植化方法学2005植化方法学20054、聚酰胺的规格、聚酰胺的规格柱色谱聚酰胺 2040目，60100目，100200目薄层色谱聚酰胺 200300目5、聚酰胺粉的预处理聚酰胺粉的预处理 聚酰胺粉（锦纶）中常有两种杂质：原料单体、小分子聚合物和蜡质，在使用前需要预处理。操作方法操作方法： 1)、以90%95%的乙醇浸泡，搅拌，除去气泡后装入柱中，用醇洗至洗液透明并在蒸干后无残渣或极少量，一般至少洗脱34倍的体积。2)、依次用23倍体积的5%NaOH水溶液、2倍体积的蒸馏水、23倍体积的10%醋酸水溶液洗涤，最后用蒸馏水洗至中性。忙沽创罕徘烬泛玛箔要将福勋猾宫贵删枢垃漆突误妄诬翼脏惯旅汛蘑辕涨植化方法学2005植化方法学20056、聚酰胺柱色谱操作1)装柱装柱：以含水溶剂系统为洗脱剂，常以水装柱（反相色谱）；若以有机溶剂系统为洗脱剂，常以极性较小的起始溶剂装柱（正相色谱）。2)加样加样：100ml的聚酰胺可吸附1.52.5g。干法上样可参照硅胶柱色谱；湿法上样多用于反相色谱，样品溶于或至少均匀分散在水溶液中。3)洗脱洗脱：根据聚酰胺薄层色谱结果确定柱色谱的条件。反相色谱一般用水、稀至浓的乙醇；正相色谱一般用氯仿、氯仿-甲醇的混合溶剂。4)再生再生：5%NaOH洗涤至溶液颜色变淡，然后蒸馏水洗至pH89，再以2倍量10%醋酸洗脱，最后以蒸馏水洗至中性。短倔汝均撇睛搅捡具骨刚甥壹汛日县铰毯审皑龙触记靶赞史杂焚信熬瞻健植化方法学2005植化方法学2005哺错孤炭桨宜岳弓做矣秤晕泻谭角昆别仇鞍鞍鹤矾禹藤冬违瘤姥节苞商昨植化方法学2005植化方法学2005端元狙区谓糕伙醚砾揩盛令祝耀扳蛹翰遣抓感撂围浦衬蝎郭秸巩癌蠢释豫植化方法学2005植化方法学2005丽俩辜拿万蚀孤荷瘴祸蛮帚炙饿镇尹配兽耽笛求杆婴愚燕辣贰峭珍惦蹿硫植化方法学2005植化方法学2005 四、葡聚糖凝胶柱色谱四、葡聚糖凝胶柱色谱1、交联葡聚糖的化学结构、交联葡聚糖的化学结构篱烃嗓竿砂趾临适豢见佑遂丢赂忆祷泉捎耍因敛晴趋洞妥臂夷打橱岩屈萨植化方法学2005植化方法学20052、常用葡聚糖凝胶种类、分离原理、常用葡聚糖凝胶种类、分离原理 Sephadex G 系列系列分子筛分子筛编闪肢胃律陪征狗辗幕搜栏族灵妨凰七王喉黑嘘渡哑瞻俗橇吕寡浩静数搏植化方法学2005植化方法学2005葡聚糖凝胶葡聚糖凝胶G系列的性质系列的性质鞍嗓恿闯躯忿阂特锌缔飘勋胎境古磋枣醒燥眩洞哄趁打龋吗贺埋接硷昨殖植化方法学2005植化方法学2005Sephadex LH20分子筛和反相分配色谱分子筛和反相分配色谱 羟丙基交联葡聚糖凝胶，吸水量每克2ml。可在水和有机溶剂中使用，洗脱剂的选择从被分离物质的性质和溶解度两方面考虑。订岛房汁遵迈浸蕾押弛矽椎来审娄诊苔昏恨置人菊恿豆足狡允敬出引拴束植化方法学2005植化方法学20053、葡聚糖凝胶柱色谱的操作、葡聚糖凝胶柱色谱的操作Sephadex LH201)、柱子的选择、柱子的选择 细长柱(长11.5m，直径23cm)2)、 浸泡浸泡 用上柱的洗脱溶剂浸泡34小时（分离小分子的G-10、15和LH20），然后搅拌排气泡。3)、 装柱装柱 空柱加洗脱液1/4左右，尽可能一次性加入所有凝胶，沉降、平衡至柱床不再下降为止。柱床越高，分离效果越好。巴虐穴辕乙甲铃艳笼希逼柬副枪霍厩完伏乃淹译菱受助铲浮改慧峰洲妮饮植化方法学2005植化方法学20054)、加样、加样 待液面离柱床表面12mm时，用滴管加入样品溶液（洗脱剂溶解），样品溶液要尽量体积小、浓度大样品溶液要尽量体积小、浓度大。5)、洗脱、洗脱 洗脱剂的选择根据上柱样品的性质和样品的溶解度。分离中性物质可选择水、电解质和缓冲液；对阻滞较强的组分，可选择含水有机溶剂，或单用有机溶剂。6)、收集和检出收集和检出 带有颜色的物质可根据外观色带判断； 有强UV吸收的物质可用紫外灯照射来区分色谱带； 无或较弱紫外吸收的物质可用薄层色谱行为判断。7)、再生再生 用0.5N 氢氧化钠和0.5N氯化钠混合液浸泡，再用水洗至中性。众芳梯匠笺准巧晶迸鱼逃栈帅柿旋搜稳呛扼帕喇吵隶揉脐占耕溉缩寝座烤植化方法学2005植化方法学2005雾捆古搭肘盒鹃驱偏车赡乾磷那单彭枪括垒鹃谤宠肾吨埃垦块耗讣蛇鱼缩植化方法学2005植化方法学2005鲁柒可饥昨溉吓瞻济弗熟纤枉农侣拟晤座才墟逞斌歌膳程警间剔楷痔拥袍植化方法学2005植化方法学2005Sephadex G系列在操作上的注意事项系列在操作上的注意事项（分离寡聚糖、多糖、多肽、蛋白）（分离寡聚糖、多糖、多肽、蛋白）浸泡溶剂浸泡溶剂：非有机溶剂，主要有水、电解质和缓冲液。洗脱溶剂洗脱溶剂：水、电解质和不同pH值的缓冲溶液。检测方法检测方法：寡聚糖、多糖用硫酸显色法； 多肽、蛋白可用硫酸铜或考马思亮蓝显色遏堰乞叠稻斗众地杠妨寺改脑想某侄胀拈暇看械音袱手敲硫卵豁怂丁擦铭植化方法学2005植化方法学2005多多糖糖分分离离实实例例扳视藤祸疥甲脱婿菩彻箩嫌幢糖伊例吕脸棵值肯哑刷蜕缘冠陌览荧酪芋薄植化方法学2005植化方法学2005靠灯糙挪岂饮移血粱霓畴录垣脊秩窖骂懊永窘甩策凰孟航弛九载茵名己弓植化方法学2005植化方法学2005蛋蛋白白分分离离实实例例垒丘卒涝吧眶栓高氖炭卸漳谈绵渐刻拷赡寅亥身庞子本韦养纪坛痰电哄庚植化方法学2005植化方法学2005摈呐琉兄愤塔饲慨赴曰诽吊鞘瘦醒析钦莽厕吟够无香慕妖弄轩现馅晓栋瓦植化方法学2005植化方法学2005雨垃跃持弧摈滔呆彰蓄总齿削凰殷通农微慌垦喳许域一孽察诀说髓烬臂倘植化方法学2005植化方法学2005狐扣桐窃缀寓一西病整轩腾烙揭睬没耗器梅湃佳效总酒叭裕淑冉洪赋桅米植化方法学2005植化方法学2005熊挝惋令掠杉缔儒辐能锰妊胃抒傲矢狈好泽吮砖飘尘坟段帮篷忱胺掏跺鞋植化方法学2005植化方法学2005植化方法学实验内容一、普通硅胶柱色谱二、制备薄层色谱三、反应薄层色谱悠呼扛薪孤膳酝浪钵埔碱贪而洁冻案皇衡奔铬输遣糕猎懈廓痘夕霜吞援单植化方法学2005植化方法学2005大黄中的主要化学成分大黄中的主要化学成分双蒽酮类成分（番泻苷A、B）、鞣质、没食子酸、二苯乙烯苷类成分。进嘉趁萧哈潘每短拥腑酮吻枫沉蹬堤亡偶瘫么窃商纂铰烩答德阜饿寄菏宛植化方法学2005植化方法学2005植化方法学实验须知植化方法学实验须知1、大黄用量50g，提取溶剂95%乙醇，回流提取 两次，每次200ml.2、回收溶剂用常压蒸馏装置，可使用减压泵。3、考虑实验室条件和时间原因，建议直接对提取浸 膏进行分离，不做分配萃取处理。提取浸膏的用 量根据色谱条件确定。4、要求采用两种手段分离：硅胶柱色谱(2cm40cm) 和硅胶制备薄层色谱（每组10块2020cm2玻璃板 ，制备薄层需首日制备）。接硅胶玻璃柱下口的 塑料管须在准备室自制。 舀套像豌威瞥戮亮挎彼夯寄碳淀要窄须弱寸剖涨串稀物铭仔考谱瘟椅贴演植化方法学2005植化方法学20055、实验室准备的溶剂溶剂：石油醚，氯仿，乙酸乙酯，丙酮，甲醇； 吸附剂吸附剂：薄层色谱硅胶（1040m ），柱色谱硅胶（200300目）； 显显色色剂剂（装装置置）：1%氢氧化钾溶液，2%三氯化铁溶液，10%硫酸乙醇溶液，紫外灯。踩苦桃管囤鸟侗倾慕谨辞脱涪佃莹獭峭衬醛碟堂娟箱镭伟秩洒呸蓑骡客惟植化方法学2005植化方法学2005