免疫学应用免疫学应用 第一节第一节 免疫学防治免疫学防治一、免疫预防一、免疫预防n n特异性免疫获得的方式有特异性免疫获得的方式有 自然免疫自然免疫 主动免疫主动免疫 被动免疫被动免疫 主动免疫主动免疫 人工免疫人工免疫 被动免疫被动免疫 过继免疫过继免疫 ( (一一) )人工主动免疫：人工主动免疫： 是是给给机机体体接接种种疫疫苗苗或或类类毒毒素素等等抗抗原原物物质质，刺刺激激机机体体产产生生特特异异性性免免疫疫应应答答而而获获得得免免疫疫力的方法，也称预防接种。力的方法，也称预防接种。 人工主动免疫常用的生物制剂人工主动免疫常用的生物制剂 n n1 1、死疫苗、死疫苗n n 通过理化方法将病原微生物杀死而制通过理化方法将病原微生物杀死而制成的制剂，又称成的制剂，又称灭活疫苗灭活疫苗。如霍乱、流脑、。如霍乱、流脑、乙脑等疫苗。乙脑等疫苗。 n n2、活疫苗、活疫苗 用人工变异或直接从自然界筛选出用人工变异或直接从自然界筛选出来的毒力高度减弱或基本无毒的活病来的毒力高度减弱或基本无毒的活病原微生物制成的试剂，又称原微生物制成的试剂，又称减毒活疫减毒活疫苗苗。如。如卡介苗、麻疹疫苗、风疹疫苗、卡介苗、麻疹疫苗、风疹疫苗、脊髓灰质炎疫苗、流行性腮腺炎疫苗脊髓灰质炎疫苗、流行性腮腺炎疫苗等。等。 n n 死疫苗和活疫苗的比较死疫苗和活疫苗的比较 项目项目项目项目 死疫苗死疫苗死疫苗死疫苗 活疫苗活疫苗活疫苗活疫苗 制剂特点制剂特点制剂特点制剂特点 死、强毒死、强毒死、强毒死、强毒 活、弱毒或无毒活、弱毒或无毒活、弱毒或无毒活、弱毒或无毒 接种剂量接种剂量接种剂量接种剂量 较大较大较大较大 较小较小较小较小 接种次数接种次数接种次数接种次数 2 2 3 3次次次次 1 1次次次次 接种后反应接种后反应接种后反应接种后反应 反应较大反应较大反应较大反应较大 反应较小反应较小反应较小反应较小 保存及有效期保存及有效期保存及有效期保存及有效期 易保存，易保存，易保存，易保存，1 1年年年年 不易保存，不易保存，不易保存，不易保存，44数周数周数周数周 免疫效果免疫效果免疫效果免疫效果 较差，维持数月较差，维持数月较差，维持数月较差，维持数月 较好，维持较好，维持较好，维持较好，维持3 3 5 5年年年年 n n3 3、类毒素、类毒素 将细菌外毒素经将细菌外毒素经0.30.30.40.4甲醛甲醛处理，使其毒性消失而保留免疫原性。处理，使其毒性消失而保留免疫原性。 如破伤风类毒素、白喉类毒素等。如破伤风类毒素、白喉类毒素等。 百、白、破三联疫苗百、白、破三联疫苗n n4 4、新型疫苗、新型疫苗（1 1）亚单位疫苗）亚单位疫苗 （2 2）合成肽疫苗）合成肽疫苗（3 3）结合疫苗）结合疫苗 重组抗原疫苗重组抗原疫苗（4 4）基因工程疫苗）基因工程疫苗 重组载体疫苗重组载体疫苗 DNADNA疫苗疫苗 转基因植物疫苗转基因植物疫苗（二）人工被动免疫（二）人工被动免疫 是给机体输入抗体，使机体获得特异性免疫力。可立即获得，但免疫维持时间短，2-3周，多用于治疗或紧急预防。 1、抗毒素 是抗细菌外毒素的抗体。多为马血清制剂。 具有双重性2 2、人免疫球蛋白制剂、人免疫球蛋白制剂 （1 1）人丙种球蛋白人丙种球蛋白：从正常人血浆：从正常人血浆或健康产妇胎盘中提取制成。或健康产妇胎盘中提取制成。 （2 2）人特异性免疫球蛋白人特异性免疫球蛋白：来源于：来源于恢复期病人及含高价特异性抗体供血恢复期病人及含高价特异性抗体供血者血浆，或接受类毒素和疫苗免疫者者血浆，或接受类毒素和疫苗免疫者的血浆。的血浆。3 3、细胞因子与单克隆抗体、细胞因子与单克隆抗体（三）计划免疫（三）计划免疫n n有计划地进行人群免疫接种，以提高有计划地进行人群免疫接种，以提高人群免疫水平人群免疫水平n n我国推荐的儿童免疫程序我国推荐的儿童免疫程序 年年年年 龄龄龄龄 疫疫疫疫 苗苗苗苗 年年年年 龄龄龄龄 疫疫疫疫 苗苗苗苗出生时出生时出生时出生时卡介苗、乙肝疫卡介苗、乙肝疫卡介苗、乙肝疫卡介苗、乙肝疫苗苗苗苗8 8个月个月个月个月麻疹疫苗麻疹疫苗麻疹疫苗麻疹疫苗2 2个月个月个月个月三价脊髓灰质炎三价脊髓灰质炎三价脊髓灰质炎三价脊髓灰质炎疫苗疫苗疫苗疫苗1 11.5-21.5-2岁岁岁岁百白破百白破百白破百白破4 43 3个月个月个月个月三价脊髓灰质炎三价脊髓灰质炎三价脊髓灰质炎三价脊髓灰质炎疫苗疫苗疫苗疫苗2 2，百白破，百白破，百白破，百白破1 14 4岁岁岁岁三价脊髓灰质炎三价脊髓灰质炎三价脊髓灰质炎三价脊髓灰质炎疫苗疫苗疫苗疫苗4 44 4个月个月个月个月三价脊髓灰质炎三价脊髓灰质炎三价脊髓灰质炎三价脊髓灰质炎疫苗疫苗疫苗疫苗3 3，百白破，百白破，百白破，百白破2 27 7岁岁岁岁卡介苗、麻疹疫卡介苗、麻疹疫卡介苗、麻疹疫卡介苗、麻疹疫苗、百白破三联苗、百白破三联苗、百白破三联苗、百白破三联疫苗疫苗疫苗疫苗5 5个月个月个月个月百白破百白破百白破百白破3 31212岁岁岁岁卡介苗（农村）卡介苗（农村）卡介苗（农村）卡介苗（农村） 二、免疫治疗二、免疫治疗n n（一）治疗性疫苗（一）治疗性疫苗 1.1.微生物抗原疫苗微生物抗原疫苗 2.2.细胞疫苗细胞疫苗 3.3.分子疫苗分子疫苗n n（二）抗体（二）抗体n n（三）细胞因子（三）细胞因子n n（四）过继免疫治疗和造血干细胞移植（四）过继免疫治疗和造血干细胞移植n n过继免疫治疗：过继免疫治疗：是指给患者转输具有在是指给患者转输具有在体内继续扩增效应细胞的一种疗法。体内继续扩增效应细胞的一种疗法。n n 如：给免疫缺陷患者转输骨髓细胞如：给免疫缺陷患者转输骨髓细胞 给肿瘤患者转输特异肿瘤浸润淋巴给肿瘤患者转输特异肿瘤浸润淋巴细胞（细胞（TILTIL）或）或 非特异性的淋巴因子激非特异性的淋巴因子激活的杀伤细胞（活的杀伤细胞（LAKLAK）造血干细胞移植：造血干细胞移植：用患者自身或健康人的用患者自身或健康人的造血干细胞移植回输给患者，让干细胞造血干细胞移植回输给患者，让干细胞在患者体内定居、分化、增殖，使其恢在患者体内定居、分化、增殖，使其恢复造血能力和免疫力。复造血能力和免疫力。常用脐带血常用脐带血n n（五）生物应答调节剂和免疫抑制剂（五）生物应答调节剂和免疫抑制剂1、免疫增强剂（免疫增强剂（IPAIPA）：）：是增强、促进和调节是增强、促进和调节机体免疫功能的生物或非生物制剂。主要用于机体免疫功能的生物或非生物制剂。主要用于恶性肿瘤、免疫缺陷病和传染病的辅助治疗。恶性肿瘤、免疫缺陷病和传染病的辅助治疗。 免疫增强剂只对免疫功能低下者起作用免疫增强剂只对免疫功能低下者起作用免疫增强剂分类免疫增强剂分类 分分分分 类类类类 举举举举 例例例例细胞因子制剂细胞因子制剂细胞因子制剂细胞因子制剂 IL-2IL-2、TNFTNF、IFNIFN微生物制剂微生物制剂微生物制剂微生物制剂卡介苗、短小棒状杆菌、脂磷壁酸卡介苗、短小棒状杆菌、脂磷壁酸卡介苗、短小棒状杆菌、脂磷壁酸卡介苗、短小棒状杆菌、脂磷壁酸化学药物化学药物化学药物化学药物左旋咪唑、西咪替丁左旋咪唑、西咪替丁左旋咪唑、西咪替丁左旋咪唑、西咪替丁多糖类制剂多糖类制剂多糖类制剂多糖类制剂茯苓多糖、人参多糖茯苓多糖、人参多糖茯苓多糖、人参多糖茯苓多糖、人参多糖2 2、免疫抑制剂、免疫抑制剂：是一类抑制机体免疫功能：是一类抑制机体免疫功能的生物或非生物制剂。的生物或非生物制剂。常见免疫抑制剂种类常见免疫抑制剂种类 分分分分 类类类类 举举举举 例例例例抗生素抗生素抗生素抗生素环孢霉素环孢霉素环孢霉素环孢霉素A A、FK-506FK-506单克隆抗体制单克隆抗体制单克隆抗体制单克隆抗体制剂剂剂剂抗抗抗抗TCTC及亚群、抗及亚群、抗及亚群、抗及亚群、抗MHCMHC、抗、抗、抗、抗ILIL和和和和ILIL受受受受体体体体激素激素激素激素肾上腺皮质类固醇肾上腺皮质类固醇肾上腺皮质类固醇肾上腺皮质类固醇烷化剂烷化剂烷化剂烷化剂环磷酰胺环磷酰胺环磷酰胺环磷酰胺抗代谢药抗代谢药抗代谢药抗代谢药硫唑嘌呤、硫唑嘌呤、硫唑嘌呤、硫唑嘌呤、5-5-氟尿嘧啶氟尿嘧啶氟尿嘧啶氟尿嘧啶 第二节第二节 免疫学诊断免疫学诊断一、检测抗原和抗体的体外实验一、检测抗原和抗体的体外实验（一）体液免疫检测（血清学反应）（一）体液免疫检测（血清学反应）1、抗原抗体反应的特点：、抗原抗体反应的特点：特异性可逆性比例性阶段性抗体过剩抗体过剩比例适当比例适当抗原过剩抗原过剩抗原抗体的比例与其形成免疫复合物大小的关系抗原抗体的比例与其形成免疫复合物大小的关系可逆性可逆性： 抗原抗体反应的影响因素抗原抗体反应的影响因素1 1、电解质浓度（多用生理盐水）电解质浓度（多用生理盐水）2 2、酸碱度（、酸碱度（pH: 6pH: 68 8）3 3、温度（、温度（3737）常见的抗原和抗体检测方法：常见的抗原和抗体检测方法：根据抗原性质、出现结果的现象、参与根据抗原性质、出现结果的现象、参与反应成分的不同，可将抗原抗体反应分为：反应成分的不同，可将抗原抗体反应分为：l l凝集反应凝集反应l l沉淀反应沉淀反应l l采用标记物的抗原抗体反应等采用标记物的抗原抗体反应等 颗粒性抗原颗粒性抗原( (细菌、红细胞等细菌、红细胞等) )与相应与相应抗体结合后形成凝集团块，这一类反应称抗体结合后形成凝集团块，这一类反应称为凝集反应为凝集反应(agglutination)(agglutination)。该类反应可。该类反应可检测到检测到ugug/ml/ml水平的抗体。水平的抗体。 1. 1. 直接凝集反应直接凝集反应细菌或红细菌或红细胞等颗细胞等颗粒性抗原粒性抗原 抗体抗体间接凝集和间接凝集抑制试验血清蛋白质、细胞裂解液等血清蛋白质、细胞裂解液等可溶性抗可溶性抗原与相应抗体结合后出现沉淀物，原与相应抗体结合后出现沉淀物，此类反此类反应称为沉淀反应应称为沉淀反应(precipitation)(precipitation)。 沉淀反应：沉淀反应：单向琼脂扩散试验单向琼脂扩散试验用于用于Ig、C3等的定量测定等的定量测定沉淀反应：沉淀反应：双向琼脂扩散试验双向琼脂扩散试验沉淀反应沉淀反应对流免疫电泳对流免疫电泳-+补体结合反应补体结合反应补体结合反应补体结合反应免免疫疫标标记记技技术术( (immunolabellingimmunolabelling technique)technique) 是是指指用用荧荧光光素素、放放射射性性核核素素、酶酶、发发光光剂剂或或电电子子致致密密物物质质( (胶胶体体金金、铁铁蛋蛋白白) )作作为为示示踪踪剂剂标标记记抗抗体体或或抗抗原原进进行的抗原抗体反应。行的抗原抗体反应。n 此类方法具有灵敏、特异、快此类方法具有灵敏、特异、快速，能够定性、定量甚至定位测定，速，能够定性、定量甚至定位测定，结果易于观察、适合自动化检测等结果易于观察、适合自动化检测等很多优点。广泛用于各种生物活性很多优点。广泛用于各种生物活性物质的分析鉴定与定量检测。物质的分析鉴定与定量检测。免疫标记技术：免疫标记技术： 免疫荧光技术免疫荧光技术免疫荧光直接法免疫荧光直接法免疫荧光间接法免疫荧光间接法免疫标记技术：免疫标记技术：免疫酶技术免疫酶技术1、包被抗体、包被抗体 洗洗2、加抗原、加抗原 洗洗3、加酶标抗体、加酶标抗体 洗洗4、加底物显色、加底物显色1、包被抗原、包被抗原 洗洗2、加抗体、加抗体 洗洗3、加酶标抗球、加酶标抗球 蛋白蛋白 洗洗4、加底物显色、加底物显色ELISA双抗体夹心法双抗体夹心法ELISA间接法间接法免疫标记技术：免疫标记技术：放射免疫测定法（放射免疫测定法（RIARIA） 放射免疫测定法（放射免疫测定法（RIARIA）是将放射性核素）是将放射性核素分析的灵敏性和抗原抗体反应的特异性结合分析的灵敏性和抗原抗体反应的特异性结合的测定技术。具有灵敏、精确、特异性高、的测定技术。具有灵敏、精确、特异性高、易规范化及自动化等优点的一种先进的免疫易规范化及自动化等优点的一种先进的免疫标记技术。标记技术。免疫标记技术：免疫标记技术：金免疫技术（金标法）金免疫技术（金标法） 金免疫技术是一处以胶体金作为标记物金免疫技术是一处以胶体金作为标记物的免疫标记技术。是目前应用广泛、简便、的免疫标记技术。是目前应用广泛、简便、快速的检验方法。快速的检验方法。二、免疫细胞及功能测定二、免疫细胞及功能测定细胞免疫检测细胞免疫检测T细胞总数测定细胞总数测定（1 1）E E花环试验：花环试验：正常情况下，外周正常情况下，外周血淋巴细胞中能形血淋巴细胞中能形成花环的细胞（即成花环的细胞（即T T细胞）约细胞）约60%-80%60%-80%。（2）荧光抗体染色）荧光抗体染色 从外周血分离单个从外周血分离单个核细胞（核细胞（PBM）后，用鼠）后，用鼠抗人抗人CD3的单克隆抗作的单克隆抗作第一抗体与第一抗体与PBM结合，结合，再用荧光素（再用荧光素（FITC）标）标记的兔抗鼠记的兔抗鼠IgG抗体作抗体作第二抗体进行间接荧光第二抗体进行间接荧光染色。染色。细胞免疫检测细胞免疫检测T细胞亚群测定细胞亚群测定 用间接荧光法用间接荧光法检测检测CD4和和CD8 T细胞细胞 CD4/CD8正常正常比值为比值为1.7-2.01.7-2.0左左右。右。细胞免疫检测细胞免疫检测淋巴细胞转化试验淋巴细胞转化试验-细胞介导的细胞毒试验细胞介导的细胞毒试验B细胞的检测B B细胞数量的检测细胞数量的检测(1)(1)膜表面免疫球蛋白膜表面免疫球蛋白( (SmIgSmIg) )的检测：的检测：SmIgSmIg是是B B细胞特有的表面标志，因此是鉴定细胞特有的表面标志，因此是鉴定B B细胞的可细胞的可靠指标。用抗靠指标。用抗SmIgSmIg抗体，借助直接免疫荧光法抗体，借助直接免疫荧光法或免疫组织化学法进行检测。或免疫组织化学法进行检测。(2)(2)间接免疫荧光法：间接免疫荧光法：应用针对应用针对B B细胞表面抗细胞表面抗原原(CDl9(CDl9、CD20CD20、CD21CD21、CD22CD22等等) )的特异性的特异性单克隆抗体，以间接免疫荧光法对单克隆抗体，以间接免疫荧光法对B B细胞进细胞进行鉴定和计数。行鉴定和计数。B B细胞功能测定细胞功能测定B B细胞增生试验细胞增生试验 原理与原理与T T细胞增生试验相同；细胞增生试验相同； 但刺激物主要为美洲商陆但刺激物主要为美洲商陆(PWM)(PWM)、富、富含含SPASPA的金葡菌、细菌脂多糖等。的金葡菌、细菌脂多糖等。体内免疫学检测体内免疫学检测（一）体液免疫检测（一）体液免疫检测 1 1、I I型超敏反应皮肤试验型超敏反应皮肤试验 用常见变应原作皮内注用常见变应原作皮内注射或划痕后，在射或划痕后，在2020分钟内引分钟内引起起红斑及丘疹红斑及丘疹。如。如超过超过1cm1cm或或无红肿但注射处有痒感，无红肿但注射处有痒感，或或全身有不适反应者全身有不适反应者均为阳均为阳性，反之为阴性。性，反之为阴性。2 2、中和反应皮肤试验、中和反应皮肤试验 将微量外毒素注射于受试者前臂将微量外毒素注射于受试者前臂屈侧皮内，屈侧皮内，24-4824-48小时局部出现皮肤红小时局部出现皮肤红肿者为阳性反应，表示无免疫力。阴肿者为阳性反应，表示无免疫力。阴性反应为有免疫力。性反应为有免疫力。（二）细胞免疫检测（二）细胞免疫检测 以特异性抗原或有丝分裂原注入皮内，以特异性抗原或有丝分裂原注入皮内，剌激体内致敏剌激体内致敏T T细胞分化增殖，释放淋巴细胞分化增殖，释放淋巴因子，引起局部皮肤的因子，引起局部皮肤的IVIV型超敏反应。型超敏反应。 1 1、特异性抗原皮肤试验：在受试者、特异性抗原皮肤试验：在受试者前臂内侧皮内注入少量可溶性抗原，前臂内侧皮内注入少量可溶性抗原，24-24-4848小时后，观察局部皮肤红肿硬结的大小时后，观察局部皮肤红肿硬结的大小。大于小。大于1cm1cm即为阳性，表示有细胞免疫即为阳性，表示有细胞免疫力。力。 2 2、植物血凝素（、植物血凝素（PHAPHA）皮试：）皮试： 将将PHAPHA注射于受试者前臂屈侧皮内，注射于受试者前臂屈侧皮内，6-126-12小时后局部出现红斑硬结，小时后局部出现红斑硬结，24-4824-48小时达高峰，即为阳性反应，常用于检小时达高峰，即为阳性反应，常用于检测细胞免疫水平。测细胞免疫水平。祝愿同学们前程似锦！