第九章第九章第九章第九章 流感病毒流感病毒流感病毒流感病毒1v传染性强，传播速度快；v引起的并发症严重；v全球每年流感病例为6亿12亿，重症流感的病死率为810；v人感染高致病性禽流感，死亡率60%；v容易变异，人群缺乏持久免疫力。220世纪5次大流行：1900、19181918、1957、1968、1977l1918-1919第一次世界大战期间，第一次世界大战期间，发生一次大流行，当时全世界发生一次大流行，当时全世界20亿人口，亿人口，10亿被感染亿被感染l死亡人数死亡人数2000万，超过一战中死万，超过一战中死亡人数的总和亡人数的总和31 2435 67 8PB2PB1RNAM2M1NAHA分节段的分节段的(-)ssRNA核蛋白（核蛋白（NP)3 3种种种种RNARNA多聚酶多聚酶多聚酶多聚酶 (PA, PB1, PB2)(PA, PB1, PB2)PA RNA多聚酶多聚酶核糖核蛋白（核糖核蛋白（RNP）NP核衣壳核衣壳基质蛋白：基质蛋白：M1,M2包膜蛋白包膜蛋白内层内层中层中层外层外层4一、分类一、分类1 1、型、型 根根据据核核蛋蛋白白（NPNP）和和基基质质蛋蛋白白（MAMA）抗抗原原性性的的不不同，分同，分A A、B B和和C C 3 3型，或称型，或称甲、乙、丙甲、乙、丙3 3型。型。甲型（A)：易变异，常可造成大流行。宿主：多种动物、人。根据HA和NA抗原性的不同，再区分若干亚型：H1H16, N1N9乙型（B)：变异小，造成局部爆发。感染人和猪丙型（C)：不易变异，主要侵犯婴幼儿。只感染人52 2、亚型、亚型 A A型型流流感感病病毒毒根根据据血血凝凝素素（HAHA）和和神神经经氨氨酸酸酶（酶（NANA）的不同进一步分成亚型。的不同进一步分成亚型。 禽禽流流感感病病毒毒的的HAHA有有1616个个亚亚型型（H1-H14H1-H14），NANA有有9 9个亚型（个亚型（N1-N9N1-N9）。）。6二、病毒的性质二、病毒的性质1. 形态形态 典典型型的的流流感感病病毒毒粒粒子子呈呈球球状状，直直径径80120nm，平平均均为为100nm。病病毒毒体体有有多多形形性性，新新分分离离的的毒毒株株通通常常为为丝丝形形，长长短短不不一一，长长的的可可达数微米。达数微米。782. 基因组：基因组： A、B两两型型流流感感病病毒毒由由8个个节节段段的的单单股股负负链链RNA组成组成 C型流感病毒基因组由型流感病毒基因组由7个个RNA节段组成。节段组成。 流流 感感 病病 毒毒 RNA总总 分分 子子 量量 为为 5.91066.3 106，甲甲、乙乙、丙丙流流感感病病毒毒基基因因组组的的大大小小和和碱碱基基组组成成不不尽尽相相同同，AU：GC比比率率甲甲型型为为1.25，乙乙型型为为1.42，丙型为，丙型为1.46。93. 病毒体表面结构病毒体表面结构101 1）HAHA糖蛋白糖蛋白 HAHA内内有有4 4个个抗抗原原位位点点，这这些些位位点点中中个个别别氨氨基基酸酸的的改改变变可可引引起起病病毒毒抗抗原原性性的的微微小小改变，即发生改变，即发生抗原性漂移抗原性漂移。11 HA的生物学活性：的生物学活性：1）是病毒的吸附蛋白；）是病毒的吸附蛋白；2）与与病病毒毒的的侵侵入入过过程程有有关关。病病毒毒以以膜膜融融合合方方式进入细胞需要式进入细胞需要HA的水解；的水解；3）有血细胞凝集活性；）有血细胞凝集活性；4）是是病病毒毒表表面面的的主主要要抗抗原原，诱诱生生中中和和抗抗体体和和细胞免疫反应，细胞免疫反应，决定病毒的亚型。决定病毒的亚型。122）NA糖蛋白糖蛋白v完完整整的的NA糖糖蛋蛋白白为为蘑蘑菇菇状状，由由48.5nm的的头头部部和和410nm的柄组成，单一的寡糖链可决定病毒的亚型。的柄组成，单一的寡糖链可决定病毒的亚型。v作用：作用： 1) 可可水水解解细细胞胞表表面面受受体体特特异异性性糖糖蛋蛋白白末末端端的的N-乙乙酰酰基基神经氨酸。神经氨酸。 2) 病病毒毒在在细细胞胞表表面面成成熟熟时时，NA可可以以移移去去细细胞胞膜膜出出芽芽点点上的神经氨酸酶，上的神经氨酸酶，有利于病毒粒子的成熟和释放有利于病毒粒子的成熟和释放。 3) 具有具有免疫原性，免疫原性，能诱发相应的抗体能诱发相应的抗体14HA和NA的关系HA结合唾液酸结合唾液酸NA水解唾液酸水解唾液酸病毒与受体结合，进入细胞病毒释放153)抗原性抗原性流感病毒的主要抗原成分有流感病毒的主要抗原成分有NP、MA、HA和和NA。NP、MA具有具有型型特异性，相应抗体对病毒感染无保护特异性，相应抗体对病毒感染无保护力。力。HA、NA是是种种特异性抗原，特异性抗原，HA能使动物产生中和抗能使动物产生中和抗体，对机体有保护作用；体，对机体有保护作用；NA抗体不能中和病毒，但抗体不能中和病毒，但能减少病毒增殖，改变病程。能减少病毒增殖，改变病程。16抗原漂移（抗原漂移（antigenic drift)：由于基因组自发由于基因组自发的点突变引起小幅度的变异，当氨基酸的改变积的点突变引起小幅度的变异，当氨基酸的改变积累到一定程度或突变氨基酸正好使抗原决定簇改累到一定程度或突变氨基酸正好使抗原决定簇改变，则引起抗原性的变异。变，则引起抗原性的变异。抗原变异幅度小，属于量变，中小型流行，每年有发生。抗原变异幅度小，属于量变，中小型流行，每年有发生。 变异机理：编码血凝素基因发生一系列点突变，（某一核苷酸的碱基发生改变）导致氨基酸序列改变。17抗原转变（抗原转变（antigenic shift)：由于突变幅度较由于突变幅度较大，导致产生新的亚型，这种变异称为抗原转变。大，导致产生新的亚型，这种变异称为抗原转变。变异幅度大，质变，大流行。每变异幅度大，质变，大流行。每10-40年出现一次。年出现一次。变异机理：基因重组(交换核酸片断）19人人肺细胞肺细胞人流感病毒人流感病毒鸡流感病毒鸡流感病毒新病毒株新病毒株20甲型流感病毒抗原转变与流行年代近年来流行型别：近年来流行型别：H3N2、H1N121三、病毒的复制三、病毒的复制 22流感病毒的复制过程23四、理化特性四、理化特性u抵抗力不强；抵抗力不强；u56 30min，灭活；，灭活；u对干燥、日光、紫外线敏感；对干燥、日光、紫外线敏感；u室温下感染性很快消失；室温下感染性很快消失；u乙醚、甲醛等敏感；乙醚、甲醛等敏感；u酸性条件下更易灭活；酸性条件下更易灭活；u但在但在-70或冷冻干燥后活性可长期保存。或冷冻干燥后活性可长期保存。 24（一）一）传染源、传播方式、潜伏期传染源、传播方式、潜伏期传染源传染源Source 急性感染者急性感染者 传播方式传播方式Spread 飞沫或污染物飞沫或污染物 潜伏期潜伏期Incubation 1-3 days. 五、致病性五、致病性25(二)流感病毒的致病机制病毒病毒局部炎症局部炎症呼吸道呼吸道毒素样物质毒素样物质血流血流全身症状全身症状肺炎肺炎少数呼吸道局部感染呼吸道局部感染, 不引起病毒血症不引起病毒血症26（三）常见症状 全身症状全身症状：发热发热fever、头痛头痛headache，肌肉酸痛肌肉酸痛myalgia（重）（重）上炎：鼻塞、咽痛、咳嗽（轻）上炎：鼻塞、咽痛、咳嗽（轻）致病性致病性27（四）并发症1. 肺炎（合并细菌感染，常见的有肺炎球菌、金黄色葡萄球菌等） 2.其他病毒的双重感染, eg. Adenovirus（腺病毒）常发生于老年人、儿童、心肺功能异常者（五）免疫性：感染后获得对同型V免疫力28六. 微生物学检查法1.快速诊断检测病毒抗原：取材：鼻粘膜，呼吸道脱落上皮细胞免疫荧光法、ELISA检测核酸：RT-PCR292.血清学 急性期，恢复期双份血清检测抗体效价，如果后者比前者升高4倍以上，可作出诊断。 303. 病毒分离鉴定取急性期患者咽嗽液或鼻咽拭子，加抗生素处理后，放冰瓶内送实验室接种鸡胚接种培养细胞31七、预防与治疗1、建立流感检测站，及时发现与隔离病人2、预防接种亚单位疫苗，70% protection. 32抗流感病毒药物金刚烷胺：M2阻滞剂奥司米韦：可以抑制神经氨酸酶活性。干扰素中药：清热解毒板蓝根、大青叶、连翘、鱼腥草，等33抗流感新药“达菲”八角大肠杆菌八角大肠杆菌+炸药炸药莽草酸莽草酸30：1葡萄糖葡萄糖“达菲”成分中竟包含一种可爆炸物质、一种中国调味料以及一种无害的大肠杆菌。 34八、兽医临床上常见的流感病毒 35（一）禽流感1.分类地位：分类地位：正粘病毒科/甲型流感病毒属。 362.禽流感病毒一般特性禽流感病毒一般特性 球形，直径为80120nm，但也常有同样直径的丝状形式，长短不一； 单股负股RNA，分8节段；螺旋对称核衣壳。 有囊膜，表面有1012nm的纤突（H and N）；H和N是囊膜表面的主要糖蛋白；具有型特异性和多变性，在病毒感染过程中起着重要作用。H决定病毒的致病性，能诱发感染宿主产生具有保护作用的中和抗体；N诱发的抗体无中和作用,但可减少病毒增殖；高致病性毒株主要是H5和H7。37383.禽流感病毒的培养 常用：鸡胚（初次羊膜腔、适应后尿囊腔）及细胞培养常用：鸡胚（初次羊膜腔、适应后尿囊腔）及细胞培养（鸡胚成纤维细胞、原代猴肾细胞、（鸡胚成纤维细胞、原代猴肾细胞、MDCK、Vero)； 有些毒株在鸽或其他细胞中培养后，对鸡的毒力减弱。有些毒株在鸽或其他细胞中培养后，对鸡的毒力减弱。 394、禽流感病毒来源及传播、禽流感病毒来源及传播水水禽禽是是禽禽流流感感病病毒毒的的主主要要贮贮藏藏库库,水水禽禽一一般般呈呈亚亚临临床床感感染染 ;将水禽与家禽混合饲养非常容易将病毒引入家禽将水禽与家禽混合饲养非常容易将病毒引入家禽; 散养散养; 使用不能防止野鸟进入的禽舍使用不能防止野鸟进入的禽舍 ;存在多种禽鸟的市场也可能是病毒的主要来源存在多种禽鸟的市场也可能是病毒的主要来源.猪猪猪猪是是是是不不不不同同同同病病病病毒毒毒毒基基基基因因因因重重重重配配配配的的的的“ “混混混混合合合合器器器器” ”或或或或活活活活载载载载体体体体, , , , 是是是是“ “禽禽禽禽- - - -猪猪猪猪- - - -人人人人” ”种间传播链中的中间宿主种间传播链中的中间宿主种间传播链中的中间宿主种间传播链中的中间宿主40水禽和野生鸟类、鸥类水禽和野生鸟类、鸥类 活禽市场活禽市场猪猪混混合合器器41 主要来自野生禽类（尤其是野生水禽）、受感染的主要来自野生禽类（尤其是野生水禽）、受感染的家禽以及观赏鸟等。家禽以及观赏鸟等。 42禽流感的传播禽流感的传播可在感染的鸟类和禽群中持续存在数月可在感染的鸟类和禽群中持续存在数月 有多种传播途径有多种传播途径 可通过污染的衣服、鞋、设施及鸟笼等传播可通过污染的衣服、鞋、设施及鸟笼等传播43445.禽流感病毒的致病性禽流感病毒的致病性 引起各种类型的禽流感（Avian influenza，AI)。 高致病性禽流感又称：真性鸡瘟、欧洲鸡瘟；OIE A类传染病，严重危害养禽业。4546476.禽流感病毒的诊断禽流感病毒的诊断 病毒的分离与鉴定病毒的分离与鉴定 采取病禽的呼吸道渗出物或器官组织，制成悬液，离心沉淀或过滤以去除组织碎屑；无菌悬液0.1-0.2mL尿囊腔接种1011日龄鸡胚，35-37中培养。取鸡胚的尿囊液,以HA试验和HI试验鉴定病毒。 血清学试验：血清学试验：禽流感病毒抗体的检测，这种抗体在感染后7d便可被检测出来。用于血清学检查的方法有：HI试验（检测抗H抗体）、双向免疫扩散试验（检测抗NP抗体）、病毒中和试验、神经氨酸酶抑制试验、ELISA（酶联免疫吸附试验）以及琼脂扩散试验(AGP)等。通常是采取发病初期和康复期(发病后1428d)的血清检测，若康复期血清抗体比发病初期升高倍以上，则可证实禽流感的发生。48分子生物学诊断分子生物学诊断 RT-PCR 和和Realtime RT-PCR荧光荧光RT-PCR、 RT-PCR-ELISA依赖核酸序列的扩增技术依赖核酸序列的扩增技术(NASBA)环介导的等温扩增技术环介导的等温扩增技术(LAMP)基因芯片技术基因芯片技术497.预防与控制预防与控制 50（二）猪流感病毒（二）猪流感病毒（Swine influenza virus，SIV）（1）分类地位：）分类地位：正粘病毒科/甲型流感病毒属（2）血清型：）血清型：主要有H1N1、H3N2；近年来，从猪体内还分离到丙型流行性感冒病毒，但对猪不致病。（3）抵抗力：）抵抗力：流感病毒存在于病猪和带毒猪的呼吸道分泌物中，对热和日光的抵抗力不强，一般消毒药敏感。 51（4）致病性：）致病性：致猪的急性呼吸器官传染病猪流行性感冒。（5）微生物学检查：）微生物学检查：用灭菌的棉拭子采取鼻腔分泌物，放入适量生理盐水中洗涮，再加青霉素、链霉素处理；尿囊腔或羊膜腔接种1012日龄鸡胚，35-377296h，收集尿囊液和羊膜腔液，以HA和HI试验鉴定病毒。 52思考题思考题1.名词解释：抗原漂移、抗原转换；2.叙述流感病毒的复制周期；3.流感病毒疫苗为什么每年都要接种，试叙其机制。53