医学微生物学实验三1、细菌的人工培养（菌的人工培养（讲授）授）2、细菌的培养方法：菌的培养方法： 固体培养基接种法（自做）；固体培养基接种法（自做）； 半固体、液体培养基接种法（示教）半固体、液体培养基接种法（示教）3、葡萄球菌、葡萄球菌、链球菌培养及生化（示教）球菌培养及生化（示教）4、细菌的形菌的形态观察察 自自阅片：片：甲型甲型链球菌、球菌、结核杆菌核杆菌 示教片：示教片：淋球菌、肉毒杆菌、淋球菌、肉毒杆菌、产气气荚膜杆菌、白喉杆菌、膜杆菌、白喉杆菌、炭疽杆菌炭疽杆菌炭疽杆菌炭疽杆菌实验内容内容第四第四节 细菌的人工培养菌的人工培养 p31p31一、一、培养基培养基（culture medium）：）：是由人工方法配制而成的，是由人工方法配制而成的，专供微生物生供微生物生长繁殖繁殖使用的使用的混合混合营养物养物制品制品。常用培养基的种常用培养基的种类 按按营养养组成和用途分成和用途分厌氧培养基氧培养基基基础培养基培养基增菌培养基增菌培养基选择培养基培养基鉴别培养基培养基二、二、细菌在培养基中的生菌在培养基中的生长情况情况 据物理状据物理状态分分1 1、液体培养基：、液体培养基：均匀混均匀混浊、沉淀生沉淀生长、表面生表面生长（菌膜）；（菌膜）；多用于增菌多用于增菌均匀混均匀混浊对照照沉淀生沉淀生长2 2、固体培养基：、固体培养基： 含含1.5%1.5%琼脂脂 用于分离培养用于分离培养菌落菌落：单个个细菌分裂繁殖成一堆肉眼可菌分裂繁殖成一堆肉眼可见 的的细菌集菌集团。纯培养培养：挑取一个菌落，移种到另一培养挑取一个菌落，移种到另一培养 基中，生基中，生长出来的出来的细菌均菌均为纯 种，称种，称为纯培养。培养。菌落特征菌落特征大小、形状、大小、形状、颜色、气味、透明度、色、气味、透明度、光滑或粗糙、湿光滑或粗糙、湿润或干燥、隆起或扁平、或干燥、隆起或扁平、边缘整整齐与否、是否溶血等与否、是否溶血等有助于有助于细菌菌鉴定定菌落（菌落（S型）型）菌苔菌苔菌落（菌落（R型）型）光滑型光滑型(S型型)粗造型粗造型(R型型)粘液型粘液型(M型型) 3 3、半固体培养基：、半固体培养基：含含0.3%0.5%琼脂脂 鞭毛菌鞭毛菌混混浊生生长（沿穿刺（沿穿刺线呈云呈云雾状状/ /羽毛状）羽毛状） 无鞭毛菌无鞭毛菌沿穿刺沿穿刺线呈呈线状生状生长 用于用于检测细菌的菌的动力力和和保存菌种保存菌种斜面划斜面划线示意示意图4 4、斜面培养基接种法、斜面培养基接种法应用：短期保存菌种用：短期保存菌种三、三、人工培养人工培养细菌的用途菌的用途u在医学中的在医学中的应用用 1.1.感染性疾病的病原学感染性疾病的病原学诊断断：明确病因，指明确病因，指导用用药 2.2.细菌学的研究菌学的研究：细菌菌遗传、变异、耐异、耐药性性 3.3.生物制品的制生物制品的制备：疫苗、疫苗、类毒素、抗毒素毒素、抗毒素u在工在工农业生生产中的中的应用用 （抗生素、（抗生素、维生素、生素、酶制制剂等）等） u在基因工程中的在基因工程中的应用用（ 基因工程菌基因工程菌乙肝疫苗）乙肝疫苗）进入入实验内容内容讲授授1 1、固体培养基、固体培养基( (平板平板) )接种法接种法分区划分区划线法法连续划划线法法第一区划第一区划线灭菌接种菌接种环第二区划第二区划线灭菌接种菌接种环第三区划第三区划线灭菌接种菌接种环灭菌接种菌接种环，取菌准，取菌准备分区划分区划线法法原划原划线标本：混合菌液本：混合菌液分分组：1人一个固体平板人一个固体平板连续划划线法法菌落示意菌落示意图细菌在固体培养基中的生菌在固体培养基中的生长现象象细菌在固体培养基中的生菌在固体培养基中的生长现象象 菌菌 落落 菌落特征菌落特征：大小、形状、：大小、形状、颜色、气味、透明度、表面色、气味、透明度、表面光滑或粗糙、湿光滑或粗糙、湿润或干燥、或干燥、边缘整整齐与否、溶血性等。与否、溶血性等。 菌落菌落类型：型： S型、型、 R型、型、 M型菌落。型菌落。 菌菌 苔苔：指多个菌落融合在一起形成的指多个菌落融合在一起形成的细菌堆菌堆积物。物。菌落（菌落（S型）型）菌苔菌苔菌落（菌落（R型）型）光滑型光滑型(S型型)粗造型粗造型(R型型)粘液型粘液型(M型型)注意事注意事项1、无菌操作、无菌操作2、密而不重叠、密而不重叠3、勿划破、勿划破琼脂脂4、做好、做好标记，第二天第二天观察察结果果2、葡萄球菌培养（示教）、葡萄球菌培养（示教）营养要求不高，普通培养基生养要求不高，普通培养基生长良好良好 菌菌 落落： S S型菌落，金型菌落，金黄色、表皮、腐生葡萄黄色、表皮、腐生葡萄球菌各自形成球菌各自形成金黄色、金黄色、白色、白色、柠檬色檬色- -脂溶性脂溶性色素色素血平板：血平板： 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌形成的形成的-溶血溶血环金黄色色素金黄色色素白色色素白色色素3 3、链球菌培养（示教）球菌培养（示教） 血平板上的菌落：血平板上的菌落： 甲型溶血性甲型溶血性链球菌形球菌形成草成草绿色溶血色溶血现象，乙型溶血性象，乙型溶血性链球菌形球菌形成透明的完全溶血成透明的完全溶血现象，丙型象，丙型链球菌无溶球菌无溶血血现象。象。甲甲链溶血溶血草草绿色溶血色溶血乙乙链溶血溶血丙丙链不溶血不溶血4、常、常见致病菌的形致病菌的形态与染色性与染色性甲型溶血性甲型溶血性甲型溶血性甲型溶血性链链球菌球菌球菌球菌取材：取材：纯培养物培养物染色法：革染色法：革兰染色染色放大倍数：放大倍数：10X100自自阅片之一片之一结结核分枝杆菌核分枝杆菌核分枝杆菌核分枝杆菌取材：痰涂片取材：痰涂片染色法：抗酸染色染色法：抗酸染色放大倍数：放大倍数：10X100自自阅片之二片之二菌体染成菌体染成红色色，细长略微弯曲杆略微弯曲杆菌，菌，单个或分枝个或分枝状排列；状排列；（非抗酸菌及（非抗酸菌及细胞染成胞染成蓝色）色）淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌示教片之一示教片之一取材：泌尿道取材：泌尿道脓性分泌物性分泌物染色法：革染色法：革兰染色染色放大倍数：放大倍数：10X100淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌中性粒中性粒细胞分叶核胞分叶核淋球菌染成淋球菌染成红色色/G-，肾形或豆形，成形或豆形，成双排列双排列肉毒梭菌肉毒梭菌肉毒梭菌肉毒梭菌示教片之二示教片之二取材：取材：纯培养物培养物染色法：革染色法：革兰染色染色放大倍数：放大倍数：10X100G+粗短杆菌，粗短杆菌，芽胞呈芽胞呈椭圆形，形，比菌体粗，次极比菌体粗，次极端，端，细菌呈菌呈汤匙匙状或网球拍状状或网球拍状产产气气气气荚荚膜梭菌膜梭菌膜梭菌膜梭菌示教片之三示教片之三取材：小鼠腹腔渗出液取材：小鼠腹腔渗出液染色法：革染色法：革兰染色染色放大倍数：放大倍数：10X100G+粗大杆菌，粗大杆菌，两端几乎平切，两端几乎平切，在被感染得人在被感染得人或或动物体内形物体内形成成明明显的的荚膜膜炭疽杆菌炭疽杆菌炭疽杆菌炭疽杆菌示教片之四示教片之四取材：取材：纯培养物培养物染色法：革染色法：革兰染色染色放大倍数：放大倍数：10X100G+粗大杆菌，粗大杆菌，有氧条件下形有氧条件下形成成椭圆形芽胞形芽胞，位于菌体中央位于菌体中央白喉棒状杆菌白喉棒状杆菌白喉棒状杆菌白喉棒状杆菌取材：取材：纯培养物培养物染色法：美染色法：美蓝染色染色放大倍数：放大倍数：10X100取材：取材：纯培养物培养物染色法：染色法：Neisser染色染色放大倍数：放大倍数：10X100示教片之五示教片之五菌体菌体细长弯曲的杆菌，粗弯曲的杆菌，粗细不一，常一不一，常一端或两端膨大呈棒状；排列不端或两端膨大呈棒状；排列不规则，呈，呈栅栏状、状、V字形或字形或L字形。字形。异染异染颗粒粒1、细菌的人工培养（菌的人工培养（讲授）授）2、细菌的培养方法：菌的培养方法： 固体培养基接种法（自做）；固体培养基接种法（自做）； 半固体、液体培养基接种法（示教）半固体、液体培养基接种法（示教）3、葡萄球菌、葡萄球菌、链球菌培养及生化（示教）球菌培养及生化（示教）4、细菌的形菌的形态观察察 自自阅片：甲型片：甲型链球菌、球菌、结核杆菌核杆菌 示教片：淋球菌、肉毒杆菌、示教片：淋球菌、肉毒杆菌、产气气荚膜杆菌、白喉杆菌、膜杆菌、白喉杆菌、炭疽杆菌炭疽杆菌炭疽杆菌炭疽杆菌第第2 2页： 实验名称：名称：细菌平板划菌平板划线分离法分离法 （记录实验结果果绘一一简图并描述平板上的并描述平板上的菌落特征菌落特征）第第3页 ： 实验名称：名称：细菌的形菌的形态观察（察（绘图）甲型甲型链球菌、球菌、结核杆菌、淋球菌、肉毒杆菌、核杆菌、淋球菌、肉毒杆菌、产气气荚膜杆菌、白喉杆菌、膜杆菌、白喉杆菌、炭疽杆菌炭疽杆菌炭疽杆菌炭疽杆菌 实验内容内容第第1页： 实验名称：名称：细菌培养及形菌培养及形态观察察甲型溶血性甲型溶血性甲型溶血性甲型溶血性链链球菌球菌球菌球菌取材：取材：纯培养物培养物染色法：革染色法：革兰染色染色放大倍数：放大倍数：10X100结结核分枝杆菌核分枝杆菌核分枝杆菌核分枝杆菌取材：痰涂片取材：痰涂片染色法：抗酸染色染色法：抗酸染色放大倍数：放大倍数：10X100 淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌取材：泌尿道取材：泌尿道脓性分泌物性分泌物染色法：革染色法：革兰染色染色放大倍数：放大倍数：10X100肉毒梭菌肉毒梭菌肉毒梭菌肉毒梭菌取材：取材：纯培养物培养物染色法：革染色法：革兰染色染色放大倍数：放大倍数：10X100产产气气气气荚荚膜梭菌膜梭菌膜梭菌膜梭菌取材：小鼠腹腔渗出液取材：小鼠腹腔渗出液染色法：革染色法：革兰染色染色放大倍数：放大倍数：10X100炭疽杆菌炭疽杆菌炭疽杆菌炭疽杆菌取材：取材：纯培养物培养物染色法：革染色法：革兰染色染色放大倍数：放大倍数：10X100白喉棒状杆菌白喉棒状杆菌白喉棒状杆菌白喉棒状杆菌取材：取材：纯培养物培养物染色法：染色法：Neisser染色染色放大倍数：放大倍数：10X100