微生物基础知识及洁净区微生物控制一、微生物简介二、微生物的分布三、微生物的作用及危害 四、微生物的形态结构 五、微生物污染及消毒灭菌六、洁净区微生物的控制一、微生物简介1 1、微生物的定义（microorganism, microbe）: 微生物是存在于自然界中的个体微小，结构简单、肉眼看不见，必须借助于显微镜才能看清它们外形的一群低等的、原始的微小生物，如细菌。2、微生物的分类按其结构、化学组成可分为: :原核类:仅有原始核质，无核仁或核膜，细胞器很不完善。如细菌、放线菌、支原体、立克次氏体。 真核类:细胞核的分化程度较高，有核膜、核仁和染色体，细胞器完整。如真菌（酵母菌和霉菌）、 原生动物、藻类非细胞类:体积微小，能通过除菌过滤器。如病毒和朊病毒按其致病性可分为: :病原性微生物：有致病性非病原性微生物：无致病性3.微生物的五大特点：个体小，面积大：小于0.1mm。肉眼不可见。分布广, ,种类多（10万多种） ：自然界中到处都有，如水、空气、土壤等, , 土壤中的数量最多。代谢强，转化快：发酵乳糖的细菌在1小时内可分解其自重100010000倍的乳糖；产朊假丝酵母合成蛋白质的能力比食用公牛强10万倍生长旺，繁殖快：微生物有惊人的繁殖速度，大多数微生物几十分钟内就可以繁殖一代适应性强，易变异（耐药性产生的原因）二、微生物的分布1.微生物在自然界的分布：土壤：是微生物生活的最适环境，土壤中的微生物又可分为如下几类： 细菌：占土壤微生物总数的70%90%。 放线菌：占土壤中微生物含量的5%30%。 霉菌：主要生活在靠近地面的土壤中，在通气良好的土壤中，霉菌数量很多。 酵母菌：普通土壤中酵母菌含量很少。水：仅次于土壤的微生物分布、定居的第二场所，90%为革兰氏阴性菌，主要有假单胞菌、黄杆菌等。空气：空气中的微生物主要来源于带有微生物菌体及孢子的灰尘（这类微生物大多数是腐生性的，）还来源于人和动物，它们大多数是通过呼吸道排出的，其中也包含有病原微生物，悬浮在大气中。2.微生物在人体中的分布：在正常人体皮肤、粘膜及外界相通的各种腔道（如口腔、鼻咽腔、肠道和泌尿道）等部位，存在着对人体无害的微生物群. 部位 常见菌种u皮肤 表皮葡萄球菌、类白喉杆菌、绿脓杆菌、耻垢杆菌等u口腔 链球菌（甲型或乙型）、乳酸杆菌、螺旋体、梭形杆菌、 白色念球菌、（真菌）表皮葡萄球菌、肺炎球菌、奈瑟氏 球菌、类白喉杆菌u胃 正常一般无菌u肠道 类杆菌、双歧杆菌、大肠杆菌、厌氧性链球菌、粪链球 菌、 葡萄球菌、白色念球菌、乳酸杆菌、变形杆菌、破 伤风杆菌、产气荚膜杆菌等u鼻咽腔 甲型链球菌、奈氏球菌、肺炎球菌、流感杆菌、乙型链 球菌、葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、变形杆菌等u眼结膜 皮表葡萄球菌、结膜干燥杆菌、类白喉杆菌等人体中的微生物人体中的微生物人体中的微生物人体中的微生物三、微生物的作用及危害 1. 微生物的作用绝大多数微生物对人和动物是有益的。微生物已广泛应用于农业、食品、医药、酿造、化工、制革、石油等行业，发挥了越来越重要的作用。例如与我们日常生活密切相关的如酸奶、酒类、抗生素、疫苗等。2. 微生物的危害微生物中也有一部分能引起人及动、植物发生病害，如人类的许多传染病，如伤寒、结核、病毒性肝炎，鼠疫等。从药品生产的而言，微生物对药品的原料、生产环境和成品的污染是造成生产失败、成品不合格的重要因素。 四、微生物的形态结构 （一）、细菌 细菌是一类细胞细而短、结构简单、细胞壁坚韧，以二分裂方式无性繁殖的原核微生物，分布广泛。1.细菌的形态与结构 （1） 球菌 多数球菌直径在1微米左右，外观呈球形或近似球形。常见的有双球菌、链球菌、葡萄球菌等。 （2） 杆菌 形态多数呈直杆状，也有的菌体稍弯，多数呈分散存在，也有的呈链状排列，分为棒状杆菌、链状杆菌、球杆菌等。 （3） 螺形菌 菌体弯曲，呈弧形或螺旋形。如幽门螺杆菌。 细菌虽小，仍具有一定的细胞结构和功能。细胞壁、细胞膜、细胞质和核质是细菌的基本结构。 大肠菌群大肠菌群为人和动物肠道中的常居菌，在一定条件下可引起肠道外感染。生存环境 大肠菌群在自然界中分布广泛，在1546均可生长，最适生长温度为37。在水和土壤中大量存在，对自然环境有较强的抵抗力。主要污染的食品是肉类、水产品、蔬菜等。85热水13分钟灭菌。300ppm次氯酸纳溶液 13分钟内杀灭本菌。 金黄色葡萄球菌在自然界中分布广泛，空气、水、地面、物体表面、人和动物的体表、粘膜等处均有存在。食品药品中生长有金黄色葡萄球菌，是食品药品卫生的一种潜在危险，因为金黄色葡萄球菌可以产生肠毒素，食后能引起食品中毒。金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 繁殖条件 金黄色葡萄球菌能在1245生长繁殖，最适生长温度为37，特征 伤口化脓的地方、口、鼻子等处繁殖； 污染来源于手指的可能性很高 ； 产生的毒素，非常耐热；预防： 手指处有伤口、化脓口的人，不要直接接触产品； 彻底对手指进行洗净消毒，佩戴手套，要戴帽子、戴口罩；杀灭条件 加热8030分钟才能杀死，煮沸可迅速使它死亡沙门氏菌沙门氏菌常在动物中广泛传播，人的沙门氏菌感染也非常普遍。世界上沙门氏菌的食物中毒占首位，因此，检查食品药品中的沙门氏菌非常重要。生存环境 沙门氏菌在水中不易繁殖，但可生存23周，冰箱中可生存34个月，在25可存活10个月，在自然环境的粪便中可存活12个月。繁殖条件 沙门氏菌最适繁殖温度为37，在20以上即能大量繁殖，因此，低温储存食品是一项重要预防措施 。污染渠道 沙门氏菌的来源主要是患病的人和动物，及人和动物的带菌者，其中在肉类中最为多见。杀灭条件 沙门氏菌对热及外界环境的抵抗力属于中等， 60 2030分钟 75 5分钟即被杀死， 100 立即被杀死。沙门氏菌（二）、真菌真菌是一类有细胞壁，无叶绿素，以寄生或腐生方式生存，少数为单细胞，多数为多细胞，能进行无性或有性繁殖的一类真核细胞型微生物。真菌包括单细胞与多细胞两类。单细胞真菌呈圆形或卵圆形，称为酵母菌；多细胞真菌由菌丝和孢子组成，并交织成团，称丝状菌或霉菌。真菌生长的最适的温度为2228，最适的pH值为46。其繁殖能力强，但生长速度比细菌慢，常需1-4周才形成菌落。真菌对热的抵抗力不强，一般加热6070 1小时即被杀死，但对干燥、日光、紫外线和一些化学消毒剂有抵抗力，但对2.5碘酒、10甲醛则较敏感。（三）、病毒病毒属非细胞型微生物，在自然界分布非常广泛，可在人、动物、植物、真菌和细菌中寄居并引起感染。病毒是体积最小、结构最简单的微生物，它仅有一种核酸（DNA或RNA）作其遗传物质。病毒必须在宿主活细胞内寄生，依靠细胞提供的能量、营养物质及生物大分子合成机制，完成病毒的复制过程。病毒与人类的关系极为密切，人类的传染病约75是由病毒引起的。有些病毒传染性强，可引起世界大流行（如流感、艾滋病等）。（四）、热原与内毒素热原：是微量即可引起恒温动物体温异常升高的物质的总称。内毒素：是革兰氏阴性菌细胞壁上的一种脂多糖和微量蛋白的复合物，具有多种生物活性。热原包括内毒素 ，内毒素是主要的热原物质。在产品检测中，细菌内毒素是检测热原的方法之一。我厂产品， 脯氨酸检测内毒素-鲎试剂法。 中国药典10EU/g AJI2002 6EU/g 肌苷检测热原-动物试验法（家兔法）。 消除细菌内毒素的方法 高温破坏法：可用180干烤34h或250干烤 至少60min。 吸附法：一般选用活性炭。 化学酸碱和氧化法。 离子交换法。 反渗透法。 凝胶过滤法。注：在产品微检中，无菌生长，不代表无内毒素，细菌死亡后会产生大量内毒素。五、微生物污染及消毒灭菌1.药品微生物污染：药品微生物污染：微生物的产生、附着而给药品带来不良影响。药品的微生物污染也称染菌。污染药品的细菌：常见污染药品的细菌是一些生命力较强的细菌，如：葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、枯草杆菌及一些霉菌，抵抗力弱的细菌一般不易造成污染。药品的微生物污染源：空气、水、厂房与设备、药品生产用原辅料、包装材料、昆虫、生产操作人员等2.消毒与灭菌消毒：杀死物体上病源微生物的方法，并不一定能杀死细菌的芽胞。消毒所用的试剂称为消毒剂。灭菌：杀灭物体上所有微生物的方法。灭菌比消毒要求高，包括杀灭细菌芽孢在内的全部病原微生物和非病原微生物。抑菌：抑制体内或体外细菌的生长繁殖。常用的抑菌剂为各种抗生素，可抑制细菌的繁殖。防腐：防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法，细菌一般不死亡。同一种化学药品在高浓度时为消毒剂，低浓度时常为防腐剂。无菌：不存在活的细菌。防止细菌进入人体或其他物品的操作技术，为无菌操作。3、常用的消毒灭菌法： 物理灭菌法和化学消毒法 物理灭菌方法热力灭菌法辐射杀菌法滤过除菌法超声波杀菌法干燥与低温抑菌法热力灭菌法：使蛋白质、酶及核酸永久性破环，细胞膜溶解，导致细胞发生不可逆转的死亡。干热灭菌法：采用灼烧或干热空气灭菌。常用方式是把待灭菌的物品均匀的放入烘箱，升温至160，恒温1h。此方法适合玻璃皿，金属用具的灭菌。湿热灭菌法利用热蒸汽杀死微生物。相同条件下，湿热灭菌效果比干热灭菌效果好。这是因为一方面细胞内蛋白质含水量高，容易变性，另一方面高温水蒸气对蛋白质有高度的穿透力，从而加速蛋白质变性，死亡。 高压蒸汽灭菌：湿热灭菌法的一种。高压蒸汽灭菌是最可靠、最适用、最广泛的灭菌方法。 辐射灭菌法：是采用辐射进行灭菌消毒。包括可见光、红外线、紫外线、X射线和射线等。紫外线：波长200-300nm的紫外线具有杀菌作用，265266nm波段杀菌能力最前。紫外线穿透物质的能力差，一般用于空气及物体表面消毒。电离辐射：高速电子、X射线、射线，适用于不耐热物品的灭菌，常用于药品和医疗用品的灭菌。 微波：波长1mm1m。滤过除菌法用物理阻留的方法将液体或空气中的细菌除去, ,以达到除菌目的。滤菌器含有微细小孔0.220.22微米, ,只允许液体或气体通过, ,而大于孔径的细菌等颗粒不能通过 。适用范围：血清、毒素、抗生素以及空气等的除菌。化学消毒法法：一般化学药剂无法杀死所有的微生物，而只能杀死其中的病原微生物，所以是消毒的作用，而不是灭菌的作用。消毒剂：能迅速杀灭病原微生物的药物。防腐剂：能抑制或阻止微生物生长繁殖的药物。消毒剂、防腐剂没有选择性，对一切活细胞都有毒性，不仅能杀死或抑制病原微生物，而且对人体组织细胞也有损伤作用，所以常用于器械，体表、环境的消毒。常用的化学消毒剂有：来苏水、碘酒、酒精等类别作用机制作用机制常用种常用种类用途用途酚酚类蛋白蛋白变性，性，细胞膜胞膜损伤石炭酸石炭酸地面、器具表地面、器具表面、皮肤消毒面、皮肤消毒醇醇类蛋白蛋白变性性75酒精酒精皮肤、体温皮肤、体温计消毒消毒氧化氧化剂氧化、蛋白氧化、蛋白沉淀沉淀二氧化氯二氧化氯地面、器具表面、地面、器具表面、皮肤消毒皮肤消毒过氧乙酸、氧乙酸、碘酒碘酒塑料、玻璃器材、塑料、玻璃器材、皮肤消毒皮肤消毒重金属重金属盐氧化、蛋白氧化、蛋白酶酶变性性红汞、汞、硫柳汞硫柳汞皮肤、粘膜、小皮肤、粘膜、小创伤消毒消毒表面表面活性活性剂蛋白蛋白变性性细胞膜胞膜损伤0.1新新洁尔尔灭地面、器具表面、地面、器具表面、皮肤消毒皮肤消毒化学灭菌法常用消毒剂种类和用途：洁净区的主要污染源：空气、制药用水、操作人员、设备，原辅料等，其中操作人员是主要的污染源。药品生产质量管理规范中明确规定：洁净区内的人员应严格控制，其工作人员应定期进行卫生和微生物学基础知识、洁净区作业等方面的培训和考核；进进入洁净区的临时外来人员因进行指导和监督。防止微生物污染的措施： 了解污染源、杜绝污染途径 洁净区洁净技术的的应用及卫生管理 制药用水的质量控制 进行微生物限度检查，控制药品质量洁净区防污染必须以尘埃粒子和微生物为环境监控对象。六、洁净区微生物的控制六、洁净区微生物的控制1.1.洁净区的污染源：尘埃及细菌污染来自人的尘粒污染占洁净室污染的80%生产工具和设备引起的污染占15%洁净区本身和过滤器的缺陷引起的污染占5%1.11.1操作人员带来的尘埃粒子： a a. 成年人产生的皮屑：10万1000万粒子/min； b b. 操作人员身穿工作服，剧烈活动：产生 100万个粒径0.1 m的微粒 20万个粒径0.5 m的微粒 c c. 交谈1min ，产生1.52.0万粒子 d d. 咳嗽:70:70万个粒子，喷嚏：140140万个粒子 1.2人体微生物分布情况 ： 人体部位人体部位 微生物种类名称微生物种类名称 检出率检出率% 皮肤皮肤 表皮葡萄球菌表皮葡萄球菌疮疱丙酸杆菌疮疱丙酸杆菌类白喉棒杆菌类白喉棒杆菌 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 851004510055 525 鼻和鼻咽鼻和鼻咽 表皮葡萄球菌表皮葡萄球菌金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌类白喉棒杆菌类白喉棒杆菌黏膜炎布兰汉氏球菌黏膜炎布兰汉氏球菌 流感嗜血杆菌流感嗜血杆菌 90208558012 12 口腔口腔表皮葡萄球菌表皮葡萄球菌-溶血链球菌溶血链球菌唾液链球菌唾液链球菌消化链球菌消化链球菌金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌流感嗜血杆菌流感嗜血杆菌产碱韦荣氏球菌产碱韦荣氏球菌75100100100占优势占优势常见常见25100100口咽部口咽部 表皮葡萄球菌表皮葡萄球菌类白喉棒杆菌类白喉棒杆菌-链球菌和非溶血链球菌链球菌和非溶血链球菌金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 307050902599 3540 大肠大肠 脆弱拟杆菌脆弱拟杆菌产黑素拟杆菌产黑素拟杆菌口腔拟杆菌口腔拟杆菌具核梭杆菌具核梭杆菌坏死梭杆菌坏死梭杆菌肠球菌肠球菌大肠杆菌大肠杆菌100100100100100100100在洁净区内的人员数量应尽量少，应严格按照在洁净区内的人员数量应尽量少，应严格按照SOPSOP要求要求操作以减少尘埃粒子操作以减少尘埃粒子,要有自我约束的概念。要有自我约束的概念。 1.3 人体带菌及皮屑情况 项目项目 部位部位 数量（个）数量（个） 细菌细菌 手手前额前额头皮头皮1001000/立方厘米立方厘米100010万万/立方厘米立方厘米100万万/立方厘米立方厘米 皮屑皮屑 皮肤表面皮肤表面皮肤更替皮肤更替 脱落尘粒脱落尘粒 1.75平方米平方米5天一次天一次 7.1亿亿/天天 为保证生产环境的洁净度，应认清人体产生污染的部位，做好措施为保证生产环境的洁净度，应认清人体产生污染的部位，做好措施出出入入洁洁净净区区的的无无菌菌服服应应尽尽可可能能覆覆盖盖全全身身，皮皮肤肤暴暴露露部部分分越越少少越越好好，以尽量减少产品的污染。以尽量减少产品的污染。在在洁洁净净区区从从事事药药品品生生产产的的人人员员须须每每年年至至少少进进行行一一次次身身体体检检查查，有有皮肤疾病者、传染病者、体表有伤口者不得进入洁净区。皮肤疾病者、传染病者、体表有伤口者不得进入洁净区。 2.1 洁净室的设计：表面应光滑平整易于清洁消毒、无死角、无裂缝，不易藏灰尘；不同洁净度级别的房间应有足够的压差天花板应密封、穿墙的管道与墙体之间应密封100级洁净区内应无地漏、其它区域地漏应液封设置更衣室、缓冲间，并安装过滤器，门设计成连锁空气流动一般为杂流，上送风下排风，100级为层流更衣室的洁净度级别应与高级别的房间相同。2.洁净区洁净技术的应用2.2洁净区污染的控制保持房间正压：洁净级别不同的相邻房间，之间的静压差5Pa洁净区对外界的静压差10Pa空气总是由洁净级别高的房间向低的房间流动对洁净区空气进行净化：保持空调系统的设计符合洁净区洁净度要求。保持空调系统的净化功能符合要求。按规定对洁净区进行消毒、灭菌保持洁净室联锁装置的正常：3. 洁净区操作注意事项：3.1 洁净区人流管理操作人员进入洁净区应严格按照SOP程序： 存放个人物品换鞋 穿上洁净拖鞋 脱去外衣 洗手 穿上洁净服 戴上口罩检查手消毒戴上洁净手套进入洁净区人员离开洁净区程序： 洁净区缓冲间更衣室（脱下工作鞋、换穿拖鞋、脱下口罩、衣、帽）存衣室（洗手、穿上外衣）换鞋间（脱下拖鞋、走出换鞋间）换鞋存放室维修人员进入洁净区维修工作要求：必须按进入洁净区的SOP要求进入洁净区。将工具清洁后从传递窗传入。在生产状态下，不得从事可能影响产品质量的维修维修工具必须为专用工具，存放在专用地点，并有标识。维修用具在使用完后必须马上清洁，并放回指定地点。不得裸手直接接触药品。不得高声谈笑，必须戴口罩。不可穿着洁净服走出更衣室外面，然后再回到洁净区。洁净区人员工作要求：个人卫生要求不得化妆不得在洁净区内吃饭、喝水。不得在洁净区内抽烟不得有可见伤口不得留长手指甲、戴首饰、传染病患者不得进入洁净区。平时生产工作中，如患有腹泻、感冒、咳嗽、不明原因发热或体表有伤口等轻微疾病，不得进入洁净区。洁净区人员工作要求：正确的行为和操作：保持在洁净区内工作，不随意出入洁净区不随便说话，必要时才说话不要通过传递窗说话，使用电话总是戴上口罩以减少来自口腔的污染机械和设备的维修保养必须有规律的进行定期对洁净室和洁净室内物品进行清洁始终保持洁净区的清洁和整齐良好的行为很关键，请记住：穿着正确、移动正确、行动正确、工作正确防止不正确的行为和操作：防止着装不正确而散播身体的粒子，引起污染防止不戴手套接触物料，引起交叉污染防止在洁净室内脱去洁净室工作服防止用手指接触头发或身体的其他部位防止在患感冒或其他疾病期间进洁净室工作防止在洁净室内吃、喝、抽烟或读报等防止在洁净室内戴首饰、手表防止在洁净室使用错误清洁物料防止在洁净室内快速地走、移动、转身防止靠在工作台、产品或其它物料上防止把手、手臂和手肘放在超净工作台上休息防止搬运物料的顶部防止在工作台上滑动物品3.2 洁净区物流管理物品进出洁净区应该使用传递窗：使用前先检查传递窗连锁装置是否正常，检查传递窗内、外是否清洁，无粉尘，否则，应立即用干净的微湿抹布抹干净才能使用。同一时间，传递窗只能用于一种物料的传递，在清洁后才能进行另一种物料的传递。由非洁净区进入洁净区的物料及物品，通过传递窗，须开启紫外灯照射10min。4.洁净区的清洁和消毒4.1消毒剂的选择地面和工作台面消毒-新洁尔灭不锈钢表面消毒-75%乙醇手消毒- 75%乙醇 消毒剂应轮换交替使用，避免产生耐药性。如0.1%新洁尔灭和2%来苏水消毒液 4.2正确配制、使用消毒剂用纯化水配制消毒液按说明书要求的浓度配制消毒液不要将剩下的消毒液倒入新配的消毒液中不要混合不同种类的消毒液4.3洁净区的清洁：生产完成后应进行清场，对地面、门窗、用具、设备表面、水池、地漏等进行清洁。定期对洁净区墙面、地面、天花、排风、地漏及其它辅助装置进全面擦拭和消毒。定期对洁净区内空气进消毒。单月使用0.1%新洁尔灭，双月使用2%来苏水对洁净区地面、清洁工具进行消毒。单月使用0.2%新洁尔灭，双月使用3%来苏水对洁净区地漏进行消毒4.4洁净区的熏蒸和消毒：洁净区熏蒸一般使用甲醛和过氧乙酸两种消毒剂（每季度轮流更换）。甲醛：能破坏细菌繁殖体及许多芽孢、真菌和病毒。甲醛加高锰酸钾产生大量甲醛气体，可使室内消毒。过氧乙酸：广谱消毒剂，能杀死细菌繁殖体、芽孢、真菌与某些病毒。4.5洁净区的微生物监控：洁净区尘埃粒子、沉降菌、浮游菌、控制菌的监控产品及纯化水的微生物限度监控 本次培训到此结束 谢谢！