第八章第八章 生物碱类药物的分析生物碱类药物的分析 第一节第一节 概述概述一、生物碱（一、生物碱（Alkaloids） 生物碱是生物体内含氮有机化合生物碱是生物体内含氮有机化合物的总称物的总称典型药物的结构 二、生物碱类药物的通性二、生物碱类药物的通性 1. 碱性 季铵碱脂肪胺、脂环胺芳胺、N芳杂环酰胺 小檗碱麻黄碱、阿托品罂粟碱咖啡因 吗啡具酸碱两性 2. 溶解性 游离生物碱不溶或难溶于水，能溶或易溶于有机溶剂，在稀酸中成盐而溶解 生物碱盐类易溶于水，不溶于有机溶剂 3. 旋光性 一般多为左旋体有效。 第二节第二节 鉴别试验鉴别试验 一、特征鉴别反应（一）双缩脲反应（一）双缩脲反应 侧链具有氨基醇结构侧链具有氨基醇结构 （二）Vitali反应 托烷生物碱托烷生物碱 （三）绿奎宁反应 硫酸奎宁、硫酸奎尼丁硫酸奎宁、硫酸奎尼丁（四）Marquis反应 吗啡生物碱吗啡生物碱 （五）Frohde反应 吗啡生物碱吗啡生物碱 （六） 官能团反应 吲哚生物碱吲哚生物碱 1. 利血平利血平 + 新制香草醛新制香草醛玫瑰红色玫瑰红色2. （七）紫脲酸胺反应 黄嘌啉类生物碱黄嘌啉类生物碱 （八）还原反应 吗啡与磷酸可待因的区分反应吗啡与磷酸可待因的区分反应 二、一般鉴别反应（一）熔点测定法（二）沉淀反应 常用的生物碱沉淀试剂为：常用的生物碱沉淀试剂为： 1. 重金属盐类，如重金属盐类，如K2HgI4、KBiI4、I2KI、二氯化汞等；、二氯化汞等； 2. 大分子酸类，如磷钼酸、硅钨大分子酸类，如磷钼酸、硅钨酸等。酸等。（三）显色反应 常用的显色试剂：浓硫酸、浓硝酸、钼硫酸、钒硫酸、硒硫酸、甲醛硫酸等（四）（四）UV（五）（五）IR（六）色谱法（六）色谱法 1. HPLC 2. TLC 硅硅胶胶为为吸吸附附剂剂：游游离离生生物物碱碱能能顺顺利利迁迁移移，生生物物碱碱盐盐类类吸吸附附太太牢牢，造造成成严重拖尾。严重拖尾。 解决方法：解决方法： （1）在展开剂中加少量的碱性试剂，）在展开剂中加少量的碱性试剂，如氨、二乙胺、有机脂烃胺类；如氨、二乙胺、有机脂烃胺类； （2）硅胶板用碱处理）硅胶板用碱处理 第三节第三节 特殊杂质检查特殊杂质检查 特殊杂质检查主要根据药物与杂质的理化性质差异来进行。 利用药物和杂质在颜色、溶解行利用药物和杂质在颜色、溶解行为、旋光性质、对光吸收选择性等物为、旋光性质、对光吸收选择性等物理性质上的差异，检查杂质是否符合理性质上的差异，检查杂质是否符合限量规定限量规定一、物理法一、物理法 利用药物与杂质在挥发性、臭味等方面的差异进行检查。（一）臭味及挥发性的差异（一）臭味及挥发性的差异ChP（2000） 麻醉乙醚中异臭的检查麻醉乙醚中异臭的检查 取本品取本品 10ml，置瓷蒸发皿中，使自，置瓷蒸发皿中，使自然挥发，挥散完毕后，不得有异臭。然挥发，挥散完毕后，不得有异臭。（二）（二） 颜色的差异颜色的差异ChP（2000） 盐酸阿扑吗啡盐酸阿扑吗啡检查检查 分解产物分解产物 取本品取本品 0.10g，加，加无水氧化物的乙醚无水氧化物的乙醚 5ml，振摇后，乙，振摇后，乙醚液只许显极淡的红色。醚液只许显极淡的红色。（三）溶解行为的差异（三）溶解行为的差异 利用药物与杂质在溶解性方面的差利用药物与杂质在溶解性方面的差异进行检查。如葡萄糖中糊精的检查。异进行检查。如葡萄糖中糊精的检查。（四）旋光性质的差异（四）旋光性质的差异ChP（2000） 硫酸阿托品硫酸阿托品检查检查 莨菪碱莨菪碱 取本品，按干燥品取本品，按干燥品计算，加水制成每计算，加水制成每 1ml 中含中含 50mg 的的溶液，依法测定（附录溶液，依法测定（附录 E），旋光），旋光度不得过度不得过 0.40。（五）对光吸收性质的差异（五）对光吸收性质的差异分光光度法分光光度法 利用药物与杂质在紫外吸收光谱方面的差异进行检查。 1. 紫外分光光度法 例1. 中国药典（2000年版）规定肾上腺素中检查肾上腺素酮的方法为：取本品，加盐酸溶液（92000）制成每1ml中含2.0mg的溶液，于310nm波长处测定，吸收度不得超过0.05，已知肾上腺素酮在310nm波长处的为453，肾上腺素在该波长处无吸收。请计算肾上腺素酮的限量应为（D）A. 0.1 B. 0.5 C. 0.04D. 0.06% E. 0.0002 2. IR 用于药物中无效或低效晶型的检查。利用药物与杂质有特征峰差异进行检查。如甲苯咪唑中A晶型的检查、无味氯霉素混悬剂中A晶型的检查。 X射线粉末衍射法 3. 原子吸收分光光度法 主要用于金属元素的检查，具有灵敏度高、选择性好等优点。如肝素钠中钾盐的检查。（六）吸附或分配性质的差异（六）吸附或分配性质的差异色谱色谱法法 1. TLC （1）杂质对照品法 （2）高低浓度对比法 （3）参比杂质对照品法 选用可能存在的某种物质作为杂质对照品。（4）选用质量符合规定的与供试品相同的药物作为杂质对照品。 2纸色谱 用于极性较大药物中杂质的检查或放射性药物注射液（或溶液）中放射化学杂质的检查。如地高辛中洋地黄毒苷的检查。 缺点：展开时间长，斑点扩散，不能用强酸等腐蚀性显色剂 3HPLC （1）内标法加校正因子测定供试品中某个杂质的含量 准确测定杂质含量 方法 内标物+杂质对照品对照溶液，进样，测定，计算校正因子 供试品+内标供试品溶液，进样，测定杂质和内标峰面积或峰高，计算杂质含量 （2）外标法测定供试品中某个杂质的含量供试品供试品溶液 杂质对照品对照品溶液 进样，测定，计算杂质的含量 缺点：不易准确控制进样量，宜用定量环进样 （3）加校正因子的主成分自身对照法方法 待测成分对照品+杂质对照品溶液，进样，记录色谱图，计算杂质的校正因子 分别进样，供试品溶液的记录时间除另分别进样，供试品溶液的记录时间除另有规定外，应为主成分保留时间的若干倍，有规定外，应为主成分保留时间的若干倍，测量供试品溶液色谱图上各杂质的峰面积，测量供试品溶液色谱图上各杂质的峰面积，分别乘以相应的校正因子后与对照溶液主成分别乘以相应的校正因子后与对照溶液主成分的峰面积比较，依法计算各杂质含量。分的峰面积比较，依法计算各杂质含量。（4）不加校正因子的主成分自身对照法 无杂质对照品，且杂质峰面积与主成分峰面积相差悬殊时应用。 方法 分别进样，测定供试品溶液中各杂质峰面积及其总和，与对照溶液主成分峰面积比较，控制供试品中杂质的量。 缺点：检测波长处，各杂质和药物的吸收强度可能有差异，准确度差 优点：不需杂质对照品，可同时控制各个杂质及其总量限度 （5）面积归一化法 取一定量供试品溶液进样，测定各杂质及药物的峰面积，计算各杂质峰面积及其总和占总峰面积的百分率，不能超过限量。注意溶剂峰不应计算在总峰面积内。 优点：不需杂质对照品，简便易行。 缺点：检测波长处，各杂质和药物的吸收强度可能有差异，控制杂质峰面积百分率不一定就是杂质限量，准确度差。 4GC 用于药物中挥发性杂质的检查。如药物中有机溶剂残留量测定。检查方法同HPLC。 二、化学法二、化学法 利用药物与杂质在化学性质上的差异进行检查。如阿司匹林中水杨酸的检查。98：77乙醇中检查杂醇油是利用（C）A. 颜色的差异B. 旋光的差异C. 臭味及挥发性的差异D. 对光选择吸收的差异E. 溶解行为的差异例. 药物中特殊杂质的检查方法有（ABCDE）A沉淀法与颜色法B滴定法C旋光法D分光光度法E色谱法例. HPLC检查药物中杂质的具体方法有（ABCDE）A峰面积归一化法B主成分自身对照法C内标法D外标法E内标法加校正因例. 最常用于药物中特殊杂质检查的方法是(A)A. TLCB. IRC. UVD. MSE. NMR例. 红外分光光度法在杂质检查中主要用于（A）A. 药物中无效或低效晶型的检查B. 杂质特征峰的确定C. 杂质相关峰的确定D. 杂质官能团的确定E. 药物和杂质的鉴别一、非水溶液滴定法（非水碱量法）一、非水溶液滴定法（非水碱量法） 原料药原料药（一）原理 水水溶溶液液中中滴滴定定突突跃跃不不明明显显，在在非非水水介质中，碱性增强，使滴定顺利进行介质中，碱性增强，使滴定顺利进行 第四节第四节 含量测定含量测定 1. 溶剂溶剂 酸酸性性溶溶剂剂：冰冰醋醋酸酸、冰冰醋醋酸酸+醋醋酐酐、醋酐醋酐 惰性溶剂：惰性溶剂：苯、氯仿、四氯化碳苯、氯仿、四氯化碳 能能影影响响溶溶质质的的解解离离情情况况和和能能影影响响酸酸碱碱强强度度很很大大的的溶溶剂剂：硝硝基基甲甲烷烷、丙丙酮、二氧六环酮、二氧六环 2. 滴定剂：高氯酸的冰醋酸溶液高氯酸的冰醋酸溶液 或高氯酸的二氧六环溶液或高氯酸的二氧六环溶液 3. 指示终点的方法 电位法电位法：玻璃：玻璃甘汞电极系统甘汞电极系统 指示剂法指示剂法：结晶紫、喹哪啶红等：结晶紫、喹哪啶红等 有有机机碱碱及及其其盐盐类类及及有有机机酸酸碱碱金金属属盐类盐类8pKb10 冰醋酸作溶剂冰醋酸作溶剂10pKb12 冰醋酸冰醋酸+醋酐醋酐pKb12 醋酐醋酐 （二）适用范围 一一般般采采用用半半微微量量法法。中中国国药药典典（2000年年版版）的的测测定定方方法法为为：取取经经适适当当方方法法干干燥燥的的供供试试品品适适量量约约消消耗耗高高氯氯酸酸滴滴定定液液（0.1 mol/L）8 ml，加加冰冰醋醋酸酸1030 ml使使溶溶解解。若若供供试试品品为为氢氢卤卤酸酸盐盐，应应再再加加5醋醋酸酸汞汞的的冰冰醋醋酸酸溶溶液液35 m1，加加各各药药品品项项下下规规定定的的指指 示示 液液 1 2滴滴 ， 用用 高高 氯氯 酸酸 滴滴 定定 液液（0.1mol/L）滴滴定定，并并将将滴滴定定结结果果用用空空白白试验校正。试验校正。 （三）一般测定方法（三）一般测定方法 取取本本品品约约 0.15g，精精密密称称定定，加加醋醋酐酐冰冰醋醋酸酸（5 1）的的混混合合液液 25ml，微微热热使使溶溶解解，放放冷冷，加加结结晶晶紫紫指指示示液液 1滴滴，用用高高氯氯酸酸滴滴定定液液（0.1mo1/L）滴滴定定，至至溶溶液液显显黄黄色色，并并将将滴滴定定的的结结果果用用空空白白试试验验校校正正。每每 1ml 高高氯氯酸酸滴滴定定液液（0.1mol/L）相相当当于于 19.42mg 的的C8H10N4O2。咖啡因咖啡因 ChP(2000)（四）生物碱盐类的滴定（四）生物碱盐类的滴定 置换滴定：置换滴定： 无机酸在冰醋酸中的酸性次序为：无机酸在冰醋酸中的酸性次序为：高氯酸氢溴酸盐酸硫酸高氯酸氢溴酸盐酸硫酸硝酸其它弱酸硝酸其它弱酸 （磷酸、有机酸）（磷酸、有机酸） 由由于于有有机机酸酸系系弱弱酸酸，被被高高氯氯酸酸置置换换出出的的HA，对对滴滴定定无无干干扰扰，能能准准确确滴滴定。定。 1. 有机酸盐的测定有机酸盐的测定 取取本本品品约约 60mg，精精密密称称定定，加加冰冰醋醋酸酸 20ml 溶溶解解后后，加加结结晶晶紫紫指指示示液液 1滴滴，用用高高氯氯酸酸滴滴定定液液（0.05mo1/L）滴滴定定，至至溶溶液液显显蓝蓝绿绿色色，并并将将滴滴定定的的结结果果用用空空白白试试验验校校正正。每每 1ml 高高氯氯酸酸滴滴定定液液（0.05mol/L）相相当于当于 22.07mg 的的C19H23N3O2 C4H4O4。马来酸麦角新碱马来酸麦角新碱 ChP(2000) 若若被被置置换换出出的的有有机机酸酸不不溶溶于于冰冰醋醋酸酸，应应先先将将样样品品碱碱化化，有有机机溶溶剂剂提提取取游离碱后，再非水碱量法测定。游离碱后，再非水碱量法测定。 一般均预先在溶液中加入一般均预先在溶液中加入Hg(Ac)2 的冰醋酸溶液，以消除氢卤的冰醋酸溶液，以消除氢卤酸对滴定的干扰。酸对滴定的干扰。 理论量理论量13倍倍 2. 氢卤酸盐的测定取取本本品品约约 0.15g，精精密密称称定定，加加冰冰醋醋酸酸 10ml，加加热热溶溶解解后后，加加醋醋酸酸汞汞试试液液 4ml 与与结结晶晶紫紫指指示示液液 1滴滴，用用高高氯氯酸酸滴滴定定液液（0.1mo1/L）滴滴定定至至溶溶液液显显翠翠绿绿色色，并并将将滴滴定定的的结结果果用用空空白白试试验验校校正正。每每 1ml 高高氯氯酸酸滴滴定定液液（0.1mol/L）相相当于当于 20.17mg 的的C10H15NO HCl。盐酸麻黄碱盐酸麻黄碱 ChP(2000) 生生物物碱碱的的硫硫酸酸盐盐，在在冰冰醋醋酸酸介介质质中中只只能能被滴定至生物碱的硫酸氢盐。被滴定至生物碱的硫酸氢盐。 （1）直接滴定）直接滴定3. 硫酸盐的测定A. 硫酸阿托品 HClO4直接滴定时，反应摩尔比为11B. 硫酸奎宁 HClO4直接滴定时，反应摩尔比为13 （2）加加入入高高氯氯酸酸钡钡消消除除硫硫酸酸的的干干扰扰后后滴定滴定 硫酸奎宁硫酸奎宁 反应摩尔比为反应摩尔比为1 2 硫酸阿托品硫酸阿托品 一元碱不能滴定一元碱不能滴定 因因HNO3具具有有氧氧化化性性，可可使使指指示示剂剂变变色色，一一般般电电位位法法指指示示终终点点。如如硝硝酸酸士的宁、硝酸毛果芸香碱士的宁、硝酸毛果芸香碱 4. 硝酸盐的测定 取取本本品品约约 0.3g，精精密密称称定定，加加冰冰醋醋酸酸 20ml，振振摇摇使使溶溶解解，照照电电位位滴滴定定法法（附附录录 A），用用高高氯氯酸酸滴滴定定液液（0.1mo1/L）滴滴定定，并并将将滴滴定定的的结结果果用用空空白白试试验验校校正正。每每 1ml 高高氯氯酸酸滴滴定定液液 （ 0.1mol/L） 相相 当当 于于 39.74mg的的C21H22N2O2 HNO3。硝酸士的宁硝酸士的宁 ChP(2000) 按常法测定，按常法测定，如磷酸氯喹、磷酸如磷酸氯喹、磷酸可待因可待因 5. 磷酸盐的测定 简简便便、快快速速、准准确确、精精密密、取取样样量小，测定的是生理活性部分。量小，测定的是生理活性部分。 如有酸性或碱性成分存在时会影如有酸性或碱性成分存在时会影响，选择性差，不能直接用于制剂分响，选择性差，不能直接用于制剂分析，只能用于原料药测定。析，只能用于原料药测定。 （五）特点（五）特点（1）一一般般是是取取一一定定量量样样品品在在水水浴浴上上蒸蒸干干，在在一一定定温温度度下下干干燥燥后后按按原原料料药药物物项项下下的的方方法进行。法进行。主药对热稳定主药对热稳定（六）制剂分析（六）制剂分析1. 注射剂注射剂 精精密密量量取取本本品品 10ml，置置水水浴浴上上蒸蒸干干，在在 105 干干燥燥 1h，放放冷冷，加加冰冰醋醋酸酸 10ml，与与醋醋酸酸汞汞试试液液 6ml 使使溶溶解解，加加结结晶晶紫紫指指示示液液 1滴滴，用用高高氯氯酸酸滴滴定定液液（0.1mo1/L）滴滴定定，至至溶溶液液显显绿绿色色，并并将将滴滴定定的的结结果果用用空空白白试试验验校校正正。每每 1ml 高高氯氯酸酸滴滴定定液液（0.1mol/L）相相当当于于37.58mg 的的C20H21NO4 HCl。盐酸罂粟碱注射液盐酸罂粟碱注射液 ChP（2000）（2）碱碱化化，经经有有机机溶溶剂剂反反复复提提取取完完全全，蒸蒸去去溶溶剂剂后后，再再按按原原料料药药方方法法进进行行。主药对热不稳定主药对热不稳定二盐酸奎宁注射液二盐酸奎宁注射液 ChP（2000） 精精密密量量取取本本品品适适量量（约约相相当当于于二二盐盐酸酸奎奎宁宁 0.15g），置置分分液液漏漏斗斗中中，加加水水使使成成20ml，加加氨氨试试液液使使成成碱碱性性，用用氯氯仿仿分分次次振振摇摇提提取取，第第一一次次 25ml，以以后后每每次次各各 10ml，至至奎奎宁宁提提尽尽为为止止，每每次次得得到到的的氯氯仿仿液液均均用用同同一一份份水水洗洗涤涤 2 次次，每每次次 5 ml，洗洗液液用用氯氯仿仿 10ml 振振摇摇提提取取，合合并并氯氯仿仿液液，置置水水浴浴上上蒸蒸去去氯氯仿仿，加加无无水水乙乙醇醇 2ml再再蒸蒸干干，在在 105 干干燥燥 1h，放放冷冷，加加醋醋酐酐 5ml 与与冰冰醋醋酸酸 10ml，溶溶解解后后，加加结结晶晶紫紫指指示示液液 1滴滴，用用高高氯氯酸酸滴滴定定液液（0.1mo1/L）滴滴定定，至至溶溶液液显显蓝蓝色色，并并将将滴滴定定的的结结果果用用空空白白试试验验校校正正。每每 1ml 高高氯氯酸酸滴滴定定液液（0.1mol/L）相当于相当于19.87mg 的的C20H24N2O2 2HCl。 片片剂剂中中许许多多赋赋形形剂剂如如硬硬脂脂酸酸盐盐、苯苯甲甲酸酸盐盐、羧羧甲甲基基纤纤维维素素钠钠等等都都消消耗耗高高氯氯酸酸，因因此此片片剂剂的的测测定定一一般般需需提提取取分分离并经干燥后才可进行。离并经干燥后才可进行。2. 片剂片剂：如硫酸奎宁片、硫酸奎尼丁片如硫酸奎宁片、硫酸奎尼丁片 碱化、有机溶剂提取后，碱化、有机溶剂提取后，HClO4滴滴定时，反应摩尔比为定时，反应摩尔比为1 4 硫酸奎宁片硫酸奎宁片 ChP（2000） 取取本本品品 10 片片，除除去去糖糖衣衣后后，精精密密称称定定，研研细细，精精密密称称取取适适量量（约约相相当当于于硫硫酸酸奎奎宁宁 0.3g），置置分分液液漏漏斗斗中中，加加氯氯化化钠钠0.5g 与与 0.1mol/L 氢氢氧氧化化钠钠溶溶液液 10ml，混混匀匀，精精密密加加氯氯仿仿50ml，振振摇摇10min，静静置，分取氯仿液，用干燥滤纸滤过。置，分取氯仿液，用干燥滤纸滤过。精精密密量量取取续续滤滤液液25ml，加加醋醋酐酐5ml 与与二二甲甲基基黄黄指指示示液液2滴滴，用用高高氯氯酸酸滴滴定定液液（0.1mo1/L）滴滴定定，至至溶溶液液显显玫玫瑰瑰红红色色，并并将将滴滴定定的的结结果果用用空空白白试试验验校校正正。每每1ml 高高氯氯酸酸滴滴定定液液（0.1 mol/L）相相当当于于19.57mg的的（C20H24N2O2）2 H2SO42H2O。二、提取中和法（二、提取中和法（提取酸碱滴定法、提取酸碱滴定法、提取容量法）提取容量法） （一）原理与方法 1. 碱化2. 有机溶剂提取3. 中和法测定 （1）直接滴定法直接滴定法 用于碱性较强的生物碱用于碱性较强的生物碱 （2）剩余滴定法剩余滴定法 用于碱性较弱的生物碱用于碱性较弱的生物碱 （3）酸滴定液返提后剩余滴定法酸滴定液返提后剩余滴定法 用于对热不稳定的生物碱用于对热不稳定的生物碱 1. 碱化试剂 最常用氨水最常用氨水 2. 提取溶剂 （1）提取溶剂选择的原则）提取溶剂选择的原则（2）常用的提取溶剂）常用的提取溶剂 最常用氯仿最常用氯仿（二）测定条件的选择（3）提取溶剂的用量及提取次数）提取溶剂的用量及提取次数 通通常常应应提提取取4次次，第第一一次次用用量量至至少少应应为为水水液液体体积积的的一一半半，以以后后几几次次应应各为第一次的一半各为第一次的一半 3. 提取终点的确定 用用合合适适的的沉沉淀淀反反应确定应确定4. 指示剂的选择 5. 乳化的预防和消除乳化的预防和消除 仪仪器器简简单单、试试剂剂常常用用，但但操操作作繁繁琐琐、费费时时、精精密密度度差差、准准确确度度差差，主主要用于制剂分析要用于制剂分析（三）特点（三）特点阿片粉中吗啡的含量测定阿片粉中吗啡的含量测定石灰法石灰法 ChP（1995） 固固相相萃萃取取离离子子对对-反反相相高高效效液液相相色色谱谱法法 ChP（2000）（四）应用（四）应用（五）提取重量法（五）提取重量法 （一）基本原理 在适当的pH介质中 三、酸性染料比色法三、酸性染料比色法 制剂1. 水相中反应水相中反应 离离子子对对BH+In-被被有有机机溶溶剂剂提提取取，使使有有机机相相呈呈色色。剩剩余余的的酸酸性性染染料留于水相料留于水相3. 比色法测定比色法测定2. 有机溶剂提取有机溶剂提取（1）定定量量分分离离出出有有机机提提取取液液，脱脱水水后后，测定测定A，求出有机碱含量，求出有机碱含量 （2）定定量量分分离离出出有有机机提提取取液液，脱脱水水后后，碱碱化化，则则水水相相呈呈色色，测测定定水水相相中中In-的吸收度，间接求出有机碱的含量的吸收度，间接求出有机碱的含量 BH+In- + OH- B + H2O + In- （3）定定量量分分离离出出有有机机提提取取液液，脱脱水水后后，酸酸化化，则则水水相相呈呈色色，测测定定水水相相中中HIn的的吸吸收收度度，间间接接求求出出有有机机碱碱的的含含量量BH+In- + H+ BH+ HIn 1. 水水相相的的最最适适pH值值 如如果果水水相相pH值值过过小小，酸酸性性染染料料几几乎乎仍仍以以分分子子状状态态存存在在；如如果果水水相相pH值值过过大大，则则生生物物碱碱几乎全部以游离碱的形式存在几乎全部以游离碱的形式存在 2. 有机溶剂的选择有机溶剂的选择 CHCl3、CH2Cl2 （二）影响定量分析的因素3. 酸酸性性染染料料的的选选择择 常常用用溴溴甲甲酚酚绿绿、溴麝香草酚蓝（溴麝香草酚蓝（BTB）等）等5. 有色杂质的排除有色杂质的排除4. 水分的影响水分的影响 严防水分的混入严防水分的混入 有有机机层层可可加加入入无无水水硫硫酸酸钠钠等等脱脱水水剂或经干燥滤纸滤过剂或经干燥滤纸滤过 6. 共存物的影响共存物的影响 3. 准准确确度度差差，不不能能用用于于原原料料药药的的测定，只能用于制剂分析测定，只能用于制剂分析（三）特点（三）特点 1. 选择性高（选用适当选择性高（选用适当pH缓冲液缓冲液可消除干扰）可消除干扰）2. 灵敏度高、供试品用量少灵敏度高、供试品用量少硫酸阿托品注射液硫酸阿托品注射液 ChP（2000）注射液注射液 对照法对照法（四）应用（四）应用片剂片剂 对照法对照法五、色谱法五、色谱法 （一）高效液相色谱法（一）高效液相色谱法 1反相反相 HPLC 分析生物碱类和有分析生物碱类和有机含氮药物的特点机含氮药物的特点 色谱峰拖尾，保留时间过长，甚色谱峰拖尾，保留时间过长，甚至长期地保留在色谱柱上。至长期地保留在色谱柱上。 四、紫外四、紫外可见分光光度法可见分光光度法 （1）加加扫扫尾尾剂剂法法 分分离离依依据据物物质质的的极极性性及及溶溶解解性性。在在流流动动相相中中加加入入扫扫尾尾剂剂，最常用的扫尾剂是三乙胺最常用的扫尾剂是三乙胺（2）用用硅硅胶胶作作固固定定相相法法 离离子子交交换换机机理：根据理：根据pKa大小进行分离大小进行分离 2解决方法解决方法 流流动动相相要要选选择择适适宜宜的的 pH 值值、竞竞争争离离子子的的种种类类和和浓浓度度，同同时时要要加加入入有有机机改性剂改性剂 适合于药物与体内代谢物的分析适合于药物与体内代谢物的分析 （3）用金刚烷基硅烷化硅胶作固定相）用金刚烷基硅烷化硅胶作固定相法法 分离依据物质溶解性分离依据物质溶解性 不不论论是是游游离离碱碱还还是是其其盐盐类类，均均是是以游离碱出峰以游离碱出峰（二）气相色谱法（二）气相色谱法97：83咖啡因和茶碱的特征鉴别反应是A. 双缩脲反应B. Vitali反应C. Marquis反应D. 紫脲酸铵反应E. 绿奎宁反应 98：139盐酸吗啡中应检查的特殊杂质为A. 吗啡B. 阿朴吗啡C. 罂粟碱D. 莨菪碱E. 其它生物碱 96：136用非水溶液滴定法测定盐酸吗啡含量时，应使用的试剂是A. 5醋酸汞冰醋酸液B. 盐酸C. 冰醋酸D. 二甲基甲酰胺E. 高氯酸 97：130非水溶液滴定法测定硫酸奎宁含量的反应条件为 A冰醋酸一醋酐为溶剂 B. 高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定 C1mol的高氯酸与mol的硫酸奎宁反应 D. 仅用电位法指示终点 E溴酚蓝为指示剂 99：78. 非水溶液滴定法测定硫酸奎宁原料的含量时，可以用高氯酸直接滴定冰醋酸介质中的供试品，1摩尔硫酸奎宁需要消耗高氯酸的摩尔数为 A. 1 B. 2 C. 3 D. 4 E. 5 99x：116120滴定反应中 A. 被测物与HClO4的摩尔比为11 B. 被测物与HClO4的摩尔比为13 C. 两者均是 D. 两者均不是99x：116硫酸奎宁片经氯仿提取后用HClO4滴定（D）99x：117硫酸阿托品在冰醋酸中用HClO4滴定99x：118. 硫酸奎宁原料药用HClO4滴定99x：119. 磷酸可待因用HClO4滴定99x：120. 硝酸士的宁用HClO4滴定（A）（B）（A）(A)96：129. 生物碱类药物制剂的测定方法 A. 直接用有机溶剂提取后，用H2SO4标准液滴定 B. 碱化后用有机溶剂提取，再用NaOH水溶液滴定 C. 碱化后用有机溶剂提取，蒸去有机溶剂后用中性醇溶液，再用H2SO4标准液滴定 D. 碱化后用有机溶剂提取，蒸去有机溶剂，再加入定量的H2SO4，再用NaOH标准液回滴 E. 酸化后，用有机溶剂提取，采用适宜方法滴定96：77. 酸件染料比色法中，水相的pH值过小，则A. 能形成离子对B. 有机溶剂提取能完全C. 酸性染料以阴离子状态存在D. 生物碱几乎全部以分子状态存在E. 酸性染料以分子状态存在 95：111115可选择的药物： A. 阿托品 B. 吗啡 C. 两者均可 D. 两者均不可 95：111. 具有酯结构 95：112. 为两性化合物 95：113. 显较强碱性 95：114. 用提取容量法测定 95：115. 用碱性染料比色法（A）（B）（A）（C）（D）例15 A. 双缩脲反应 B. Marquis反应 C. 两者皆是 D. 两者皆不是 1. 盐酸麻黄碱 2. 某些生物碱类药物 3. 盐酸吗啡 4. 咖啡因 5. 硫酸奎尼丁（A）（C）（B）（D）（D）例6. 生物碱类药物的一般鉴别试验包括A. 熔点测定B. 显色反应C. 沉淀反应D. 光谱法（紫外、红外）E. 薄层色谱法 例7. 能够发生Vitali反应的药物是A. 盐酸吗啡B. 硫酸奎宁C. 磷酸可待因D. 盐酸麻黄碱E. 硫酸阿托品 例8. 用非水溶液滴定法测定二盐酸奎宁时，二盐酸奎宁和HClO4的摩尔比是A. 11B. 12C. 13D. 14E. 11.5 例9. 检查硫酸阿托品中莨菪碱时，应采用A. 色谱法B. 红外分光法C. 旋光度法D. 显色法E. 直接检查法 例10. 酸性染料比色法测定生物碱类药物，有机溶剂萃取测定的有色物是A. 离子对和指示剂的混合物B. 生物碱盐C. 指示剂D. 离子对E. 游离生物碱