同型半胱氨酸与高血压及脑卒中相同型半胱氨酸与高血压及脑卒中相关性的研究关性的研究张伟毅博士张伟毅博士澳大利亚悉尼大学澳大利亚悉尼大学同型半胱氨酸代谢途径同型半胱氨酸代谢途径 同型半胱氨酸又称为高半胱氨酸同型半胱氨酸又称为高半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)，是甲硫氨酸的中间代谢产物，是甲硫氨酸的中间代谢产物，在体内由甲硫氨酸转甲基后生成，有两种去路，一在体内由甲硫氨酸转甲基后生成，有两种去路，一是是Hcy可在胱硫醚缩合酶可在胱硫醚缩合酶(CBS)和胱硫醚酶的催化下和胱硫醚酶的催化下生成半胱氨酸，需要维生素生成半胱氨酸，需要维生素B6的参与，或经巯基氧的参与，或经巯基氧化结合生成高胱氨酸，另外化结合生成高胱氨酸，另外Hcy还可在叶酸和维生还可在叶酸和维生素素B12的辅助作用下再甲基化重新合成甲硫氨酸，的辅助作用下再甲基化重新合成甲硫氨酸，此过程需甲硫氨酸合成酶此过程需甲硫氨酸合成酶(MS)的催化，并且必须有的催化，并且必须有N5-甲基四氢叶酸作为甲基的供体，后者是四氢叶甲基四氢叶酸作为甲基的供体，后者是四氢叶酸经酸经5，10-甲烯四氢叶酸还原酶甲烯四氢叶酸还原酶(MTHFR)催化而催化而产生产生 PCR for TNF-PCR for TNF- 高同型半胱氨酸血症高同型半胱氨酸血症 相关疾病：相关疾病： 动脉粥样硬化动脉粥样硬化 (1969) 心脏病心脏病 (1984) 脑卒中脑卒中 (1991): 独立危险因素中国高血压现状中国高血压现状 高血压发病人数高血压发病人数 : 约约2亿亿 同型半胱氨酸与高血压同型半胱氨酸与高血压: 原发性高血压伴高同型原发性高血压伴高同型半胱氨酸血症半胱氨酸血症 (血浆中浓度15 umol/L)：1.5 亿(占高血压病人75%) 心脏病及脑卒中发病风险心脏病及脑卒中发病风险: 28 倍 MTHFR 纯合突变型纯合突变型 (TT): 风险达到40倍 国内脑卒中现状国内脑卒中现状l2008年在国内排名第一的死因为脑卒中年在国内排名第一的死因为脑卒中l耗资耗资(RMB): 4亿亿/年年l病人病人: 750万MTHFRlMTHFR:亚甲基四氢叶酸还原酶亚甲基四氢叶酸还原酶l位置位置:1p36.3（1号染色体短臂36.3）l基因多态性及突变基因多态性及突变 (43个位点) l基因型及表型基因型及表型lC677T MTHFR 1995（第677号位点由C突变为T）不同基因型所保留的不同基因型所保留的MTHFR活性活性: CC（野生型）（野生型） 100 CT（杂合突变型）杂合突变型） 71 (国人突变频率为35%) TT（纯合突变型）纯合突变型） 34 (国人突变频率为22%,白 种人仅10%）lA1298T MTHFR 2001l其它其它7个较常见易突变位点个较常见易突变位点l34 个不常见突变位点个不常见突变位点 2003MTHFR MTHFR 多态性多态性多态性多态性l高同型半胱氨酸血症高同型半胱氨酸血症l心脏病心脏病l脑卒中脑卒中l深部静脉血栓深部静脉血栓l外周神经障碍外周神经障碍l胎盘血管问题胎盘血管问题 (死胎死胎)l胎儿发育不良、唇裂、妊娠中毒症等胎儿发育不良、唇裂、妊娠中毒症等,C677T C677T 缺陷缺陷缺陷缺陷l抑郁、焦虑抑郁、焦虑l纤维肌痛纤维肌痛l慢性疲劳慢性疲劳l偏头痛偏头痛l痴呆痴呆l神经痛神经痛l精神分裂症精神分裂症l帕金森氏综合征帕金森氏综合征A1298T A1298T 缺陷缺陷缺陷缺陷l基因组基因组 DNA 100ngl引物各引物各 10 pmoll上游引物上游引物: 5-CAAAGGCCACCCCGAAGC-3l下游引物下游引物: 5-AGGACGGTGCGGTGAGAGTG-3l1 X Taq酶缓冲液酶缓冲液(2 mM MgCl2)lTaq 酶酶 0.25 Ul退火温度退火温度: 680Cl产物片段长度产物片段长度: 246 bpMTHFR C677TMTHFR C677T PCRPCR扩增扩增扩增扩增l限制性内切酶限制性内切酶: Hinf I, 5 Ul条条 件件: 370C 过夜l基基 因因 型型:CC（野生型） - 246 bp TC（杂合突变型）- 246, 174, 72 bp TT (纯合突变型)- 174, 72 bpMTHFR C677TMTHFR C677T的限制性片段长的限制性片段长的限制性片段长的限制性片段长度多态性检测度多态性检测度多态性检测度多态性检测CBSlCBS: 胱硫醚合酶l位置位置:21q22.3（21号染色体长臂号染色体长臂22.3）l目的基因目的基因: CBS 844位点插入了68个基因l上游引物上游引物: 5-TGCGAGGATGGACCCTTCGG-3l下游引物下游引物: 5-GCAGTTGTTAACGGCGGTAT-3l1 X Taq酶缓冲液酶缓冲液(2 mM MgCl2)lTaq 酶酶 0.25 Ul退火温度退火温度: 550CPCR for CBS PCR for CBS l基因型基因型: DD (野生型)- 148 bp DI（杂合突变型）- 216, 148 bp II（纯合突变型）- 216 bpCBSCBS的基因型的基因型的基因型的基因型需检测人群需检测人群 高危人群高危人群l1、原发性高血压原发性高血压l2、高同型半胱氨酸高血压高同型半胱氨酸高血压l3、高血压伴随高血脂、高血糖、高血压伴随高血脂、高血糖l4、以前发生过血栓、以前发生过血栓l5、家族史、家族史预预 防防l叶酸叶酸: 400ug/天 孕妇lMTHFR 纯合突变型纯合突变型TT : 更多的叶酸l肝素肝素: 低分子量