大肠杆菌生长曲线的测定大肠杆菌生长曲线的测定授课教师授课教师: : 孙运军孙运军研研 究究 生生: : 何浩何浩 张晨张晨 黄同龙黄同龙 左明星左明星1目的要求目的要求1、通过光密度值的测量了解大肠杆菌的生 长规律，绘制生长曲线。2、了解光电比浊法测量细菌数量的原理。细菌数量的原理。2 基本原理 将一定量的细菌接种到将一定量的细菌接种到恒容积恒容积的液体培养基的液体培养基中，在适宜的培养条件下，该群体就会有规律的中，在适宜的培养条件下，该群体就会有规律的增长。以培养时间为横坐标，以细胞数目的对数增长。以培养时间为横坐标，以细胞数目的对数或生长速率为纵坐标作图所绘制的曲线称为该细或生长速率为纵坐标作图所绘制的曲线称为该细菌的生长曲线。该曲线包括四个阶段：延滞期、菌的生长曲线。该曲线包括四个阶段：延滞期、指数期、稳定期、衰亡期。指数期、稳定期、衰亡期。 345 本本实实验验采采用用分分光光光光度度计计进进行行光光电电比比浊浊测测定定不不同同培培养养时时间间细细菌菌悬悬浮浮液液的的光光密密度度值值，绘制生长曲线。绘制生长曲线。6光吸收的基本定律：光吸收的基本定律：朗伯比耳定律朗伯比耳定律A=kbc (k为摩尔吸光系数，b为液层厚度，c为溶液浓度)朗伯比耳定律的意义是：当一束平行单色光通过均匀、非散射的溶液时，其吸光度与溶液浓度和液层厚度的乘积成正比。FeSO4溶液在溶液在650nm的的光吸收曲线光吸收曲线7大肠杆菌悬浮液的光吸收规律：实验表明，实验表明，OD600在在0.1 0.65之内的之内的大肠杆菌悬浮液基本符合大肠杆菌悬浮液基本符合朗朗伯比耳定律，即吸光度与菌液浓度成正比。伯比耳定律，即吸光度与菌液浓度成正比。大肠杆菌梯度稀释液的大肠杆菌梯度稀释液的光吸收曲线光吸收曲线8 器器 材材 1 1、菌、菌 种：大肠杆菌。种：大肠杆菌。 2 2、培养基：、培养基：LB液体培养基。液体培养基。 3 3、仪器与耗材：、仪器与耗材：722型分光光度计、恒温摇型分光光度计、恒温摇 床、无菌试管、无菌吸管。床、无菌试管、无菌吸管。9操作步骤操作步骤 1、配制、配制LB液体培养基液体培养基100 ml，分装，分装1支试管支试管(5 ml/支支)，剩余培养，剩余培养 基装入基装入250 ml的三角瓶，的三角瓶，121灭菌灭菌20min。 2、取、取11支无菌大试管，用记号笔分别标明培养时间，即支无菌大试管，用记号笔分别标明培养时间，即0、1.5、 3、4、6、8、10、12、14、16和和20 h。 3、用、用5 ml无菌吸管取无菌吸管取2.5 ml大肠杆菌培养液大肠杆菌培养液(培养培养12h)转入装有转入装有 LB液体培养基的三角瓶内，混匀后分别取液体培养基的三角瓶内，混匀后分别取5ml混合液放混合液放 入上述标记的入上述标记的11支无菌大试管中。支无菌大试管中。 4、将已接种的试管置摇床、将已接种的试管置摇床37振荡培养振荡培养(200 rpm)，在相应时间，在相应时间 取出试管放于冰箱中，最后一同测定取出试管放于冰箱中，最后一同测定OD600值。值。 5、进行光密度测定时，以未接种的、进行光密度测定时，以未接种的LB液体培养基为空白对照，液体培养基为空白对照， 从早取出的培养液开始依次测定，细胞密度大的培养液用从早取出的培养液开始依次测定，细胞密度大的培养液用LB 液体培养基稀释后测定，使液体培养基稀释后测定，使OD600值在值在0.1 0.65之内。之内。10不同培养时间的菌液不同培养时间的菌液1112注意事项：注意事项：1. 选用规格一致的试管；选用规格一致的试管；2. 每支试管的装液量应相同每支试管的装液量应相同(5 ml/支支)；3. 混匀的菌悬液加入到比色皿后应迅速读取混匀的菌悬液加入到比色皿后应迅速读取OD值；值；4. 保护比色皿透光面不受磨损，不要用手指直接接触；保护比色皿透光面不受磨损，不要用手指直接接触；5. 分光光度计在未测样品时应及时打开盖。分光光度计在未测样品时应及时打开盖。13实验结果实验结果1、将测定的ODOD600600值填入下表：值填入下表：培养时间(h)对照 0 1.5 3 4 6 8 10 12 14 16 20OD6002、绘制大肠杆菌的生长曲线：ODOD600600值值培养时间培养时间/h/h14LB液体培养基配方：液体培养基配方：100ml酵母提取物酵母提取物(Yeast extract): 0.5g蛋白胨蛋白胨(Tryptone)：1g氯化钠氯化钠(Nacl)： 1g15Thanksfor your attention！16