专题十八生物技术实践专题十八生物技术实践核核心心考考点点精精析析命命题题热热点点解解读读专专题题质质量量检检测测1微生物的微生物的营营养养营养要素营养要素来源来源功能功能碳源碳源无机无机碳源碳源CO2、NaHCO3、CaCO3等含碳无机物等含碳无机物构成细胞和合成一构成细胞和合成一些代谢产物些代谢产物有些既是碳源又是有些既是碳源又是异养微生物的能源异养微生物的能源有机有机碳源碳源糖、脂肪、蛋白质、糖、脂肪、蛋白质、有机酸、石油、花生有机酸、石油、花生粉饼等粉饼等营养要素营养要素来源来源功能功能氮氮源源无机无机氮源氮源NH3、铵盐、硝酸盐、铵盐、硝酸盐、N2等等合成蛋白质、合成蛋白质、核酸及含氮的核酸及含氮的代谢产物代谢产物有机有机氮源氮源牛肉膏、蛋白胨、核牛肉膏、蛋白胨、核酸、尿素、氨基酸酸、尿素、氨基酸营养要素营养要素来源来源功能功能生长因子生长因子(特特殊营养物质殊营养物质)维生素、氨维生素、氨基酸、碱基基酸、碱基酶和核酸的组成成分酶和核酸的组成成分参与代谢过程中的酶参与代谢过程中的酶促反应促反应水和无机机盐水和无机机盐外界摄入外界摄入水不仅是优良溶剂而且水不仅是优良溶剂而且可维持生物大分子的稳可维持生物大分子的稳定；无机盐是细胞内的定；无机盐是细胞内的成分和调节物质等成分和调节物质等 2 2培养基种类及用途培养基种类及用途划分划分标准标准培养基种类培养基种类特点特点用途用途物理物理性质性质液体培养基液体培养基不加凝固剂不加凝固剂工业生产工业生产半固体半固体培养基培养基加凝固加凝固剂，如琼脂剂，如琼脂观察微生物的运动、观察微生物的运动、分类鉴定分类鉴定固体培养基固体培养基微生物分离、鉴定、微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种活菌计数、保藏菌种划分划分标准标准培养基种类培养基种类特点特点用途用途化学化学成分成分天然培养基天然培养基含化学成分不明含化学成分不明确的天然物质确的天然物质工业生产工业生产合成培养基合成培养基培养基成分明确培养基成分明确(用化学成分已知用化学成分已知的化学物质配成的化学物质配成)分类、鉴定分类、鉴定划分划分标准标准培养基培养基种类种类特点特点用途用途用途用途选择培选择培养基养基培养基中加入培养基中加入某种化学物质，某种化学物质，以抑制不需要以抑制不需要微生物的生长，微生物的生长，促进所需要的促进所需要的微生物的生长微生物的生长培养、分离出特定微生物培养、分离出特定微生物(如培养酵母菌和霉菌时，如培养酵母菌和霉菌时，可在培养基中加入青霉素；可在培养基中加入青霉素；培养金黄色葡萄球菌时，培养金黄色葡萄球菌时，可在培养基中加入高浓度可在培养基中加入高浓度的食盐的食盐)划分划分标准标准培养基培养基种类种类特点特点用途用途用途用途鉴别培鉴别培养基养基根据微生物根据微生物的代谢特点，的代谢特点，在培养基中在培养基中加入某种指加入某种指示剂或化学示剂或化学药品药品鉴别不同种类的微生物，鉴别不同种类的微生物，如可用伊红如可用伊红美蓝培养美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品基鉴别饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌中是否有大肠杆菌(若有，若有，菌落呈深紫色，并带有菌落呈深紫色，并带有金属光泽金属光泽)3 3微生物的分离与计数微生物的分离与计数(1)(1)土壤中分解尿素的细菌的分离：土壤中分解尿素的细菌的分离：筛选菌株：利用选择培养基筛选。筛选菌株：利用选择培养基筛选。过程：土壤取样过程：土壤取样样品的稀释样品的稀释微生物的培养与观察。微生物的培养与观察。(2)(2)分解纤维素的微生物的分离：分解纤维素的微生物的分离： 原理：原理： 即：可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。即：可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。流程：土壤取样流程：土壤取样选择培养选择培养梯度稀释梯度稀释涂布平板涂布平板挑选菌落。挑选菌落。(3)(3)鉴定方法：鉴定方法：鉴定分解尿鉴定分解尿素的细菌素的细菌含酚红指示剂的尿素为唯一氮源的培含酚红指示剂的尿素为唯一氮源的培养基养基细菌细菌指示剂变红，则该菌能指示剂变红，则该菌能分解尿素分解尿素鉴定纤维素鉴定纤维素分解菌分解菌(4)(4)计数方法：计数方法：显微镜直接计数法：显微镜直接计数法：利用特定细菌计数板或血球计数板，在显微镜下计数利用特定细菌计数板或血球计数板，在显微镜下计数一定容积样品中的细菌数量。该方法不能区分细菌的一定容积样品中的细菌数量。该方法不能区分细菌的死活。死活。间接计数法间接计数法( (活菌计数法活菌计数法) )：常用稀释涂布平板法。稀释涂布平板法的理论依据是：当常用稀释涂布平板法。稀释涂布平板法的理论依据是：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落即代样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落即代表一个活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在表一个活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在3030300300的平板进行计数，每个稀释倍数涂布的平板进行计数，每个稀释倍数涂布3 3个平板进行计数，个平板进行计数，取平均值。取平均值。消毒和灭菌的区别消毒和灭菌的区别条件条件结果结果常用方法常用方法应用范围应用范围消消毒毒较为较为温和温和的物的物理或理或化学化学方法方法仅杀死仅杀死物体表物体表面或内面或内部部分部部分微生物微生物煮沸消毒法煮沸消毒法一般物品一般物品巴氏消毒法巴氏消毒法不耐高温的液体不耐高温的液体化学药剂消毒法化学药剂消毒法用酒精擦拭双手，用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源等用氯气消毒水源等条件条件结果结果常用方法常用方法应用范围应用范围灭菌灭菌强烈的理强烈的理化因素化因素杀死物体内杀死物体内外所有的微外所有的微生物，包括生物，包括芽孢和孢子芽孢和孢子灼烧灭菌灼烧灭菌接种工具接种工具干热灭菌干热灭菌玻璃器皿、玻璃器皿、金属用具等金属用具等高压蒸汽高压蒸汽灭菌灭菌培养基及容培养基及容器的灭菌器的灭菌 1 1酶的存在与简单制作方法酶的存在与简单制作方法(1)(1)酶在生物体内的存在酶在生物体内的存在( (或分布或分布) )部位：部位：酶是在生物体活细胞中合成的。多数酶在细胞内直接参酶是在生物体活细胞中合成的。多数酶在细胞内直接参与生物化学反应，少数的酶要分泌到细胞外发挥作用。与生物化学反应，少数的酶要分泌到细胞外发挥作用。(2)(2)酶的制备：酶的制备：胞内酶的制取：需要破碎生物组织细胞，可用破碎胞内酶的制取：需要破碎生物组织细胞，可用破碎仪、研磨器或匀浆器等机械将组织细胞破碎，使酶从仪、研磨器或匀浆器等机械将组织细胞破碎，使酶从活细胞中释放出来，进入细胞外的溶液中，经过滤、活细胞中释放出来，进入细胞外的溶液中，经过滤、离心制备成粗酶液。离心制备成粗酶液。胞外酶的制备：对于唾液淀粉酶、胰蛋白酶等分泌胞外酶的制备：对于唾液淀粉酶、胰蛋白酶等分泌到细胞外的酶，可以直接从动物分泌物或细胞外的组到细胞外的酶，可以直接从动物分泌物或细胞外的组织间隙中提取。织间隙中提取。2 2酶活性酶活性( (力力) )测定的一般原理和方法测定的一般原理和方法(1)(1)酶活性酶活性( (力力) )的含义：酶的活性的含义：酶的活性( (力力) )是指酶催化一定化是指酶催化一定化 学反应的能力。学反应的能力。(2)(2)酶活性酶活性( (力力) )测定的一般原理和方法：酶的活性测定的一般原理和方法：酶的活性( (力力) )通通常以单位时间内底物的消耗量或者在单位时间内产物常以单位时间内底物的消耗量或者在单位时间内产物的生成量来表示。的生成量来表示。3 3酶的活性及影响酶活性因素的实验探究酶的活性及影响酶活性因素的实验探究( (以果胶酶在以果胶酶在生产中的应用为例探究温度或生产中的应用为例探究温度或pHpH对果胶酶活性的影响对果胶酶活性的影响) )(1)(1)探究不同温度探究不同温度( (或或pH)pH)对酶活性的影响时，温度对酶活性的影响时，温度( (或或pH)pH)作为自变量，通常通过设置合理的梯度来确定最适值，作为自变量，通常通过设置合理的梯度来确定最适值，最适值是通过比较相同时间内获得的产量或效果来确最适值是通过比较相同时间内获得的产量或效果来确定的。定的。(2)(2)在混合苹果泥和果胶酶之前，要将苹果泥和果胶酶分在混合苹果泥和果胶酶之前，要将苹果泥和果胶酶分装在不同的试管中恒温装在不同的试管中恒温( (或同或同pH)pH)处理，目的是保证底处理，目的是保证底物和酶在混合时的温度物和酶在混合时的温度( (或或pH)pH)相同，避免苹果泥与果相同，避免苹果泥与果胶酶混合时影响混合物的温度胶酶混合时影响混合物的温度( (或或pH)pH)，从而影响实验，从而影响实验效果。效果。(3)(3)果胶酶将果胶分解为小分子物质，小分子物质可以通果胶酶将果胶分解为小分子物质，小分子物质可以通过滤纸，因此苹果汁的体积大小反映了果胶酶催化分过滤纸，因此苹果汁的体积大小反映了果胶酶催化分解果胶的能力。在不同的温度和解果胶的能力。在不同的温度和pHpH下，果胶酶的活性下，果胶酶的活性越大，苹果汁的体积就越大。越大，苹果汁的体积就越大。4 4探究不同种类加酶洗衣粉的洗涤效果探究不同种类加酶洗衣粉的洗涤效果(1)(1)实验原理：加酶洗衣粉的酶制剂有多种，包括蛋白酶、实验原理：加酶洗衣粉的酶制剂有多种，包括蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶等。加入不同的酶制剂，会脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶等。加入不同的酶制剂，会制成用于不同污渍洗涤的加酶洗衣粉。复合酶洗衣粉加制成用于不同污渍洗涤的加酶洗衣粉。复合酶洗衣粉加入的酶制剂种类较多，对各种污渍都有较好的洗涤效果。入的酶制剂种类较多，对各种污渍都有较好的洗涤效果。(2)(2)实验操作程序：实验操作程序：步骤步骤烧杯编号烧杯编号注入自来水注入自来水500 mL500 mL500 mL加入物质加入物质(等量等量)奶渍布奶渍布奶渍布奶渍布奶渍布奶渍布控制水温控制水温373737步骤步骤烧杯编号烧杯编号加入洗衣粉加入洗衣粉(等量等量)蛋白酶洗衣蛋白酶洗衣粉粉复合酶复合酶洗衣粉洗衣粉脂肪酶脂肪酶洗衣粉洗衣粉玻璃棒搅拌玻璃棒搅拌(等速等速)5分钟分钟5分钟分钟5分钟分钟观察实验现象观察实验现象5 5固定化酶和固定化细胞的比较固定化酶和固定化细胞的比较项目项目固定化酶固定化酶固定化细胞固定化细胞常用方法常用方法化学结合法、化学结合法、物理吸附法物理吸附法包埋法包埋法优点优点可反复使用；可反复使用；有利于工艺的连续有利于工艺的连续化、管道化，同时降化、管道化，同时降低了生产成本低了生产成本可以连续发酵，节可以连续发酵，节约成本；约成本；保持酶在保持酶在细胞内的原始状况，细胞内的原始状况，增加了酶的稳定性；增加了酶的稳定性；操作容易操作容易项目项目固定化酶固定化酶固定化细胞固定化细胞不足不足酶在固定化时活力有酶在固定化时活力有所损失；所损失；不适用于多酶反应不适用于多酶反应细胞膜、细胞壁会阻细胞膜、细胞壁会阻碍底物的渗透和扩散，碍底物的渗透和扩散，降低反应效率降低反应效率1 1运用发酵加工食品的基本方法运用发酵加工食品的基本方法果酒果酒果醋果醋腐乳腐乳泡菜泡菜微生物微生物类型类型酵母菌酵母菌(真真菌菌)兼性厌兼性厌氧菌氧菌醋酸杆菌醋酸杆菌(细菌细菌)好氧好氧细菌细菌毛霉毛霉(真菌真菌)好氧菌好氧菌乳酸菌乳酸菌(细细菌菌)厌氧菌厌氧菌原理原理酵母菌无酵母菌无氧呼吸产氧呼吸产生酒精生酒精醋酸杆菌醋酸杆菌有氧呼吸有氧呼吸产生醋酸产生醋酸毛霉代谢产毛霉代谢产生蛋白酶和生蛋白酶和脂肪酶脂肪酶乳酸菌无乳酸菌无氧呼吸产氧呼吸产生乳酸生乳酸果酒果酒果醋果醋腐乳腐乳泡菜泡菜控制控制条件条件前期有氧后前期有氧后期无氧，期无氧，20左右左右有氧，有氧，3035有氧，有氧，1518无氧，常温无氧，常温实验实验流程流程在泡菜的腌制过程中会产生亚硝酸盐，亚硝酸盐在一在泡菜的腌制过程中会产生亚硝酸盐，亚硝酸盐在一 定条件下可转化为能致癌、致畸和致突变的物质定条件下可转化为能致癌、致畸和致突变的物质 亚硝胺。亚硝胺。在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与氮化反应后，与N N1 1萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰瑰( (紫紫) )红色染料，通过目测比较，可大致估算亚硝酸红色染料，通过目测比较，可大致估算亚硝酸盐的含量。盐的含量。2 2植物激素与组织培养植物激素与组织培养 生长素和细胞分裂素在植物组织培养中的作用及特点：生长素和细胞分裂素在植物组织培养中的作用及特点：(1)(1)在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强 的趋势。的趋势。(2)(2)使用顺序不同，结果不同，具体如下：使用顺序不同，结果不同，具体如下：使用顺序使用顺序实验结果实验结果先使用生长素，后使用细先使用生长素，后使用细胞分裂素胞分裂素有利于细胞分裂，但细胞有利于细胞分裂，但细胞不分化不分化先使用细胞分裂素，后使先使用细胞分裂素，后使用生长素用生长素细胞既分裂又分化细胞既分裂又分化同时使用同时使用分化频率提高分化频率提高(3)(3)用量比例不同，结果也不同：用量比例不同，结果也不同：3 3植物芳香油三种提取方法的比较植物芳香油三种提取方法的比较提取方法提取方法实验原理实验原理方法步骤方法步骤适用范围适用范围水蒸气蒸水蒸气蒸馏馏利用水蒸气将利用水蒸气将挥发性较强的挥发性较强的植物芳香油携植物芳香油携带出来带出来水蒸气水蒸气蒸馏蒸馏分分离油层离油层除水过滤除水过滤适用于提取玫适用于提取玫瑰油、薄荷油瑰油、薄荷油等挥发性强的等挥发性强的芳香油芳香油提取方法提取方法实验原理实验原理方法步骤方法步骤适用范围适用范围压榨法压榨法通过机械加通过机械加压，压榨出压，压榨出果皮中的芳果皮中的芳香油香油石灰水浸泡、石灰水浸泡、漂洗漂洗压榨、压榨、过滤、静置过滤、静置再次过滤再次过滤适用于柑橘、柠适用于柑橘、柠檬等易焦糊原料檬等易焦糊原料的提取的提取有机溶有机溶剂萃取剂萃取使芳香油溶使芳香油溶解在有机溶解在有机溶剂中，蒸发剂中，蒸发溶剂后就可溶剂后就可获得芳香油获得芳香油粉碎、干燥粉碎、干燥萃取、过滤萃取、过滤浓缩浓缩适用范围广，要适用范围广，要求原料的颗粒要求原料的颗粒要尽可能细小，能尽可能细小，能充分浸泡在有机充分浸泡在有机溶液中溶液中4 4DNADNA和蛋白质技术和蛋白质技术(1)DNA(1)DNA的粗提取和鉴定：的粗提取和鉴定：基本原理：基本原理：a aDNADNA在不同浓度的在不同浓度的NaClNaCl溶液中的溶解度不同，在溶液中的溶解度不同，在0.14 mol/L0.14 mol/L的的NaClNaCl溶液中的溶解度最低。溶液中的溶解度最低。b bDNADNA不溶于酒精溶液。不溶于酒精溶液。c cDNADNA不被蛋白酶水解。不被蛋白酶水解。d dDNADNA在水浴加热条件下可被二苯胺染成蓝色。在水浴加热条件下可被二苯胺染成蓝色。主要步骤：选取材料主要步骤：选取材料破碎细胞，获取含破碎细胞，获取含DNADNA的滤液的滤液去除滤液中的杂质去除滤液中的杂质DNADNA的析出与鉴定。的析出与鉴定。注意事项：注意事项：a a选择动物细胞时，细胞比较容易破碎，选择植物细胞选择动物细胞时，细胞比较容易破碎，选择植物细胞时则要先溶解细胞膜时则要先溶解细胞膜( (如加洗涤剂、研磨等如加洗涤剂、研磨等) )。b b以鸟类的红细胞为材料时，需向血液中加入柠檬酸钠以鸟类的红细胞为材料时，需向血液中加入柠檬酸钠抗凝。抗凝。c c二苯胺需现配现用。二苯胺需现配现用。(2)PCR(2)PCR技术的基本操作和应用：技术的基本操作和应用：目的目的获取大量的目的基因获取大量的目的基因原理原理双链双链DNADNA的复制。的复制。条件条件需要需要DNADNA模板、引物模板、引物( (一般为单链一般为单链DNA)DNA)、四、四种脱氧核苷酸、耐高温的种脱氧核苷酸、耐高温的DNADNA聚合酶和酶促反应所需聚合酶和酶促反应所需的离子，同时还要控制温度。的离子，同时还要控制温度。过程：过程：a a变性：在变性：在9595时时DNADNA解旋。解旋。b b复性：在复性：在5050时引物与时引物与DNADNA单链结合。单链结合。c c延伸：在延伸：在7272时合成时合成DNADNA子链子链( (两个引物间的序列两个引物间的序列) )。(3)(3)蛋白质的提取和分离：蛋白质的提取和分离：实验原理：依据蛋白质的各种特性可以将不同种类的实验原理：依据蛋白质的各种特性可以将不同种类的蛋白质分离。蛋白质分离。常用方法：常用方法：a a凝胶色谱法：根据相对分子质量的大小分离蛋白质。凝胶色谱法：根据相对分子质量的大小分离蛋白质。b b电泳：利用待分离样品中各种分子带电性质的差异电泳：利用待分离样品中各种分子带电性质的差异及分子本身大小、形状的不同产生不同的迁移速度，由及分子本身大小、形状的不同产生不同的迁移速度，由此将各种分子分离。此将各种分子分离。c c蛋白质的提取和分离一般分为四步：样品处理、粗蛋白质的提取和分离一般分为四步：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。分离、纯化和纯度鉴定。人和哺乳动物成熟的红细胞中不含细胞核，也没有人和哺乳动物成熟的红细胞中不含细胞核，也没有DNADNA，不，不 适于作为适于作为DNADNA提取的材料，但却是提取血红蛋白的理想材料。提取的材料，但却是提取血红蛋白的理想材料。凝胶色谱柱的直径大小不影响分离效果，但直径过大会造凝胶色谱柱的直径大小不影响分离效果，但直径过大会造 成洗脱液体积增大，样品稀释度增大；凝胶色谱柱的高度成洗脱液体积增大，样品稀释度增大；凝胶色谱柱的高度 与分离度有关。与分离度有关。红细胞洗涤过程中，洗涤三次后，上清液仍有黄色，可增红细胞洗涤过程中，洗涤三次后，上清液仍有黄色，可增 加洗涤次数，否则无法除去血浆蛋白；离心时转速要低，加洗涤次数，否则无法除去血浆蛋白；离心时转速要低， 时间要短，否则白细胞等会一同沉淀，达不到分离效果。时间要短，否则白细胞等会一同沉淀，达不到分离效果。血红蛋白释放过程中，蒸馏水的作用是涨破红细胞，甲苯血红蛋白释放过程中，蒸馏水的作用是涨破红细胞，甲苯 的作用主要是溶解细胞膜。的作用主要是溶解细胞膜。明考向明考向 在高考中，微生物的培养与应用是较为重要的部分，在高考中，微生物的培养与应用是较为重要的部分，其中微生物的培养、消毒和灭菌、微生物的分离、提纯和其中微生物的培养、消毒和灭菌、微生物的分离、提纯和计数是重要的命题点。计数是重要的命题点。做考题做考题 例例11 (2011 (2011新课标全国卷新课标全国卷) )有些细菌可分解原油，从而有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题：土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题：(1)(1)在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以_为为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于_培养基。培养基。(2)(2)纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即两种，即_和和_。(3)(3)为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力小，分解圈大说明该菌株的降解能力_。(4)(4)通常情况下，在微生物培养过程中实验室常用的灭菌通常情况下，在微生物培养过程中实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、方法有灼烧灭菌、_和和_。无菌技术要求试验操作应在酒精灯无菌技术要求试验操作应在酒精灯_附近进行，以附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。避免周围环境中微生物的污染。 解析解析 本题主要考查生物技术实践中微生物的培养与分离，意本题主要考查生物技术实践中微生物的培养与分离，意在考查对相关知识的灵活运用能力。在考查对相关知识的灵活运用能力。(1)(1)欲筛选出能降解原油的欲筛选出能降解原油的菌株，培养基中应只含有原油而无其他碳源，这样不能降解原油菌株，培养基中应只含有原油而无其他碳源，这样不能降解原油的细菌在此培养基上不能生存，这类培养基属于选择培养基。的细菌在此培养基上不能生存，这类培养基属于选择培养基。(2)(2)分离纯化菌种时，常采用的接种方法有平板划线法和稀释涂分离纯化菌种时，常采用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法，使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在培布平板法，使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落，以便于纯化菌种。养基表面形成单个的菌落，以便于纯化菌种。(3)(3)降解原油能力降解原油能力越强的菌株，在菌落周围形成的分解圈越大。越强的菌株，在菌落周围形成的分解圈越大。(4)(4)实验室常用的实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌灭菌方法有灼烧灭菌( (如接种环如接种环) )、干热灭菌、干热灭菌( (如培养皿如培养皿) )和高压蒸和高压蒸汽灭菌汽灭菌( (如培养基如培养基) )等。无菌技术要求在整个实验过程中操作都要等。无菌技术要求在整个实验过程中操作都要在酒精灯火焰附近进行，以避免周围微生物的污染。在酒精灯火焰附近进行，以避免周围微生物的污染。 答案答案 (1)(1)原油选择原油选择(2)(2)平板划线稀释涂布平板平板划线稀释涂布平板(3)(3)强强(4)(4)干热灭菌法高压蒸汽灭菌法火焰干热灭菌法高压蒸汽灭菌法火焰 悟技巧悟技巧 解答此类问题应注意以下几点：解答此类问题应注意以下几点：(1)(1)运用所学知识与现实生活联系，尝试运用所学知运用所学知识与现实生活联系，尝试运用所学知 识分析和解决实际问题。识分析和解决实际问题。(2)(2)了解无菌操作技术，以及常用方法和适用范围。了解无菌操作技术，以及常用方法和适用范围。(3)(3)分离微生物时，可通过改变培养基成分、改变培养分离微生物时，可通过改变培养基成分、改变培养 条件和特定某种营养成分来达到目的。条件和特定某种营养成分来达到目的。明考向明考向 酶的应用相关知识是高考中的高频考点。主要考酶的应用相关知识是高考中的高频考点。主要考查影响酶活性因素的实验探究，酶作用效果的实验分析查影响酶活性因素的实验探究，酶作用效果的实验分析与设计，以及固定化酶技术等。与设计，以及固定化酶技术等。做考题做考题 例例22(2011(2011江苏高考江苏高考) )下列有关酶的制备和应用的叙述，下列有关酶的制备和应用的叙述，正确的是正确的是 ( () )A A酶解法和吸水涨破法常用于制备微生物的胞内酶酶解法和吸水涨破法常用于制备微生物的胞内酶B B透析、电泳和酸解等方法常用于酶的分离与纯化透析、电泳和酸解等方法常用于酶的分离与纯化C C棉织物不能使用添加纤维素酶的洗衣粉进行洗涤棉织物不能使用添加纤维素酶的洗衣粉进行洗涤D D多酶片中的胃蛋白酶位于片剂的核心层多酶片中的胃蛋白酶位于片剂的核心层 解析解析 本题以酶为载体，综合考查有关酶的制备与应用的本题以酶为载体，综合考查有关酶的制备与应用的知识。酶解法可去除微生物的细胞壁，再通过吸水涨破法使知识。酶解法可去除微生物的细胞壁，再通过吸水涨破法使细胞内的物质释放出来，提取分离其中的胞内酶；透析和电细胞内的物质释放出来，提取分离其中的胞内酶；透析和电泳可用于酶的分离和纯化，但酸解会破坏酶的结构；棉织物泳可用于酶的分离和纯化，但酸解会破坏酶的结构；棉织物的主要成分是纤维素，可用含纤维素酶的洗衣粉洗涤，因为的主要成分是纤维素，可用含纤维素酶的洗衣粉洗涤，因为纤维素酶使纤维的结构变得蓬松，从而使渗入到纤维深处的纤维素酶使纤维的结构变得蓬松，从而使渗入到纤维深处的尘土和污垢能够与洗衣粉充分接触，达到更好的去污效果；尘土和污垢能够与洗衣粉充分接触，达到更好的去污效果；多酶片中的胃蛋白酶应在片剂的糖衣外层，而片剂的核心层多酶片中的胃蛋白酶应在片剂的糖衣外层，而片剂的核心层应是在小肠中发挥作用的胰蛋白酶等。应是在小肠中发挥作用的胰蛋白酶等。 答案答案 A A 悟技巧悟技巧 解答此类问题应注意以下几点：解答此类问题应注意以下几点：(1)(1)酶的活性受温度和酸碱影响，加酶洗涤剂的洗涤效果受温酶的活性受温度和酸碱影响，加酶洗涤剂的洗涤效果受温 度、酸碱度和水质等因素影响。度、酸碱度和水质等因素影响。(2)(2)实验设计一定遵循单一变量原则和对照实验原则。实验设计一定遵循单一变量原则和对照实验原则。(3)(3)袋装干酵母需活化后才可进行细胞固定化。袋装干酵母需活化后才可进行细胞固定化。明考向明考向 在高考中，生物技术在食品加工及其他方面的应用在高考中，生物技术在食品加工及其他方面的应用的试题难度不大，其命题多结合食品制造考查相关原理，的试题难度不大，其命题多结合食品制造考查相关原理，将植物组织培养与植物激素的应用和植物中有效成分的将植物组织培养与植物激素的应用和植物中有效成分的提取相联系，将提取相联系，将PCRPCR技术和蛋白质提取与基因工程相联技术和蛋白质提取与基因工程相联系等进行综合考查。系等进行综合考查。做考题做考题 例例33 (2010 (2010山东高考山东高考) )生物柴油是一种可再生的清洁能生物柴油是一种可再生的清洁能源，其应用在一定程度上能够减缓人类对化石燃料的消耗。源，其应用在一定程度上能够减缓人类对化石燃料的消耗。科学家发现，在微生物科学家发现，在微生物M M产生的脂肪酶作用下，植物油与甲产生的脂肪酶作用下，植物油与甲醇反应能够合成生物柴油醇反应能够合成生物柴油( (如下图如下图) )。(1)(1)用于生产生物柴油的植物油不易挥发，宜选用用于生产生物柴油的植物油不易挥发，宜选用_、_方法从油料作物中提取。方法从油料作物中提取。(2)(2)筛选产脂肪酶的微生物筛选产脂肪酶的微生物M M时，选择培养基中添加的植物油为时，选择培养基中添加的植物油为微生物生长提供微生物生长提供_，培养基灭菌采用的最适方法是，培养基灭菌采用的最适方法是_法。法。 (3)(3)测定培养液中微生物数量，可选用测定培养液中微生物数量，可选用_法直接计数；从法直接计数；从微生物微生物M M分离提取的脂肪酶通常需要检测分离提取的脂肪酶通常需要检测_，以确定其应，以确定其应用价值；为降低生物柴油生产成本，可利用用价值；为降低生物柴油生产成本，可利用_技术使脂技术使脂肪酶能够重复使用。肪酶能够重复使用。(4)(4)若需克隆脂肪酶基因，可应用耐热若需克隆脂肪酶基因，可应用耐热DNADNA聚合酶催化的聚合酶催化的_技术。技术。 解析解析 (1)(1)因为植物油不易挥发，不能选用蒸馏法，可以用压榨法、萃因为植物油不易挥发，不能选用蒸馏法，可以用压榨法、萃取法从油料作物中提取。取法从油料作物中提取。(2)(2)微生物的生长需要水、碳源、氮源和无机盐微生物的生长需要水、碳源、氮源和无机盐等，选择培养基中添加的植物油为微生物生长提供碳源。分析灼烧灭菌、等，选择培养基中添加的植物油为微生物生长提供碳源。分析灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌等实验室常用灭菌方法的特点可知，培养基灭菌干热灭菌和高压蒸汽灭菌等实验室常用灭菌方法的特点可知，培养基灭菌采用的最适方法是高压蒸汽灭菌法。采用的最适方法是高压蒸汽灭菌法。(3)(3)测定培养液中微生物的数量，可测定培养液中微生物的数量，可选用显微镜直接计数法直接计数。提取的脂肪酶在应用于实验或生产之前，选用显微镜直接计数法直接计数。提取的脂肪酶在应用于实验或生产之前，要先检测其活性，以确定其应用价值。固定化酶技术可以实现酶的反复利要先检测其活性，以确定其应用价值。固定化酶技术可以实现酶的反复利用，降低生产成本。用，降低生产成本。(4)(4)在应用在应用PCRPCR技术扩增技术扩增DNADNA片段时，片段时，DNADNA合成合成( (延伸延伸) )时时温度要控制在温度要控制在7272，需要具有较强的耐热性的，需要具有较强的耐热性的DNADNA聚合酶催化。聚合酶催化。 答案答案 (1) (1)压榨萃取压榨萃取( (注：两空顺序无先后注：两空顺序无先后) )(2)(2)碳源碳源高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌(3)(3)显微镜直接计数酶活性显微镜直接计数酶活性( (或：酶活或：酶活力力) )固定化酶固定化酶( (或：固定化细胞或：固定化细胞) )(4)PCR(4)PCR(或：多聚酶链式或：多聚酶链式反应，聚合酶链式反应反应，聚合酶链式反应) ) 悟技巧悟技巧 解答此类问题应注意以下几点：解答此类问题应注意以下几点：(1)(1)果酒、果醋、腐乳、泡菜的制作原理，微生物类型。果酒、果醋、腐乳、泡菜的制作原理，微生物类型。(2)(2)结合物理、化学中有关物质的理化性质，理解蒸馏、结合物理、化学中有关物质的理化性质，理解蒸馏、 萃取等方法。萃取等方法。(3)(3)蛋白质提取与分离的原理与方法，以及蛋白质提取与分离的原理与方法，以及PCRPCR技术的原技术的原 理和操作要领。理和操作要领。点击此处进入点击此处进入 “专题质量检专题质量检测测”