实验一光学显微镜及其使实验一光学显微镜及其使用用A A周次周次实验名称名称学学时数数6 6光学光学显微微镜构造和使用构造和使用3 37 7叶叶绿体的体的荧光光观察察3 38 8线粒体和液泡系的超活染色与粒体和液泡系的超活染色与观察察3 39 9红细胞凝集反胞凝集反应和和细胞膜渗透性胞膜渗透性3 31010巨噬巨噬细胞吞噬胞吞噬现象象观察察3 31111蟾蜍骨髓蟾蜍骨髓细胞染色体胞染色体标本制作本制作3 3本学期细胞生物学实验开设项目和时间安排本学期细胞生物学实验开设项目和时间安排三）相差显微镜三）相差显微镜部件构成：部件构成：环状光阑，相差物镜环状光阑，相差物镜1这种显微镜最大的特点是可以观察未经染色的标这种显微镜最大的特点是可以观察未经染色的标本和活细胞。光线经环状光阑投射样品的直射光和本和活细胞。光线经环状光阑投射样品的直射光和衍射光透过物镜相差板时，把透过标本的可见光的衍射光透过物镜相差板时，把透过标本的可见光的光程差变成振幅差，从而提高了各种结构间的对比光程差变成振幅差，从而提高了各种结构间的对比度，使各种结构变得清晰可见。光线透过标本后发度，使各种结构变得清晰可见。光线透过标本后发生折射，偏离了原来的光路，同时被延迟了生折射，偏离了原来的光路，同时被延迟了1/4（波长），如果再增加或减少（波长），如果再增加或减少1/4，则光程差变为，则光程差变为1/2，两束光合轴后相互干涉加强，振幅增大或减，两束光合轴后相互干涉加强，振幅增大或减小，提高反差，造成不同的反差效果。小，提高反差，造成不同的反差效果。2 聚光器调中，需要借助调中望远镜调中。聚光器调中，需要借助调中望远镜调中。 四）微分干涉差显微镜四）微分干涉差显微镜部件构成：部件构成：起偏器起偏器+DIC棱镜棱镜+DIC滑行器滑行器+检偏器检偏器偏振器装在聚光器的前面，使光线发生线性偏振，聚光器前偏振器装在聚光器的前面，使光线发生线性偏振，聚光器前的的DIC棱镜可将一束光分解成偏振方向不同的两束光（棱镜可将一束光分解成偏振方向不同的两束光（x和和y），二者成一小夹角。聚光器将两束光调整成与显微），二者成一小夹角。聚光器将两束光调整成与显微镜光轴平行的方向。最初两束光相位一致，在穿过标本相镜光轴平行的方向。最初两束光相位一致，在穿过标本相邻的区域后，由于标本的厚度和折射率不同，两束光产生邻的区域后，由于标本的厚度和折射率不同，两束光产生了光程差。在物镜的后焦面处安装了第二个了光程差。在物镜的后焦面处安装了第二个DIC棱镜，即棱镜，即DIC滑行器，它把两束光波合并成一束。这时两束光的偏滑行器，它把两束光波合并成一束。这时两束光的偏振面（振面（x和和y）仍然存在。最后光束穿过第二个偏振装置，）仍然存在。最后光束穿过第二个偏振装置，即检偏器，检偏器与起偏器的方向成直角。检偏器将两束即检偏器，检偏器与起偏器的方向成直角。检偏器将两束垂直的光波组合成具有相同偏振面的两束光，从而使二者垂直的光波组合成具有相同偏振面的两束光，从而使二者发生干涉。于是在灰色的背景上，标本结构呈现出亮暗差，发生干涉。于是在灰色的背景上，标本结构呈现出亮暗差，成像效果有浮雕立体感。为了使影像的反差达到最佳状态，成像效果有浮雕立体感。为了使影像的反差达到最佳状态，可通过调节可通过调节DIC滑行器的纵行微调来改变光程差，改变影滑行器的纵行微调来改变光程差，改变影像的亮度，使标本的细微结构呈现出正或负的投影形象，像的亮度，使标本的细微结构呈现出正或负的投影形象，三维立体感明显。三维立体感明显。DIC显显微微镜镜下下的的硅硅藻藻 五）偏光显微镜五）偏光显微镜部件构成：部件构成：起偏器起偏器+检偏器检偏器偏光显微镜用于检测具有双折射性的物质，如纤维偏光显微镜用于检测具有双折射性的物质，如纤维丝、纺锤体、胶原、染色体等等。和普通显微镜丝、纺锤体、胶原、染色体等等。和普通显微镜不同的是：其光源前有起偏器，使进入显微镜的不同的是：其光源前有起偏器，使进入显微镜的光线为偏振光，镜筒中有检偏器。检偏器偏振方光线为偏振光，镜筒中有检偏器。检偏器偏振方向与起偏器垂直时则为正交偏光镜，这种显微镜向与起偏器垂直时则为正交偏光镜，这种显微镜的载物台一般是可以旋转的，当载物台上放入单的载物台一般是可以旋转的，当载物台上放入单折射的物质时，无论如何旋转载物台，由于两个折射的物质时，无论如何旋转载物台，由于两个偏振片是垂直的，显微镜里看不到光线，而放入偏振片是垂直的，显微镜里看不到光线，而放入双折射性物质时，由于光线通过这类物质时发生双折射性物质时，由于光线通过这类物质时发生偏转，因此旋转载物台便能检测到这种物体。偏转，因此旋转载物台便能检测到这种物体。六）荧光显微镜六）荧光显微镜1 短波光照射样品导致荧光分子被激发，短波光照射样品导致荧光分子被激发，分子能级跃迁，以光子的形式释放能量。分子能级跃迁，以光子的形式释放能量。2 光源：光源：高压汞灯高压汞灯，使用时需要预热十五，使用时需要预热十五分钟，断电后十分钟内不能重启。分钟，断电后十分钟内不能重启。3 滤色镜滤色镜：包括激发光滤镜和阻断滤镜。：包括激发光滤镜和阻断滤镜。4 汞灯使用前需聚焦调中。汞灯使用前需聚焦调中。七）倒置显微镜七）倒置显微镜光源在上，物镜在下，光路设计与普通显微镜正好光源在上，物镜在下，光路设计与普通显微镜正好相反，经常用于观察相反，经常用于观察工作距离较大工作距离较大的样品，如观的样品，如观察培养的活细胞。察培养的活细胞。八) 电子显微镜电子显微镜与光学显微镜的成像原理基本一样，所电子显微镜与光学显微镜的成像原理基本一样，所不同的是用不同的是用电子束作照明源，用电磁场作透镜电子束作照明源，用电磁场作透镜，放大倍数最高可达近百万倍。另外，由于电子束放大倍数最高可达近百万倍。另外，由于电子束的穿透力很弱，因此用于电镜的标本须制成厚度的穿透力很弱，因此用于电镜的标本须制成厚度约约50nm左右的超薄切片。左右的超薄切片。透透射射电电子子显显微微镜镜