不同方法测定单宁（不同方法测定单宁（tannin）含）含量量的比较研究采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物测定测定单宁单宁含量的方法含量的方法一、比色法 二、EDTA络合滴定法 三、高锰酸钾滴定法 三种方法的比较采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物 方法一方法一、 比色法比色法一、一、 实验目的实验目的 了解单宁的性质及熟练掌握单宁含量的测定方法了解单宁的性质及熟练掌握单宁含量的测定方法二、实验原理二、实验原理 样品中的单宁在碱性溶液中将磷钨钼酸还原，生成深蓝色样品中的单宁在碱性溶液中将磷钨钼酸还原，生成深蓝色化合物，其颜色的深浅与单宁的含量成正比，可与标准进行化合物，其颜色的深浅与单宁的含量成正比，可与标准进行比较定量。比较定量。三、材料、仪器与试剂三、材料、仪器与试剂 1、材料：、材料： 香蕉（未熟透）香蕉（未熟透）50g 2、仪器：、仪器： 天平天平 组织捣碎机组织捣碎机 烧杯烧杯 移液管移液管 分光光度计分光光度计 容量瓶容量瓶 恒温箱恒温箱 （30） 3、试剂、试剂 ：采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物 标准单宁酸溶液（标准单宁酸溶液（0.5mg/mL）：准确称取标准单宁）：准确称取标准单宁 酸酸50 mg，溶解后用水稀释至，溶解后用水稀释至100 mL，用时现配。，用时现配。 F-D( Folin-Donis)试剂：称取钨酸钠（试剂：称取钨酸钠（Na2WO4H2O） 50g、磷钼酸、磷钼酸10g，置于，置于500mL锥形瓶中，加锥形瓶中，加375mL水溶解，水溶解， 再加磷酸再加磷酸25mL，连接冷凝管，在沸水浴上加热回流，连接冷凝管，在沸水浴上加热回流2h，冷却，冷却 后用水稀释至后用水稀释至500mL。 60g/L 偏磷酸溶液。偏磷酸溶液。 1 mol/L碳酸钠溶液：称取无水碳酸钠碳酸钠溶液：称取无水碳酸钠53g，加水溶解并稀释，加水溶解并稀释至至500mL。 95%和和75%乙醇溶液。乙醇溶液。 四、实验步骤四、实验步骤 1、标准曲线的绘制、标准曲线的绘制 按下表编号，分别加入试剂按下表编号，分别加入试剂 于于50mL容量瓶，加完后，剧容量瓶，加完后，剧 烈烈 振摇，以蒸馏水稀释至刻度，充分混合，于振摇，以蒸馏水稀释至刻度，充分混合，于30恒温箱中放恒温箱中放置置 ， 1.5h后，用分光光度计在波长后，用分光光度计在波长680处测定吸光值，并处测定吸光值，并 绘制标准曲线。绘制标准曲线。采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物2、样品测定、样品测定 果实去皮，迅速称取果实去皮，迅速称取50g，加入，加入95%乙醇乙醇 50mL、偏磷酸、偏磷酸50mL、水、水50mL，置于高速组织捣碎机中打浆，置于高速组织捣碎机中打浆1min（或在研钵（或在研钵中研磨成浆状）。称取匀浆中研磨成浆状）。称取匀浆20于于100容量瓶中，加容量瓶中，加75%乙醇乙醇40mL，在沸水浴中加热，在沸水浴中加热20min，冷却后用，冷却后用75%乙醇稀释至刻乙醇稀释至刻度。充分混合，以慢速定量滤纸过滤，弃去初滤液。度。充分混合，以慢速定量滤纸过滤，弃去初滤液。 吸取上述滤液吸取上述滤液2置于已盛有置于已盛有25mL蒸馏水、蒸馏水、2.5mLF-D试剂的试剂的50mL容量瓶中，然后加入，剧烈振摇后，以水稀释至刻度，容量瓶中，然后加入，剧烈振摇后，以水稀释至刻度，充分摇匀（此时溶液的蓝色逐渐产生）。同时做空白试验。充分摇匀（此时溶液的蓝色逐渐产生）。同时做空白试验。 于于30 恒温箱中放置后，用分光光度计在波长处，以试剂恒温箱中放置后，用分光光度计在波长处，以试剂空白调零，测定吸光值。空白调零，测定吸光值。采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物 四、结果计算式中: x样品中单宁的质量分数，样品中单宁的质量分数，%； c 比色用样品溶液中单宁的含量（由标准曲线查得比色用样品溶液中单宁的含量（由标准曲线查得 ），），g； m 样品质量，样品质量，g； K 稀释倍数，如按上述方法取样稀释倍数，如按上述方法取样50时，时，K=（20/200）（2/100）=1/500 五、注意事项五、注意事项 1、样品处理时要尽快进行，以免单宁氧化而造成误差。、样品处理时要尽快进行，以免单宁氧化而造成误差。 2、维生素维生素C也能与也能与F-D试剂试剂作用产生作用产生蓝色蓝色，因此当样品含有，因此当样品含有维生素维生素C时需要进行校正，时需要进行校正，1维生素维生素C相当于相当于0.8单宁酸。单宁酸。采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物方法二、EDTA络合滴定法一、一、 实验目的实验目的 了解单宁的性质及熟练掌握单宁含量的测定方法了解单宁的性质及熟练掌握单宁含量的测定方法二、实验原理二、实验原理 根据单宁可与重金属离子形成络合物沉淀的性质，在样品提取根据单宁可与重金属离子形成络合物沉淀的性质，在样品提取液中加入过量的标准液中加入过量的标准Zn(Ac)2溶液，待反应完全后，再用溶液，待反应完全后，再用EDTA标准溶液滴定剩余的，根据标准溶液滴定剩余的，根据EDTA标准溶液的消耗量，可计算出标准溶液的消耗量，可计算出样品中单宁的含量。样品中单宁的含量。 三、材料、仪器与试剂三、材料、仪器与试剂 1、材料：、材料： 香蕉（未熟透）香蕉（未熟透）5g 2、仪器：容量瓶仪器：容量瓶 电子天平电子天平 研钵研钵 碱式滴定管碱式滴定管采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物 3 3、试剂：、试剂：1.000 mol/L1.000 mol/L醋酸锌标准溶液：准确称取醋酸锌标准溶液：准确称取Zn(Ac)Zn(Ac)22H H2 2 O O 21.95g,21.95g,用水溶解后定容至用水溶解后定容至100mL100mL。0.0500 0.0500 mol/Lmol/L乙二胺四乙酸二钠（乙二胺四乙酸二钠（EDTAEDTA）标准溶液：准确称取）标准溶液：准确称取乙二胺四乙酸二钠乙二胺四乙酸二钠9.3069.306g,g,溶解于水，并用水稀释至溶解于水，并用水稀释至500mL.500mL.pH=10pH=10的的NHNH3 3-NH-NH4 4ClCl缓冲溶液：称取缓冲溶液：称取54gNH54gNH4 4Cl Cl 加水溶解后加入浓加水溶解后加入浓氨水氨水350mL,350mL,用水定容至用水定容至1000mL1000mL。铬黑铬黑T T指示剂：称取指示剂：称取0.590.59铬黑铬黑T T，溶于，溶于10mL pH=1010mL pH=10的的NHNH3 3-NH-NH4 4ClCl缓缓冲溶液中，用冲溶液中，用95%95%乙醇定容至乙醇定容至100mL100mL。四、实验步骤四、实验步骤 1.1.样品处理样品处理 称取切碎混匀的样品称取切碎混匀的样品510g510g，置于研钵中，加少许石英砂研，置于研钵中，加少许石英砂研磨成浆状（干样品经磨碎过筛后，准确称取磨成浆状（干样品经磨碎过筛后，准确称取12g12g），转入），转入150mL150mL锥形瓶中，用锥形瓶中，用50mL50mL水分多次洗净研钵，洗液一并转入锥水分多次洗净研钵，洗液一并转入锥形瓶中，振动、提取形瓶中，振动、提取1015min.1015min.2.2.络合沉淀络合沉淀 在在100mL100mL容量瓶中，准确加入容量瓶中，准确加入ZnZn（AcAc）2 2标准溶液标准溶液5mL5mL、浓氨、浓氨水水3.5mL3.5mL，摇匀（开始有白色沉淀产生，摇动使沉淀溶解）。，摇匀（开始有白色沉淀产生，摇动使沉淀溶解）。慢慢将提取物转入容量瓶中，不断振摇，在慢慢将提取物转入容量瓶中，不断振摇，在3535水浴中保温水浴中保温采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物2030min.冷却，用水定容至冷却，用水定容至100mL，充分混匀，静置、过滤，充分混匀，静置、过滤 （处滤液弃去）。（处滤液弃去）。 3.滴定滴定 准确吸取滤液准确吸取滤液10mL，置于，置于150mL锥形瓶中。加水锥形瓶中。加水40mL、NH3-NH4Cl缓冲溶液缓冲溶液12.5mL、铬黑、铬黑T指示剂指示剂10滴，混匀。用滴，混匀。用0.0500mol/L的标准溶液滴定，溶液由酒红色变为纯的标准溶液滴定，溶液由酒红色变为纯蓝色金额为终点。蓝色金额为终点。四、注意事项四、注意事项1.单宁遇单宁遇Fe3+会发生颜色反应，因此处理样品时，不能与分歧会发生颜色反应，因此处理样品时，不能与分歧接触，切碎样品应采用不锈钢刀。接触，切碎样品应采用不锈钢刀。2.单宁容易被氧化，样品处理后应立即进行测定。同时要注意单宁容易被氧化，样品处理后应立即进行测定。同时要注意控制加热温度，加热过程中要加些摇动数次，意识反应完全。控制加热温度，加热过程中要加些摇动数次，意识反应完全。采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物结果计算式中式中: 样品中单宁的质量分数，样品中单宁的质量分数，（）（）标准溶液的浓度，标准溶液的浓度，吸取（）吸取（）标准溶液的体积，标准溶液的体积，mLEDTA标准溶液的浓度，标准溶液的浓度， V2滴定时消耗标准溶液的体积，滴定时消耗标准溶液的体积， mL0.1556由实验得出的比例常数，由实验得出的比例常数，样品质量，样品质量， 10分取倍数，及样品络合沉淀后定容至分取倍数，及样品络合沉淀后定容至100mL，吸取其中的，吸取其中的1/10进行滴定。进行滴定。采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物方方法三、高锰酸钾法法三、高锰酸钾法 一、目的一、目的 了解单宁性质及熟练掌握单宁含量的测定方法了解单宁性质及熟练掌握单宁含量的测定方法 二、原理二、原理 作为多酚，单宁是一种强还原剂，极易被氧化剂氧化，还可作为多酚，单宁是一种强还原剂，极易被氧化剂氧化，还可被活性炭吸附。本测定以高锰酸钾为氧化剂，根据样品中单宁被活性炭吸附。本测定以高锰酸钾为氧化剂，根据样品中单宁可以被活性炭吸附，测定样品液用活性碳吸附前后的氧化值之可以被活性炭吸附，测定样品液用活性碳吸附前后的氧化值之差，计算单宁物质的含量。差，计算单宁物质的含量。 三、材料、仪器与试剂三、材料、仪器与试剂 1、材料：香蕉（未熟透）、材料：香蕉（未熟透） 2、仪器、仪器 ：天平：天平 研钵研钵 烧杯（烧杯（50、100mL） 漏斗漏斗 滤纸（滤纸（1515）2 2张张 刻度试管（刻度试管（5 5、10mL10mL）采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物 三角瓶（三角瓶（100mL100mL） 量筒量筒10mL10mL 25mL 25mL碱式滴定管碱式滴定管 容量瓶容量瓶 100mL 100mL 恒温水浴锅恒温水浴锅5050 3 3 、试剂、试剂 0.01 0.01 mol/Lmol/L KMnO KMnO4 4 标准溶液：称取约标准溶液：称取约1.60g KMnO1.60g KMnO4 4溶于溶于1000mL1000mL蒸馏水中，盖蒸馏水中，盖上表面皿，加热至沸并保持微沸状态约上表面皿，加热至沸并保持微沸状态约1h1h。冷却后，放暗处约一周后用垂熔。冷却后，放暗处约一周后用垂熔玻璃漏斗或玻璃丝过滤。将滤液转至棕色瓶内暗处保存。用玻璃漏斗或玻璃丝过滤。将滤液转至棕色瓶内暗处保存。用NaCNaC2 2O O4 4标定标定KMnOKMnO4 4 。 2.5 2.5 mol/Lmol/L硫酸溶液：取硫酸溶液：取138.8mL138.8mL浓硫酸稀释至浓硫酸稀释至1000mL1000mL。 活性炭活性炭 四、操作步骤四、操作步骤 1 1、称取、称取5g5g样品在研钵中研磨成匀浆，用漏斗转移容量瓶定容至样品在研钵中研磨成匀浆，用漏斗转移容量瓶定容至 100mL 100mL，混匀后，混匀后用干燥滤过滤，保留滤液。用干燥滤过滤，保留滤液。2 2、吸取样品滤液、吸取样品滤液5.0mL5.0mL，于，于100mL100mL三角瓶中，加三角瓶中，加10mL10mL水和水和5mL 2.5 5mL 2.5 mol/L Hmol/L H2 2SOSO4 4，混匀，微热（混匀，微热（5050）5min5min后用后用0.01 0.01 mol/Lmol/L KMnO KMnO4 4 标准溶液滴定至淡粉色维持标准溶液滴定至淡粉色维持30s30s不褪色即为终点，记下消耗的体积不褪色即为终点，记下消耗的体积V V1 1，重复一次做两个平行样。，重复一次做两个平行样。3 3、吸取样品滤液、吸取样品滤液5.0mL5.0mL，于，于100mL100mL烧杯中，并加烧杯中，并加3g3g活性炭，加热搅拌活性炭，加热搅拌10min10min，过滤，过滤用少量的热蒸馏水冲洗残渣，收集的滤液中加用少量的热蒸馏水冲洗残渣，收集的滤液中加2.5 2.5 mol/Lmol/L硫酸硫酸5mL5mL，同样用，同样用0.01 0.01 mol/Lmol/L KMnO KMnO4 4 标准溶液滴定至终点，记下消耗的体积标准溶液滴定至终点，记下消耗的体积V V2 2, ,重复一次做两个重复一次做两个平行样。平行样。 采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物式中：式中： CKMnO4 摩尔浓度，摩尔浓度，mol/L V1滴定样品消耗滴定样品消耗KMnO4 的毫升数，的毫升数，mL V2活性碳吸附单宁后所消耗的活性碳吸附单宁后所消耗的KMnO4的毫的毫升数，升数，mL W样品克数，样品克数，g 0.04161mL 0.01 mol/L KMnO4 溶液相当溶液相当于单宁的毫克数，于单宁的毫克数，mg采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物六、记录实验结果项目项目样品样品活性碳吸附后样品活性碳吸附后样品消耗消耗VKMnOKMnO4 4 （mLmL）平均消耗平均消耗VKMnOKMnO4 4 （mLmL）单宁含量单宁含量（mg/100g）采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物七、注意事项n1、过滤时由于溶液粘度大，过滤缓慢，只保、过滤时由于溶液粘度大，过滤缓慢，只保留接下来的留接下来的10mL滤液，以部分代整体。且过滤液，以部分代整体。且过滤时要用干燥滤纸。滤时要用干燥滤纸。n2、开始滴定时反应速度慢，待溶液中产生了、开始滴定时反应速度慢，待溶液中产生了Mn2+后，由于后，由于Mn2+的催化作用，加快了反应的催化作用，加快了反应速率，故能顺利地滴定到呈现稳定的淡粉色为速率，故能顺利地滴定到呈现稳定的淡粉色为终点，因而此反应称为自动催化反应，稍过量终点，因而此反应称为自动催化反应，稍过量的滴定剂本身是紫红色即显示终点。的滴定剂本身是紫红色即显示终点。采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物单宁（tannin）是涩味（acerbity）的重要代表物，食品化学分析中有多种测定单宁含量的方法。