第第八八章章 放放射射毒毒理理学学的的基基本本研究方法研究方法毒理学研究方法毒理学研究方法整体动物实验整体动物实验（in vivo）体外试验体外试验（in vitro)人体观察人体观察（Human Toxicology)流行病学研究流行病学研究（Epidemiological Study)一般毒一般毒性试验性试验特殊毒特殊毒性试验性试验离体器官：离体器官：心、肝、肺、心、肝、肺、肾、脑肾、脑细胞：细胞：原代细胞、细原代细胞、细胞株、细胞系胞株、细胞系细胞器：细胞器：线粒体、微粒线粒体、微粒体、胞核体、胞核临床毒理学研临床毒理学研究：究：中毒事故中毒事故的处理的处理或治疗或治疗志愿者研究：志愿者研究：低浓度、短时低浓度、短时间、可逆性间、可逆性描述流行病学描述流行病学研究：研究：提出病因假说提出病因假说分析流行病学分析流行病学研究：研究：验证病因假说，验证病因假说，明确因果关系明确因果关系急性急性亚急性亚急性亚慢性亚慢性慢性慢性皮肤和眼皮肤和眼刺激性刺激性致敏性致敏性致突变致突变致畸致畸致癌致癌发育与生发育与生殖毒性殖毒性1 基本研究基本研究实验动物选择实验动物选择生物转运与转化的动态实验生物转运与转化的动态实验-大白鼠、狗大白鼠、狗致癌作用致癌作用-小白鼠、大白鼠和小猎犬小白鼠、大白鼠和小猎犬阻止吸收剂和促排剂阻止吸收剂和促排剂-大白鼠大白鼠从从肺肺中中洗洗出出难难溶溶性性放放射射性性核核素素的的洗洗肺肺疗疗法法研研究究-狒狒狒狒1. 确定实验动物的种属、品系、性别和年龄等确定实验动物的种属、品系、性别和年龄等2.对对放放射射性性危危害害不不明明的的放放射射性性核核素素进进行行毒毒性性鉴鉴定定时时，应选用两种不同种属的动物，即应选用两种不同种属的动物，即啮齿类啮齿类和和非啮齿类非啮齿类。3.慢慢性性实实验验观观察察，且且要要观观察察动动物物的的生生长长发发育育状状况况，应应选用选用较年幼较年幼的动物。的动物。同一实验中，各组动物的年龄、体重应尽可能一致。同一实验中，各组动物的年龄、体重应尽可能一致。根根据据实实验验要要求求选选择择动动物物的的性性别别，如如无无特特殊殊要要选选取取雌雌、雄动物各半。雄动物各半。 为为了了确确保保选选择择健健康康的的动动物物进进行行实实验验，在在实实验验前前应应进进行行检检疫疫，并并在在实实验验条条件件下下预预先先饲饲养养观观察察一一段段时时间间，以便淘汰不合要求的动物。以便淘汰不合要求的动物。 SD染毒方式染毒方式经呼吸道染毒经呼吸道染毒经消化道染毒经消化道染毒经皮肤染毒经皮肤染毒注射染毒注射染毒呼吸道染毒方式呼吸道染毒方式放放射射性性气气溶溶胶胶（aerosol）的的吸吸入入研研究究是是卫卫生生防防护护和和内内照照射射生生物物效效应应研研究究的的重重要要课课题题。为为此必须建立放射性气溶胶吸入的动物模型。此必须建立放射性气溶胶吸入的动物模型。吸入染毒可分吸入染毒可分静式吸入静式吸入与与动式吸入动式吸入。静式吸入染毒静式吸入染毒(static inhalation exposure) 静静式式吸吸入入染染毒毒是是将将实实验验动动物物放放在在一一定定容容积积的的密密闭闭容容器器的的吸吸入入中中毒毒柜柜中中，引引入入一一定定活活度度的的放放射射性性气气溶溶胶胶，在在规规定定的的时时间间内内对对实实验验动动物物进进行行吸吸入入染染毒毒。在在这这期期间间，要要用用小小型型搅搅拌拌风风扇扇使使放放射射性性气气溶胶在柜内搅匀。溶胶在柜内搅匀。 该该操操作作设设备备简简单单，方方便便易易行行，但但只只适适用用于于每每次持续时间不长、相对物数不多的吸入染毒。次持续时间不长、相对物数不多的吸入染毒。 本本法法存存在在的的缺缺点点是是实实验验动动物物消消耗耗O2、排排出出CO2，所所以以随随着着染染毒毒时时间间的的延延长长，柜柜内内O2含含量量逐逐渐渐下下降降，CO2浓浓度度相相应应增增加加，温温度度和和湿湿度度增增高高，如如时时间间过过长长或或动动物物过过多多，就就可可能能出出现现缺缺O2和和CO2滞滞留留的的症症状状。并并且且，由由于于动动物物的的被被毛毛、排排泄泄物物及及中中毒毒柜柜壁壁可可吸吸附附一一定定量量的的气气溶溶胶胶，以以及及随随着着动动物物呼呼吸吸道道的的吸吸收收，柜柜内内气气溶溶胶胶浓浓度度可可逐逐渐渐下下降降，不不能能维维持持恒定的浓度。恒定的浓度。 表表 动物最低需氧量及不同容积染毒柜可放实验动物数动物最低需氧量及不同容积染毒柜可放实验动物数动式吸入染毒动式吸入染毒(dynamic inhalation exposure) 动动式式吸吸入入中中毒毒装装置置可可以以连连续续不不断断地地送送入入含含有有一一定定活活度度的的放放射射性性气气溶溶胶胶，同同时时排排出出等等量量的的空空气气，以以造造成成一一个个不不断断更更新新空空气气而而放放射射性性气气溶溶胶胶浓浓度度又又相相对对稳稳定的动态平衡的空气环境，以供动物吸入中毒。定的动态平衡的空气环境，以供动物吸入中毒。 同同时时，考考虑虑到到为为了了保保护护实实验验环环境境不不被被污污染染，所所以以设设计计是是采采用用三三区区制制原原则则，即即放放射射性性物物质质及及放放射射性性气气溶溶胶胶处处于于一一区区容容器器中中，内内置置气气溶溶胶胶发发生生器器，这这种种容容器器又又处处于于二二区区密密闭闭手手套套箱箱内内，而而该该密密闭闭手手套套箱箱又又位位于三区实验室中。于三区实验室中。 以以大大白白鼠鼠吸吸入入放放射射性性气气溶溶胶胶的的实实验验方方法法为为例例，需需要要控制如下实验装置的条件：控制如下实验装置的条件：实实验验用用雾雾化化器器可可采采用用超超声声雾雾化化器器和和以以压压缩缩空空气气为为动力的医用气雾枪对放射性溶液进行发雾。动力的医用气雾枪对放射性溶液进行发雾。为为了了除除去去放放射射性性水水悬悬液液发发雾雾的的放放射射性性粒粒子子所所带带的的水水份份，制制备备一一个个由由加加热热管管和和温温度度控控制制系系统统组组成成的的加加热热器器，使使达达到到用用此此加加热热器器后后所所收收集集到到的的粒粒子子基基本上呈固态的气溶胶粒子。本上呈固态的气溶胶粒子。 粒度采样器粒度采样器使用直式小流量撞击采样器。使用直式小流量撞击采样器。发发生生的的放放射射性性气气溶溶胶胶，经经过过加加热热器器后后，通通入入安安装装在在密密封封手手套套箱箱内内的的吸吸入入柜柜内内，以以喷喷射射泵泵为为动动力力，用用流流量量计计来来控控制制进进、出出气气流流量量，从从而而保保持持柜柜内内气气溶溶胶胶的的动动态态平平衡衡，使使大大白白鼠鼠呼呼吸吸带带的的气气溶溶胶胶流流量量维持在一定剂量。维持在一定剂量。第二代L-RD全自动动态染毒柜 不不同同规规格格，内内设设加加热热温温控控及及内内循循环环搅搅拌拌系系统统以以及及氧氧气气检检测测系系统统。供供药药量量、供供气气量量、适适应应溶溶剂剂、染染毒毒时时间间、延延时时停停机机、药药液液比比重重设设置置可可以以通通过过电电脑脑设设置置，染染毒毒浓浓度度预预置置（按按需需要要实实验验之之前前设设置置好好染染毒毒浓浓度度，电电脑脑控控制制；根根据据预预置置浓浓度度按按比比例例提提供供药药液液和和压压缩缩空空气气），湿湿度度、温温度度显显示示，可自动清洗，用药量预测等。可自动清洗，用药量预测等。动式染毒柜工作原理图动式染毒柜工作原理图该该动动式式吸吸入入染染毒毒装装置置的的优优点点：动动物物染染毒毒时时间间可可不不受受限限制制，放放射射性性气气溶溶胶胶的的活活度度可可持持续续保保持持，并并可可避避免免实实验验动动物物缺缺O2，防防止止CO2积聚，温度、湿度也可保持恒定。积聚，温度、湿度也可保持恒定。气管内注射气管内注射(intra-tracheal injection) 气气管管内内注注射射分分经经咽咽喉喉插插入入法法和和气气管管穿穿刺刺法法两两种种。前前者多用于小鼠、大鼠和豚鼠；后者多用于兔。者多用于小鼠、大鼠和豚鼠；后者多用于兔。 气气管管内内注注入入的的容容量量，小小鼠鼠应应少少于于0.2ml，大大鼠鼠和和服服鼠鼠不宜超过不宜超过1.5ml，兔约为，兔约为5ml。 该法的优点是染毒剂量较准确，中毒模型容易建立。该法的优点是染毒剂量较准确，中毒模型容易建立。 其其缺缺点点是是易易造造成成损损伤伤，引引起起动动物物死死亡亡；不不能能发发挥挥上上呼呼吸吸道道的的防防卫卫作作用用，与与自自然然吸吸入入有有差差异异，所所以以一一般般只只用于急性毒性试验。用于急性毒性试验。胃肠道途径染毒有胃肠道途径染毒有灌胃法灌胃法和和喂饲法喂饲法两种两种。研研究究放放射射性性核核素素的的急急性性毒毒性性和和慢慢性性毒毒性性多多采采用用此此法法。对对易易挥挥发发的的物物质质最最好好选选用用灌灌胃胃法法，研研究究被被污污染染的的食食物物和和饮水的慢性毒性作用则应选用喂伺法。饮水的慢性毒性作用则应选用喂伺法。 灌灌胃胃法法在在设设计计剂剂量量浓浓度度时时要要地地适适宜宜的的溶溶剂剂和和剂剂型型，要要注注意意灌灌胃胃量量，一一般般小小鼠鼠为为0.2-1.0ml，大大鼠鼠为为1-4m1，豚豚鼠鼠为为1-5m1，兔兔、猫猫为为5-10ml。实实验验观观察察时时各各剂剂量量组组应应按按平平均体重给予等容量。均体重给予等容量。灌胃操作时要特别注意防止食道损伤和误灌入气管内。灌胃操作时要特别注意防止食道损伤和误灌入气管内。 喂喂饲饲法法是是将将放放射射性性核核素素掺掺入入饲饲料料或或饮饮水水中中供供动动物物自自由由饮饮用用。要要求求掺掺入入放放射射性性核核素素后后无无特特殊殊气气味味，且且最最好好在在早早晨晨空空腹腹时时喂喂饲饲，使使动动物物能能全全部吃掉，以保证剂量准确。部吃掉，以保证剂量准确。如如食食物物有有残残留留时时应应秤秤量量记记录录。放放射射性性核核素素掺掺入入水水中中时时，要要考考虑虑动动物物的的日日饮饮水水量量，一一般般小小鼠鼠每日饮水量为每日饮水量为1.5-3ml，大鼠为，大鼠为8-15m1。 皮肤染毒方式皮肤染毒方式 动动物物的的皮皮肤肤与与人人的的皮皮肤肤有有很很大大差差异异，而而猪猪及及豚豚鼠鼠的的皮皮肤肤与与人人相相近近似似，因因此此皮皮肤肤试试验验可可选选其其进进行行。皮皮肤肤染染毒毒时时，首首先先要要选选择择动动物物本本身身难难以以抓抓、拉拉到到的的皮皮肤肤作作为为染染毒毒部部位位。去去毛毛方方法法可可采采用用剪剪毛毛、剃剃毛毛或或用用化化学学脱脱毛毛剂脱毛，防止损伤皮肤。剂脱毛，防止损伤皮肤。 一一般般要要在在去去毛毛后后24 h，确确认认皮皮肤肤无无损损伤伤时时方方可可染染毒毒。染染毒毒面面积积，小小鼠鼠为为22.5 cm，大大鼠鼠和和脉脉鼠鼠约约45 cm，兔兔约约56 cm，大大致致占占体体表表面面积积的的10-15 %左左右右。在急性实验中，也可使用大鼠和小鼠浸尾染毒。在急性实验中，也可使用大鼠和小鼠浸尾染毒。 三、观察指标的选择三、观察指标的选择 在在放放射射毒毒理理学学的的研研究究领领域域中中，观观察察指指标标的的选选择择可可概概括括地地分分为为实实验验研研究究指指标标和和对对受受放放射射核核素素污污染染人人员员进进行行的的临临床床观观察察指指标标，以以及及辐射流行病学辐射流行病学调查指标调查指标等。等。 （一）实验研究指标的选择（一）实验研究指标的选择 研研究究放放射射性性核核素素在在机机体体内内的的生生物物动动力力学学过过程程的的指指标标，需需要要测测定定放放射射性性核核素素在在整整体体或或不不同同器器官官组组织织内内的的蓄蓄积积量量，以以及及随随尿尿、粪粪、呼出气、分泌物的排除量。呼出气、分泌物的排除量。 研研究究放放射射性性核核素素内内照照射射的的生生物物效效应应观观察察指指标标，除除常常用用的的体体重重、寿寿命命、死死亡亡率率等等一一般般指指标标外外，还还有有血血液液学学、生生物物化化学学、病病理理学学、免疫学以及致癌、致畸、致突变指标等免疫学以及致癌、致畸、致突变指标等。 （二）人体观察指标的选择（二）人体观察指标的选择 由由于于从从动动物物实实验验研研究究指指标标所所得得的的资资料料外外推推于于人人时时，无无论论在在定定性性和和定定量量方方面面都都可可能能带带来来误误差差，所所以以最最有有价价值值的的显显然然是是获获得得人人体直接观察的指标。体直接观察的指标。 放放射射核核素素中中毒毒病病例例的的临临床床和和随随访访观观察察；流行病学调查。流行病学调查。2 整体测量方法整体测量方法一、整体测量装置一、整体测量装置二、二、谱的分析谱的分析如前所述如前所述3 液体闪烁测量方法液体闪烁测量方法 液液体体闪闪烁烁计计数数(liquid scintillation counting)技技术主要通用于对术主要通用于对软软放射性核素放射性核素的探测。的探测。 从从最最基基本本的的组组成成部部分分来来看看，可可归归纳纳为为：双双光光电电倍倍增增管管；双双管管输输出出相相加加电电路路；快快符符合合计计数数 ；集成电路；集成电路；电脑控制系统等电脑控制系统等。 液闪计数仪液闪计数仪 基本原理基本原理液体闪烁计数器方框图液体闪烁计数器方框图溶剂溶剂第一第一闪烁剂闪烁剂第二第二闪烁剂闪烁剂电子学电子学线路线路光电倍光电倍增管增管记录记录闪烁瓶闪烁瓶特特 点点1.在在探探测测放放射射性性示示踪踪剂剂时时所所使使用用的的闪闪烁烁体体为为液液体体，是是由由闪烁剂溶于适当的溶剂中制成的。闪烁剂溶于适当的溶剂中制成的。2.放放射射性性示示踪踪剂剂与与闪闪烁烁剂剂的的接接触触密密切切，所所以以放放射射源源的的自自吸收或吸收层的吸收较少。吸收或吸收层的吸收较少。3.液液体体闪闪烁烁术术中中的的匀匀相相液液体体闪闪烁烁术术是是一一种种具具有有最最高高探探测测效率的技术效率的技术。4.在在液液体体闪闪烁烁术术的的应应用用中中，有有时时所所见见闪闪烁烁剂剂的的发发射射光光谱谱与与光光阴阴极极的的有有效效光光谱谱不不甚甚匹匹配配，则则可可加加用用另另一一闪闪烁烁剂剂，使使其其发发射射光光谱谱与与光光电电倍倍增增管管中中光光阴阴极极的的有有效效光光谱谱就就更更为匹配。为匹配。 两个闪烁剂两个闪烁剂应用中的注意事项应用中的注意事项 1. 液体闪烁术的探测下限液体闪烁术的探测下限 2. 液体闪烁术对不同射线的探测效率比较液体闪烁术对不同射线的探测效率比较 由由于于射射线线为为连连续续能能谱谱，总总有有一一部部分分能能量量低低于于最最小小可探测限，所以其探测效率不可能达到可探测限，所以其探测效率不可能达到100%。 由由于于闪闪烁烁液液溶溶剂剂的的密密度度低低于于无无机机晶晶体体，对对发发射射射射线线及及X射射线线的的放放射射示示踪踪剂剂的的探探测测效效率率不不高高，但但对其他衰变形式产生的电子效果不亚于软对其他衰变形式产生的电子效果不亚于软粒子。粒子。 应用中的注意事项（续）应用中的注意事项（续） 3.闪烁剂选择闪烁剂选择 4.溶剂的选择溶剂的选择 对能量的利用率要高；对能量的利用率要高；其其发发射射的的光光谱谱要要能能与与光光电电倍倍增增管管中中阴阴极极的的有有效效光光谱相匹配谱相匹配;在在溶溶剂剂中中更更有有一一定定的的溶溶解解度度，至至少少要要能能达达到到其其能能充分发挥作用的浓度充分发挥作用的浓度;对对有有些些闪闪烁烁剂剂来来说说，其其发发射射的的光光谱谱与与光光电电倍倍增增管管的有效光谱匹配较差时，就得另加选用第二闪烁剂。的有效光谱匹配较差时，就得另加选用第二闪烁剂。 所用的溶剂对能量传递的效率要高所用的溶剂对能量传递的效率要高4 放射自显影方法放射自显影方法 放放射射自自显显影影术术(auto-radiography)是是运运用用敏敏感感乳乳胶胶膜膜紧紧密密接接触触含含有有放放射射性性物物质质的的标标本本，使使乳乳胶胶层层显显示示出出放放射射性性核核素素所所释释放放出的射线或粒子径迹的一种技术。出的射线或粒子径迹的一种技术。 基本原理基本原理1.当当敏敏感感乳乳胶胶与与被被观观察察的的含含有有放放射射性性物物质质的的组组织织紧紧密密接接触触，核核乳乳胶胶受受到到由由放放射射源源部部位位产产生生的的辐辐射射照照射，可从带负电的溴离子中发射出一个电子。射，可从带负电的溴离子中发射出一个电子。2.该电子随后被带正电的银离子所俘获。该电子随后被带正电的银离子所俘获。3.俘俘获获电电子子过过程程是是一一个个还还原原反反应应过过程程。很很多多带带正正电电的银离子被还原，在溴化银分子中形成潜影。的银离子被还原，在溴化银分子中形成潜影。4.该该潜潜影影经经显显影影处处理理后后，显显示示出出银银粒粒的的黑黑化化。即即放放射自显影影像。射自显影影像。特点特点1.累积成像效果累积成像效果 2.探测分辨力极高探测分辨力极高3.逼真、准确的记录图像逼真、准确的记录图像不同水平的观察方法不同水平的观察方法整体放射自显影术整体放射自显影术光镜放射自显影术光镜放射自显影术电镜放射自显影术电镜放射自显影术组织切片组织切片电镜观察电镜观察特殊观察方法特殊观察方法荧光增敏放射自显影术荧光增敏放射自显影术双标记放射自显影术双标记放射自显影术中子诱发放射自显影术中子诱发放射自显影术5 致突变、致畸和致癌的试验方法致突变、致畸和致癌的试验方法一、致突变试验一、致突变试验染色体畸变试验染色体畸变试验(chromosome aberration test)微核试验微核试验(micronucleaus test)程序外程序外DNA合成试验合成试验(unscheduled DNA synthesis, UDS)显性致死突变试验显性致死突变试验(dominant lethal mutation test)（一）（一）染色体畸变试验染色体畸变试验(chromosome aberration test)基本原理基本原理 所所有有生生物物细细胞胞的的染染色色体体均均有有特特定定的的形形态态结结构构和和一一定定的的数数目目，而而且且这这些些特特征征相相对对恒恒定定。当当放放射射性性核核素素作作用用于于染染色色体体时时，可可发发生生包包括括缺缺失失、断断片片和和易易位位等等形形态态结结构构的的变变化化和和数数目目的的改改变变，即染色体畸变。即染色体畸变。（二）（二）微核试验微核试验 (micronucleus test)基基本本原原理理：微微核核是是由由染染色色单单体体或或染染色色体体断断裂裂后后形形成成的的无无着着丝丝粒粒断断片片，或或因因纺纺锤锤体体受受损损而而丢丢失失的的整整个个染染色色体体在在细细胞胞分分裂裂的的后后期期仍仍留留在在子子细细胞胞质质内内，单单独独形形成成一一个个或或几几个个规规则则的的次次核。由于比主核小，故称微核。核。由于比主核小，故称微核。微核微核嗜多染细胞嗜多染细胞（三）程序外（三）程序外DNA合成试验合成试验(UDS)基基本本原原理理：在在培培养养的的哺哺乳乳动动物物细细胞胞，受受到到放放射射性性核核素素作作用用而而发发生生DNA损损伤伤，并并启启动动修修复复机机制制（程程序序外外DNA合合成成），当当培培养养液液中中加加入入3H-TdR时时，即即可可掺掺入入DNA，以以放放射射自自显显影影术术计计数数细细胞胞核核内内显显影影颗颗粒粒或或用用液液闪闪法法技技术术测测定定掺掺入入DNA的的放放射射性性活活度，来显示程序外度，来显示程序外DNA的合成增加。的合成增加。检测终点是检测终点是DNA损伤损伤（四）显性致死突变试验（四）显性致死突变试验 (dominant lethal mutation test)基基本本原原理理：通通过过观观察察动动物物生生殖殖细细胞胞突突变变效效应应来来进进行行的的化化学学或或辐辐射射致致突突变变作作用用的的试试验验，其其原理与生殖细胞染色体断裂和易位有关。原理与生殖细胞染色体断裂和易位有关。二、致畸试验二、致畸试验基基本本原原理理：致致畸畸实实验验（teratogenicity test）是是观观察察孕孕期接触受试物是否会引起胚胎毒性或后代畸形的试验。期接触受试物是否会引起胚胎毒性或后代畸形的试验。胚胚胎胎在在发发育育过过程程中中，可可因因收收到到化化学学物物或或放放射射性性物物质质的的作作用用，使使细细胞胞分分化化、器器官官形形成成和和正正常常发发育育受受阻阻，以以致致出现器官的器质性缺陷，造成形态结构异常。出现器官的器质性缺陷，造成形态结构异常。 一一般般受受试试物物作作用用在在器器官官形形成成期期，因因此此时时期期对对受受试试物的作用最为敏感，易得出阳性结果。物的作用最为敏感，易得出阳性结果。 三、致癌试验三、致癌试验基本原理：基本原理：当当原原癌癌基基因因接接触触了了放放射射性性诱诱变变原原发发生生突突变变后后，形形成成癌癌基基因因，它它能能使使细细胞胞在在失失控控的的情情况况下下进进行行不不断断的的分裂，从而引起细胞的过度增生，导致肿瘤的发生。分裂，从而引起细胞的过度增生，导致肿瘤的发生。人人体体细细胞胞内内在在正正常常情情况况下下存存在在能能阻阻止止细细胞胞过过度度分分裂裂的的抗抗癌癌基基因因，当当接接触触放放射射性性物物质质时时，抑抑癌癌基基因因失失去去调调控控能能力力转转变变为为癌癌基基因因，使使细细胞胞不不断断过过度度分分裂裂，产生恶性肿瘤。产生恶性肿瘤。 机体接触环境中放射性核素后引起癌变机体接触环境中放射性核素后引起癌变 6 人体观察方法人体观察方法一、人体临床观察一、人体临床观察对人体观察应着重于：对人体观察应着重于：1.人人体体受受放放射射性性核核素素内内污污染染后后，要要进进行行有有效效的的治治疗疗与与预预后后的的判判断断，必必须须先先了了解解污污染染核核素素的的放放射射毒毒理理学学规规律律，在在不不同同阶阶段段，采采取取不不同同的的措措施施以以减减少少对对机体的危害。机体的危害。2.慢慢性性低低活活度度放放射射性性核核素素内内污污染染的的生生物物效效应应，尤尤其其是远期致癌效应，需经一定的潜伏期。是远期致癌效应，需经一定的潜伏期。 二、群体辐射流行病学调查二、群体辐射流行病学调查辐辐 射射 流流 行行 病病 学学 调调 查查 (radioepidemiological investigation)是是回回顾顾性性观观察察环环境境放放射射性性污污染染物物对对接触人群健康影响的一项重要和必要的方法。接触人群健康影响的一项重要和必要的方法。在在辐辐射射流流行行病病学学调调查查中中，应应注注意意设设计计，确确定定调调查查目目的的调调查查对对象象，制制订订调调查查项项目目，列列出出对对比比指指标标和运用统计分析。和运用统计分析。 1.调查对象调查对象 辐射流行病调查的对象是依据目的而定的辐射流行病调查的对象是依据目的而定的2.调查项目和对比指标调查项目和对比指标 辐辐射射流流行行病病学学调调查查的的群群体体指指标标与与健健康康检检查查的的个个体体指标含义不同指标含义不同3.调查方式调查方式 回顾性调查回顾性调查 前瞻性调查前瞻性调查 总总之之，辐辐射射流流行行病病学学的的现现场场调调查查，对对于于确确定定放放射射性性物物质质的的有有害害效效应应极极为为重重要要。放放射射性性物物质质对对人人体体的的作作用用的的影影响响是是多多方方面面的的，应应参参照照观观察察结结果果，运运用用基基础础医医学学、临临床床医医学学以以及及医医学学统统计计等等知知识识，进进行行周周密密细细致致的的设设计计，选选择择适适当当的的指指标标，才才能能获获得可靠结果。得可靠结果。7 核酸分子杂交方法核酸分子杂交方法 核酸探针核酸探针 核核酸酸探探针针是是一一类类具具有有特特异异顺顺序序的的DNA或或RNA克克隆隆片片段段，它它们们能能够够专专一一性性地地与与受受检检目目标标DNA互互补结合补结合(即分子杂交即分子杂交)，以检测核酸的质和量。，以检测核酸的质和量。 它它是是一一段段与与目目标标基基因因互互补补的的核核酸酸序序列列，可可以以是是DNA，也也可可以以是是RNA或或cDNA，其其长长度度大大小小不不一一，一般处在一般处在20b-10 kb范围内，多集中在范围内，多集中在0.5-2 kb之间之间核苷酸的结构核苷酸的结构核酸探针核酸探针基因片段基因片段RFLP片段片段重复片段重复片段DNARNA人工合成人工合成cDNAmRNA引物引物寡聚寡聚DNA无性生物扩增和纯化标记应用无性生物扩增和纯化标记应用载体载体PCR扩增扩增DNA合成合成图图 核酸探针的种类核酸探针的种类 核核酸酸探探针针是是分分子子生生物物学学的的基基本本工工具具，它它具有具有示踪性示踪性和和显示性显示性两个功能两个功能 核酸分子杂交核酸分子杂交核核酸酸分分子子杂杂交交的的两两个个基基本本条条件件是是用用同同位位素素标标记记的的核核酸酸探探针针和和待待检检的的目目标标核核酸酸，进进行行液相杂交或固相杂交。液相杂交或固相杂交。毒毒理理学学实实验验设设计计都都必必须须遵遵循循随随机机、对对照照、重重复复三个基本原则。三个基本原则。(一一)随机的原则随机的原则随随机机化化(randomization)是是指指在在抽抽样样时时,使使总总体体中中每每一一个个体体都都有有同同等等的的机机会会被被抽抽取取;在在分分配配样样本本时时,确确保保样样本本中中的的每每一一个个体体都都有有同同等等的的机机会会被被分分入入任任何何一一个个组组中中。在在进进行行毒毒理理学学动动物物实实验验时时,动动物物必必须须随随机机分分组组,最最常用的方法是完全随机或随机区组的方法。常用的方法是完全随机或随机区组的方法。(二二)对照的原则对照的原则对对照照(control)是是指指在在实实验验时时针针对对实实验验组组设设立立的的可可以对比的组。以对比的组。对对照照的的意意义义在在于于通通过过对对照照鉴鉴别别处处理理因因素素与与非非处处理因素的差异及处理因素的效应大小理因素的差异及处理因素的效应大小,消除和减少消除和减少 随随机机化化原原则则不不能能控控制制的的抽抽样样误误差差及及实实验验者者操操作作熟熟练练程程度度等等所所造造成成的的差差异异。毒毒理理学学实实验验中中常常用用的的对对照形式有以下几种。照形式有以下几种。1.未未处处理理对对照照(空空白白对对照照)：即即不不施施加加任任何何处处理理措措施施，用用于于确确定定实实验验对对象象生生物物学学特特征征的的本本底底值值,进进行行质质量量控制。控制。2.阴阴性性对对照照：不不给给要要研研究究的的处处理理因因素素,但但给给予予其其他他的的实实验验因因素素，以以排排除除这这些些实实验验因因素素的的影影响响。常常用用的的阴阴性性对对照照是是溶溶剂剂对对照照,以以此此作作为为与与染染毒毒组组比比较较的的基基础础。对对照照组组与与实实验验组组必必须须在在同同时时、同同地地、同同条条件件下进行处理下进行处理,否则就失去了对照的意义。否则就失去了对照的意义。3. 阳阳性性对对照照：用用已已知知的的阳阳性性物物检检测测实实验验体体系系的的有有效效性性。对对于于变变异异较较大大的的实实验验,必必须须设设置置阳阳性性对对照照组组。当当同同时时进进行行的的阳阳性性对对照照组组不不能能得得到到阳阳性性结结果果时时，说说明明此此次次实实验验质质量量有有问问题题，全全部部数数据据无无效效,必必须须重重新新进进行行实实验验。有有些些文文献献中中，在在需需要要设设置置阳阳性性对对照照组组的的实实验验(如如遗遗传传毒毒理理学学、致致畸畸、致致癌癌和和致致敏敏实实验验等等)中中，未未设设置置阳阳性性对对照照，或或阳阳性性对对照照的的结结果果明明显显不不合合理理,此时的实验结论是不可信的。此时的实验结论是不可信的。4. 自自身身对对照照：同同一一研研究究对对象象自自身身处处理理前前后后互互为为对对照照。采采用用这这种种对对照照时时，要要求求研研究究因因素素处处理理前前后后的的实实验验条条件件必必须须一一致致，观观察察指指标标应应是是稳稳定定的的。有有些些文文献献中中，在在实实验验过过程程中中观观察察指指标标本本身身可可能能有有变变化化的的情情况况下下，仍仍用用自自身身对对照照，不不能能说说明明是是非非研研究究因因素素(如动物周龄、季节等如动物周龄、季节等)还是研究因素的作用。还是研究因素的作用。5. 历历史史性性对对照照：同同一一实实验验室室过过去去多多次次实实验验的的对对照照组组数数据据组组成成的的历历史史对对照照可可用用于于实实验验室室质质量量的的控控制制和和保保证证。过过去去的的研研究究资资料料可可用用于于研研究结果的比较，但需注意资料的可比性。究结果的比较，但需注意资料的可比性。(三三)重复的原则重复的原则重重复复(replication)是是指指实实验验组组和和对对照照组组应应有有一一定定数数量量的重复观察结果。的重复观察结果。当当观观测测的的结结果果具具有有变变异异性性时时，为为了了显显示示随随机机变变量量的的统统计计规规律律性性，必必须须有有足足够够例例数数的的重重复复实实验验数数据据。重重复复的的原原则则大大多多数数情情况况下下通通过过各各组组适适宜宜的的样样本本量量来来体体现现，样样本本量量越越大大，越越能能反反映映客客观观、真真实实的的情情况况。样样本本量量应应考考虑虑到到统统计计学学的的要要求求，在在保保证证实实验验结结果果可可靠靠性性的的前前提提下下,选择适宜的样本量，以控制实验规模和成本。选择适宜的样本量，以控制实验规模和成本。记住你听到的充满力量的话语记住你听到的充满力量的话语积极、乐观！下决心；恒心；下决心；恒心；信心；平常心信心；平常心