掂驴嵌詹菠麻嘛秩乏丑忌酝首油镭均站揍副浊竟侣涅灯用鸦害枫锡刷剿挝Chap20生物制品分析概论Chap20生物制品分析概论Chap20 Chap20 生物制品分析概论生物制品分析概论优绽昂夕申杠狮茵敝域撞筐醉糯蘸汲件辩莫觅呆惯惮渊涂浇者扁砖警妥绰Chap20生物制品分析概论Chap20生物制品分析概论第一节第一节 概述概述l中国药典中国药典20102010版版第一部收载药材及饮片、植物油脂和提取物、成方制第一部收载药材及饮片、植物油脂和提取物、成方制剂和单味制剂等。剂和单味制剂等。第二部收载化学药品、抗生素、生化药品、放射性药第二部收载化学药品、抗生素、生化药品、放射性药品以及药用辅料等。品以及药用辅料等。第三部收载第三部收载生物制品生物制品，首次将中国生物制品规程，首次将中国生物制品规程并入药典。并入药典。垄监勃晋布酮皱舔炙纶闸哼掷吻卫矣悟番卸败酌管憎秃课坊葱了娃啼进峰Chap20生物制品分析概论Chap20生物制品分析概论生物药物生物药物 (bio-pharmaceutics) (bio-pharmaceutics)-生化药物生化药物(biochemical drugs) (biochemical drugs) -生物合成药物生物合成药物(biosynthetic drugs)(biosynthetic drugs)-生物制品生物制品(biological products)(biological products)基本概念基本概念链将抛插令稍宪庭认昂地篮伶警慕互废搞芹晚捞鸭殷尸赞瘩曾丘夕孰个腑Chap20生物制品分析概论Chap20生物制品分析概论利用生物体、生物组织或组成生物体的各种成利用生物体、生物组织或组成生物体的各种成分，综合运用生物学、生物化学、微生物学、免分，综合运用生物学、生物化学、微生物学、免疫学、物理化学和药学的原理与方法制得的一大疫学、物理化学和药学的原理与方法制得的一大类药物。包括从动物、植物和微生物等生物体中类药物。包括从动物、植物和微生物等生物体中直接制取的各种天然生物活性物质以及人工合成直接制取的各种天然生物活性物质以及人工合成或半合成的天然物质类似物。或半合成的天然物质类似物。生物药物生物药物(bio-pharmaceutics)(bio-pharmaceutics)仕姚印彻惹邹幻当告汪厄腺翘疹搔诱倍虽额瞧棋壬槐吞谢男青异屎蒙彻芍Chap20生物制品分析概论Chap20生物制品分析概论指从动物、植物及微生物提取的，亦可用生物指从动物、植物及微生物提取的，亦可用生物- -化学半合成或用现代生物技术制得的生命基本化学半合成或用现代生物技术制得的生命基本物质，及其衍生物、降解物及大分子的结构修物质，及其衍生物、降解物及大分子的结构修饰物等。如氨基酸、多肽、蛋白质、酶、多饰物等。如氨基酸、多肽、蛋白质、酶、多糖、脂质和核苷酸等。糖、脂质和核苷酸等。p如：氨基酸、多肽、蛋白质、酶等。如：氨基酸、多肽、蛋白质、酶等。生化药物生化药物(Biochemical Drugs)(Biochemical Drugs)抛炯坤慢未厌铜空哺候飞倒悦杂柱妊恒徒呐蓑腑充出侈湿铁柿知联喀傣鳖Chap20生物制品分析概论Chap20生物制品分析概论由微生物代谢所产生的药物和必须利用微生物由微生物代谢所产生的药物和必须利用微生物及其酶转化反应共同完成的半合成药物。及其酶转化反应共同完成的半合成药物。如：维生素、抗生素、氨基酸、某些酶等。如：维生素、抗生素、氨基酸、某些酶等。生物合成药物（生物合成药物（biosynthetic drugsbiosynthetic drugs）氖圣巳酌读际孤计烫傲排置爵馋疆冀肠责尼吓画痉救平吱腾杭爆禄穗京并Chap20生物制品分析概论Chap20生物制品分析概论是应用普通的或以基因工程、细胞工程、蛋白质是应用普通的或以基因工程、细胞工程、蛋白质工程、发酵工程等生物技术获得的微生物、细胞工程、发酵工程等生物技术获得的微生物、细胞及各种动物和人源的组织和液体等生物材料制及各种动物和人源的组织和液体等生物材料制备，用于人类疾病预防、治疗和诊断的药品。参备，用于人类疾病预防、治疗和诊断的药品。参见中国生物制品规程见中国生物制品规程p生物制品的一个显著特点：生物制品的一个显著特点：全程质量控制全程质量控制。生物制品生物制品(Biological Products)(Biological Products)抢沥开贬婆师饺服汗羽皋姻屋胰拜图澈存莽赫菠亢缩微耘像辈腮醚绘观琐Chap20生物制品分析概论Chap20生物制品分析概论（1 1）疫苗类）疫苗类(Vaccines)(Vaccines)（2 2）抗毒素及抗血清类）抗毒素及抗血清类(Antitoxin and Antiserum)(Antitoxin and Antiserum)（3 3）血液制品）血液制品(Blood Products)(Blood Products)（4 4）细胞因子）细胞因子(Cytokines)(Cytokines)及重组及重组DNADNA产品产品 (Recombinant DNA Products) (Recombinant DNA Products)（5 5）诊断制品）诊断制品(Diagnostic Reagents)(Diagnostic Reagents)（6 6）其他制品）其他制品(Else Products)(Else Products)擅支忌拇拙媳鹤格羽内殷乎时蝴嫌际疚删这涛易毅郎缩蝗移揣辫处凯墩浪Chap20生物制品分析概论Chap20生物制品分析概论生物制品的特点生物制品的特点1 1分子量大，分子量不是定值分子量大，分子量不是定值2. 2. 结构确证难结构确证难3. 3. 全过程的质量控制全过程的质量控制4. 4. 生物活性检查生物活性检查5. 5. 安全性检查安全性检查6. 6. 效价效价( (含量含量) )测定测定傲虚睁员耽突罢梅寐拭索蓟馏阁钾季度甩洒峙尼邯奸握瓢身应唯庇建踏矣Chap20生物制品分析概论Chap20生物制品分析概论生物制品的全程质量控制生物制品的全程质量控制l20052005版中国药典各论内容一般包括：版中国药典各论内容一般包括：品名品名 定义、组成及用途定义、组成及用途基本要求基本要求 制造制造检定检定 保存运输及有效期保存运输及有效期使用说明使用说明阿静撂婴僳睬辨谤界止龄搽半糠剥背怖咐裁蚁膏哲观冲烘纶奠墙终掇齿编Chap20生物制品分析概论Chap20生物制品分析概论第二节第二节 质量控制的基本程序与方法质量控制的基本程序与方法 一、鉴别试验一、鉴别试验二、杂质检查二、杂质检查 三、安全性检查三、安全性检查四、含量四、含量( (效价效价) )测定测定淌醋沂芍篮隐实诌摧籍障阔授抱求颂绣矿拾爽脓累逢另七枝体堑炳崭涝紫Chap20生物制品分析概论Chap20生物制品分析概论一、鉴别试验一、鉴别试验l理化鉴别理化鉴别 化学、化学、UVUV、HPLCHPLCl生化鉴别生化鉴别 酶法、电泳法酶法、电泳法l生物鉴别法生物鉴别法 血清学法血清学法 生物学法（小鼠惊厥试验）生物学法（小鼠惊厥试验）桥拂雪苞殖润畴泽返镊折通当肄故听臭绊切滋漱匆淬捣肠膊宝屈瑟限沽萄Chap20生物制品分析概论Chap20生物制品分析概论二、杂质检查二、杂质检查l一般杂质一般杂质l特殊杂质特殊杂质l安全性检查安全性检查蜜喜为秽耿壶拇稚壁票疽眨互断屠菇蛔蔽扎慢掀郑相律盗熔显尔碎愉贞挣Chap20生物制品分析概论Chap20生物制品分析概论安全性检查安全性检查 l热原检查法（家兔法）热原检查法（家兔法）l细菌内毒素检查法细菌内毒素检查法l异常毒性试验异常毒性试验l过敏试验过敏试验 l降压物质检查法降压物质检查法l无菌试验无菌试验l基因工程药物中可能基因工程药物中可能杂质与污染物检查杂质与污染物检查l致突变试验致突变试验l生殖毒性试验生殖毒性试验嘻渗段魔地葵砌观清灸疼佩俩席茬炳楼猴耙恨言貌挡筷藕党乐矾流魔寺捌Chap20生物制品分析概论Chap20生物制品分析概论 家兔法家兔法 本法是将一定剂量的供试品，静脉注入家本法是将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体内，以其体温升高的程度，判定该供兔体内，以其体温升高的程度，判定该供试品中所含热原是否符合规定。试品中所含热原是否符合规定。 热原检查法热原检查法(Test for pyrogen)(Test for pyrogen)徘难势圈裸虐道欠挞入瑞契要开俺治浓舒梭诞失弯保蔼焦具偷厢掩试跋焙Chap20生物制品分析概论Chap20生物制品分析概论细菌内毒素检查法细菌内毒素检查法(Test for Bacterial Endotoxin)(Test for Bacterial Endotoxin)本法系利用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反本法系利用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的机理，以判断供试品中细菌苗内毒素的应的机理，以判断供试品中细菌苗内毒素的限量是否符合规定的一种方法。限量是否符合规定的一种方法。球解泥饮铀辩先破剔趾湃焙西狙复乐矢泵慌肛蚁提物挠族丈疏蛋笑肇悸梧Chap20生物制品分析概论Chap20生物制品分析概论鲎鲎埃轮迅帚烙木洱纶蓑滞虹豹淀邱蛹摄咎彤浚旋午个母离浆索审还桌立湿歇Chap20生物制品分析概论Chap20生物制品分析概论用一定剂量的药物按指定的操作方法和给药途用一定剂量的药物按指定的操作方法和给药途径给予规定体重的某种试验动物，观察其急性径给予规定体重的某种试验动物，观察其急性毒性反应。反应的判断以试验动物死亡与否为毒性反应。反应的判断以试验动物死亡与否为终点。终点。异常毒性试验异常毒性试验(Test for Undue Toxicity)(Test for Undue Toxicity)挺颧损祁犹从瘩绎醇翔薪涂畸鸳缸当碧作励牢嗽匣撤驱皖零毯律技箱障燃Chap20生物制品分析概论Chap20生物制品分析概论过敏试验是检查异性蛋白的试验。药物中若夹过敏试验是检查异性蛋白的试验。药物中若夹杂有异性蛋白，在临床使用时易引起病人多种杂有异性蛋白，在临床使用时易引起病人多种过敏反应，轻者皮肤出现红斑或丘疹，严重者过敏反应，轻者皮肤出现红斑或丘疹，严重者可出现窒息、发结、血管神经性水肿、血压下可出现窒息、发结、血管神经性水肿、血压下降，甚至休克和死亡。降，甚至休克和死亡。过敏试验过敏试验蔽骋砍淳撩昆嗣坯匡氖湖郁大欧鳞谎庭珊威鹅瘦谆京滤牛诽丫昆谴佬沈异Chap20生物制品分析概论Chap20生物制品分析概论降压物质是指某些药物中含有的能导致血压降低降压物质是指某些药物中含有的能导致血压降低的杂质，包括组胺、类组胺或其他导致血压降低的杂质，包括组胺、类组胺或其他导致血压降低的物质。的物质。降压物质检查法降压物质检查法(Test for Depressor Substances)(Test for Depressor Substances)贱妮阴辣壹埠乃攻亏寂瞪麻霸色躲懦障之网瘩篮讶副泽插舰返遏缅衫咕鞍Chap20生物制品分析概论Chap20生物制品分析概论l无菌试验无菌试验l基因工程药物中可能杂质与污染物检查基因工程药物中可能杂质与污染物检查 外源性外源性DNADNA测定、宿主细胞蛋白质测定、宿主细胞蛋白质l致突变试验致突变试验l生殖毒性试验生殖毒性试验腕剑锚妓刑最扦骑乳采疽颁涧伞缄醛亨丝氧葵荔镐够惶鹅掏贺系役巳陆钉Chap20生物制品分析概论Chap20生物制品分析概论第三节第三节 常用定量分析法常用定量分析法 讫鸯咖关旧禽痹语赔冶期煽喧乎腺贪骤普崭融敌峰义惯妆球修满窖灼辛需Chap20生物制品分析概论Chap20生物制品分析概论倘嘶卓踊撤宝厉篓特在梆浇慧溉翰想巳笆柄溯痪献热湃蝉痰脸误才琢赐磅Chap20生物制品分析概论Chap20生物制品分析概论练峻预遍曰尖查蓑踌韭米拘虱巨志捻惑的灿蘑银集应薪汰豢尺莉荫疥逝匈Chap20生物制品分析概论Chap20生物制品分析概论蜗啦山姓宦谜旱少涧疹辈疼潞某稿酵淬磕邵是间辨恶禽瑰沦痢浦想兔馅局Chap20生物制品分析概论Chap20生物制品分析概论1 1反相高效液相色谱法反相高效液相色谱法(RP-HPLC) (RP-HPLC) 以以(C(C4 4、C C8 8、C C1818) )烷基硅烷键合相为柱填料，以烷基硅烷键合相为柱填料，以甲醇甲醇- -水、乙腈水、乙腈- -水或甲醇、乙腈与缓冲液构成的水或甲醇、乙腈与缓冲液构成的溶液为流动相，以紫外、荧光或电化学检测器为溶液为流动相，以紫外、荧光或电化学检测器为检测手段，这种色谱体系在生化药物检测手段，这种色谱体系在生化药物( (例如肽例如肽类、氨基酸、蛋白质、多糖等类、氨基酸、蛋白质、多糖等) )定量分析中应用定量分析中应用广泛。广泛。 色谱法色谱法阴洒痉揍开跋冀氓尾研箔堰铀碌耕墨捅依拭戴悬朝萍哉递使螺宙铲滨伍娜Chap20生物制品分析概论Chap20生物制品分析概论2.2.高效离子交换色谱法高效离子交换色谱法(HPIEC) (HPIEC) HPIECHPIEC是是蛋蛋白白质质、多多肽肽分分离离分分析析中中常常见见的的方方法法之之一。具有较高质量的活性回收。一。具有较高质量的活性回收。3.3.高效凝胶过滤色谱法高效凝胶过滤色谱法(HPGFC) (HPGFC) HPGFC HPGFC可用于多肽和蛋白质等生化药物的分离及可用于多肽和蛋白质等生化药物的分离及其分子量的测定。其分子量的测定。泅委廉酒橱拴编匙砌持几扫脯诲匠钉逻妻喷逮焊队阵伺烟今他蠢横绽逸掺Chap20生物制品分析概论Chap20生物制品分析概论噪肘咕皋猖桃努囚快拈茹参吠钉入洁摘颁讳疲预逸疯腆斡瑞皮么掏拈栋惫Chap20生物制品分析概论Chap20生物制品分析概论剩鞘呆青瓜抑焉记魏户段初褥邦搁益鬃篆逗误争权恩净丢棒育巢这丫娱峦Chap20生物制品分析概论Chap20生物制品分析概论电泳法电泳法l醋酸纤维素薄膜电泳法醋酸纤维素薄膜电泳法l琼脂糖凝胶电泳法琼脂糖凝胶电泳法lSDS-PAGESDS-PAGEl毛细管电泳毛细管电泳用于蛋白质类生物用于蛋白质类生物制品的分析制品的分析森堑涟刮那炊英袜龄湿锡摇澎竿潦装卢陇疆选矣疚荫荐职影茨梯蛔塑珠钵Chap20生物制品分析概论Chap20生物制品分析概论1 .1 .原理原理 毛细管电泳是以弹性石英毛细管为分离通道，毛细管电泳是以弹性石英毛细管为分离通道，以高压直流电场为驱动力，依据样品中各组分以高压直流电场为驱动力，依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的电之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的电泳分离分析方法。泳分离分析方法。 高效毛细管电泳法（高效毛细管电泳法（HPCEHPCE）（High performance capillary electrophoresisHigh performance capillary electrophoresis） 芜赡词膘楔沪倡道吏域壹较哦筐嘘帝坊位箍磺烙糙师函期札未蓖籍洋背祝Chap20生物制品分析概论Chap20生物制品分析概论l电泳电泳：电解质中带电粒子在电场力作用下，以不同的速度向电荷相反方向迁移的现象。l电泳淌度电泳淌度：带电粒子在毛细管中定向移动的速度与所在电场强度之比。l电渗流电渗流：毛细管内壁表面的电荷所引起的管内液体的整体流动，来源于外加电场对管壁溶液双电层的作用。几个概念几个概念历午漆郊逸沟饶掂募墓祁勃理舞碌博眉馋吃净胸纪敌蚌立缔宏呢赃界兆艳Chap20生物制品分析概论Chap20生物制品分析概论电渗流作用电渗流作用钳涂挤弃盏咙淖瞩像忌称秀贤笆纲椒无育镶浅帘胎接部耸支浩瞥剑棚弓土Chap20生物制品分析概论Chap20生物制品分析概论毛细管电泳装置示意图毛细管电泳装置示意图粥与金唱韧辆瑰严侄怀耶饮辜蜘闷敬牛升短秀捻净五关伎皂造俄绪匹英却Chap20生物制品分析概论Chap20生物制品分析概论()(+)+-毛细电泳中不同组分的迁移示意图毛细电泳中不同组分的迁移示意图捶蔚筹叫镭甩献秆材伟糜兼绎犯蚤研腐兑症耐扒烤穿倍踏淄故套眨礁失禽Chap20生物制品分析概论Chap20生物制品分析概论流出顺序流出顺序正离子、中性粒子、负离子正离子、中性粒子、负离子电渗流的速度是泳流速度的电渗流的速度是泳流速度的5-75-7倍倍伪役类匹壹订叠汝轩朋峡洪磷区使续戌霹骨肖鸣生痕柳乐龄配沂冤凤耻沮Chap20生物制品分析概论Chap20生物制品分析概论目前，毛细管电泳的分离模式主要有以下目前，毛细管电泳的分离模式主要有以下3 3种：种： (1)(1)毛细管区带电泳：用以分析带电溶质。为了降毛细管区带电泳：用以分析带电溶质。为了降 低电渗流和吸附现象，可将毛细管内壁涂层。低电渗流和吸附现象，可将毛细管内壁涂层。(2)(2)毛细管凝胶电泳：在毛细管中装入单体，引发毛细管凝胶电泳：在毛细管中装入单体，引发 聚合形成凝胶，主要用于测定蛋白质、聚合形成凝胶，主要用于测定蛋白质、DNADNA等等 大分子化合物。大分子化合物。 枚慌吝排敌匡私妙颠墨些咯营爱裹逐脾盲渐苗哎牵迹乌锹巳垂心巡睦膳动Chap20生物制品分析概论Chap20生物制品分析概论(3)(3)胶束电动毛细管色谱胶束电动毛细管色谱 在缓冲液中加入离子型表面活性剂如十二烷在缓冲液中加入离子型表面活性剂如十二烷 基硫酸钠，形成胶束，被分离物质在水相和基硫酸钠，形成胶束，被分离物质在水相和 胶束相胶束相( (准固定相准固定相) )之间发生分配并隨电渗流之间发生分配并隨电渗流 在毛细内迁移，达到分离。本模式能用于中在毛细内迁移，达到分离。本模式能用于中 性物质的分离。性物质的分离。臭嫁谈非虽羡渍牛扩倘令松韶艘妻鹅尾竿享突央犀烹昌逝吃妒竟阁碍七眩Chap20生物制品分析概论Chap20生物制品分析概论l柱效高柱效高 理论板数数万至数千万理论板数数万至数千万l速度快速度快 250 250秒分离秒分离1010种蛋白质种蛋白质l试剂消耗少试剂消耗少 数数mlml缓冲液缓冲液l进样量小进样量小 nL nL级进样级进样高效毛细管电泳法优点高效毛细管电泳法优点普亨阉锚惰宠拿务厩企灰叹俯腐暖窜邮描唯袭迂郝伐犹擂锥鸭尧漾骆箍脾Chap20生物制品分析概论Chap20生物制品分析概论HPCE的应用的应用l毛细管电泳技术可检测多种样品，如血清、血毛细管电泳技术可检测多种样品，如血清、血浆、尿样、脑脊液、红细胞、体液或组织及其浆、尿样、脑脊液、红细胞、体液或组织及其实验动物活体实验；且可分离分析多种组分，实验动物活体实验；且可分离分析多种组分，如核酸如核酸/ /核苷酸、蛋白质核苷酸、蛋白质/ /多肽多肽/ /氨基酸、糖类氨基酸、糖类/ /糖蛋白、酶、碱氨基酸、微量元素、小的生物糖蛋白、酶、碱氨基酸、微量元素、小的生物活性分子等的快速分析，以及活性分子等的快速分析，以及DNADNA序列分析和序列分析和DNADNA合成中产物纯度测定等。合成中产物纯度测定等。 掖蛤听穿含遵髓靖酷烷珊致赤设惰志谅董酱茹简挟肋淖驶劣葵藤桂希矫招Chap20生物制品分析概论Chap20生物制品分析概论