药理学基础实验药理学基础实验 实验一实验一 基础训练基础训练实验二实验二不同给药途径对药物作用的影响及药物的抗凝血作用不同给药途径对药物作用的影响及药物的抗凝血作用实验三实验三药物的镇痛作用（化学刺激法）药物的镇痛作用（化学刺激法）实验四实验四溶血性实验溶血性实验实验五实验五药物提高心肌耐缺氧能力的作用药物提高心肌耐缺氧能力的作用实验六实验六半数致死量（半数致死量（LD50）的测定的测定实验一实验一基础训练基础训练【实实验验目目的的】学习小白鼠捉拿、给药和取血方法。【器【器材】材】1ml注射器，灌胃针头，电子秤，小鼠固定箱【药【药品】品】生理盐水，苦味酸【动【动物】物】小白鼠4只，体重1822g，雌雄不限一、常用实验动物的捉拿固定方法一、常用实验动物的捉拿固定方法1、小鼠抓取固定方法小鼠温顺，一般不会咬人，抓取时先用右手抓取鼠尾提起，置于鼠笼或实验台向后拉，在其向前爬行时，用左手拇指和食指抓住小鼠的两耳和颈部皮肤，将鼠体置于左手心中，把后肢拉直，以无名指按住鼠尾，小指按住后腿即可。有经验者直接用左手小指钩起鼠尾，迅速以拇指和食指、中指捏住其耳后颈背部皮肤亦可。这种在手中固定方式，能进行实验动物的灌胃、皮下、肌肉和腹腔注射以及其他实验操作。图1-1小白鼠的捉拿方法图1-2大白鼠的捉拿方法 图1-3豚鼠的捉拿方法 图1-4家兔的捉拿方法二、常用实验动物的给药方法二、常用实验动物的给药方法1、皮下注射：注射时以左手拇指和食指提起皮肤，将连有5（1/2）号针头的注射器刺入皮下。皮下注射部位一般狗、猫多在大腿外侧，豚鼠在后大腿的内侧或小腹部；大白鼠可在侧下腹部。兔在背部或耳根部注射。蛙可在脊背部淋巴腔注射。2、皮内注射：皮内注射时需将注射的局部脱去被毛，消毒后，用左手拇指和食指按住皮肤并使之绷紧，在两指之间，用结核菌素注射器连4(1/2)细针头，紧贴皮肤表层刺入皮内，然后再向上挑起并再稍刺入，即可注射药液，此时可见皮肤表面鼓起一白色小皮丘。3、肌肉注射：肌肉注射应选肌肉发达，无大血管通过的部位，一般多选臀部。注射时垂直迅速刺入肌肉，回抽针栓如无回血，即可进行注射。给小白鼠、大白鼠等小动物作肌肉注射时，用左手抓住鼠两耳和头部皮肤，右手取连有针头的 注 射 器 ， 将 针 头 刺 入 大 腿 外 侧 肌 肉 ， 将 药 液 注 入 。4、腹腔注射：用大、小白鼠做实验时，以左手抓住动物，使腹部向上，右手将注射针头于左（或右）下腹部刺入皮下，使针头向前推0.51.0cm，再以45度角穿过腹肌，固定针头，缓缓注入药液。为避免伤及内脏，可使动物处于头低位，使内脏移向上腹。若实验动物为家兔，进针部位为下腹部的腹白线离开1cm处。5、经口给药：在急性试验中，经口给药多用灌胃法，此法剂量准确，适用于小白鼠、大白鼠、家兔等动物。一般当灌胃针插入小鼠34cm，大鼠或豚鼠4-6cm后可将药物注入。常用的灌胃量小鼠为0.2-1ml，大鼠1-4ml，豚鼠为1-5ml。三、常用动物的取血方法三、常用动物的取血方法1、割(剪)尾采血当所需血量很少时采用本法。固定动物并露出鼠尾。将尾部毛剪去后消毒，然后浸在45左右的温水中数分钟，使尾部血管充盈。再将尾擦干，用锐器（刀或剪刀）割去尾尖0.3-0.5cm，让血液自由滴入盛器或用血红蛋白吸管吸取，采血结束，伤口消毒并压迫止血。也可在尾部作一横切口，割破尾动脉或静脉，收集血液的方法同上。每鼠一般可采血10余次以上。小鼠每次可取血0.1ml，大鼠0.30.5ml。2、眼眶静脉丛采血采血者的左手拇食两指从背部较紧地握住小鼠或大鼠的颈部（大鼠采血需带上纱手套），应防止动物窒息。当取血时左手拇指及食指轻轻压迫动物的颈部两侧，使眶后静脉丛充血。右手持续接7号针头的1ml注射器或长颈（34cm）硬质玻璃滴管（毛细管内径0.5-1.0mm），使采血器与鼠面成45的夹角，由眼内角刺入，针头斜面先向眼球，刺入后再转180度使斜面对着眼眶后界。刺入浓度，小鼠约23mm，大鼠约45mm。当感到有阻力时即停止推进，同时，将针退出约0.1-0.5mm，边退边抽。若穿刺适当血液能自然流入毛细管中，当得到所需的血量后，即除去加于颈部的压力，同时，将采血器拔出，以防止术后穿刺孔出血。若技术熟练，用本法短期内可重复采血均无多大困难。左右两眼轮换更好。体重20-25g的小鼠每次可采血0.2-0.3ml；体重200-300g大鼠每次可采血0.5-1.0ml，可适用于某些生物化学项目的检验。性别鉴定 不同途径给药方法经口灌胃腹腔注射 皮下注射 肌肉注射 小白鼠眼眶取血实验二实验二不同给药途径对药物作用的影响及不同给药途径对药物作用的影响及药物的抗凝血作用药物的抗凝血作用【实验目的】【实验目的】1、观察不同给药途径对药物作用的影响；2、观察药物的抗凝血作用。【实验原理】【实验原理】肝素是一个兼具体内外抗凝作用的药物，但给药途径不同，可产生截然不同的效果。注射给药吸收好，口服不吸收。该实验通过分别给动物灌胃和注射等量肝素，然后测定其凝血时间，可以看出给药途径不同对肝素作用的影响。【器器材材】1ml注射器、灌胃器、天平称、毛细玻璃管、秒表、棉球钳【药【药品】品】100u/ml肝素溶液，生理盐水【动【动物】物】小白鼠（18-24克）实验方法实验方法1、肝素不同给药途径对药物作用的影响取体重接近的小白鼠20只，称重后分为四组并标记，第一组腹腔注射100/ml肝素溶液0.2ml/10g，第二组腹腔注射生理盐水0.2ml/10g；第三组灌胃100/ml肝素溶液0.2ml/10g，第四组灌胃生理盐水0.2ml/10g。给药10分钟后，分别以毛细玻璃管有小鼠内眦取血，用毛细玻管法观察凝血时间。2、毛细管法取血后来回摇晃毛细血管，直至血液在毛细血管中不再移动。结结果果处处理理将小白鼠的凝血时间填入下表。取每组5只凝血时间的平均数，将各组的结果进行比较，以判断注射肝素和灌胃肝素对凝血时间的影响。表4-1肝素不同给药途径对药物作用的影响组给药凝血时间（min）别途径12345平均肝素p.o.生理盐水p.o.肝素s.c生理盐水s.c【注意事项】1、取血用毛细玻管必须干净，内壁无污，并且管径均匀一致，否则影响实验结果。2、玻片、针头要干净。实验三实验三药物的镇痛作用（化学刺激法）药物的镇痛作用（化学刺激法）【实验目的】【实验目的】学习并掌握镇痛实验化学刺激法，观察阿司匹林的镇痛作用。【实验原理】【实验原理】小鼠腹腔注射刺激剂(如酒石酸锑钠、醋酸溶液等)可诱导疼痛，动物表现出特征性的躯体伸缩行为称之为扭体反应(表现为腹部内凹、躯干与后腿伸张、臀部抬高等)。将给药组与对照组相比，若使扭体反应发生率减少50%以上的，可认为有镇痛作用。【器【器材】材】鼠笼，小动物电子秤(或天平)，1ml注射器。【药【药品】品】4%阿司匹林、1.0%醋酸、生理盐水【动【动物】物】小鼠，体重1822g，雌雄各半。【实验方法】【实验方法】取小鼠16只，称重，随机分为2组，分别为阿司匹林组和生理盐水组。观察每组动物的正常活动情况，第一组小鼠灌胃给药4%阿司匹林0.15ml/10g，第二组灌胃给药等容量的生理盐水0.15ml/10g。30min后，两组小鼠分别腹腔注射1.0%醋酸0.1ml/10g，观察20min内各组出现扭体反应动物数及其平均扭体次数。数据处理数据处理汇总各组实验结果，记于下表内，并依照下列公式计算药物镇痛百分率或抑制百分率。表5-1 药物对醋酸所致小鼠扭体反应的影响分 组 动物数 (n) 给药剂量 (mg/kg) 给药方式 扭体次数 镇痛率(%) 抑制率(%)生理盐水阿司匹林实验四实验四溶血性实验溶血性实验【实实验验目目的的】通过本实验认识溶血现象，并掌握溶血性实验的基本操作。【实实验验原原理理】溶血是指红细胞破裂、溶解的一种现象。多种中草药（如党参、桔梗和三七等）含有皂甙，皂甙是一类表面活性剂，有很强的乳化力，具有溶血作用。另外大量输入低渗溶液以及含有某些甾体化合物的注射液也可以引起溶血。在溶血性检查中可附带检查供试品有无红细胞凝集作用。【器【器材】材】离心机、恒温箱、试管、移液管【药【药品】品】红细胞悬液、吐温-80、生理盐水实验方法实验方法1、2%红细胞悬液的制备取新鲜兔血10-20ml，用竹签搅拌以除去纤维蛋白，再用生理盐水冲洗3-5次。每次加生理盐水5-10ml，混匀后离心（4000rpm/min离心5min），弃去上清夜，再加入生理盐水，离心，直至上清夜不成红色为止。然后按所得红细胞的溶剂，用生理盐水配成2%的悬液。2、取七只试管，编号，按下表依次加入各种溶液。摇匀后置37 恒温中保温，观察0.5、1、2、3小时各管内的溶血情况。试管1234567吐温-80(ml)0.10.30.50.70.9-生理盐水(ml)4.94.74.54.34.15.0蒸馏水5.02%红细胞悬液(ml)1111111写出各管的结果、分析原因。写出各管的结果、分析原因。结果处理结果处理全溶血：溶液澄明，红色，管底无红细胞残留物。部分溶血：溶液澄明，红色或棕色，底部尚有少量红细胞残留。镜检细胞稀少或变形。不溶血：细胞全部下沉，上层液体无色澄明。镜检红细胞不凝集。凝集：虽不溶血但红细胞凝集，经振摇后不能分散，或出现药物性沉淀。一般认为凡1小时后第3号试管以及第3号以前的各管出现溶血、部分溶血或凝集反应的制剂均不宜供静脉注射用。思考题思考题1、什么叫溶血现象？与药物有关的哪些因素可以引起溶血现象？2、如何进行溶血性试验？其结果如何判断？【注意事项】【注意事项】1、供采血的动物可采用家兔、羊、狗和大鼠。2、本试验使用的2%红细胞悬液，也可用2%全血的生理盐水混悬液。两种混悬液的试验结果基本一致。但前者溶液澄明，易于观察，而后者操作方便。在半小时内溶液澄明，变成黄或棕黄色，并有棕黄色絮状沉淀，表示药液中有凝集血细胞蛋白的因素。这是可取凝集液一滴置于载玻片上，在显微镜下可见红细胞凝集，在盖玻片周围滴加生理盐水，凝集的红细胞能被冲散则为假凝集，不被冲散则为真凝集。4、如有假凝集现象，而必须进行溶血试验者，可在药液中先加入1%鸡蛋白或明胶液，以除去凝集因素，在进行试验。实验五实验五药物提高心肌耐缺氧能力的作用药物提高心肌耐缺氧能力的作用【实验目的】【实验目的】观察药物对小白鼠常压下心肌缺氧耐受力的影响，学习抗心绞痛药物的初筛方法。【实验原理】【实验原理】心绞痛是由于心肌缺血缺氧而引起的，而心肌又是机体对缺氧最为敏感的器官之一。因此，动物全身耐缺氧实验，可基本反映心肌对缺氧的耐受情况。【器【器材】材】可密闭的500毫升广口瓶，1ml注射器，秒表。【药【药品】品】0.1%盐酸心得安溶液、0.05%盐酸心得安溶液、生理盐水、钠石灰【动【动物】物】小鼠，雌雄各半，体重1822g。实验方法实验方法1、将广口瓶底部放入新鲜钠石灰20g，钠石灰上垫一层滤纸。2、取性别相同，体重差别不超过2g小鼠24只，称重，随机分为3组并用苦味酸标记，分别为0.1%盐酸心得安溶液组、0.05%盐酸心得安溶液组和生理盐水组。观察每组动物的正常活动情况，第一组小鼠腹腔注射0.1%盐酸心得安溶液0.2ml/10g，第二组腹腔注射0.05%盐酸心得安溶液0.2ml/10g，第三组注射等容量的生理盐水。于给药后30min将小鼠一同放入广口瓶内，加盖密闭，立即开动秒表记录时间分别观察和记录各鼠死亡（呼吸停止）时间。【结【结果】果】根据实验结果，求得每种药物的小鼠平均存活时间，记于下表内，并与对照组比较，计算存活时间延长百分率，并进行t检验。给药组平均存活时间存活时间延长百分率=对照组平均存活时间100%对照组平均存活时间组别药物平均存活时间（秒）存活时间延长百分率（%）123【思考题】【思考题】广口瓶底部放置钠石灰和滤纸有什么作用？3实验六实验六半数致死量（半数致死量（LD50）的测的测定定【实实验验目目的的】学习并掌握小鼠半数致死量的测定方法、步骤和计算过程【实实验验原原理理】衡量一个药物的急性毒性大小，一般是以该药物使动物致死的数量（lethaldose）为指标。通常用半数致死量（LD50）来表示，因为LD50是剂量反应曲线上最敏感的一点。一个药物的剂量与生物反应之间有一定的关系，若以死亡率做纵坐标，剂量做横坐标，常成一“S”形曲线。【器【器材】材】1ml注射器、电子秤【药【药品】品】生理盐水、盐酸利多卡因20mg/ml【动【动物】物】小白鼠20只，体重1822g，雌雄各半实验方法实验方法1、动物的选用和分组：选用昆明种小鼠18-24克，按随机原则分为5组，每组7只，按下表腹腔注射给药，记录30min后各族小鼠死亡数。实验结果记录组别小鼠(只)剂量(mg/kg)对数剂量注射剂量(ml)死亡数(只)死亡率(P)P217500.052778.250.0837122.460.1247191.650.19573000.3r=log-1(logLD100-logLD0)/(n-1)数据处理数据处理孙氏改进寇氏法孙氏改进寇氏法当最小剂量组死亡率为0%，最大剂量组死亡率为100%时，按下列公式计算：LD50=log-1Xm-i(p-0.5)其中Xm最大剂量的对数；p各组动物死亡率，以小数表示；i相邻两对数剂量的差值（大剂量组减小剂量组）p各组动物死亡率的总和。LD50的标准误差计算：SlogLD50=i(P-P2)/n1/2其中n每组动物数。LD50的95可信限计算： log-1(logLD501.96SlogLD50)