小鼠精子畸形实验小鼠精子畸形实验 Sperm Abnormality Test in Mouse 遗传学终点（genetic endpoint）：遗传学实验观察到的现象所反应的各种事件。遗传学终点分类：共4 4类 1 1）基因突变； 2 2）染色体畸变； 3 3）染色体组畸变； 4 4）DNADNA损伤1 1、基因突变检测AmesAmes试验、果蝇伴性隐性致死试验、正向基因突变试验2 2、染色体损伤检测染色体畸变分析、微核试验、显性致死试验3 3、DNADNA损伤检测SCESCE试验、UDSUDS试验、SCGESCGE试验目的目的 观察精子在生成过程中形态的改观察精子在生成过程中形态的改变来检查受试物对雄性生殖细胞的变来检查受试物对雄性生殖细胞的致突变作用致突变作用. .原理原理o精子的成熟和正常形态受多种基因控制，当这些基因中任何一个在化合物的作用下发生突变，就会导致畸形率增高。o某些特殊的染色体重排，如性-常染色体易位是精子产生畸形的主要机理。但是，缺血、变态反应、感染和体温升高也可能导致精子的畸形。器材与试剂器材与试剂o器材：显微镜；镊子；剪刀；平皿o试剂：生理盐水；无水乙醇；2%伊红水溶液试验设计试验设计1、试验动物：试验动物：采用采用68周龄性成熟雄性小鼠周龄性成熟雄性小鼠2、接毒剂量及分组：接毒剂量及分组：受试物设高、中、低三受试物设高、中、低三个剂量组，同时设阴性和阳性对照组。个剂量组，同时设阴性和阳性对照组。试验设计试验设计 受试物高剂量组的总剂量应能使部分受试物高剂量组的总剂量应能使部分动物死亡，然后以动物死亡，然后以1/5或或1/10递减为中、低递减为中、低剂量组。剂量组。 阳性对照组用环磷酰胺阳性对照组用环磷酰胺20 mg/kg，腹，腹腔注射，连续天，每天一次。腔注射，连续天，每天一次。 操作步骤操作步骤o处死动物处死动物：用颈椎脱法处死小鼠，剪开腹：用颈椎脱法处死小鼠，剪开腹腔，取出两侧附睾腔，取出两侧附睾o过滤过滤：放入盛有约：放入盛有约ml生理盐水的平皿中，生理盐水的平皿中，用眼科剪剪碎附睾，四层擦镜纸过滤用眼科剪剪碎附睾，四层擦镜纸过滤o涂片涂片：取小滴滤液涂片：取小滴滤液涂片o固定固定：干燥，甲醇固定分钟（可以直：干燥，甲醇固定分钟（可以直接涂片镜检）接涂片镜检）o染色染色：用伊红染色小时，冲洗：用伊红染色小时，冲洗o镜检镜检：干燥镜检（先用低倍镜，再用高：干燥镜检（先用低倍镜，再用高倍镜，在较暗的视野下观察）倍镜，在较暗的视野下观察）操作步骤操作步骤首先，在低倍镜下选择背景清晰、精子分布均匀、重叠较少的区域，然后，在高倍镜下观察结构完整的1000个精子，计数其中畸形的精子。观察与计数观察与计数 精子畸形主要表现在头部。按Wyrobeks的分类标准，主要类型有：无钩、香蕉形、无定形、胖头、尾折叠、双头及双尾。 无尾精子、头部重叠的或整个与另一个重叠的精子均不计数。 判断双头、双尾精子时，要注意与两条精子的部分重叠相区别 注意事项注意事项o辨别小鼠附睾；o如将精子悬液经过滤、离心等步骤除去组织残渣后再推片效果更好，注意推片的质量；o镜检时注意鉴别制片过程中人为造成的精子损伤。注意事项注意事项o处于精母细胞阶段的生精细胞对诱变剂较敏感，因此在染毒后35周时精子畸形率最高，必要时可作动态观察有助于全面评价；o缺血、感染、发热等可产生假阳性结果；组别组别动物数动物数 /只只受检精子数受检精子数/个个畸形精子总数畸形精子总数/个个精子畸形率精子畸形率/正常组正常组55000511.02损伤对照组损伤对照组550001873.74*高剂量组高剂量组55000259 5.18*中剂量组中剂量组550001533.06*低剂量组低剂量组55000691.38各组小鼠精子畸形检测结果各组小鼠精子畸形检测结果 正正 常常 精精 子子香香 蕉蕉 形形胖胖 头头 畸畸 形形 双双 尾尾 畸畸 形形 20 以上有不当之处，请大家给与批评以上有不当之处，请大家给与批评指正，谢谢大家！指正，谢谢大家！