第七章第七章 受体放射分析（受体放射分析（ RBA）第一节第一节 概概 论论 受体的概念最初是在药理学研究中提出的，受体的概念最初是在药理学研究中提出的，并且进行了大量的研究。自并且进行了大量的研究。自8080年代以来，受体年代以来，受体的研究取得了长足的进展，这种进展是与新技的研究取得了长足的进展，这种进展是与新技术、新方法的应用分不开的。例如，利用基因术、新方法的应用分不开的。例如，利用基因克隆技术测定受体的一级结构，使受体的氨基克隆技术测定受体的一级结构，使受体的氨基酸序列得以阐明，并为确定受体的亚型奠定了酸序列得以阐明，并为确定受体的亚型奠定了基础。但这些新技术、新方法不能测定受体的基础。但这些新技术、新方法不能测定受体的亲和力（亲和力（KDKD值）。值）。 至今，研究受体亲和力和受体数量最基本，至今，研究受体亲和力和受体数量最基本，最主要的方法仍然是受体的放射性配基结合分最主要的方法仍然是受体的放射性配基结合分析（析（radioligand binding assay of radioligand binding assay of receptorsreceptors，RBARBA），简称受体放射分析。它是），简称受体放射分析。它是应用放射性核素标记配基与特异性的受体结合，应用放射性核素标记配基与特异性的受体结合，研究受体的亲和力和受体的数量，也是研究受研究受体的亲和力和受体的数量，也是研究受体亚型的常用方法。体亚型的常用方法。 迄今为止，所有已发现的受体迄今为止，所有已发现的受体（receptorreceptor）都是具有特定氨基酸序列和特定）都是具有特定氨基酸序列和特定构型的蛋白质。每一种受体在细胞上都有特定构型的蛋白质。每一种受体在细胞上都有特定的宏观分布（器官和组织特异性）和微观分布的宏观分布（器官和组织特异性）和微观分布（细胞或细胞核）。（细胞或细胞核）。 虽然受体在总蛋白分子中所占的份额很虽然受体在总蛋白分子中所占的份额很小，约为十万到百万分之一，但受体的功能小，约为十万到百万分之一，但受体的功能却十分重要，它接受细胞外的特定信号（神却十分重要，它接受细胞外的特定信号（神经递质、激素、某些药物等），通过受体后经递质、激素、某些药物等），通过受体后特定的信号传递系统，引起细胞的特定反应，特定的信号传递系统，引起细胞的特定反应，因此，受体是高等动物适应环境、协调机体因此，受体是高等动物适应环境、协调机体各种细胞功能的关键分子。可以认为，受体各种细胞功能的关键分子。可以认为，受体是细胞适应内外环境最重要的门户，在中枢是细胞适应内外环境最重要的门户，在中枢神经系统中更是信息传递和储存的枢纽。神经系统中更是信息传递和储存的枢纽。一、受体的分类和受体亚型一、受体的分类和受体亚型 按受体所在的部位不同分为细胞膜受按受体所在的部位不同分为细胞膜受体和细胞核受体。每种受体都有特异的内体和细胞核受体。每种受体都有特异的内源性和外源性配基，但是药理实验和放射源性和外源性配基，但是药理实验和放射配基结合实验发现，不少受体存在两种或配基结合实验发现，不少受体存在两种或两种以上的亚型。所谓受体的亚型是指受两种以上的亚型。所谓受体的亚型是指受体分子结构上既有部分相同之处，也存在体分子结构上既有部分相同之处，也存在部分差别，它们对一定的配基有不同的亲部分差别，它们对一定的配基有不同的亲和力，在生物学上具有各自不同的效应。和力，在生物学上具有各自不同的效应。受体亚型的区分是生物进化的结果，有利受体亚型的区分是生物进化的结果，有利于机体处理信息的能力及适应性更强。于机体处理信息的能力及适应性更强。 二、跨膜受体的信号传递通路二、跨膜受体的信号传递通路 跨膜受体是含糖或不含糖的蛋白质分子，跨膜受体是含糖或不含糖的蛋白质分子，它的主要作用是将细胞外的信号传导到细胞它的主要作用是将细胞外的信号传导到细胞内，信号再从细胞浆传递到效应器，最后是内，信号再从细胞浆传递到效应器，最后是一个特定的生物学效应。信号的这种传导过一个特定的生物学效应。信号的这种传导过程称为信号传导通路（程称为信号传导通路（signal transudation signal transudation pathwaypathway），它是当今生物学领域中一个重大），它是当今生物学领域中一个重大的研究课题。受体信号传导的确切通路和机的研究课题。受体信号传导的确切通路和机理至今仍未完全阐明，同学们可参阅理至今仍未完全阐明，同学们可参阅“细胞细胞生物学生物学”等相关课程。等相关课程。 三、受体与配基结合的特性三、受体与配基结合的特性 1 1、可饱和性（、可饱和性（satiabilitysatiability） 每个细胞所每个细胞所含受体数是有限的，因此配基与受体结合的反应含受体数是有限的，因此配基与受体结合的反应曲线应该具有可饱和性，受体结合反应呈高亲和曲线应该具有可饱和性，受体结合反应呈高亲和性和低容量，而非特异结合则呈低亲和性和高容性和低容量，而非特异结合则呈低亲和性和高容量，后者的剂量反应曲线不呈可饱和性。量，后者的剂量反应曲线不呈可饱和性。2 2、可逆性（、可逆性（reversibilityreversibility） 激素、递质激素、递质和药物与特异性受体结合反应是可逆的，当受体和药物与特异性受体结合反应是可逆的，当受体周围的配基浓度降低，结合反应就逆向进行，即周围的配基浓度降低，结合反应就逆向进行，即配基受体复合物很快解离，解离后的配基是原形，配基受体复合物很快解离，解离后的配基是原形，不起代谢变化，这跟酶与底物作用结果不同，底不起代谢变化，这跟酶与底物作用结果不同，底物经酶作用后变成代谢产物。物经酶作用后变成代谢产物。 3 3、特异性（、特异性（specificityspecificity）和亲和性（）和亲和性（affinityaffinity） 受体具有特异识别配基的性能，因此，只有受体具有特异识别配基的性能，因此，只有严格构型和构象的配基分子才能选择性地与受体严格构型和构象的配基分子才能选择性地与受体结合。受体的特异性还表现在器官或组织（靶器结合。受体的特异性还表现在器官或组织（靶器官）的专一性上，如雌激素对子宫、阴道、乳腺官）的专一性上，如雌激素对子宫、阴道、乳腺等器官有兴奋作用，这是因为这些器官上雌激素等器官有兴奋作用，这是因为这些器官上雌激素受体的数量明显高于非靶器官。受体的亲和性是受体的数量明显高于非靶器官。受体的亲和性是指受体和配基的结合能力，受体亲和性高就说明指受体和配基的结合能力，受体亲和性高就说明受体和配基结合的牢固，不容易解离。受体亲和受体和配基结合的牢固，不容易解离。受体亲和性的定量指标就是受体的平衡解离常数性的定量指标就是受体的平衡解离常数KDKD值。受值。受体的体的KDKD值一般在值一般在1010-8-8-10-10-10-10mol/Lmol/L之间，之间，KDKD值在值在1010- -9 9mol/Lmol/L以上的受体，一般认为是高亲和性。以上的受体，一般认为是高亲和性。 4 4、与效应的一致性、与效应的一致性 受体的主要功能是介导配基的生物效应，如受体的主要功能是介导配基的生物效应，如果一种蛋白能与某种物质结合而不介导特定的生果一种蛋白能与某种物质结合而不介导特定的生物效应，那么这种蛋白不能称之为受体。所以用物效应，那么这种蛋白不能称之为受体。所以用生物效应作为观察受体和配基性质的标准是十分生物效应作为观察受体和配基性质的标准是十分必要的。从配基的角度分析，有的是阳性效应，必要的。从配基的角度分析，有的是阳性效应，有的是阴性效应。阳性效应就是配基与受体结合有的是阴性效应。阳性效应就是配基与受体结合后引起阳性生理效应，称为激动剂。阴性效应就后引起阳性生理效应，称为激动剂。阴性效应就是配基与受体结合后不但不引起阳性生理效应，是配基与受体结合后不但不引起阳性生理效应，而且阻断内源性配基的阳性生理作用，称为拮抗而且阻断内源性配基的阳性生理作用，称为拮抗剂或阻断剂。剂或阻断剂。 四、受体的生理调节四、受体的生理调节 细胞膜上受体的数量和亲和性随细胞所处的细胞膜上受体的数量和亲和性随细胞所处的环境而发生变化。受体的这种生理调节现象与人环境而发生变化。受体的这种生理调节现象与人体的疾病、药物作用有着密切的关系。受体的生体的疾病、药物作用有着密切的关系。受体的生理调节作用可分为向上调节和向下调节。理调节作用可分为向上调节和向下调节。 1 1、向下调节（、向下调节（down-regulationdown-regulation） 细胞所处环境中某种激动剂的浓度增高或长细胞所处环境中某种激动剂的浓度增高或长期作用，其结果使相应受体的数量减少，并出现期作用，其结果使相应受体的数量减少，并出现受体对此物质的敏感性下降，或耐受性增高等现受体对此物质的敏感性下降，或耐受性增高等现象，如哮喘病人长期服用象，如哮喘病人长期服用-激动剂产生的耐受性激动剂产生的耐受性增高，即药效减弱。增高，即药效减弱。 2 2、向上调节（、向上调节（up-regulationup-regulation） 细胞所处环境中某种拮抗剂的浓度过高或长细胞所处环境中某种拮抗剂的浓度过高或长期作用，结果会使受体数量增高，出现受体敏感期作用，结果会使受体数量增高，出现受体敏感性增高，表现为增敏，或撤药后反跳现象。如高性增高，表现为增敏，或撤药后反跳现象。如高血压病人长期服用心得安时对儿茶酚胺增敏，若血压病人长期服用心得安时对儿茶酚胺增敏，若突然停药，可出现血压升高的反跳现象。由于受突然停药，可出现血压升高的反跳现象。由于受体在整体条件下，随机体状态变化，会出现生理体在整体条件下，随机体状态变化，会出现生理调节，因此对受体数量和亲和性测定就成为研究调节，因此对受体数量和亲和性测定就成为研究病理变化和评价药效的重要内容。病理变化和评价药效的重要内容。 第二节第二节 受体配基结合反应的基本原理受体配基结合反应的基本原理 一、简单单位点系统受体与配基相互结合的一、简单单位点系统受体与配基相互结合的基本规律基本规律（一）质量作用定律（一）质量作用定律（mass action lawmass action law） 对某种受体而言，它的全部受体都以相同的亲和对某种受体而言，它的全部受体都以相同的亲和性以单分子与特定的配基相结合（分子比为性以单分子与特定的配基相结合（分子比为1 1：1 1），而且不表现明显的正负协同作用，理论上讲），而且不表现明显的正负协同作用，理论上讲结合后产生的生物效应也应完全相同。即为简单结合后产生的生物效应也应完全相同。即为简单单位点系统。有时，一个受体系统中存在两（多）单位点系统。有时，一个受体系统中存在两（多）种亚型，但所用配基无选择性，尽管亚型的生物种亚型，但所用配基无选择性，尽管亚型的生物效应可能不全相同，结合反应却表现出完全相同效应可能不全相同，结合反应却表现出完全相同的特征，这时，也可作为单位点系统来看待。的特征，这时，也可作为单位点系统来看待。（二）复合物的浓度和配基浓度的关系：（二）复合物的浓度和配基浓度的关系： 上式展开，重排，得到下式：上式展开，重排，得到下式： 可以看出，可以看出，RLRL和和LT LT 并非线性关并非线性关系，而是曲线关系，对一定数量（系，而是曲线关系，对一定数量（RTRT固定）和一定亲和力（固定）和一定亲和力（KDKD固定）的受体固定）的受体来说，配基浓度从零开始上升时，复合来说，配基浓度从零开始上升时，复合物浓度先是上升很快，以后逐渐变慢，物浓度先是上升很快，以后逐渐变慢，最后绝大多数受体都变为复合物，也就最后绝大多数受体都变为复合物，也就是受体被饱和了。这就是饱和曲线是受体被饱和了。这就是饱和曲线 （saturation curve)saturation curve)（图（图9 91 1）。）。 曲线的曲线的高度主要反高度主要反映受体的数映受体的数量多少，曲量多少，曲线上升的快线上升的快慢则主要反慢则主要反映受体和配映受体和配基的亲和力基的亲和力（亲和力越（亲和力越高，上升越高，上升越快）。快）。 （三）非特异结合（三）非特异结合（nonnonspecific specific bindingbinding，NSBNSB）上述饱和曲线是受体与配上述饱和曲线是受体与配基的特异结合形成的。这种结合的特点是基的特异结合形成的。这种结合的特点是低容量（受体的数量不多）和高亲和力，低容量（受体的数量不多）和高亲和力，所以容易饱和。但是，任何受体标本除特所以容易饱和。但是，任何受体标本除特异结合外，还会有一部分非特异结合，当异结合外，还会有一部分非特异结合，当分离特异结合的复合物测量放射性时，这分离特异结合的复合物测量放射性时，这部分非特异结合的放射性混在一起，测到部分非特异结合的放射性混在一起，测到的是总放射性（的是总放射性（total bindingtotal binding，TBTB），），必需先减去非特异结合（必需先减去非特异结合（NSBNSB），才能得），才能得到特异结合（到特异结合（specific bindingspecific binding，SBSB）的）的放射性。放射性。 NSBNSB主要来自杂蛋白，反应器壁，分离材料的主要来自杂蛋白，反应器壁，分离材料的吸附，它的特点是，容量很大，而亲和力低，因此吸附，它的特点是，容量很大，而亲和力低，因此在一般情况下不被饱和，也就是随着配基浓度的升在一般情况下不被饱和，也就是随着配基浓度的升高，它不呈饱和曲线，而是一条上升的直线（图高，它不呈饱和曲线，而是一条上升的直线（图9 9l l）。另外，如果系统中存在大量同种受体的非）。另外，如果系统中存在大量同种受体的非标记配基，则放射性的标记配基，则放射性的SBSB被非标记配基取代，而被非标记配基取代，而NSBNSB由于容量很大，空余的位点很多，放射性不被由于容量很大，空余的位点很多，放射性不被取代。所以要从取代。所以要从TBTB中减去中减去NSBNSB，最基本的办法是做，最基本的办法是做一系列平行管，所有的条件都与一系列平行管，所有的条件都与 TBTB管相同，只是管相同，只是多加多加 100-1000100-1000倍量的非标记配基，将倍量的非标记配基，将SBSB完全取代完全取代掉，这时的放射性结合即为掉，这时的放射性结合即为NSBNSB。由于。由于NSBNSB和放射配和放射配基呈直线关系，多点饱和法的实验中往往只需做基呈直线关系，多点饱和法的实验中往往只需做3-3-4 4点，再用直线回归法求出其余各点的放射性。点，再用直线回归法求出其余各点的放射性。 （四）（四） ScatchardScatchard作图（作图（Scatchard Scatchard plotplot） 将将9 91 1写成以下形式：写成以下形式：KDKD RT RTRLRL L LRLRL上式重排，得到著名的上式重排，得到著名的ScatchardScatchard函数：函数： 可以看出，当可以看出，当 RTRT和和 KDKD固定时，固定时，RLRL L L和和RLRL是线性关系，也就是说，以是线性关系，也就是说，以RLRL为横为横坐标，以坐标，以RLRLL L为纵坐标，将得到一为纵坐标，将得到一条直线。这是简单单位点系统的一个重要特征。条直线。这是简单单位点系统的一个重要特征。横截距即为横截距即为RTRT值（当值（当RLRLL L 0 0时，时，RTRTRLRL），直线斜率的倒数就是），直线斜率的倒数就是KDKD（图（图9 93 3）。）。 ScatchardScatchard作图除进行数据处理外，作图除进行数据处理外，还能判断一些较复杂的情况。例如，一还能判断一些较复杂的情况。例如，一般来说，般来说，ScatchardScatchard作图在下列情况下不作图在下列情况下不呈直线：呈直线：双位点或多位点系统，亦即双位点或多位点系统，亦即受体有两种以上亲和力；受体有两种以上亲和力；受体有正协受体有正协同（同（nositive cooperativelynositive cooperatively）或负协）或负协同（同（negative cooperativelynegative cooperatively）现象；）现象；非特异结合的测定所用非标记配基浓非特异结合的测定所用非标记配基浓度不对，或把一部分非特异结合也抑制度不对，或把一部分非特异结合也抑制了，或对特异结合的抑制不完全。了，或对特异结合的抑制不完全。（五）正负协同作用（五）正负协同作用 何谓正负协同作用？它是指当一部分受体与何谓正负协同作用？它是指当一部分受体与配基结合后使相邻的受体的亲和力发生改变，倘若配基结合后使相邻的受体的亲和力发生改变，倘若亲和力逐步下降，称之为负协同作用（如图亲和力逐步下降，称之为负协同作用（如图9 94 4中中曲线（曲线（2 2） ，亲和力逐步增大，称之为正协同作，亲和力逐步增大，称之为正协同作用。（曲线（用。（曲线（3 3）。）。 （六）受体与配基反应的动力学（六）受体与配基反应的动力学（ kineticskinetics） 受体与配基的结合反应一般都较快（多数在受体与配基的结合反应一般都较快（多数在数十秒至数十分钟）达到平衡。当周围的游离配基数十秒至数十分钟）达到平衡。当周围的游离配基急剧下降，或非标记配基浓度急剧升高时，放射性急剧下降，或非标记配基浓度急剧升高时，放射性复合物的解离也很快（图复合物的解离也很快（图9 96 6），这种快速结合和），这种快速结合和快速解离对保证受体的迅速反应有很重要的意义。快速解离对保证受体的迅速反应有很重要的意义。（七）竞争性取代反应（七）竞争性取代反应 （competitive competitive displacement reaction)displacement reaction) 在一个受体和放射配基的反应系统中加在一个受体和放射配基的反应系统中加入另一个化合物，它若能和受体的配基结入另一个化合物，它若能和受体的配基结合位点结合，则会与放射配基竞争与受体合位点结合，则会与放射配基竞争与受体结合，最终将表现为放射配基与受体形成结合，最终将表现为放射配基与受体形成复合物的能力降低（亲和力降低），但受复合物的能力降低（亲和力降低），但受体数量不变所以叫竞争性取代反应，此时，体数量不变所以叫竞争性取代反应，此时，非标记的起竞争作用的配基称为竞争剂非标记的起竞争作用的配基称为竞争剂（competitiveagentcompetitiveagent），它们和受体结合），它们和受体结合后不改变受体分子的结构。后不改变受体分子的结构。 表示竞争剂抑制作用强弱的指标表示竞争剂抑制作用强弱的指标有二个：有二个：ICIC5050值和值和KIKI。ICIC5050值是指抑制值是指抑制5050受体与放射配基结合所需竞争剂的受体与放射配基结合所需竞争剂的浓度，浓度，ICIC5050值大，表明竞争剂抑制作用值大，表明竞争剂抑制作用小。小。KIKI则是指竞争剂的平衡解离常数，则是指竞争剂的平衡解离常数，KIKI越小，表明竞争剂抑制作用越大。越小，表明竞争剂抑制作用越大。 二、双位点系统二、双位点系统 一种配基可以和两种以上的受体亚一种配基可以和两种以上的受体亚型结合，每种亚型都有相应的型结合，每种亚型都有相应的KDKD值。这值。这一部分的内容感兴趣的同学自己阅读！一部分的内容感兴趣的同学自己阅读！第三节第三节 受体放射分析的基本方法受体放射分析的基本方法 一、放射性配基的要求一、放射性配基的要求 制制备备优优良良的的放放射射性性配配基基是是受受体体结结合合试试验验的的首首要要条条件件。对对任任何何一一种种受受体体系系统统，通通常常都都有有好好几几种种标标记记配配基基可可供供选选择择。选选择择应应从从两两方方面面考考虑虑：配配基的特性；基的特性；实验目的。实验目的。 （）对放射性配基的基本要求（）对放射性配基的基本要求1 1、高高比比活活度度 组组织织细细胞胞内内的的受受体体浓浓度度一一般般都都很很 低低 ， 约约 在在 10104 4-10-105 5个个 细细 胞胞 ， 或或 0.01-0.01-3.0pmol/mg3.0pmol/mg蛋蛋白白的的水水平平，而而且且受受体体对对配配基基的的平平衡衡解解离离常常数数约约在在1010-9-9mol/Lmol/L上上下下。因因此此，低低比比活活度度的配基难于达到分析灵敏度的要求。的配基难于达到分析灵敏度的要求。 一一般般要要求求配配基基比比活活度度至至少少在在 3 37 7 10101111BqBq（10Ci10Ci）mmolmmol以以上上。另另外外，配配基基比比活活度度高高，加加入入反反应应管管的的放放射射性性配配基基量量才才有有可可能能减减少少，从从而而有有利利于于用用小小量量标标本本得得到到可可靠的数据，并有利降低非特异性结合率。靠的数据，并有利降低非特异性结合率。2 2、高高亲亲和和力力 因因为为亲亲和和力力高高，可可以以减减少少标标记记配配基基用用量量，从从而而既既可可降降低低非非特特异异性性结结合合，又又可可使使放放射射性性配配基基与与受受体体的的结结合合物物解解离离变变慢慢，便便于于进进行行结结合合和和游游离离配配基基的的分分离离。不不仅仅方方便便操作，而且获得的数据准确。操作，而且获得的数据准确。 3 3、特特异异性性强强 即即该该配配基基与与所所研研究究受受体体有有选选择择性性结结合合，理理想想的的是是该该配配基基只只与与一一种种受受体体或或受受体体亚亚型型结结合合。但但没没有有一一种种配配基基是是完完全全选选择择性性的的，所所以以要要结结合合实实验验研研究究的的目目的的，选选择择对对某某一一受受体体或其中某一亚型亲和力高的放射性配基。或其中某一亚型亲和力高的放射性配基。4 4、稳定性好、稳定性好 包括标记的稳定性、贮藏时的包括标记的稳定性、贮藏时的稳定性以及温育分析时之稳定性。稳定性以及温育分析时之稳定性。 从从实实验验目目的的考考虑虑则则主主要要针针对对具具体体研研究究目目标标来来选选择择。例例如如有有的的受受体体有有几几种种亚亚型型，如如果果实实验验的的意意图图是是放放射射性性配配基基要要结结合合所所有有这这几几个个亚亚型型，即即可可选选择择无无亚亚型型选选择择的的配配基基。相相反反，想想研研究究其其中中某某一一个个亚型，则应选择针对该亚型的高亲和力配基。亚型，则应选择针对该亚型的高亲和力配基。 目目前前，用用作作受受体体放放射射分分析析的的放放射射性性配配基基多多用用3 3H H、125125I I标标记记。氚氚标标记记配配基基与与原原型型配配基基为为同同型型式式，生生物物学学活活性性好好，多多数数情情况况下下比比活活度度也也能能达达到到要要求求，且且半半衰衰期期长长，使使用用方方便便，主主要要缺缺点点是是需需用用液液闪闪测测量量，操操作作较较麻麻烦烦，一一般般实实验验室室不不能能进进行行标标记记。多多肽肽及及蛋蛋白白质质配配基基多多用用125125I I标标记记，其其优优点点是是可可以以达达到到较较高高的的比比活活度度。只只要要很很好好掌掌握握标标记记条条件件（单单碘碘标标记记物物），仍仍能能保保持持较较好好的的生生物物活活性性。另另外外，碘碘标标记记法法快快速速、方方便便、经经济济，一一般般实实验验室室可可进进行行。测测量量操操作作简简单单，所所以以125125I-I-配配基基也也大大量量采采用用。需要注意的是自行标记需要注意的是自行标记125125I-I-配基要解决两个难题：配基要解决两个难题： 要要确确定定标标记记物物的的比比活活度度，如如果果比比活活度度不不确确切切，最最后后所所得得的的受受体体结结合合位位点点数数不不确确切切。标标记记配配基基的的纯纯化化 ： 多多 肽肽 的的 碘碘 标标 化化 合合 物物 往往 往往 产产 生生 一一 碘碘（monoiodinatedmonoiodinated）和和二二碘碘（iodinatediodinated）标标记记物物。这些标记物对受体的亲和力有可能是不同的。这些标记物对受体的亲和力有可能是不同的。 125125I I核素在存放过程中要衰变，因此核素在存放过程中要衰变，因此125125I I配基应该配基应该注意比活度的衰变校正，而且要有正确的校正方法。注意比活度的衰变校正，而且要有正确的校正方法。 标标记记配配基基的的存存放放问问题题：标标记记配配基基在在存存放放过过程程中中，由由于于受受到到核核素素的的衰衰变变，放放射射性性的的损损伤伤等等原原因因，其其化化学学和和生生物物学学性性质质必必然然会会产产生生某某些些变变化化。为为减减轻轻损损伤伤，氚氚标标记记物物，一一般般采采用用原原包包装装的的溶溶剂剂作作适适当当稀稀释释后后，在在原原推推荐荐的的温温度度下下保保存存。 125125I I标标记记物物常常用用1 1BSABSA的的缓缓冲冲液液适当稀释后分装，在适当稀释后分装，在-20-20中存放。中存放。 （二）放射性配基的质量鉴定（二）放射性配基的质量鉴定 选选定定好好某某一一种种放放射射性性配配基基后后，在在具具体体使使用用前前还还应应对对其其质质量量作作适适当当的的鉴鉴定定，以以保保证证受受体体结结合合分分析析结结果果的的准准确确性性。例例如如，一一般般是是假假定定和和推推测测所所用用的的标标记记配配基基与与原原型型配配基基具具有有相相同同的的生生物物活活性性，但但具具体体使使用用时时，应应认认真真进进行行评评价价。这这一一点点常常常常是是很很多多研研究究报报告告的的结结果果对对同同一一受受体体出出现现很大差别的重要原因。很大差别的重要原因。 1 1、放放射射化化学学纯纯度度 放放射射性性配配基基的的放放射射化化学学纯纯度度对对受受体体结结合合率率及及分分析析灵灵敏敏度度均均有有较较大大影影响响。除除新新鲜鲜产产品品外外存存放放一一定定时时间间后后的的标标记记配配基基均均应应重重测测其其放放化化纯纯度度，以以保保证证分分析析的的准准确确性性。一一般般要要求求放放化化纯度应在纯度应在9595以上。以上。 2 2、结结合合活活性性鉴鉴定定 受受体体结结合合分分析析中中，放放射射性性配配基基的的活活性性特特别别重重要要，特特别别是是生生物物活活性性。目目前前，测测定定配配基基的的活活性性主主要要是是指指与与受受体体的的结结合合能能力力。即即测测定定其其最最大大结结合合活活性性。现现介介绍绍JC JC KermodeKermode提提出出的的一一种种方方法法如如下下：以以定定量量标标记记配配基基加加逐逐级级增增加加至至过过量量的的受受体体制制剂剂（饱饱和和结结合合实实验验）进进行行反反应应，测测定定结结合合百百分分率率；以以结结合合百百分分率率的的倒倒数数对对受受体体浓浓度度的的倒倒数数作作图图，获获得得一一条条直直线线；延延长长直直线线与与纵纵座座标标的的交交点点，即即可可算算出出该该标标记记配配基基结结合合活性。（如图）活性。（如图）3 3、比比活活度度 受受体体结结合合分分析析最最后后的的结结果果计计算算时时离离不不开开准准确确的的比比活活度度数数据据。必必要要时时也也可可用用放放射射受受体体自自身身置置换换法法测测定定比比活活度度。这这一一方方法法若若使使用用得得当当，能能较较准准确确测测定定比活度，而且也反映标记配基的受体结合活性。比活度，而且也反映标记配基的受体结合活性。二、受体标本的制备二、受体标本的制备 在在受受体体结结合合实实验验的的研研究究中中，所所用用的的受受体体材材料料可可以以是是组组织织切切片片，也也可可以以是是完完整整的的单单层层培培养养细细胞胞或或游游离离活活细细胞胞，粗粗制制的的或或纯纯化化的的细细胞胞膜膜受受体，可溶性的受体蛋白等。体，可溶性的受体蛋白等。 （）组织切片（）组织切片 冷冷冻冻组组织织切切片片常常用用明明胶胶粘粘贴贴于于玻玻片片上上，在在温温育育缓缓冲冲液液中中与与标标记记配配基基进进行行反反应应。反反应应后后用用缓缓冲冲液液洗洗几几次次即即可可，切切片片厚厚度度一一般般为为5-50m5-50m。用用组组织织切切片片的的目目的的更更多多是是研研究究受受体体的的分分布布（用放射自显影法或免疫组化法）。（用放射自显影法或免疫组化法）。 （二）游离的完整细胞悬液（二）游离的完整细胞悬液 完完整整的的活活细细胞胞可可以以是是血血细细胞胞，培培养养的的单单层层细细胞胞，肿肿瘤瘤的的腹腹水水型型细细胞胞以以及及经经处处理理的的原原代代细细胞胞等等。完完整整细细胞胞的的优优点点是是在在研研究究受受体体结结合合特特性性同同时时，能能进行生物效应的测定。使用完整细胞的优点如下：进行生物效应的测定。使用完整细胞的优点如下： 1 1、受受体体处处于于原原有有的的正正常常环环境境中中。膜膜未未受受扰扰乱乱，膜膜内内pHpH、离离子子梯梯度度也也保保存存着着。受受体体与与其其相相连连的的效效应系统（如应系统（如G G蛋白）也保存完好。蛋白）也保存完好。 2 2、在在受受体体功功能能反反应应完完全全的的情情况况下下研研究究受受体体，可可以以同同时时观观察察配配基基与与受受体体结结合合的的情情况况和和细细胞胞的的生生物效应。所得的结果更能反映受体的生理特点。物效应。所得的结果更能反映受体的生理特点。 3 3、能直接给出平均每一个细胞的受体数。、能直接给出平均每一个细胞的受体数。 但但完完整整细细胞胞的的受受体体分分析析较较难难控控制制分分析析条条件件。操操作作过过程程可可能能导导致致细细胞胞表表面面生生理理活活性性的的改改变变，因因此此结结果果有有时时不不够够稳稳定定。另另外外，若若细细胞胞上上某某种种受受体体的的含含量量低低，作作分分析析时时需需加加入入大大量量细细胞胞才才能能获获得得足足够够的的放放射射性性计计数数，给给实实际际工工作作带带来来一一定定困困难难。完完整整细细胞胞来来源源分分三三种种：从从组组织织分分离离出出游游离离细细胞胞；血血细细胞胞；培培养养细细胞胞。一一般都需采用台盼蓝等检查细胞活性。般都需采用台盼蓝等检查细胞活性。 （三）膜制剂（三）膜制剂（membranous preparationmembranous preparation） 绝绝大大多多数数受受体体结结合合分分析析使使用用膜膜制制剂剂。使使用用膜膜制制剂剂可可以以减减少少非非特特异异性性结结合合率率。而而且且，在在膜膜制制备备过过程程中中，通通过过洗洗膜膜的的方方法法，可可以以将将内内源源性性配配基基洗洗去去，并并除除去去部部分分蛋蛋白白溶溶解解酶酶。膜膜制制剂剂通通常常也也保保存存有有受受体体- -效效应应器器（包包括括GTPGTP结结合合蛋蛋白白等等）结结合合系系统统。但但受受体体功功能能的的其其他他方方面面则则失失去去了了。另另外外，膜膜内内离离子子浓浓度度梯梯度度、受受体体与与细细胞胞结结构构关关系系也也失失去去了了。但但是是，受受体体结结合合需需要要的的是是膜膜双双层层脂脂质质结结构构本本身身，而而不不是是细细胞胞内内其其他他组组份份。所所以以膜膜碎碎片片内内仍仍保保留留受受体体的药理学特性。的药理学特性。 细细胞胞膜膜和和细细胞胞浆浆受受体体的的制制备备一一般般都都利利用用蔗蔗糖糖密密度度梯梯度度离离心心法法分分离离不不同同的的亚亚细细胞胞组组分分。其其优优点点是是除除去去大大部部分分杂杂蛋蛋白白，以以减减小小非非特特异异结结合合。为为保保证证所所制制得得的的膜膜受受体体保保持持良良好好的的结结合合活活性性，需需注注意意：全全部部过过程程在在0-40-4下下进进行行操操作作。制制备备缓缓冲冲液液的的蔗蔗糖糖密密度度，离离子子强强度度， pHpH值值及及其其它它物物质质（如如 EDTAEDTA， MgMg2 2）应应严严格格控控制制。组组织织匀匀浆浆条条件件应应保保持持一一致致：一一般般先先用用高高速速分分散散器器，后后改改用用玻玻璃璃匀匀浆浆器器将将细细胞胞破破裂裂。匀匀浆浆的的时时间间、速速度度、温温度度应应尽尽量量一一致致。离离心心的的时时间间、速速度度、温温度度应应保保持持恒恒定定。为为防防止止膜膜受受体体蛋蛋白白被被蛋蛋白白酶酶水水解解常常加蛋白酶抑制剂。加蛋白酶抑制剂。 细细胞胞组组份份的的分分离离一一般般采采用用差差速速离离心心法法。通通过过适适当当控控制制离离心心力力及及离离心心时时间间可可使使某某些些颗颗粒粒组组份份沉沉淀淀，而而另另一一些些保保留留在在上上清清液液中中。细细胞胞组组份份的的一一般般分分离离流流程图见图程图见图9 91515： l、 粗粗 膜膜 制制 剂剂 （ crude membranous preparation）冷冷冻冻的的组组织织块块切切碎碎后后加加低低渗渗缓缓冲冲液液进进行行匀匀浆浆。低低速速离离心心（800 3500 g） 10 15分分钟钟，上上清清波波再再高高速速高高心心（1000030000 g） 10 15分分钟钟（均均在在 4下下进进行行）。所所得得即即为为膜膜制制剂剂或或粗粗膜膜制制剂剂。两两次次离离心心的的目目的的是是尽尽可可能能去去除除可可溶溶性性物物质质（如如内内源源性性配配基基、GTP等等），以以免干扰结合分析。免干扰结合分析。 2、 洗洗 膜膜 制制 剂剂 （ washed membranous preparation）有有时时，上上述述粗粗制制剂剂经经洗洗膜膜步步骤骤后后可可有有效效地地进进一一步步降降低低非非特特异异结结合合及及内内源源性性配配基基的的结结合合。但但洗洗膜膜过过程程必必需需防防止止受受体体蛋蛋白白的的分分解解。目目前前抑抑制制受受体体蛋蛋白白分分解解作作用用的的主主要要方方法法有有：用用新新鲜鲜组组织织；低低温温状状态态下下操操作作膜膜的的制制备备；加加蛋蛋白白酶抑制剂。酶抑制剂。 3 3、可可溶溶性性受受体体蛋蛋白白 大大多多数数跨跨膜膜受受体体用用1 1（ V VV V） TritonX-100TritonX-100能能有有效效地地将将受受体体蛋蛋白白从从双双脂脂层层中中溶溶解解出出来来，也也有有用用DigitoninDigitonin或或Tween-80Tween-80等等物物质质来来溶溶解解。溶溶解解受受体体时时常常加加蛋蛋白白酶酶抑抑制制剂剂以以保保护护可可溶溶性性受受体体蛋蛋白白不不被被水水解解。一一般般用用100000 100000 g g的的超超速速离离心心法法分分离离可可溶溶性性和和不不可可溶溶性性的的物物质质。所所有有操操作作都都应应在在4 4 下下进进行行，以以免免受受体体蛋蛋白白产产生生凝凝结结、变变性性。假假如如受受体体蛋蛋白白还还需需进进一一步步纯纯化化，常常用用特特异异的的配配基基或或抗抗体体，以亲合层析法分离受体蛋白。以亲合层析法分离受体蛋白。 三、结合反应的类型三、结合反应的类型 （）标标记记配配基基饱饱和和法法 （radioligand radioligand saturation methodsaturation method） 它又分为单点他和及多点饱和法。它又分为单点他和及多点饱和法。 1 1、单单点点饱饱和和法法（Single Single point point Saturation Saturation methodmethod） 定定量量受受体体制制剂剂加加大大量量的的标标记记配配基基使使受受体体得得以以饱饱和和结结合合。根根据据受受体体- -配配基基复复合合物物的的放放射射性性计计算算受受体体结结合合容容量量（或或结结合合位位点点数数）。这这种种方方法法操操作作简简便便、标标本本用用量量少少。但但只只凭凭单单点点实实验验数数据据计计算算受受体体结结合合容容量量，比比多多点点法法的的结结果果略略低，不能给出低，不能给出KDKD，误差也较大。，误差也较大。 2 2、多多点点饱饱和和法法（multi-point multi-point saturation saturation methodmethod） 一一定定量量的的受受体体制制剂剂，逐逐步步增增加加标标记记配配基基的的量量（一一般般7-87-8个个实实验验点点），使使受受体体的的结结合合趋趋于于饱饱和和。用用曲曲线线拟拟合合法法或或直直线线拟拟合合法法计计算算受受体体结结合合容容量量和和亲亲和和力力（RTRT、KDKD），结结果果可可靠靠性性高高。但但受体标本、标记配基用量大，工作量大。受体标本、标记配基用量大，工作量大。 如如果果在在此此类类实实验验中中，受受体体存存在在两两种种亚亚型型，而而所所选选的的放放射射配配基基对对两两种种亚亚型型又又有有一一定定选选择择性性，则则得得到到双双位位点点饱饱和和曲曲线线，用用双双位位点点饱饱和和曲曲线线的的数学模型可得到两种亚型的数学模型可得到两种亚型的RTRT和和KDKD。（二）非标记配基饱和法（二）非标记配基饱和法 一一定定量量的的受受体体制制剂剂和和标标记记配配基基，逐逐渐渐增增加加非非标标记记配配基基（一一般般7 78 8个个实实验验点点），使使受受体体饱饱和和结结合合，曲曲线线拟拟合合法法或或直直线线拟拟合合法法计计算算受受体体结结合合容容量量和和亲亲和和力力。这这种种方方法法克克服服了了多多点点饱饱和和法法标标记记配配基基用用量量大大的的缺缺点点，但但由由于于非非标标记记配配基基的的用用量量逐逐渐渐加加大大，放放射射性性逐逐步步减减少少，必必需需标标记记配配基比活度较高才能得到满意结果。基比活度较高才能得到满意结果。 四、分析条件的选择四、分析条件的选择（一）标记配基浓度（一）标记配基浓度 试试验验类类型型不不同同，选选用用的的标标记记配配基基浓浓度度也也有有不不同同。单单点点饱饱和和试试验验要要求求饱饱和和量量的的标标记记配配基基。对对于于多多点点饱饱和和试试验验，应应尽尽可可能能覆覆盖盖饱饱和和区区及及非非饱饱和和区区，还还应应考考虑虑最最低低一一点点有有足足够够的的放放射射性性满满足足放放射射性性测测量量统统计计上上的的要要求求，最高一点的浓度则往往要考虑配基的来源及价格。最高一点的浓度则往往要考虑配基的来源及价格。 （二二）受受体体浓浓度度 一一般般说说在在一一定定范范围围内内受受体体结结合合位位点点随随组组织织量量的的增增加加而而增增加加，特特异异性性结结合合量量与与组组织织浓浓度度成成线线性性关关系系。在在线线性性范范围围内内，较较高高受受体体浓浓度度，有有时时可可增增加加特特异异性性结结合合与与非非特特异异性性结结合合的的比比值值，有有人人提提出出，受受体体浓浓度度应应选选为为约约相相当当于于KDKD值值。在在实实践践中中，往往往往需需要要通过实验来确定受体浓度。通过实验来确定受体浓度。 （三）温育温度与时间（三）温育温度与时间 温温度度是是影影响响反反应应速速率率的的重重要要因因素素。温温度度高高，结结合合快快，达达到到反反应应平平衡衡时时间间短短，温温度度低低，反反应应终终止止时时容容易易降降温温，减减少少分分离离过过程程中中复复合合物物的的解解离离。另另外外，温温度度低低对对配配基基及及受受体体的的稳稳定定性性有有利利。不不同同受受体体结结合合系统的最佳温度和时间要经过试验选定。系统的最佳温度和时间要经过试验选定。 对对于于饱饱和和或或竞竞争争取取代代试试验验，应应要要求求反反应应达达到到平平衡衡，故故温温育育时时间间应应足足够够长长以以达达到到平平衡衡状状态态。温温育育温温度度与与平平衡衡时时间间是是紧紧密密相相关关的的，不不同同的的受受体体结结合合系系统统的的反反应应平平衡衡时时间间因因亲亲和和力力、温温育育温温度度、配配基基及及受受体体浓浓度度的的不不同同而而不不同同。一一般般室室温温（ 2222）操操作作比比较较方方便便，但但有有人人认认为为使使用用生生理理温温度度37 37 更更好好。00温温育育平衡时间虽然长一些，但其结果之重复性更好。平衡时间虽然长一些，但其结果之重复性更好。 （四）缓冲液（四）缓冲液 结结合合分分析析使使用用过过多多种种缓缓冲冲液液，如如磷磷酸酸盐盐缓缓冲冲液液，Tvrit-HCITvrit-HCI缓缓冲冲液液等等，所所选选缓缓冲冲液液应应不不干干扰扰结结合合，并并在较大范围内可稳定在较大范围内可稳定pHpH。 一一般般说说，结结合合分分析析的的pHpH应应处处于于生生理理范范围围，即即pH7-8pH7-8。钠钠、镁镁等等离离子子在在不不同同的的受受体体系系统统中中会会有有不不同同的的影影响响。因因此此要要根根据据具具体体目目的的决决定定选选用用与与否否。如如果果加加入入的的受受体体蛋蛋白白量量较较少少时时，宜宜在在缓缓冲冲液液加加入入适适量量蛋蛋白，使反应液内蛋白浓度为白，使反应液内蛋白浓度为0.1mg-1mg0.1mg-1mgmlml为好。为好。 为为了了阻阻止止肽肽类类的的降降解解，常常在在分分析析时时加加入入各各种种肽肽酶酶抑抑制制剂剂。但但要要视视具具体体是是哪哪种种肽肽而而定定，以以确确保保实实际际有有效效。因因为为有有些些蛋蛋白白酶酶抑抑制制剂剂有有抑抑制制特特异异性性结结合合的的作用。作用。 五、结合与游离配基的分离五、结合与游离配基的分离 受受体体- -配配基基结结合合分分析析主主要要是是测测定定反反应应平平衡衡时时结结合合配配基基的的量量，求求解解受受体体的的密密度度与与平平衡衡解解离离常常数数。反反应应一一般般在在达达到到平平衡衡后后先先经经分分离离，再再测测结结合合部部分分的的放放射射性性。少少数数实实验验测测定定分分离离后后的的游游离离部部分分放放射射性性。理理论论上上，一一经经分分离离，反反应应的的平平衡衡就就会会被被破破坏坏，所所以以选选择择适适当当的的分分离离方方法法和和环环境境，使使受受体体- -配配基基复复合合物物在在分分离离过过程程中中的的解解离离减减少少到到最最低低限限度度。低低温温是是降降低低解解离的最有效手段，分离快慢也是重要因素。离的最有效手段，分离快慢也是重要因素。 常常用用的的分分离离方方法法有有离离心心法法、过过滤滤法法、吸吸附附法法、透透析析法法、电电泳泳法法等等。若若复复合合物物解解离离快快，则则只只能能选选择择快快速速的的分分离离方方法法。同同时时一一定定要要在在分分离离时时间间，分分离离温温度等方面保持各样品管之间的一致性，以减少误差。度等方面保持各样品管之间的一致性，以减少误差。（）抽滤法（滤膜法）（）抽滤法（滤膜法） 此法应用十分广泛。此法应用十分广泛。 1 1、选选用用的的滤滤膜膜材材料料 既既能能阻阻挡挡复复合合物物又又不不要要过过多多产产生生对对游游离离标标记记配配基基的的非非特特异异性吸附。常用的滤膜是玻璃纤维滤膜，比如上海虹光造纸厂生产的性吸附。常用的滤膜是玻璃纤维滤膜，比如上海虹光造纸厂生产的4949或或6969型滤膜。型滤膜。 2 2、影响因素、影响因素 （1 1）复复合合物物的的解解离离： 一一般般说说，低低温温时时解解离离较较慢慢，故故滤滤膜膜及及缓缓冲冲液液应应保保存存于于低低温温。用冰冷缓冲液抽洗为好。用冰冷缓冲液抽洗为好。 （2 2）负压：若为多头抽滤器，应注意各孔压力的均一性。）负压：若为多头抽滤器，应注意各孔压力的均一性。 3 3、减减少少标标记记配配基基对对滤滤膜膜的的吸吸附附 标标记记配配基基吸吸附附于于滤滤膜膜是是抽抽滤滤法法非非特特异异性性结结合合的的主主要要来来源源之之一一。也也是是抽抽滤滤法法的的主主要要缺缺点点，减减少少标标记记配配基基吸吸附附于于滤滤膜膜的的方方法法有有：滤滤膜膜预预先先用用非非标标记记配配基基浸浸泡泡；如如果果是是多多肽肽或或蛋蛋白白标标记记配配基基，用用1 1白白蛋蛋白白或或0. 0. l l PEIPEI（polyethyleniminepolyethylenimine）浸浸泡泡；用用一一定定量量的的淋淋洗洗液液或或保保证证一一定定淋淋洗洗次次数数，充充分分淋淋洗。洗。 （二）离心法（二）离心法 这这也也是是常常用用方方法法之之一一。很很多多受受体体分分析析建建立立之之初初都都用用此此法法。对对于于KDKD大大于于1010-8-8mol/Lmol/L的的受受体体，不不宜宜选选用用滤滤膜膜法法分分离离。离离心心法法可可以以在在复复合合物物很很少少解解离离的的状状态态下下达达到到较好的分离效果，但非特异性结合较高。较好的分离效果，但非特异性结合较高。 （三）吸附法（三）吸附法 上上述述分分离离方方法法均均系系分分离离后后测测定定复复合合物物的的放放射射性性。但但当当研研究究可可溶溶性性受受体体时时，如如类类固固醇醇激激素素受受体体，上上述述方方法法就就不不适适合合，可可采采用用吸吸附附法法。固固相相吸吸附附物物有有炭炭素素、滑滑石石粉粉、葡葡聚聚糖糖衣衣活活性性炭炭等等。其其中中以以活活性性炭炭使使用用最最多多。目目前前，已已广广泛泛应应用用葡葡聚聚糖糖衣衣活活性性炭炭。它它是是在在固固相相炭炭素素上上包包一一层层葡葡聚聚糖糖，形形成成分分子子筛筛的的作作用用，吸吸附附小小分分子子的的游游离离配配基基。这这种种炭炭液液有有一一定定的的粘粘性性，易易于于离离心心沉沉淀淀，分离效果好。分离效果好。 第四节第四节 受体放射分析的数据处理受体放射分析的数据处理 受受体体放放射射分分析析所所得得测测定定数数据据都都是是放放射射性性单单位位，如如cpmcpm，dpmdpm等等，而而受受体体分分析析没没有有标标准准品品，不不能能通通过过标标准准曲曲线线得得到到所所需需结结果果，只只能能靠靠数数据据换换算算来来解解决决。如如换换算算成成每每毫毫克克蛋蛋白白或或10105 5细细胞胞所所含含受受体体数数（通通常常以以fmolfmol或或受受体体分分子子数数表表示示）或或平平衡衡解解离离常常数数（通通常常以以nmol/Lnmol/L表表示示）。另另外外，较较多多的的受受体体放放射射分分析析是是各各种种多多点点法法，实实验验得得到到的的是是若若干干点点的的实实测测值值，需需要要经经过过用用一一定定的的数数学学模模型型进进行行直直线线或或曲曲线线拟拟合合，才才能能得得到到所所要要的的结结果果。所所以以受受体体放放射射分分析析的的数数据据处处理理包包括括两两个个方方面面，一一是是正正确确的的单单位位换算，二是各种手工或计算机的数据拟合。换算，二是各种手工或计算机的数据拟合。 一、单点饱和分析法的单位换算一、单点饱和分析法的单位换算 设设测测得得复复合合物物的的放放射射性性是是2000cpm2000cpm，则则除除以以测测量量效效率率成成为为dpmdpm（除除以以6060成成为为BqBq），再再除除以以标标记记配配基基的的比比活活度度（绝绝大大多多数数受受体体以以1 1：1 1关关系系与与配配基基结结合合）就成为该标本中的受体量：就成为该标本中的受体量： 设测量效率是设测量效率是 0.30.3，标记配基的比活度是，标记配基的比活度是 1.85 1.85 10101212BqBqmmolmmol，则标本中的，则标本中的 如如果果该该标标本本的的受受体体密密度度欲欲以以每每毫毫克克蛋蛋白白计计算算，则则60 60 fmolfmol除除以以实实测测蛋蛋白白的的毫毫克克数数即即可可。如如果果欲欲以以每每一一细细胞胞所所含含受受体体数数表表示示，则则fmolfmol应应进进一一步步换换算算成成受受体体数数。因因为为每每mmolmmol物物质质所所含含分分子子数数是是常常数数（6.02 6.02 10102020或近似或近似 6 6 10 102020 ），所以），所以 标标本本所所含含受受体体分分子子数数标标本本 mmolmmol数数 6 6 10 102020 本本例例为为 60fmol60fmol，放放所所含含受受体体分分子子数数 60 60 1010-12 -12 6 6 10 102020 360 360 10 108 8 若若该该标标本本的的细细胞胞数数是是7.5 7.5 10106 6，于于是是可可算算得得受受体体密密度度（360 360 10108 8 7.5 7.5 10106 6 48004800细胞细胞 二、多点饱和分析法的手工计算二、多点饱和分析法的手工计算 手手工工计计算算就就是是不不借借助助电电脑脑编编制制的的程程序序来来处处理理数数据据，求求得得所所要要的的结结果果。一一般般限限于于直直线线回回归归。这这种种方方法法数数据据处处理理复复杂杂，工工作作量量大大，现现在在已已经经被被受受体分析的软件所取代。体分析的软件所取代。 第五节第五节 受体放射分析的应用受体放射分析的应用 受体放射分析的应用十分广泛，可以受体放射分析的应用十分广泛，可以应用于基础医学、药理学、临床医学各学科应用于基础医学、药理学、临床医学各学科等等三、受体数据的计算机程序处理三、受体数据的计算机程序处理 受体数据的手工计算很费时间和精力，受体数据的手工计算很费时间和精力，由于现在电脑的普及，而且已有不少成熟的由于现在电脑的普及，而且已有不少成熟的受体数据处理应用软件，使用方便，所以都受体数据处理应用软件，使用方便，所以都采用计算机程序处理。计算机程序处理实例采用计算机程序处理。计算机程序处理实例参照教科书，这里不作介绍。参照教科书，这里不作介绍。