12第一节：临床微生物标本第二节：环境微生物标本3 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本一、基本原则（一）采集指征1.发现感染应及时采集微生物标本进行病原学检查。2.同一天同一检测目的的标本（血培养标本除外）一般只需检测一次。涂片检查最好和细菌培养同时进行。4 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本（二）采集时机1.尽量在抗菌药物使用之前，或停药一周后采集标本。2.如不能信用抗菌药物，应于下次抗菌药物使用前采集。3.应在感染的急性期或伤口局部治疗前采集标本。（三）采集容器1.采用专用的无菌容器收集标本，容器须灭菌处理，防止渗漏。2.容器中不得使用消毒剂和防腐剂。 5 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本（四）采集方法1.选择正确的解剖部位，并以适当的技术、方法与容器收集足量的标本。2.无菌部位的标本采集应严格无菌操作，将污染的可能性降至最低。3.收集真正感染的病灶处的标本，且避免邻近区域居菌群的污染。4.尽量不要以棉拭子收集标本。以棉拭子采集的标本如咽拭子、伤口拭子等宜插入恰当的运送培养基送检 。5.每份标本者应贴上标签并标明必要信息，在检验申请单上填写足够的有关临床资料。6 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本（五）标本运送与保存1.各种标本采集后应立即送检，以在2小时内为宜。2.如不能及时送检，应将标本置于适当的储存环境暂存，但存放时间一般不超过24小时。3.混有正常菌群的标本如痰等，不可置肉汤培养基内送检。4.标本采集与运送时应注意避免自身与他人暴露于感染因子。7 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本（二）采集时机和频次1.采集时机：只要怀疑菌血症，应立即采集标本进行血培养。采血应尽可能在使用抗菌药物前进行。2.采集频次：采血尽量在抗菌药物使用前，在24小时内采集2-3份血标本。可疑为急性原发性菌血症、真菌血症、脑膜炎、骨髓炎、关节炎或肺炎的患者，应在不同部位采集2-3份血标本。不明原因的发热，先采集2-3份血标本，24-36小时候后估计体温升温前再采集2份以上。可疑细菌性心内膜炎时，在1-2小时内采集3份血标本采集；如果24小时后阴性，再采集3份以上的血标本。8 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本二、血液标本（一）采集指标 只有在临床怀疑菌血症时才需要做血培养，不应于常规筛检和局部感染。出现以下情况需做血培养：体温在正常范围之外；心动过速、高或低血压、呼吸急促；白细胞计数升高或明显降低的地位；畏寒或寒战；新发或恶化的临床难以解释的症状和体征。9 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本（二）采集时机和频次1.采集时机：内要怀疑菌血症，应立即采集标本进行血培养。采血应尽可能在使用抗菌药物之前进行。入院前2周内接受抗菌药物治疗的患者，如果体温38380 0C C、寒战、出、寒战、出现新发或恶化的临床难以解释的症状和体征，可以考虑选现新发或恶化的临床难以解释的症状和体征，可以考虑选用有中和或吸附抗菌药物的培养基进行血培养。用有中和或吸附抗菌药物的培养基进行血培养。2.2.采集频次：采集频次：采血前尽量在抗菌药物使用前，在采血前尽量在抗菌药物使用前，在2424小时内采集小时内采集2-32-3份份血标本。血标本。可疑为急性原发性菌血症、真菌血症、脑膜炎、么、关可疑为急性原发性菌血症、真菌血症、脑膜炎、么、关节炎或肺炎的患者，应在不同部位采集节炎或肺炎的患者，应在不同部位采集2-32-3份血标本。份血标本。10 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本不明原因的发热，如隐性脓肿、伤寒热和波浪热，先采不明原因的发热，如隐性脓肿、伤寒热和波浪热，先采集集2-32-3份血标本，份血标本，24-3624-36小时后估计体温升高之前，再采集小时后估计体温升高之前，再采集2 2份以上。份以上。可疑细菌性心内膜时，在可疑细菌性心内膜时，在1-21-2小时内采集小时内采集3 3份血标本；如份血标本；如果说果说4 4小时后阴性，再采集小时后阴性，再采集3 3份以上的血标本。份以上的血标本。11 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本（三）培养基的选择推荐使用商品化的血培养瓶。说明：使用添加抗菌药物吸附剂的血培养瓶有助于提高已接受抗菌药物治疗患者血培养的检出率。12 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本 （四）采集方法1.穿刺部位皮肤消毒（1）如果选定的静脉穿刺位置明显较脏，先用肥皂和水清洗，然后用一次性纸巾或灭菌毛巾擦干。（2）一步法：推荐采用此法。使用含2%葡萄糖酸氯已定的70%乙醇覆盖需要消毒的区域，并确保消毒液停留30秒。让皮肤消毒区域彻底晾干，或至少等待30秒。（3）两步法：用70%乙醇覆盖需要消毒的区域，并确保消毒液接触皮肤时间至少30秒，再等30秒后晾干。用碘酊或者氯已定。覆盖整个待消毒区域并确保在皮肤上停留至少30秒，待消毒皮肤区域彻底晾干（约30秒）。13 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本2.培养瓶消毒：用70%乙醇消毒血培养瓶橡皮塞子；乙醇作用60秒；在血液注入前，用无菌纱布或棉签清除橡皮塞子表面剩余的乙醇，然后注入血液。3.培养瓶接种：抽取血液后，不要换针头，直接注入血培养瓶中，轻轻颠倒混匀，以防血液凝固。如果同时做需氧和厌氧培养，应先将标本接种到厌氧瓶中，然后再注入需氧瓶中，严格防止将空气注入厌氧瓶中。14 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本4.采血量（1）成人：推荐每个血培养瓶应加血量8-10ml，血液和肉汤比为1：5-10（体积比）。一般每个静脉穿刺点采血15-20ml。（2）儿童：对于婴儿和儿童，每毫升血液中的带菌量比成人要高，因此采血量较少。一般每个静脉穿刺点采血1-5ml。（3）血液量太多或太少都不利于细菌的检出，血液的培养量每增加1ml，阳性的率增加3-5%。15 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本（五）标本运送与保存接种标本后立即送检，如不能立即送检，置室温或35-370C孵箱保存，但不能超过12小时。且勿冷藏，因为某些苛氧菌在低温环境下不易存活。 在运送途中如果天气寒冷，应采取一定的保温措施。未使用的血培养瓶应室温保存。16 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本 三、下呼吸道标本（一）采集指征：出现咳嗽、咳痰、呼吸困难、肺部啰音或胸部影像学提示下呼吸道感染时，应进行痰培养。另外，肺部感染的患者有25-50可能发生菌血症，帮应同时作血培养。（二）采集时机1.采集标本的最佳时机应在使用抗菌药物之前。2.对于普通细菌性肺炎，痰标本送检每天1次，连续2-3天。不建议24小时内多次采样送检，除非痰液外观性状出现改变。3.怀疑分枝杆菌感染者，应连续收集3天清晨痰液送检。17 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本（三）采集容器推荐选择带有螺旋帽的清洁、无菌、干燥、不渗透、不吸水的广口容器。18 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本（四）采集方法1.自然咳痰法：以晨痰为佳，咳痰前先用清水、冷开水反复漱口除去过量的口腔细菌，有假牙的应取下。然后用力深咳，从气管咳出呼吸道深部的痰，痰液直接吐入痰盒中。标本量应1ml。2.雾化导痰法：痰量少或无痰者可采用雾化吸入加温至450C的3-5%NaCl水溶液，使痰液易于排出。对难于自然咳痰的患者可用无菌吸痰管抽取气管深部分泌物。19 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本3.经人工气道吸引物：是目前临床较常用的微生物检验标本。吸痰前给予100%纯氧至少30秒；可以在吸痰前进行气道盥洗，给予少量生理盐水有助于稀释黏稠的痰液和促进咳嗽反射以利于深部分泌物引流；不带负压放置吸痰管进入气道，直到开始准备撤出时才给予负压吸引；每次吸引时间控制在10-15秒，除非痰量很大。4.支气管镜采集法：在肺内病灶附近用导管吸引或用支气管刷直接取得标本。该方法对患者有一定痛苦，不易接受。20 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本5.防污染毛刷采集法和支气管肺泡灌洗法：均由临床医生按相应操作规程采集，须注意尽可能避免咽部正常菌群的污染。6.胃内采痰法：无自觉症状的肺结核患者尤其婴幼儿不会咳痰，有时将痰液误咽入胃中，可采集胃内容物做结核分枝杆菌培养。该方法应用于清晨空腹时将胃管插入胃内，用注射器抽取胃液。7.小儿取痰法：用弯压舌板向后压舌，将棉拭子伸入咽部，小儿经压舌刺激咳嗽时，可喷出肺部或气管分泌物粘在拭子上。对幼儿还可用手指轻叩胸骨柄上方，以诱发咳痰。21 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本（五）标本运送与保存标本应尽快送检，不能及时送检的标本，室温保存不超过2小时。22 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本 四、上呼吸道标本（一）采集指征1.病毒性普通感冒伴有明显咽痛时，怀疑为咽部链球菌感染，应做细菌培养。2.细菌性咽-扁桃体炎：明显咽痛、畏寒、发热，体温可达390C以上。3.上呼吸道感染易并发鼻窦炎、中耳炎、气管-支气管炎，需采集相应部位分泌物或痰液进行细菌培养。（二）采集时机1.应于抗生素应用前。2.时间上可无严格限制，但咽部是呼吸和食物的通路，以晨起后采集为佳。23 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本（三）采集容器采用专用的采样拭子及运送培养基。（四）采集方法1.鼻咽、咽拭子标本：嘱患者先用清水漱口，由检查者将其舌外拉使悬雍垂尽可能向外牵引，用压舌板将舌向下向外压，用无菌棉拭子越过舌根到咽后壁或悬雍垂的后侧，反复擦拭数次然后送检，拭子应避免触及舌、口腔黏膜和唾液。2.鼻拭子标本：最好用扩鼻器，先用拭子拭去表面的分泌物并丢弃，用第2个拭子蘸取无菌生理盐水插入鼻孔采集病灶标本。3.喉拭子：使患者对光而坐，头部上仰口张大，用压舌板轻轻压舌根，直接用棉拭子擦拭患者喉部的病灶分泌物做直接涂片和细菌培养。24 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本（五）标本运送与保存1.应立即送检。2.检测脑膜炎奈瑟菌或淋病奈瑟菌时，标本采用运送培养基运送，或直接接种在平板培养上运送。（六）其他1.最好采集2管拭子，以方便直接涂片分离培养。2.因鼻、咽部有口腔正常菌群，所以不建议用鼻咽喉拭子标本做常规细菌培养，只用于特定微生物检测（如淋球菌、酵母菌咽拭子培养）。3.耳、鼻、喉拭子标本一般不能做厌氧培养。25 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本五、尿液标本（一）采集指征1.症状指征：患者出现以下症状和体重之一怀疑有尿路感染时，应考虑做尿培养：有典型的尿路感染症状；肉眼脓尿或血尿；尿常规检查表现为白细胞或硝酸盐阳；不明原因的发热，无其他局部症状；留置导尿管的患者出现发热；膀胱排空功能受损；尿道口有脓性分泌物；泌尿系统疾病手术前26 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本2.疾病指征：尿路感染；肾结核；泌尿系统结石、前列腺增生；无症状性菌尿。27 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本（二）采集时机与频次1.采集时机：以抗菌药物使用之前的清晨第一次中段尿为宜。注意避免采集消毒剂污染的标本。2.采集频次：具有尿痛、尿频、尿急等明显症状的患者，只需采集一份标本采；治疗48-72小时后可采集第二份标本。怀疑肾结核时，应连续性3天采集晨尿。多次收集或24小时尿不应用于尿液培养。且尿液中不应加入防腐剂或消毒剂。除非进行流行病学调查，不应对长期留置导尿管的患者常规进行尿液培养。28 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本（三）采集容器（三）采集容器合格的采集容器是保证尿培养成功的必要条件，要求：由合格的采集容器是保证尿培养成功的必要条件，要求：由不与尿液成份发生反应的惰性材料制成；广口，具有较宽不与尿液成份发生反应的惰性材料制成；广口，具有较宽的底部，容积应的底部，容积应50ml50ml，盒盖易于开启；洁净、无菌、加，盒盖易于开启；洁净、无菌、加盖、封闭和防渗漏；不含防腐剂和抑菌剂。盖、封闭和防渗漏；不含防腐剂和抑菌剂。29 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本四）采集方法1.清洁中段尿：女性：采样前用肥皂水或0.05-0.1%聚维酮碘溶液冲洗外阴，用手指分开阴唇，弃其前段尿，留取中段尿10-20ml于无菌容器内。男性：采样前用肥皂水或0.05-0.1%聚维酮碘溶液等消毒剂清洗尿道口，擦干后上翻包皮，弃其前段尿，不终止排尿，留取中段尿10-20ml于无菌容器内。2.耻骨上膀胱穿刺：先用0.25-0.5%聚维酮碘溶液等消毒剂消毒穿刺部位皮肤，然后使用无菌注射器直接从耻骨联合与脐连线上高于耻骨联合2cm处刺入膀胱吸取尿液10-20ml于无菌容器内。30 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本3.小儿收集包：对于无自控能力的小儿可应用收集包采集尿液，这种装置由于很难避免会阴部菌群污染产生假阳性，所以只有在检验结果为阴性时才有意义。如果检验结果为阳性，应结合临床进行分析，必要时可使用耻骨上膀胱穿刺或导尿法留取尿液进行复检。31 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本4.导尿管尿（1）直接导尿法：使用0.05-0.1%聚维酮碘溶液等消毒剂消毒会阴，用导尿管直接经尿道插入膀胱，先弃前段尿液约15ml，再留取中段尿液10-20ml于无菌容器内。（2）留置导尿管法：采集前先夹住导尿管，采集时则松管弃前段尿液，使用0.25-0.5%聚维酮溶液等消毒剂消毒导尿管的采样部位，使用无菌注射器斜刺入导尿管的采样部位抽取10-20ml尿液于无菌容器内。应注意不能从集尿袋中采集尿液送检。（3）回肠造口导尿管法：摘除导管，弃去里面的尿液，先用0.05-0.1%聚维酮溶液等消毒剂消毒吻合口，再将导尿管插入清洁的吻合口，至筋膜的深部eswy1020ml尿液于无菌容器内。32 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本（五）标本运送与保存1.标本采集后应及时送检并接种。2.室温下保存时间不应超过2小时。如果不能及时运送或接种，应于40C下冷藏，但保存时间也不应超过8小时。3.冷藏保存不得用于淋病奈瑟菌培养。33 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本六、粪便采集（一）采集指征1.当腹泻患者出现以下任何一种情况时建议采集粪便标本，进行细菌培养：粪便涂片镜检白细胞5个/HP；未经抗菌药物治疗的持续性腹泻患者；重症腹泻；体温38.50C；血便或便中有脓液；来自疫区的患者；抗生素治疗后腹泻；高热惊厥；34 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本（二）采集时机1.在急性期留取腹泻粪便标本。2.在不同时间采集 2-3份标本可提高致病菌的分离率。3.沙门菌感染、肠热症应在2周内采集。4.寄生虫检测需间隔1-2天采集1次标本，连续采集3次且3次培养均阴性才能排除寄生虫携带状态。5.服用硫酸钡、镁或结晶物后至少5天以后采集标本。35 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本（三）采集容器要求使用清洁、带防护盖的防渗广口容器，送检的标本中不能加入防腐剂。如进行寄生虫检测时，应采用寄生虫转运包。（四）采集方法1.自然排便法：常规方法。自然排便后，挑取有脓血、黏液的粪便2-3g盛于灭菌广口容器中送检。2.直肠拭子法：适用于排便困难患者或婴幼儿，不推荐使用拭子做常规性病原菌培养。可用肥皂水将肛门周围洗净，用蘸有无菌生理盐水的棉拭子插入肛门，成人深4-5cm，儿童2-3cm，与直肠黏膜表面接触，轻轻旋转拭子，可在拭子 上明显见到粪便，插入运送培养基内，立即送检。36 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本（五）标本运送与保存1.标本应尽快送检，不能及时送检的标本，室温下保存2小时。如采便不能及时送检，可加入ph7.0的磷酸盐甘油或转运培养基，但不宜超过24小时。使用改良转运培养基Cary-Blair时，不能转送培养志贺菌的标本。2.直肠拭子采集的标本必须转入运送培养基或革兰阴性菌肉汤中送检，转运时间不宜超过2小时。3.高度怀疑霍乱弧菌感染标本的运送必须符合特殊标本的安全规定。4.直肠活检标本用粪便容器送检，内盛少量无菌蒸馏水以防止沉淀。37 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本（六）其他1.当怀疑沙门菌、志贺菌、弯曲菌以外的细菌引起的腹泻时，临床医生必须通知细菌室，因为分离弧菌、耶尔森菌、气单胞菌、邻单胞菌、大肠埃希菌O157:H7需要特殊的实验程序和培养基。2.粪便标本一般不做厌氧培养。38 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本七、 伤口脓液标本（一）采集指征1.症状指征(1)局部特征：红、肿、热、痛和功能障碍是化脓性感染的五个典型特征。但随病程迟早、病变范围、位置深浅而异，五个症状不一定全部表现。病变范围小或位置较深时局部症状可不明显。（2）全身症状：轻重不一。感染较重者常有发热、头痛、全身不适、乏力、食欲减退等，一般均有白细胞计数增加和核左移。病程较长时，可有水和电解质紊乱，血浆蛋白减少，肝糖原大量消耗，可出现营养不良、贫血、水肿等症状。全身性感染严重的患者可发生感染性休克。39 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本2.疾病指征：软组织的急性化脓性炎症：如疖、痈、急性蜂窝组织炎和丹毒等。化脓性疾病：如甲沟炎、化脓性关节炎、细菌性结膜炎、扁桃体炎和急性化脓性中耳炎等。脓肿:扁桃体脓肿、咽部脓肿、肝脓肿、腹腔脓肿和肾周脓肿等。创伤感染：术后切口感染、导管感染和脐带残端感染等。40 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本（二）采集时机在抗菌药物使用前，且仅在有临床感染症状或伤口恶化或长期不能愈合时采集标本。（三）采集容器1.较大的标本：置于含有少量生理盐水的带螺纹的无菌塑料容器内。2.较小的标本或拭子标本：置于运送培养基内。41 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本（四）采集方法1.封闭性脓肿：皮肤消毒后，采用注射器穿刺抽取脓液。若无法抽到脓液，应先皮下注射少量无菌生理盐水，再次穿刺抽吸脓液；若脓液过多，应先切开引流，在基底部或脓肿壁采集标本。脓液量应以1ml为宜。排出注射器内部及针头的气体，用无菌橡皮塞封闭针头送检，或直接打入血培养瓶中；疑为厌氧菌时，应迅速将脓液打入厌氧培养瓶中。2.开放性伤口：无菌生理盐水冲洗浅表部位，去除表面的渗出物和碎屑。用拭子深入伤口的基底部或伤口与正常组织边缘部采集两个标本，分别用于革兰染色和培养。42 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本3.烧伤伤口：清创，出现渗出物后用拭子用力采集病灶基底部或边缘的标本，仅做需氧培养，也可送组织标本。4.组织和活检标本：采集足够大的组织，体积以1mm3为宜，避免在坏死区域内采集。将小块的组织放在运输培养基内，较大的放在无菌容器中，并加入少量无菌生理盐水。43 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本（五）标本运送与保存1.标本应在采集后的30分钟内送达实验室，送检时应保持标本湿润。2.小块的组织标本可放在运送培养基内。3.较大的标本置于无菌容器内，并加入少量无菌生理盐水以保持湿度，或置于肉汤增菌液或血平板内送检。4.不能立即送检者可放于40C冰箱内保存，但必须在24小时内运送至实验室。5.活检组织若采用厌氧运送方式，可于250C保存20-24小时。44 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本八、脑脊液标本（一）采集指征多数成人患者症状为发热，头痛、恶心、呕吐、颈强直和反射增强等脑膜刺激征表现，脑脊液的典型改变有压力升高、血细胞和蛋白增高、糖含量减低和致病菌培养阳性。但是老年人和儿童临床表现常不明确或无特异性，因此对于此类人群的不明原因发热，应怀疑为脑膜炎，采集脑脊液及时送检。（二）采集时机同采集时机基本原则。45 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本 （三）采集容器1.注入无菌试管或小瓶中送检，也可将脑脊液直接注入血培养瓶送检。2.做脑脊液培养的患者，建议同时做血培养。46 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本（四）采集方法用腰穿的方法采集脑脊液。患者应先禁食，由医师按无菌操作在患者第3和第4腰椎间隙或稍低下穿刺取得，小儿则于第4和第5腰椎间隙穿刺、取得脑脊液后装入无菌试管，立即送检。（五）标本运送与保存采集标本后应在常温下立即送检，冬天应注意保温，否则会影响检出率。用于细菌培养的标本不可置于冰箱保存。（六）其他1.采集标本应放于无菌试管中，试管中无需加防腐剂。2.若只采集了一管而要做不同检查，应先送到微生物室。3.做脑脊液培养的患者，建议同时做血培养。47 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本九、无菌体液标本无菌体液是指除血液、骨髓、脑脊液以外的胸水、腹水、心包液、鞘膜积液和胆汁等穿刺液。（一）采集指征1.胸腔积液（1）症状指征：伴有胸痛、发热、胸腔积液。（2）疾病指征：结核性胸膜炎，细菌性肺炎引起的胸膜炎，真菌感染引起的胸腔积液。2.腹水（1）症状指征：腹部有积液伴腹痛、呕吐、肌紧张、肠鸣音弱或消失。（2）疾病指征：原发性腹膜炎或继发性腹膜炎。48 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本3.心包液（1）症状指征：发冷、发热、心悸、出汗、乏力及精神症状；心前区疼痛，心包摩擦音； 心音明显减弱，有肺实质变体征，可出现心脏压塞征象；心电图改变，各导联ST-T改变或肢导低压。（2）疾病指征：结核性心包炎、风湿性心包炎和急性非特异性心包（1）症状指征：关节肿胀，关节周围肌肉发生保护性痉挛，严重时出现全身寒战与高热，局部温度增高。（2）疾病指征：化脓性关节炎。5.鞘膜积液（1）症状指征：一侧睾丸急性发作疼痛，并向腹股沟部放射，自觉局部肿胀、发热，全身症状较轻，但有时体温可达400C,无泌尿系统感染特征。（2）疾病指征：急性睾丸炎等。49 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本6.胆汁（1）症状指征：腹痛、黄疸、右上腹压痛、肌紧张、胆囊区深吸气时有触痛，中毒或休克，常伴有恶心、呕吐、发热、尿少且黄。（2）疾病後：胆石病、胆囊炎、肝胆系统感染和伤寒带菌者等。50 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本（二）采集时机见采集时机基本原则。（三）采集容器无菌试管或无菌容器；也可注入血培养瓶内送检。（四）采集方法由临床医生按相应规程无菌操作穿刺抽取标本或外科手术采集标本。采集量5ml左右。当留取标本时，为防止无菌体液凝固，应在无菌容器内先加入灭菌肝素0.5ml，再注入各种穿刺液，轻轻混合后立即送检。也可将标本直接加入血培养瓶中。51 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本（五）标本运送和保存1.标本采集后常温下15分钟内送到改订微生物室，室温下可保存24小时。2.若做真菌培养只能保存于40C。3.怀疑淋病性关节炎患者的关节液采集后应立即保温送检。52 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本十、生殖道标本（一）采集指征1.症状指征：（1）皮肤黏膜损害：原发损害可有斑疹、丘疹、结节、水疱、囊肿、糜烂、溃疡等。继发损害由原发损害演变而来，有萎缩或斑痕等，患者可出现疼痛或瘙痒症状。（2）全身症状：多数无全身症状，偶尔有发热、乏力、食欲不振等。53 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本（3）男性生殖系统表现：尿频、尿急、尿痛。尿道分泌物增多：性状可为黏液性或脓性。会阴部疼痛及阴囊疼痛。性功能障碍。泌尿生殖器畸形和缺损。54 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本（4）女性生殖系统表现：阴道分泌物增多及性状异常。尿道口瘙痒及脓性分泌物流出。下腹疼痛。月经失调。外阴瘙痒。阴道出血。外阴或阴道疼痛。性功能障碍。55 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本2.疾病指征：非特异性外阴炎、前庭大腺炎、前庭大腺囊肿、外阴阴道念珠菌病、细菌性阴道病、急慢性宫颈炎、急性盆腔炎、急性尿道炎、急性膀胱炎、前列腺炎、羊膜腔感染、产褥期感染等。（二）采集时机见采集时机基本原则。（三）采集容器见采集方法基本原则。56 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本（四）采集方法1.尿道分泌物标本采集应在排尿1小时后进行。（1）男性：清洗尿道口，用灭菌纱布或棉球擦拭，采取从尿道口溢出的脓性分泌物；或用无菌男性拭子插入尿道内2-4cm轻轻旋转后取出分泌物。（2）女性：清洗尿道口，用灭菌纱布或棉球擦拭，然后从阴道内压迫尿道，或从尿道的后面向前按摩，使分泌物溢出。2.巴氏腺、尿道旁腺：用碘伏等无刺激性消毒液消毒皮肤，然后压迫腺体，使分泌物溢出。3.阴道分泌物：用窥器扩张阴道，先用拭子清除阴道表面分泌物，弃拭子，用灭菌女性拭子采取阴道口内4cm内侧壁或后穹窿处分泌物培养或涂片镜检。57 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本4.宫颈分泌物：用无菌生理盐水湿润窥阴器暴露宫颈，先用无菌拭子清除阴道和宫颈局部分泌物，弃拭子；轻压宫颈使宫颈内分泌物流出，用女性拭子插入宫颈管1-2cm采取分泌物，转动并停留10-30秒，让拭子充分吸附分泌物，或用弃针头的注射器吸取分泌物，置于灭菌试管内送检。5.宫颈内容物：羊膜腔感染时可以腹壁羊膜腔穿刺抽取羊水或经子宫颈插管抽取羊水进行病原体检测。6.子宫内膜标本：用无菌生理盐水湿润窥阴器，用拭子清除阴道和宫颈局部分泌物，弃拭子，用双腔的真空吸引器吸取标本或用拭子取子宫内膜标本，注意防止宫颈和阴道正常菌群的污染。58 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本7.前列腺按摩液：被告检者检查前1周内停服抗生素、外阴消毒后，留取排出的首段尿液10ml为VB1，继续排尿200ml后 ,留取10ml尿液为VB2；即行前列腺按摩，收集按摩液为EPS，随之立即排尿，收集首段尿液10ml为VB3。4份标本均送细菌培养，菌落计数和药敏试验。8.精液：受检者应未排精5天以上。清洗尿道口，采用手淫法或体外排精法，射精于灭菌容器内送检。9.溃疡分泌物：先用生理盐水清洗患处，用灭菌棉拭子取其边缘或基底部的分泌物，置灭菌试管内送检。10.组织标本：用无菌生理盐水清洗溃疡面并用无菌手术刀清除坏死组织和覆盖的分泌物，暴露出溃疡基底，待渗出物积聚明显时，轻压溃疡基底并用拭子或吸管采集渗出物。将组织研磨成细菌匀浆接种于液体培养基。59 第一节第一节 临床微生物标本临床微生物标本（五）标本运送与保存1.标本采集后应置于无菌试管内立即送检，禁止冷藏。2.做淋菌培养的标本应立即送检或在床旁接种，勿放冰箱保存。（六）其他1.淋病奈瑟菌感染如能同时采集直肠标本会增加阳性率，其采集方法为将拭子插入肛管2.5cm左右，穿过肛门括约肌后转动拭子，停留时间1030s.取出的粪便标本不能有粪便污染。如有尿道症状时可采集尿道分泌物。2.支原体培养取分泌物时，持拭子用力擦下尽可能多的细胞，因为支原体与细胞相伴随。3.由于可能受其他形态相似的细菌干扰，阴道与宫腔标本一般不做革兰染色查淋球菌。60 第二节第二节 环境微生物标本环境微生物标本一、空气（一）采集频率1.感染高风险部门定期监测。2.洁净手术部及其他洁净场所，新建与改建验收时以及更换高效过滤器后进行监测。3.遇医院感染暴发怀疑与空气污染有关时随时进行监测，并进行相应致病微生物的检测。（二）采样时间1.采用洁净技术净化空气的房间在洁净系统自净后与从事医疗活动前采样。2.未采用洁净技术净化空气的房间在消毒或规定的通风换气后与从事医疗活动前采样。3.怀疑与医院感染暴发有关时采样。61 第二节第二节 环境微生物标本环境微生物标本（三）采样方法1.洁净手术部及其他洁净用房可选择沉降法或浮游菌法。（1）沉降法：参照GB50333要求进行监测。沉降法不适用于空气中真菌孢子的测定。1）局部百级、周围千级：手术区布放13点，周边区布放8点（每边内2点）。2）局部千级，周围万级：手术区布放5点（双对角布点），周边区布放6点（长边内2点，短边内1点）。3）局部万级、周围10万级：手术区布放3点（对角布点），周边区布放4点（每边内1点）。4）10万级：布放5点（避开送风口正下方）。5）30万级：面积30m2布放4点。面积30m2布放2点。62 第二节第二节 环境微生物标本环境微生物标本2.未采用洁净技术净化空气的房间采用沉降法。（1）室内面积30m2时，设内中外对角线三点，内外点应在距墙壁1m处；室内面积30m2时，设四角及中央五点，四角的布点位置应在距墙壁1m处。(2)将普通营养琼脂平皿放置各采样点，采样高度为距地面0.8-1.5m，采样时将平皿盖打开，扣放于平皿旁，暴露规定时间后盖上平皿盖及时送检。（四）检测方法1.将送检平皿置35-370C恒温箱培养48小时，计数菌落数。2.若怀疑与医院感染暴发有关，就进行目标微生物的检测。63 第二节第二节 环境微生物标本环境微生物标本 （五）结果判读1.洁净手术室和其他洁净场所，空气中的细菌菌落总数要求应遵循GB50333。2.非洁净手术室、非洁净骨髓移植病房、产房、导管室、新生儿室、器官移植病房、烧伤病房、重症监护病房、血液病区空气中的细菌总数4cfu/15min.90mm。3.儿科病房、母婴同室、妇产科检查到、人工流产室、治疗室、注射室、换药室、输血科、消毒供应中心、血液透析中心、急诊室、化验室、各类普通病室、感染疾病科门诊及其病房空气的细菌菌落总数4cfu/5min.90mm。64 第二节第二节 环境微生物标本环境微生物标本 二、手（一）采集频率1.感染高风险部门定期监测2.当怀疑医院感染暴发与医务人员手卫生有关时，应及时进行监测，并进行相应致病微生物的检测。（二）采样时间：在进行卫生手或外科手消毒后，接触患者、进行诊疗活动前采样。（三）采样方法被检人员五指并拢，将浸有含中和剂的无菌洗释液采样棉拭子在双手指曲面从指根到指端来回涂两次（一只手涂擦面积约30cm2）,并随之转动采样棉拭子，擦完后，将棉拭子手接触部位用无菌剪刀剪去，放入装有5ml无菌洗释液试管中立即送检。65 第二节第二节 环境微生物标本环境微生物标本 （四）检测方法：把采样管充分震荡80次后，用无菌吸管吸取洗释液0.1ml接种在血琼脂平板上，涂布均匀，放入361培养箱中培养48h计菌落数，必要时分离致病性微生物。（五）结果判读卫生手消毒监测的细菌菌落总数应10cfu/cm2 外科手消毒监测的细菌菌落总数应5cfu/cm266 第二节第二节 环境微生物标本环境微生物标本三、物体表面（一）采集频率：感染高风险部门定期监测。（二）采样时间：在消毒处理后或怀疑与医院感染暴发有关时进行采样。（三）采样方法用内径为5cm5cm的灭菌标准板放在被检物体表面，用浸有无菌洗释液的棉拭子一支，在规格板内横竖往返均匀涂擦5次并随之转动棉拭子，连续采样4个板面积（100cm2）剪去手接触部分，将棉拭子投入5ml含相应中和剂的无菌洗释液试管中送检。门把手等小型不规则物体表面用棉拭子直接涂擦采样。 （四）检测方法：将采样管用力振打80次，用无菌吸管吸取0.1ml待检样品，接种于血琼脂平板内，涂布均匀，置361培养48h，计菌落数。必要时分离致病微生物。67 第二节第二节 环境微生物标本环境微生物标本（五）结果计算1.规则物体表面：物体表面菌落总数（cfu/cm2）=平均每皿菌落数稀释倍数/采样面积（cm2）2.不规则物体表面：小型物体表面的结果计算用cfu/件表示。（六）结果判读1.洁净手术室、非洁净手术室、非洁净骨髓移植病房、产房、导管室、新生儿室、器官移植病房、烧伤病房、重症监护病房、血液病区物体表面的细菌总数5cfu/cm2。3.儿科病房、母婴同室、妇产科检查到、人工流产室、治疗室、注射室、换药室、输血科、消毒供应中心、血液透析中心、急诊室、化验室、各类普通病室、感染疾病科门诊及其病房空气的细菌菌落总数10cfu/cm2。 cfu/cm268 第二节第二节 环境微生物标本环境微生物标本 四、消毒液（一）采集频率：感染高风险部门定期监测。（二）采样方法1.常用消毒剂有效成分含量测定：使用中消毒液的有效浓度测定可依照产品企业标准进行检测，也可使用经国家卫生行政部门批准的消毒剂纸（卡）监测。2.使用中消毒液染菌量测定采样方法：用无菌吸管按无菌操作方法吸取0.5ml被检消毒液，加入4.5ml中和剂中混匀。69 第二节第二节 环境微生物标本环境微生物标本（三）采样时间：对使用中的消毒液在有效期前采样。（四）结果判定1.使用中灭菌用消毒液无菌生长。2.使用中皮肤黏膜消毒液染菌量10cfu/ml。3.其他使用中消毒液染菌量100cfu/ml。（五）注意事项1.采样后4小时内检测。2.361恒温培养箱中培养72h计菌落数，必要时分离致病性微生物。3.正确选择试剂盒纸条检测浓度。70 第二节第二节 环境微生物标本环境微生物标本五、水（一）治疗用水1.采集频率：定期对各类治疗用水进行监测。美国CDC推荐每月至少1次或暴发期间每日对血液透析反渗水及透析液进行内毒素和细菌学监测，包括菌落数和筛查假单胞菌等嗜温性细菌。2.采样方法：用一次无菌注射器抽取治疗用水50ml至灭菌采样瓶中，盖紧瓶口；或者出水口放水约100ml后，直接用灭菌采样瓶接水50ml。独立包装的治疗用水打开后24小时之内抽取50ml。3.结果判读：口腔科治疗用水菌落总数10cfu/ml。反渗水：菌落总数10cfu/ml。细菌内毒素：反渗水不得超过1EU/ml，透析液不得超过5EU/ml.71 第二节第二节 环境微生物标本环境微生物标本（二）医院污水1.采集频率：每月监测一次粪大肠菌群，每季度监测一次沙门菌，每半年监测一次志贺菌。2.结果判读：综合性医疗机构接触池出口排放标准总余氯为3-10mg/L,粪大肠菌群500MPN/L，不得检出常见致病菌、肠道病毒。预处理标准总余氯为2-8mg/L,粪大肠菌群5000MPN/L。72 第二节第二节 环境微生物标本环境微生物标本六、消毒内镜（一）采集频率:医院应定期对消毒内镜进行监测。（二）采样方法 采样步骤：取清洗消毒后内镜，用无菌注射器抽取50ml含相应中和剂的洗脱液，从活检口注入冲洗内镜管路，并全量收集送检。（三）采样时间：内镜清洗消毒后。（四）监测方法：将洗脱液充分混匀，取1.0ml接种平皿，361恒温培养箱中培养48h计菌落数（cfu/件）。（五）监测结果：消毒后的内镜合格标准为20cfu/件，不得检出致病菌。（六）注意事项：送检时间4小时。如不能及时送检，将样品保存于0-40C冰箱，必须在24小时内送检。73 第二节第二节 环境微生物标本环境微生物标本七、灭菌效果监测（一）湿热灭菌效果监测1.物理监测：连续监测并记录灭菌参数（温度、压力、时间等），温度波动范围3以内，时间满足最低灭菌时间要求。2.化学监测：每个灭菌包外都有包外化学指示物。高度危险物品应放包内化学指示物，置于最难灭菌部位。如果包装透明，可看到包内指示物，则可不放包外化学指示物。快速压力蒸汽灭菌程序：直接将包内指示物放在待灭菌物品旁边。根据指示物颜色改变情况判断是否合格。包外化学指示物不合格，不得发放，包内化学指示物不合格，不得发放。74 第二节第二节 环境微生物标本环境微生物标本3.生物监测生物菌片、培养，对照：采用嗜热脂肪橊芽孢作为标准指示菌株。应每周监测一次。灭菌植入型器械每批次进行生物监测。标准生物监测包应置于灭菌器排气口的上方或厂家建议的灭菌器内最难灭菌的部位 。紧急情况下灭菌植入型器械，可在PCD加用5类化学指示物作为提前完成放行的依据。75 第二节第二节 环境微生物标本环境微生物标本小型压力蒸汽灭菌器进行生物监测时，应满载，且将生物测试包或生物PCD置于最难灭菌的部位。快速压力蒸汽灭菌程序：灭菌器空载，放入一支生物指示物。对照设置。将生物监测指示剂进行培养，实验组为阳性者，排除污染可能后，判断为灭菌不合格。应尽快召回，改进后生物监测连续三次合格后方可使用。紧急情况下灭菌植入型器械如5类化学指示剂合格，可提前放行，结果应及时通报使用部门。76 第二节第二节 环境微生物标本环境微生物标本（二）干热灭菌效果监测1.物理监测：每灭菌批次进行。温度在设定时间内均达到预置温度，则物理监测合格。2.化学监测：每个灭菌包均应使用包内和包外化学指示卡，包内化学指示物置于最难灭菌部位。对未打包物品，应在附近放置一个或多个包内化学指示物。3.生物监测：采用枯草杆菌黑色变种芽孢作为指示菌株。每周监测一次。77 第二节第二节 环境微生物标本环境微生物标本（三）环氧乙烷灭菌效果监测1.物理监测：每次灭菌应连续监测并记录灭菌时的温度、压力和时间等灭菌参数。2.化学监测：每个灭菌包均使用包内、包外化学指示物，包内指示物置于最难灭菌部位。3.生物监测：采用枯草杆菌黑色变种芽孢作为指示菌株。每灭菌批次进行生物监测。常规生物监测包置于整个灭菌包的中心部位即最难灭菌的部位。设阴性、阳性对照。78 第二节第二节 环境微生物标本环境微生物标本 （四）过氧化氢等离子灭菌效果监测1.物理监测：每次灭菌应连续监测并记录每个灭菌周期的临界参数如舱内压、温度、过氧化氢浓度、电源输入和灭菌时间等灭菌参数。2.化学监测：每个灭菌包均使用包内、包外化学指示物，包内化学指示物置于最难灭菌部位。3.生物监测：采用嗜热脂肪杆菌芽胞作为指示菌株。每天至少监测一次。79 第二节第二节 环境微生物标本环境微生物标本（五）低温甲醛蒸汽灭菌效果监测1.物理监测：每灭菌批次进行物理监测。详细记录灭菌过程的参数如灭菌温度、湿度、压力和时间。2.化学监测：每个灭菌包均使用包内、包外化学指示物，包内化学指示物置于最难来菌部位。3.生物监测：采用嗜热脂肪杆菌芽胞作为指示菌株。每周监测一次。8081