制药企业生产环境监控1 课程介绍污染来源与去除污染来源与去除环境监测环境监测环境监测技术环境监测技术2什么是环境监测？环境监测是用于评价生产环境控环境监测是用于评价生产环境控制效果的一种工具。制效果的一种工具。对于有微生物质量要求的药品生对于有微生物质量要求的药品生产而言，药品制造厂房洁净生产区和其它产而言，药品制造厂房洁净生产区和其它控制环境过程都是药品生产保证程序中的控制环境过程都是药品生产保证程序中的一个重要部分。一个重要部分。3环境控制程序为了确保生产环境能够持续稳定为了确保生产环境能够持续稳定地符合药品生产的要求，必须建立完整的地符合药品生产的要求，必须建立完整的环境控制程序，主要内容包括：环境控制程序，主要内容包括：合理的厂房设施设计与维护合理的厂房设施设计与维护文件系统文件系统经过验证的清洁和消毒程序经过验证的清洁和消毒程序可靠的工艺控制可靠的工艺控制良好的设施管理良好的设施管理有效的洁净区出入控制有效的洁净区出入控制有效的培训、资格确认和评价程序有效的培训、资格确认和评价程序原料与设备的质量保证原料与设备的质量保证4环境监测数据采集的执行需符合GMP要求 主管环境监测程序的人员必须具备足够的主管环境监测程序的人员必须具备足够的科学知识，并经过适当的培训和授权。科学知识，并经过适当的培训和授权。 所使用的设备系统必须经过验证，培养基所使用的设备系统必须经过验证，培养基必须用恰当的方法制备，所有规程必须以必须用恰当的方法制备，所有规程必须以书面方式确定并遵照执行。书面方式确定并遵照执行。 取样点的选择和监测频率。取样点的选择和监测频率。 警戒和纠偏标准警戒和纠偏标准 建立书面文件体系以确定偏差建立书面文件体系以确定偏差 对超警戒和对超警戒和/或纠偏数据所做的任何措施都或纠偏数据所做的任何措施都应该有一个反馈机制来进行跟踪。所有数应该有一个反馈机制来进行跟踪。所有数据应当进行记录和趋势分析。据应当进行记录和趋势分析。5取样点的选择取样应有代表性，应当有助于找取样应有代表性，应当有助于找出关于特定规程、设备、原料以及工艺方出关于特定规程、设备、原料以及工艺方面的真正或潜在的污染问题。面的真正或潜在的污染问题。不要带入污染。如果取样人员自不要带入污染。如果取样人员自己受到污染，那么在取样过程中也非常可己受到污染，那么在取样过程中也非常可能会对产品造成污染。能会对产品造成污染。6取样点的选择需考虑的因素 微生物污染最有可能对产品质量造成负面微生物污染最有可能对产品质量造成负面影响的位置。影响的位置。 最能够体现在真正生产中最严重的微生物最能够体现在真正生产中最严重的微生物增殖的位置增殖的位置 是否有统计方面的考虑，是否基于网格状是否有统计方面的考虑，是否基于网格状分布分布 能够代表在清洁、灭菌或消毒过程中最难能够代表在清洁、灭菌或消毒过程中最难以达到的区域以达到的区域 可能有助于污染扩散的活动可能有助于污染扩散的活动 在指定位点的取样活动是否会干扰环境，在指定位点的取样活动是否会干扰环境，从而造成取样结果的错误或直接污染产品从而造成取样结果的错误或直接污染产品7取样点的选择取样的位置，选择导致产品生物取样的位置，选择导致产品生物负荷增高的因素取样和监测。负荷增高的因素取样和监测。 与产品接触的来源，包括压缩气体与产品接触的来源，包括压缩气体 室内空气室内空气 生产设备生产设备 工具工具 关键位置表面关键位置表面 存储容器，传送带存储容器，传送带 人员的手套人员的手套 水水 不与产品接触的来源，墙壁、地板、天花不与产品接触的来源，墙壁、地板、天花板、门、椅子、桌子、检测设备以及通道。板、门、椅子、桌子、检测设备以及通道。8取样频率 取样频率必须能够确定系统的潜在缺陷取样频率必须能够确定系统的潜在缺陷 单一的取样方案并不适用于所有的环境单一的取样方案并不适用于所有的环境 根据实际操作变更，药典要求，显著微生根据实际操作变更，药典要求，显著微生物污染变化趋势物污染变化趋势 新增设备或公用工程和房间的新建等因素，新增设备或公用工程和房间的新建等因素，可以进行临时或永久性的取样频率变更可以进行临时或永久性的取样频率变更 单个监测点的频率可以低于整个系统或区单个监测点的频率可以低于整个系统或区域的频率域的频率 降低监测频率前，必须对照目前与所拟定降低监测频率前，必须对照目前与所拟定的频率回顾历史数据的频率回顾历史数据9警戒和纠偏标准标准的设立用于确定潜在或真实标准的设立用于确定潜在或真实的性能偏差，确定变化及变化的程度，以的性能偏差，确定变化及变化的程度，以便在产品质量受到负面影响之前及时采取便在产品质量受到负面影响之前及时采取纠偏措施纠偏措施并不是所有情况都需要设立警戒并不是所有情况都需要设立警戒和纠偏标准和纠偏标准一般来说，纠偏标准都由法规或一般来说，纠偏标准都由法规或行业指南确定，而警戒标准则由环境监测行业指南确定，而警戒标准则由环境监测的历史数据分析确定的历史数据分析确定10污染菌的鉴定菌落形态菌落形态革兰氏染色结果革兰氏染色结果自动或手动鉴定系统等自动或手动鉴定系统等11污染菌的鉴定可用于下列情况的调查：可用于下列情况的调查：无菌检查结果阳性无菌检查结果阳性培养基灌封结果阳性培养基灌封结果阳性警戒纠偏标准偏离警戒纠偏标准偏离杀菌剂耐受增强的微生物引入杀菌剂耐受增强的微生物引入12污染菌的鉴定如检测到之前未出现的菌，表如检测到之前未出现的菌，表明系统发生变化，需进行调查。明系统发生变化，需进行调查。分离菌鉴定结果可以被用作分分离菌鉴定结果可以被用作分析污染源的有效证据。比如微球菌常常能析污染源的有效证据。比如微球菌常常能在皮肤上发现，假单胞菌则与水有关。在皮肤上发现，假单胞菌则与水有关。13调查/纠偏措施调查和纠偏措施的步骤应该以书调查和纠偏措施的步骤应该以书面计划的形式预先确定。面计划的形式预先确定。开始调查或纠偏措施前必须排除开始调查或纠偏措施前必须排除取样和实验室误差的可能。取样和实验室误差的可能。 通知恰当的管理者通知恰当的管理者 开始调查以确定在特定参数下产生偏差的开始调查以确定在特定参数下产生偏差的原因和结果原因和结果 进行纠偏措施以解决问题进行纠偏措施以解决问题 跟踪回顾以评估纠偏措施的效果跟踪回顾以评估纠偏措施的效果14药品制造系统环境监测点水水压缩空气压缩空气空气监测空气监测设备表面监测设备表面监测人员监测人员监测15水的监测 水系统的取样应与生产规范保持一致性水系统的取样应与生产规范保持一致性 选择分配系统的取样点，应能够证明整个选择分配系统的取样点，应能够证明整个分配系统的微生物污染水平分配系统的微生物污染水平 取样后尽快进行微生物检测。如果无法立取样后尽快进行微生物检测。如果无法立刻进行，应当将样品于冰箱中冷藏，一般刻进行，应当将样品于冰箱中冷藏，一般检测时间不得晚于取样之后检测时间不得晚于取样之后24小时小时16压缩空气的监测 减压阀减压阀 用于加压或者覆盖无菌盛液器中产品的压用于加压或者覆盖无菌盛液器中产品的压缩气体应该通过疏水性的空气过滤装置过缩气体应该通过疏水性的空气过滤装置过滤后进行取样滤后进行取样 用于无菌环境的压缩空气应通过无菌级过用于无菌环境的压缩空气应通过无菌级过滤器的过滤滤器的过滤17空气的监测包括活性和非活性悬浮粒子的监测包括活性和非活性悬浮粒子的监测监测活性微粒的技术主要受限于以下几点：监测活性微粒的技术主要受限于以下几点： 可用的设备可用的设备 在所获取的空气中证实微生物存在所需要在所获取的空气中证实微生物存在所需要的时间的时间 当结果出现偏差时无法适时进行重新取样当结果出现偏差时无法适时进行重新取样 持续监测困难，例如培养基风干持续监测困难，例如培养基风干18空气的监测非活性悬浮粒子的监测：粒子计数器非活性悬浮粒子的监测：粒子计数器活性微生物监测：活性微生物监测：沉降碟与主动空气取样沉降碟与主动空气取样19设备表面监测接触碟法接触碟法可弯曲薄膜法可弯曲薄膜法擦拭法擦拭法表面清洗法表面清洗法20人员的监测人是无菌环境中最主要的污染源。人是无菌环境中最主要的污染源。对所有进入无菌环境的人员都要进行培训：对所有进入无菌环境的人员都要进行培训：人员卫生人员卫生微生物学介绍微生物学介绍无菌操作无菌操作更衣规范更衣规范在个人经过培训之后，仍需要完在个人经过培训之后，仍需要完成常规的服装和手套指印微生物监测，以成常规的服装和手套指印微生物监测，以持续评价其无菌操作的规范性。持续评价其无菌操作的规范性。21人员的监测无菌生产区域人员资格确认无菌生产区域人员资格确认个人卫生和习惯个人卫生和习惯 头发、皮肤、指甲以及衣服的清洁头发、皮肤、指甲以及衣服的清洁 不用化妆品、指甲油、美甲、指甲胶，不不用化妆品、指甲油、美甲、指甲胶，不食用口香糖和糖果食用口香糖和糖果 在洁净区内不吃、喝或咀嚼任何食品饮料在洁净区内不吃、喝或咀嚼任何食品饮料 不抽烟不抽烟患病患病 所有感冒、流感、感染、受伤或者晒伤都所有感冒、流感、感染、受伤或者晒伤都需要报告需要报告 所有疾病或慢性皮肤症状所有疾病或慢性皮肤症状22人员的监测衣着衣着 要求穿着专用的车间或洁净区制服要求穿着专用的车间或洁净区制服 不佩戴手表或者外露的珠宝首饰不佩戴手表或者外露的珠宝首饰 需要穿着有防护性质的服装需要穿着有防护性质的服装微生物学知识的介绍微生物学知识的介绍 微生物不同种类的一般来源微生物不同种类的一般来源无菌操作技术的介绍无菌操作技术的介绍 更衣规范更衣规范 参加无菌灌封以证明人员的无菌操作水平参加无菌灌封以证明人员的无菌操作水平 所有的培训和资格确认活动都应该通过文所有的培训和资格确认活动都应该通过文件的形式记录下来，并作为雇员档案的一件的形式记录下来，并作为雇员档案的一部分保存。部分保存。23当前洁净度认证和监测的标准洁净度人工巡检和在线监测的应用和解读24无菌药品污染来源与控制25GMP的核心第三条第三条本规范作为质量管理体系的一部本规范作为质量管理体系的一部分，说药品生产管理和质量控制的基本要求，分，说药品生产管理和质量控制的基本要求，旨在最大限度地降低药品生产过程中污染、旨在最大限度地降低药品生产过程中污染、交叉污染以及混淆、差错等风险，确保持续交叉污染以及混淆、差错等风险，确保持续稳定地生产出符合预定用途和注册要求的药稳定地生产出符合预定用途和注册要求的药品。品。26污染种类污染类型污染类型示例示例来源来源处理方法处理方法非活性粒子非活性粒子金属斑点金属斑点服装纤维服装纤维设备设备员工服装员工服装外界空气外界空气水供应水供应浮游粒子通过浮游粒子通过HEPA过滤过滤接触地方清洗和灭菌接触地方清洗和灭菌水纯化系统水纯化系统活性微生物活性微生物细菌细菌霉菌霉菌支原体支原体病毒病毒人员人员水水外界空气外界空气设备，工具，内包材设备，工具，内包材辅料，原料药辅料，原料药限制无菌核心干扰限制无菌核心干扰浮游粒子通过浮游粒子通过HEPA过滤过滤液体无菌过滤（液体无菌过滤（0.2m）组分蒸汽灭菌或辐射灭菌组分蒸汽灭菌或辐射灭菌内毒素内毒素来自某种生来自某种生物（通常为物（通常为水生）的细水生）的细胞壁残渣胞壁残渣暴露一段时间之后的暴露一段时间之后的湿设备更换零部件或湿设备更换零部件或者容器者容器/密封装置密封装置热氢氧化钠溶液热氢氧化钠溶液高温（高温（200）根据时）根据时间决定间决定27污染的来源与控制人员 A/B级洁净区：应当用头罩将所有头发以及级洁净区：应当用头罩将所有头发以及胡须等相关部位胡须等相关部位全部全部遮盖，头罩应当塞进遮盖，头罩应当塞进衣领内，应当戴口罩以防散发飞沫，必要衣领内，应当戴口罩以防散发飞沫，必要时时戴防护目镜戴防护目镜。应当戴经灭菌且无颗粒物。应当戴经灭菌且无颗粒物（如滑石粉）散发的橡胶或塑料手套，穿（如滑石粉）散发的橡胶或塑料手套，穿经灭菌或消毒的脚套，裤腿应当塞进脚套经灭菌或消毒的脚套，裤腿应当塞进脚套内，袖口应当塞进手套内。工作服应为内，袖口应当塞进手套内。工作服应为灭灭菌的连体工作服菌的连体工作服，不脱落纤维或微粒，并，不脱落纤维或微粒，并能滞留身体散发的微粒。能滞留身体散发的微粒。应当按照操作规程更衣和洗手，尽可能应当按照操作规程更衣和洗手，尽可能减少对洁净区的污染或将污染物带入洁净减少对洁净区的污染或将污染物带入洁净区。区。风箱效应风箱效应28污染的来源与去除设备湿热灭菌湿热灭菌 所有的带灭菌物品均须按规定的要求处理，所有的带灭菌物品均须按规定的要求处理，以获得良好的灭菌效果，灭菌工艺的设计以获得良好的灭菌效果，灭菌工艺的设计应当保证符合灭菌要求。应当保证符合灭菌要求。 应当通过验证确认灭菌设备腔室内待灭菌应当通过验证确认灭菌设备腔室内待灭菌产品和物品的装载方式。产品和物品的装载方式。气体层、水层、金属层气体层、水层、金属层洗瓶机、隧道式烘箱、灌装机、冻干机、洗瓶机、隧道式烘箱、灌装机、冻干机、轧盖机轧盖机29污染的来源与去除物料无菌连接无菌连接产品的转运产品的转运无菌生产所用的包装材料、容器、设备和无菌生产所用的包装材料、容器、设备和任何其它物品都应当灭菌，并通过双扉灭任何其它物品都应当灭菌，并通过双扉灭菌柜进入无菌生产区，或以其它方式进入菌柜进入无菌生产区，或以其它方式进入无菌生产区，但应当避免引入污染。无菌生产区，但应当避免引入污染。30污染的来源与去除环境厂房和车间设计厂房和车间设计压差设计压差设计空气流型空气流型环境微生物监测数据，空气悬浮粒子监环境微生物监测数据，空气悬浮粒子监测数据测数据清洁与消毒清洁与消毒 确保有效接触时间确保有效接触时间 避免消毒液失效染菌了还在使用避免消毒液失效染菌了还在使用 消毒液浓度消毒液浓度31洁净环境生产区域表面消毒技术32清洗过程设计清洗剂和清洗机制清洗剂和清洗机制清洗参数清洗参数清洗方法清洗方法可去除的污物可去除的污物需要清洗的设备需要清洗的设备残留限值残留限值33清洗-案例分析手工清洗手工清洗将清洗剂按照体积比配制成相应将清洗剂按照体积比配制成相应浓度的溶液，现将清洗剂和水按照相应的浓度的溶液，现将清洗剂和水按照相应的体积分别量好，然后将清洗剂缓慢的倒入体积分别量好，然后将清洗剂缓慢的倒入量好体积的水中，并轻轻搅拌直到均匀。量好体积的水中，并轻轻搅拌直到均匀。配制好的溶液可以进行零部件和小器具的配制好的溶液可以进行零部件和小器具的清洗，可以采用尼龙刷或洁净抹布进行清清洗，可以采用尼龙刷或洁净抹布进行清洗擦拭。如果油污或残留较重，可以采用洗擦拭。如果油污或残留较重，可以采用提高相应的清洗剂浓度来达到清洗效果。提高相应的清洗剂浓度来达到清洗效果。34清洗-案例分析搅拌浸泡（适用于大型的罐体设备）搅拌浸泡（适用于大型的罐体设备）将罐体用水冲洗掉大部分可见残将罐体用水冲洗掉大部分可见残留，然后向罐体内加入水，然后将相应的留，然后向罐体内加入水，然后将相应的清洗剂溶液倒入水中，使得最终的浓度，清洗剂溶液倒入水中，使得最终的浓度，开启搅拌，让其工作开启搅拌，让其工作1小时（如果可以连接小时（如果可以连接管路，可以使用循环泵进行密闭循环），管路，可以使用循环泵进行密闭循环），使得残留溶剂在清洗剂中，如果还有部分使得残留溶剂在清洗剂中，如果还有部分残留，需要再人工进行刷洗。如果残留较残留，需要再人工进行刷洗。如果残留较为严重，可以提高浓度。为严重，可以提高浓度。35消毒、灭菌过氧化氢过氧化氢-过氧乙酸混合物过氧乙酸混合物快速、光谱活性，可杀孢子快速、光谱活性，可杀孢子同效果相当的氧化剂相比腐蚀性小同效果相当的氧化剂相比腐蚀性小对人员较安全对人员较安全可自灭菌可自灭菌局限局限对软金属有腐蚀性对软金属有腐蚀性需要预先清洁需要预先清洁对温度敏感对温度敏感刺激性气味刺激性气味36擦拭法擦拭法抹布、拖把材质抹布、拖把材质接触时间接触时间8字模式，双桶法字模式，双桶法喷洒喷洒从最清洁区域到最脏的区域从最清洁区域到最脏的区域从顶部到底部从顶部到底部从最关键表面到最不关键表面从最关键表面到最不关键表面37洁净室环境监控38洁净状态的维持洁净状态的维持通常依靠以下几类屏障洁净状态的维持通常依靠以下几类屏障光滑洁净的表面光滑洁净的表面气锁气锁防护性着装（头罩、护目镜、操作服、脚套、防护性着装（头罩、护目镜、操作服、脚套、手套）手套）空调系统空调系统除此之外，人员的正确行为和恰当的消毒措除此之外，人员的正确行为和恰当的消毒措施也必不可少施也必不可少39隔离器 较小的封闭空间，操作者不进入较小的封闭空间，操作者不进入 关键工艺核心区（关键工艺核心区（A级）位于级）位于D级背景环境级背景环境下下 操作者只在停产期间打开设备。人通过手操作者只在停产期间打开设备。人通过手套箱进行操作，密闭的工艺加料套箱进行操作，密闭的工艺加料 去除微生物污染的方式为对隔离器内部进去除微生物污染的方式为对隔离器内部进行气雾或蒸汽消毒，以及对隔离器内部表行气雾或蒸汽消毒，以及对隔离器内部表面局部消毒面局部消毒 操作者与无菌工艺核心相互隔离，使用隔操作者与无菌工艺核心相互隔离，使用隔离罩、窗、手套箱、更换配件和部件的传离罩、窗、手套箱、更换配件和部件的传递口递口40制药用水系统的微生物学监控41制药用水的种类饮用水：为天然水经净化处理所得的水。饮用水：为天然水经净化处理所得的水。纯化水：为饮用水经蒸馏法、离子交换法、纯化水：为饮用水经蒸馏法、离子交换法、反渗透法或其他适宜的方法制备的制药用反渗透法或其他适宜的方法制备的制药用水。水。注射用水：为纯化水经蒸馏所得的水，应符注射用水：为纯化水经蒸馏所得的水，应符合细菌内毒素试验要求。合细菌内毒素试验要求。灭菌注射用水：为注射用水按照注射剂生产灭菌注射用水：为注射用水按照注射剂生产工艺制备所得。工艺制备所得。42水系统的微生物污染来源原料水原料水有机物、硬度、碱度、微生物有机物、硬度、碱度、微生物外源性污染外源性污染系统未与外界空气隔绝系统未与外界空气隔绝管道的连接泄漏管道的连接泄漏储罐上的呼吸口为使用过滤器储罐上的呼吸口为使用过滤器过滤器泄漏过滤器泄漏倒流污染，如出水口污染后发生倒流倒流污染，如出水口污染后发生倒流排气口堵塞排气口堵塞维护和维修后，如更换活性炭和树脂的颗粒维护和维修后，如更换活性炭和树脂的颗粒残留残留43水系统的微生物污染来源内源性污染内源性污染设备对微生物的吸附并形成生物膜设备对微生物的吸附并形成生物膜配水管道的内表面、阀门等附着微生物配水管道的内表面、阀门等附着微生物水系统中的微生物一般浮游在水中或附着在水系统中的微生物一般浮游在水中或附着在管壁或罐壁上。附着在管壁或罐壁上时称管壁或罐壁上。附着在管壁或罐壁上时称其为生物膜，它能持续脱落微生物其为生物膜，它能持续脱落微生物44日常监测取样频率：关键点每周一次，非关键点每月取样频率：关键点每周一次，非关键点每月一次一次消毒频率：每周一次蒸汽灭菌，一段时间未消毒频率：每周一次蒸汽灭菌，一段时间未使用，再次使用前应经过验证使用，再次使用前应经过验证注射用水：电导率，总有机碳，微生物限度，注射用水：电导率，总有机碳，微生物限度，细菌内毒素细菌内毒素45谢 谢！46