实验实验6 6淀粉酶的固定化及淀淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测粉水解作用的检测1 1、酶制剂的概念和种类、酶制剂的概念和种类酶制剂酶制剂含有酶的制品含有酶的制品定义：定义：多酶片、加酶洗衣粉中的蛋白酶多酶片、加酶洗衣粉中的蛋白酶和脂肪酶和脂肪酶种类：种类：A A、液体酶制剂、液体酶制剂治疗某些胃病的胃蛋白酶液治疗某些胃病的胃蛋白酶液B B、固体酶制剂、固体酶制剂Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.三、三、 -淀粉淀粉酶酶的固定化及淀粉水解作用的的固定化及淀粉水解作用的检测检测n实验实验目的目的n1、制、制备备固定化固定化-淀粉淀粉酶酶n2、进进行淀粉水解的行淀粉水解的测测定定Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.设备及用品设备及用品:5ml塑料注射器塑料注射器 50ml烧杯烧杯 滴管滴管 自行车用自行车用气门心及夹子气门心及夹子 注射器架注射器架 试管及微量离心管试管及微量离心管3支支材料材料:1. -淀粉酶的固定化淀粉酶的固定化:在烧杯中将在烧杯中将5mga-淀粉酶溶于淀粉酶溶于4ml蒸蒸馏水中馏水中.由于酶不纯由于酶不纯,可能有些不溶物可能有些不溶物.再加入再加入5g石英砂石英砂,不不时搅拌时搅拌,30min后装入后装入1支下端接有气门心并用夹子封住的支下端接有气门心并用夹子封住的注射器中注射器中(石英砂体积约石英砂体积约4ml)。用。用10倍体积的蒸馏水洗涤倍体积的蒸馏水洗涤此注射器以此注射器以除去未吸附的游离淀粉酶除去未吸附的游离淀粉酶,流速为流速为1ml/min.2.可溶性淀粉溶液可溶性淀粉溶液:取取50ml可溶性淀粉溶于可溶性淀粉溶于100ml热水中热水中,搅拌均匀搅拌均匀.3. 5mmol/L KI-I2溶液：溶液：称取称取0.127g碘和碘和0.83g碘化钾。加碘化钾。加蒸馏水蒸馏水100ml完全溶解后装入滴瓶中完全溶解后装入滴瓶中Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.实验原理：本实验是用实验原理：本实验是用吸附法将吸附法将 -淀粉酶固定在石英砂淀粉酶固定在石英砂上，上，一定浓度的淀粉溶液经过固定化酶柱后，可使淀粉水解成糊精，一定浓度的淀粉溶液经过固定化酶柱后，可使淀粉水解成糊精，用淀粉指示剂溶液测试，用淀粉指示剂溶液测试，流出物呈红色流出物呈红色表明水解产物糊精生成表明水解产物糊精生成淀粉淀粉-淀粉酶淀粉酶淀粉酶淀粉酶糊精糊精淀粉酶淀粉酶淀粉酶淀粉酶葡萄糖葡萄糖糖化淀粉酶糖化淀粉酶糖化淀粉酶糖化淀粉酶麦芽糖麦芽糖这里使用的是这里使用的是枯草杆菌的枯草杆菌的a-淀粉酶淀粉酶，其作用的最适温度为，其作用的最适温度为5075；最适；最适PH为为5.57.5遇碘显蓝色遇碘显蓝色遇碘显红色遇碘显红色遇碘不显色遇碘不显色实验原理实验原理Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.实验装置装置Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.实验步骤实验步骤1.将灌注了固定化酶的将灌注了固定化酶的注射器放在注射器架上注射器放在注射器架上,用滴管用滴管滴加淀粉溶液滴加淀粉溶液,使淀粉溶液使淀粉溶液0.3ml/min的流速过柱。在流出的流速过柱。在流出5ml后接收后接收0.5ml流出液流出液,加入加入12滴滴KI-I2溶液溶液,观观察颜色察颜色.用水稀释用水稀释1倍后倍后再观察颜色再观察颜色.反应柱反应柱固定化酶固定化酶气门心气门心夹子夹子5ml注射器注射器淀粉淀粉Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.2.实验后实验后,用用10倍柱体积的蒸馏水洗涤此柱倍柱体积的蒸馏水洗涤此柱,放置在放置在4冰箱中冰箱中,几天后再重复上述实验几天后再重复上述实验,看是否有相同的结果看是否有相同的结果.Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.1 2 3 4Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.课后练习课后练习 1.如何证明洗涤固定化酶柱的流出液中没有淀粉酶如何证明洗涤固定化酶柱的流出液中没有淀粉酶?2.耐高温的淀粉酶有哪些可能的用途耐高温的淀粉酶有哪些可能的用途?可在试管中加入可在试管中加入1ml可溶性淀粉，再加几滴淀粉酶柱可溶性淀粉，再加几滴淀粉酶柱流出液，保温几分钟后用碘液检验。如仍显蓝色，则流出液，保温几分钟后用碘液检验。如仍显蓝色，则流出液中没有淀粉酶了。流出液中没有淀粉酶了。可以在高温下使淀粉水解快，而且酶不会因高温上而可以在高温下使淀粉水解快，而且酶不会因高温上而失活，所以可在一些需要高温加热同时又要水解淀粉失活，所以可在一些需要高温加热同时又要水解淀粉的反应中使用。的反应中使用。Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.补充：固定化细胞的补充：固定化细胞的优点优点： （1）不需要进行酶的分离纯化，减少起始投资。）不需要进行酶的分离纯化，减少起始投资。 （2）酶的回收率高，酶在原有的细胞环境下，稳）酶的回收率高，酶在原有的细胞环境下，稳定性更高。定性更高。 （3）细胞保持生命活动状态，细胞中的辅助因子）细胞保持生命活动状态，细胞中的辅助因子可自动再生。可自动再生。 （4）细胞含有多酶体系。可催化一系列的反应。）细胞含有多酶体系。可催化一系列的反应。 （5）反应中抗污染能力强。）反应中抗污染能力强。 Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.1 1、研究认为，用固定化酶技术处理污、研究认为，用固定化酶技术处理污染物是很有前途的。如将从大肠杆菌得染物是很有前途的。如将从大肠杆菌得到的磷酸三酯酶固定到尼龙膜上制成制到的磷酸三酯酶固定到尼龙膜上制成制剂，可以用来降解残留在土壤中的有机剂，可以用来降解残留在土壤中的有机磷农药，与用微生物降解相比，其作用磷农药，与用微生物降解相比，其作用不需要适宜的（不需要适宜的（ ）A A、温度、温度 B B、PHPHC C、水分、水分 D D、营养、营养DEvaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.2 2、目前，日用化工厂大量生产的酶、目前，日用化工厂大量生产的酶制剂，其中的酶大都来自制剂，其中的酶大都来自A A、化学合成、化学合成 B B、动物体内、动物体内 C C、植物体内、植物体内 D D、微生物体内、微生物体内 DEvaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.3.3.酶的固定方法不包括酶的固定方法不包括( )( )。A. A. 将酶吸附在固体表面上将酶吸附在固体表面上 B B将酶相互连接起来将酶相互连接起来C C将酶包埋在细微网格里将酶包埋在细微网格里 D D将酶制成固体酶制剂，如加酶洗衣粉将酶制成固体酶制剂，如加酶洗衣粉中的酶中的酶DEvaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.5. 5. 关于固定化酶的叙述不正确的是关于固定化酶的叙述不正确的是 ( ) ( )。A A既能与反应物接触，又能与反应物分离既能与反应物接触，又能与反应物分离 B B固定在载体上的酶可被反复利用固定在载体上的酶可被反复利用C C可催化一系列反应可催化一系列反应 D D酶的活性和稳定性受到限制酶的活性和稳定性受到限制CEvaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.