ceRNA机制与研究方案介绍目录2ceRNA机制的生物学功能RNA转录本通过与编码RNA竞争性的结合microRNA，从而稀释掉细胞内游离microRNA的浓度，降低microRNA对编码RNA的抑制，进而提高目的基因的表达量6ceRNA的种类7ceRNA部分研究结果8ceRNA的国自然面上项目申请状况9ceRNA的课题申请状况10ceRNA的方案设计p ceRNA关系对的获取及基本qPCR分析；p ceRNA关系对中各成分与疾病相关性验证；p ceRNA关系对中的竞争性关系的验证；11ceRNA关系对的获取12ceRNA的验证试验（LncRNA为例）13实例分享一：p LncRNA pagbc对miRNA的海绵调控作用促进胆囊肿瘤发生Wu X, Wang F, Li H, et al. LncRNAPAGBC acts as a microRNA sponge and promotes gallbladder tumorigenesisJ. Embo Reports, 2017.（IF 8.568）高通量高通量测序序+qPCR验证+LncRNA功能功能验证14文献一技术路线15目的LncRNA的确定p 高通量测序pLncRNA+miRNA测序：9对胆囊癌与癌旁组织p选取5条LncRNA在26对癌与癌旁组织进行qPCR验证p 构建lncRNA-PAGBC-mRNA的基因共表达模型 16目的LncRNA的确定验证LncRNA-PAGBC在大样本中的表达p在60个癌与癌旁组织中进行lncRNA-PAGBC表达量的统计分析，证明lncRNA-PAGBC与癌症的相关性17目的LncRNA的确定对77个病例进行关于lncRNA-PAGBC的生存分析对lncRNA-PAGBC进行两个细胞系中进行亚细胞定位18目的LncRNA的确定p在胆囊癌细胞系（GBC、NOZ）中进行lncRNA PAGBC 沉默，分析细胞增殖及裸鼠成瘤19目的LncRNA的确定p在胆囊癌细胞系中进行lncRNA PAGBC 过表达，分析癌细胞的迁移、侵袭和成瘤能力20LncRNAPAGBC的与miRNA关系对确定p整合LncRNA与miRNA数据，预测出PAGBC的6条靶miRNAp选用双荧光素酶报告系统进行关系对验证（293T细胞、NOZ细胞） 21LncRNAPAGBC的靶基因确定p结合miR-133b、miR-511靶基因预测以及篇首的高通量数据，推测出靶基因SOX4 和PIK3R3p癌细胞中分别转入LncRNAPAGBC的突变体（分别针对miR-133b、miR-511结合位点）后，进行靶基因表达检测 22LncRNAPAGBC的目的基因确定癌细胞中分别转入LncRNAPAGBC的突变体、过表达+miRNA inhibitor、miRNA mimic，进行靶基因表达检测23结论1.通过高通量测序发现与胆囊癌相关的特定LncRNA，经过在病例中的检测初步筛选出目的LncRNA；2.沉默、过表达LncRNA在体内及体外的功能试验，验证出LncRNAPAGBC与胆囊癌细胞的增殖有关系；3.通过生信分析从LncRNAPAGBC预测出6个靶miRNA中，通过体内、体外试验确定出其靶标miR-133b、miR-511；4.LncRNAPAGBC通过竞争性的与miR-133b、miR-511结合，促进SOX4 和PIK3R3表达升高，进而活化了AKT/mTOR通路；24plncRNA HOTAIR在肾癌细胞中通过miR-217调节HIF-1/ Axl信号途径p高通量高通量测序序+qPCR验证+LncRNA功能功能验证Quan H, Ou L, Wei Z, et al. LncRNA HOTAIR regulates HIF-1/AXL signaling through inhibition of miR-217 in renal cell carcinomaJ. Cell Death & Disease, 2017, 8(5):e2772.（IF 5.965）实例分享二：25研究路线26p皮肤黑色素瘤中的竞争性内源RNA调控分子机制p高通量高通量测序序+qPCR验证+circRNA功能功能验证Xu S, Jing S, Sheng Y, et al. Integrative analysis of competing endogenous RNA network focusing on long noncoding RNA associated with progression of cutaneous melanomaJ. Cancer Medicine, 2018(8 Suppl). （IF 3.362）实例分享三：27方案设计测序+qPCR：15W；IF：4分左右；功能试验：15-25W；IF：3-5分左右；测序+qPCR+功能试验：35-40W；IF：6-8分281.Salmena L, Poliseno L, Tay Y, et al. ceRNA hypothesis: The Rosetta Stone of a hidden RNA language?J. Cell, 2011, 146(3):353-8.2.Thomson D W, Dinger M E. Endogenous microRNA sponges: evidence and controversyJ. Nature Reviews Genetics, 2016, 17(5):272.参考文献29感谢聆听！欢迎交流学习！感谢聆听！欢迎交流学习！30谢谢大家！感谢您的观看！ 欢迎批评指导！201932ppt资料 欢迎批评指导！201933ppt资料