第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章 特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色 弹力纤维较细，直径弹力纤维较细，直径0.2-10.2-1微米，且坚微米，且坚固，弹性大，容易伸展，纤维分枝连接成固，弹性大，容易伸展，纤维分枝连接成网，网，HEHE染色与胶原纤维着色相似，若用弹染色与胶原纤维着色相似，若用弹力纤维染色法，则可分辨的很清楚。力纤维染色法，则可分辨的很清楚。 Weigert氏弹力纤维染色法：氏弹力纤维染色法：u标本用标本用Zenker氏液，酒精或氏液，酒精或10%甲醛固定均可。甲醛固定均可。u石蜡或冰冻切片。石蜡或冰冻切片。u脱蜡至水。脱蜡至水。u水洗后，加入水洗后，加入Weigert氏染色液氏染色液2-6小时或更长的小时或更长的时间，一般依染色液的新旧而定时间，一般依染色液的新旧而定 。u取出后，直接浸入取出后，直接浸入1%盐酸酒精或酒精中进行分盐酸酒精或酒精中进行分化。化。u如需复染细胞核，可染于明矾苏木素溶液中如需复染细胞核，可染于明矾苏木素溶液中10分分钟。钟。u冲洗后，可再以冲洗后，可再以V G氏染液作对比染色氏染液作对比染色1-2分钟。分钟。u95%酒精分化、脱水、透明、封固。酒精分化、脱水、透明、封固。试剂配制：试剂配制：u盐基性复红（碱性品红）盐基性复红（碱性品红） 2gu间苯二酚（雷锁辛）间苯二酚（雷锁辛） 4gu蒸馏水蒸馏水 200mlu30%三氯化铁水溶液三氯化铁水溶液 25ml u95%酒精酒精 200mlu浓盐酸浓盐酸 4mlu先将盐基性复红（碱性品红）溶于先将盐基性复红（碱性品红）溶于200ml200ml的蒸馏水中，的蒸馏水中，u加入加入4-5g4-5g间苯二酚，加温煮沸（不停搅拌），间苯二酚，加温煮沸（不停搅拌），u然后加入然后加入25ml25ml的的30%30%三氯化铁水溶液，继续搅拌煮沸三氯化铁水溶液，继续搅拌煮沸2-52-5分钟，冷却后过滤倾去滤液，将滤纸及沉淀物置于温箱分钟，冷却后过滤倾去滤液，将滤纸及沉淀物置于温箱中烘干。中烘干。u而后将滤纸和干燥的沉淀物一并投入烧杯，加而后将滤纸和干燥的沉淀物一并投入烧杯，加200ml 95%200ml 95%酒精，小心隔水加热，徐徐搅拌使沉淀溶解，然后弃去酒精，小心隔水加热，徐徐搅拌使沉淀溶解，然后弃去滤纸冷却后，补足因加热蒸发的酒精。滤纸冷却后，补足因加热蒸发的酒精。u最后加入最后加入4ml4ml的盐酸即可应用。（对苯二酚可代的盐酸即可应用。（对苯二酚可代替间苯二替间苯二酚）。酚）。【注意事项注意事项】 WeigertWeigert氏弹力纤维染色的配制已有许多改变，盐氏弹力纤维染色的配制已有许多改变，盐基性复红（碱性品红）可由其它盐基性染料取代，基性复红（碱性品红）可由其它盐基性染料取代， 配制时如将结晶紫配制时如将结晶紫1 1克加盐基性复红克加盐基性复红1 1克，则弹力纤克，则弹力纤维染成兰绿色；全用甲紫或结晶紫，弹力纤维则呈暗维染成兰绿色；全用甲紫或结晶紫，弹力纤维则呈暗绿色。绿色。【染色结果染色结果】 弹力纤维蓝黑色，胶原纤维染成红色，肌纤维弹力纤维蓝黑色，胶原纤维染成红色，肌纤维染成黄色。染成黄色。第九章 特殊染色小动脉光镜图小动脉光镜图 ( (弹性染色弹性染色) )VerhoeffVerhoeff氏弹力纤维染色法：氏弹力纤维染色法：操作方法：操作方法：u切片常规脱蜡。切片常规脱蜡。uVerhoeff染液染液15-60分钟。分钟。u以以2%三氯化铁分化（镜下控制）。三氯化铁分化（镜下控制）。u水洗再以水洗再以95%酒精洗去碘。酒精洗去碘。u流水洗。流水洗。u以以HE或或VG氏染液复染。氏染液复染。u脱水、透明、封固。脱水、透明、封固。【染色结果染色结果】 弹力纤维蓝黑色，其它组织视复染而定。弹力纤维蓝黑色，其它组织视复染而定。u注意事项：注意事项： 这种染色法染液配制简单，但对微细弹这种染色法染液配制简单，但对微细弹力纤维不如力纤维不如Weigert氏效果好。氏效果好。试剂配制：试剂配制：u将将1 1克苏木素加热溶于克苏木素加热溶于20ml20ml的无水酒精，的无水酒精，u冷却后，加冷却后，加1%1%三氯化铁水溶液三氯化铁水溶液8ml8ml搅拌；搅拌；u再加入再加入 8ml8ml的的LugoiLugoi碘液（碘碘液（碘1 1克，碘化钾克，碘化钾2 2克，蒸馏水克，蒸馏水100ml100ml）搅拌混合而成。）搅拌混合而成。u染液仅可存放染液仅可存放2-32-3周。周。第九章第九章 特殊染色特殊染色u1.显示皮肤组织中弹力纤维的变化显示皮肤组织中弹力纤维的变化u2.显示鉴别心血管疾病显示鉴别心血管疾病u3.显示呼吸系统和肾脏疾病时弹力纤维的变化显示呼吸系统和肾脏疾病时弹力纤维的变化u4.对弹力纤维瘤的诊断有决定作用对弹力纤维瘤的诊断有决定作用四、四、Masson三色染色法三色染色法 MassonMasson三色染色法是由三色染色法是由MalloryMallory氏苯胺蓝氏苯胺蓝菊黄菊黄G G发展改良而来，但对于固定液有一定的发展改良而来，但对于固定液有一定的选择性，虽然任何固定液固定后的组织可进行选择性，虽然任何固定液固定后的组织可进行染色，但最好是用染色，但最好是用ZenkerZenker氏固定液或氏固定液或BouinBouin氏氏固定液固定组织。福尔马林固定的标本切片在固定液固定组织。福尔马林固定的标本切片在染色前以染色前以3%3%升汞作第二次固定一小时以上，则升汞作第二次固定一小时以上，则可增强着色效果。可增强着色效果。操作方法：操作方法：u(1)切片常规脱蜡至水，蒸馏水洗；切片常规脱蜡至水，蒸馏水洗；u(2)Weigent氏苏木素液染核氏苏木素液染核5分钟；分钟；u(3)自来水洗；自来水洗； u(4)1%盐酸分化盐酸分化u(5)自来水洗；自来水洗；u(6)丽春红丽春红-酸性品红溶液染酸性品红溶液染5-8分钟；分钟；u(7)1%(7)1%醋酸水溶液洗；醋酸水溶液洗；u(8)1%(8)1%磷钼酸分化（磷钼酸分化（1-31-3分钟）直到各种成分被染分钟）直到各种成分被染清晰（胶原纤维呈淡红色，肌纤维、纤维素呈鲜清晰（胶原纤维呈淡红色，肌纤维、纤维素呈鲜红色）红色）u(9)2%(9)2%亮绿液染亮绿液染2-52-5分钟（或用分钟（或用2%2%苯胺蓝水溶液替苯胺蓝水溶液替代）代）u(10)(10)水洗（快速）水洗（快速）u(11)(11)常规脱水、透明、封片。常规脱水、透明、封片。【染色结果染色结果】 胶原纤维胶原纤维绿色绿色(亮绿亮绿)（或（或苯胺蓝苯胺蓝,蓝色蓝色）肌肉、纤维素红色，红细胞橘黄色，核蓝肌肉、纤维素红色，红细胞橘黄色，核蓝黑色。黑色。第九章 特殊染色第九章 特殊染色试剂配制：试剂配制：1丽春红丽春红-品红溶液品红溶液u丽春红丽春红 0.7gu酸性品红酸性品红 0.30.5g u冰醋酸冰醋酸 1ml u蒸馏水蒸馏水 99ml 21%冰醋酸水溶液冰醋酸水溶液u冰醋酸冰醋酸 1mlu蒸馏水蒸馏水 99ml 3亮绿亮绿u亮绿亮绿 2.0gu冰醋酸冰醋酸 2mlu蒸馏水蒸馏水 98ml第二节第二节 脂类染色法脂类染色法u脂肪和类脂（磷脂、糖脂、固醇脂等）统称为脂类。它是构成人体组织的正常成分，不溶于水而易溶于酒精、乙醚、氯仿等脂溶剂中。在化学组成上，脂类属于脂肪酸的酯或与这些酯有关的物质。脂类的主要功能是氧化供能。脂肪主要存积于脂肪组织中，并以油滴状的微粒存在脂肪细胞浆内。u在病理检验中，脂类染色法最常用以证明脂肪变性，脂肪栓子以及肿瘤的鉴别。脂类染色使用最广泛的染料是苏丹染料，最常用的有苏丹，苏丹，苏丹黑及油红O等。脂肪被染色，实际上是苏丹染料被脂肪溶解吸附而呈现染料的颜色。经研究认为组织中脂质在液态或半液态时，对苏丹染料着色效果最好。根据这一原理，适当提高温度（37-60）对组织切片染色效果是有好处的。一、油红染色法：一、油红染色法：试剂配制：u油红O 0.5gu异丙醇（含量98%） 100ml此为油红饱和液，可长期保存备用。染色步骤：染色步骤：u冰冻切片冰冻切片u蒸馏水充分洗涤。蒸馏水充分洗涤。u油红稀释液染油红稀释液染10-1510-15分钟，避光、密封。分钟，避光、密封。 油红稀释液的配制：油红稀释液的配制： 取油红饱和液取油红饱和液6 6毫升，加蒸馏水毫升，加蒸馏水4 4毫升，静置毫升，静置5-105-10分钟分钟 后过滤后使用。后过滤后使用。u60%60%乙醇镜下分化至间质清晰。乙醇镜下分化至间质清晰。u水洗。水洗。uMarryMarry氏苏木素复染核。氏苏木素复染核。u水洗。水洗。u甘油或甘油明胶封片。甘油或甘油明胶封片。【结果结果】 脂肪呈鲜红色，细胞核呈蓝色，间质无色注意事项：注意事项：u油红染色时应避免试剂挥发过多，否则易形成背景沉淀。u60%乙醇分化，应于镜下控制至脂肪组织呈鲜红色，间质无色时为度。第九章第九章 特殊染色特殊染色操作方法：操作方法：u固定于10%甲醛的组织。u水洗后采用冰冻或石蜡切片。u经蒸馏水后，浸染于Harris苏木素或明矾苏木素中淡染1-2分钟。u自来水冲洗。u水洗后，移入70%酒精5秒钟。u投入苏丹染液中约30分钟或更长时间，置于56温箱中。u在70%酒精中洗涤5-10秒钟。u洗于蒸馏水中，将切片周围的水分小心擦掉。u甘油明胶封固。试剂配制：试剂配制：u1. 苏丹染液配法：将0.15克苏丹溶解于100ml70%酒精或纯丙酮和70%酒精混合液中（各50ml），临用时过滤，所得滤液即为饱和浓度。 注：浸染时，容器必须盖好，否则酒精或丙酮挥发，染料沉淀。注：浸染时，容器必须盖好，否则酒精或丙酮挥发，染料沉淀。u2.甘油明胶配制： 明胶 40g 蒸馏水 210ml 甘油 250ml 石碳酸结晶 5mlu先将明胶浸入蒸馏水中先将明胶浸入蒸馏水中2小时或更长时间，然后加甘油和石碳酸，小时或更长时间，然后加甘油和石碳酸，加热加热15分钟，摇搅直至混合液均匀为止。分钟，摇搅直至混合液均匀为止。【结果】 脂肪呈橙红色，胆脂素呈淡红色，脂肪酸不着色，细胞核呈蓝色。第九章 特殊染色第九章 特殊染色苏丹苏丹苏丹苏丹(Sudan )染色法：染色法：u苏丹又名猩红，是苏丹的衍生物，作为脂肪染剂，经各地实验证明，其结果优于苏丹。u其染色步骤与苏丹染法完全相同，从略。应用：应用：u（1）心、脑、肾等组织器官的脂肪栓塞，脂肪染色即可判定栓子是否为脂肪滴。u（2）心脏、肝脏等脂肪变性：脂肪染色可显示变性细胞内的脂滴。u（3）脂肪肉瘤与其它间叶组织的恶性肿瘤的鉴别：脂肪染色即可显示脂肪肉瘤瘤细胞内产生的脂滴。脂肪栓塞（脂肪栓塞（Fat embolism）第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色【结果结果】u糖原和PAS反应阳性物质成红色，细胞核蓝色。第九章 特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色第九章第九章 特殊染色特殊染色操作方法：操作方法：u切片常规脱蜡入水。切片常规脱蜡入水。u3%醋酸液洗醋酸液洗2分钟，入分钟，入1%阿利新兰醋酸液阿利新兰醋酸液（PH2.5）10-20分钟。分钟。u蒸馏水洗。蒸馏水洗。u按按P.A.S染色程序。染色程序。u苏木素淡染苏木素淡染2-3分钟，水洗。分钟，水洗。u常规脱水、封片。常规脱水、封片。 【结果】 酸性粘液呈蓝色，中性粘液呈红色，混合性粘液呈紫色，细胞核呈淡蓝色。第九章 特殊染色粘液染色应用：粘液染色应用：u （1）水肿与粘液变性：皮肤真皮水肿与粘液变性有时较难以从）水肿与粘液变性：皮肤真皮水肿与粘液变性有时较难以从组织学上区别，染粘液有助于鉴别。组织学上区别，染粘液有助于鉴别。u （2）硬皮病与硬肿病的鉴别：后者胶原纤维增生，纤维之间粘）硬皮病与硬肿病的鉴别：后者胶原纤维增生，纤维之间粘液阳性物质增多，有助于这两者之间的鉴别。液阳性物质增多，有助于这两者之间的鉴别。u （3）粘液细胞癌的诊断与鉴别：胃活检时，印戒细胞与黄瘤细）粘液细胞癌的诊断与鉴别：胃活检时，印戒细胞与黄瘤细胞或泡沫细胞不易鉴别，染粘液即可确定是否为印戒细胞。胞或泡沫细胞不易鉴别，染粘液即可确定是否为印戒细胞。u （4）胃癌分型：有人将胃癌分为肠型及胃型，这种分型与流行）胃癌分型：有人将胃癌分为肠型及胃型，这种分型与流行病、年龄及预后有一定关系，利用病、年龄及预后有一定关系，利用AB/PBS染色，胃癌细胞分泌染色，胃癌细胞分泌中性粘液为胃型，分泌酸性粘液为肠型。中性粘液为胃型，分泌酸性粘液为肠型。第九章 特殊染色第九章 特殊染色