实验四小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬实验 1 细胞的胞吞胞吐是细胞进行新陈代谢的方式之一。高等动物的细胞在摄取营养物质的同时，有的细胞如单核细胞和巨噬细胞还有通过识别与吞噬细菌、病毒等外来物质的作用来达到机体防御的功能。本实验通过预先激活腹腔巨噬细胞，然后腹腔注射鸡红细胞，从而引起腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞。通过光镜可清楚地观察到这一有趣的现象。实验简介实验简介2目的要求1了解小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的原理2熟悉细胞吞噬作用的基本过程3基本原理v高高等等动动物物体体内内的的巨巨噬噬细细胞胞、单单核核细细胞胞和和嗜嗜中中性性粒粒细细胞胞，具具有有吞吞噬噬的的功功能能。它它们们广广泛泛分分布布在在组组织织和和血血液液中中，在在机机体体的的非非特特异异免免疫疫功功能能中中起起着着重重要要的的作作用用。当当病病原原微微生生物物或或其其它它异异物物侵侵入入机机体体时时，能能招招引引巨巨噬噬细细胞胞，而而巨巨噬噬细细胞胞又又具具有有趋趋化化性性，它它通通过过产产生生活活跃跃的的变变形形运运动动，主主动动向向病病原原体体和和异异物物移移行行聚聚集集，首首先先把把异异物物吸吸附附在在细细胞胞表表面面，随随之之，吸吸附附区区域域的的细细胞胞膜膜向向内内凹凹陷陷，伸伸出出伪伪足足包包围围异异物物，并并吞吞入入胞胞质质，形形成成吞吞噬噬泡泡，继继而而在在细细胞胞质质中中的的初初级级溶溶酶酶体体与与吞吞噬噬泡泡融融合合，形成吞噬溶酶体，把病原体杀死，异物消化分解。形成吞噬溶酶体，把病原体杀死，异物消化分解。 4v 血细胞包括红细胞、白细胞和血小板。根据白细胞的细胞质血细胞包括红细胞、白细胞和血小板。根据白细胞的细胞质 内是否含有特殊颗粒，把白细胞分为有粒、无粒两类。含有内是否含有特殊颗粒，把白细胞分为有粒、无粒两类。含有 颗粒的白细胞为粒细胞，按瑞色染色时所染成的不同颜色分为颗粒的白细胞为粒细胞，按瑞色染色时所染成的不同颜色分为 中性、嗜酸性和嗜碱性三种粒细胞。无粒白细胞又分为淋巴中性、嗜酸性和嗜碱性三种粒细胞。无粒白细胞又分为淋巴 细胞和单核细胞。细胞和单核细胞。v 白细胞白细胞500010000/ml个。嗜中性粒细胞数量最多，占嗜中性粒细胞数量最多，占5070 常穿出血管，聚集于炎症组织的周围，作变形运动，吞噬细菌。常穿出血管，聚集于炎症组织的周围，作变形运动，吞噬细菌。 体内有炎症时，它的数量就增多。嗜酸性粒细胞数量最少。淋巴体内有炎症时，它的数量就增多。嗜酸性粒细胞数量最少。淋巴 细胞与免疫有密切关系，患结核病时，淋巴细胞明显增加。单核细胞与免疫有密切关系，患结核病时，淋巴细胞明显增加。单核 细胞是血液中最大的细胞，变形活动非常活跃，能吞噬细菌和细胞是血液中最大的细胞，变形活动非常活跃，能吞噬细菌和 异物。异物。单核细胞穿出血管到结缔组织中可变为巨噬细胞。单核细胞穿出血管到结缔组织中可变为巨噬细胞。 v 嗜酸性粒细胞具有粗大的嗜酸性颗粒，颗粒内含有过氧化物酶嗜酸性粒细胞具有粗大的嗜酸性颗粒，颗粒内含有过氧化物酶 和酸性磷酸酶；嗜碱性粒细胞中有嗜碱性颗粒，内含组织胺、和酸性磷酸酶；嗜碱性粒细胞中有嗜碱性颗粒，内含组织胺、 肝素与肝素与5-羟色胺等生物活性物质羟色胺等生物活性物质 ；中性粒细胞具有变形运动和；中性粒细胞具有变形运动和 吞噬活动的能力。吞噬活动的能力。5噬碱性粒细胞噬酸性粒细胞噬中性粒细胞淋巴细胞单核细胞6实验用品实验用品1器材：显微镜、解剖盘、剪刀、镊子、注射器、载玻片、盖玻片、吸管等2试剂： 0.85%生理盐水；阿氏（Alsever）血液保存液；6%的淀粉肉汤。3材料：小白鼠；1%鸡红细胞悬液7方法与步骤v鸡翼下静脉取血后，用Alsever以1:4比例保存于4度（可保存一周）。实验前加生理盐水离心两次，然后根据获得的红细胞的体积加入适量的生理盐水，调至鸡红细胞浓度为1%。8实验前1天，向小鼠腹腔注射1ml淀粉肉汤(预先激活腹腔巨噬细胞：诱导腹腔内产生较多的巨噬细胞 )，实验前30分钟，向腹腔内注射1ml1%的鸡红细胞。淀粉肉汤为异物，淀粉肉汤为异物，但是无毒害，可刺但是无毒害，可刺激小鼠巨噬细胞的激小鼠巨噬细胞的产生，并且淀粉肉产生，并且淀粉肉汤里含有台盼蓝，汤里含有台盼蓝，巨噬细胞吞噬后会巨噬细胞吞噬后会被染成蓝色，便于被染成蓝色，便于观察。观察。 9注射后30分钟，处死小鼠。（右手抓住鼠尾，用力向后拉，左手拇指与食指同时向下按住鼠头，使脊髓与脑髓间断开）吸取腹腔液10在干净的载玻片上滴加一滴生理盐水，向其中滴加一滴腹腔液，静置10分钟，使腹水细胞贴壁，弃去生理盐水，待其稍干后，进行瑞氏染色。11 观察时，将视野光线调暗。在高倍镜下，先分辨清鸡红细胞和观察时，将视野光线调暗。在高倍镜下，先分辨清鸡红细胞和巨噬细胞。鸡红细胞为淡黄色、椭圆形、有核的细胞。而数量较巨噬细胞。鸡红细胞为淡黄色、椭圆形、有核的细胞。而数量较多、体积较大圆形或不规则的细胞，其表面有许多似毛刺状的小突多、体积较大圆形或不规则的细胞，其表面有许多似毛刺状的小突起（伪足），胞质中有数量不等的蓝色颗粒（为吞入的含台盼蓝起（伪足），胞质中有数量不等的蓝色颗粒（为吞入的含台盼蓝淀粉肉汤形成的吞噬泡）即为巨噬细胞。变换视野，仔细观察巨噬淀粉肉汤形成的吞噬泡）即为巨噬细胞。变换视野，仔细观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的过程。可见有的鸡红细胞（一至多个）紧贴附细胞吞噬鸡红细胞的过程。可见有的鸡红细胞（一至多个）紧贴附于巨噬细胞的表面；有的巨噬细胞已将于巨噬细胞的表面；有的巨噬细胞已将1至数个红细胞部分吞入；至数个红细胞部分吞入；有的巨噬细胞已吞入有的巨噬细胞已吞入1个或几个红细胞在胞质中刚刚形成椭圆形的个或几个红细胞在胞质中刚刚形成椭圆形的吞噬泡；有的巨噬细胞内的吞噬泡体积缩小，并呈现圆形，这是吞噬泡；有的巨噬细胞内的吞噬泡体积缩小，并呈现圆形，这是与初级溶酶体发生融合，泡内物正在被消化分解。与初级溶酶体发生融合，泡内物正在被消化分解。 12未被吞噬的鸡红细胞未被吞噬的鸡红细胞吞噬了鸡红细胞吞噬了鸡红细胞的吞噬细胞的吞噬细胞将染色后的涂片置于显微镜油镜下观察，绘图记录。将染色后的涂片置于显微镜油镜下观察，绘图记录。 13实验结果的观察实验结果的观察 观察细胞的形态特征，注意不同细胞的大小观察细胞的形态特征，注意不同细胞的大小比例和形状；鸡红细胞和巨噬细胞的区分；吞比例和形状；鸡红细胞和巨噬细胞的区分；吞噬前后的大小和形状的不同。注意鸡红细胞被噬前后的大小和形状的不同。注意鸡红细胞被吞噬后形态上的变化：多观察不到核，且形态吞噬后形态上的变化：多观察不到核，且形态变圆。变圆。 吞噬过程的观察：吸附、正在吞噬、吞噬后、吞噬过程的观察：吸附、正在吞噬、吞噬后、消化后（一般观察不到正在吞噬的过程，想想消化后（一般观察不到正在吞噬的过程，想想为什么）。为什么）。14注意事项注意事项v小鼠处死后立即注人生理盐水 2ml，轻揉腹部，可获得较多的巨噬细胞。15作业v高倍镜下绘处在不同吞噬阶段的巨噬细胞图各一个，示吞噬作用的过程。v计算吞噬细胞的吞噬指数和吞噬百分数。 吞噬百分率100个巨噬细胞中内含鸡红细胞的巨噬细胞数/100个巨噬细胞总数 吞噬指数100个巨噬细胞吞噬的鸡红细胞总数/100个巨噬细胞总数1、实验报告、实验报告162 2、思考题、思考题、思考题、思考题v实验前一天，给小白鼠注射含淀粉肉汤的目的是什么？171、能否用生理盐水、葡萄糖等代替淀粉肉汤？能否单纯注射台盼蓝？18不能用生理盐水、葡萄糖代替淀粉肉汤（可用蛋白胨等代替），因为所有细胞都具有生理盐水及葡萄糖，它们可以通过浓度梯度进入细胞，不足以诱导更多巨噬细胞的作用；不能单纯注射台盼蓝，因为其不能诱导巨噬细胞的产生。在注射淀粉肉汤后，抽取腹腔液，后在离体条件下在培养皿中加入墨汁，可以观察到巨噬细胞吞噬墨汁，变成黑色。19