课题课题1 1：微生物的实验室培养：微生物的实验室培养1.了解有关培养基的基础知识；2.掌握无菌操作技术；3.了解纯化大肠杆菌的基础知识。霉 菌细 菌酵母菌放线菌 上图都是一些常见的微生物，微生物是结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或没有细胞结构的低等生物，与人类关系密切。人工的培养和分离，使得我们更进一步认识微生物。 今天我们就来学习如何培养和分离大肠杆菌！1.特点：结构都相当简单,个体多数十分微小，通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构，且体内一般不含有叶绿素，不能进行光合作用。2.微生物包括五类病 毒细 菌放线菌真 菌原生动物 培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。固体培养基 液体培养基 半固体培养基1.培养基的类型成分区别：琼脂2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方细菌喜荤，霉菌喜素大肠杆菌配方 酵母提取物：0.25g 蛋白胨：0.5g Nacl：0.5g 琼脂：1g 水：50ml3.培养基内所含的基本物质一般营养物质水、碳源、氮源、无机盐其他物质pH、特殊营养物质,例如:生长因子(即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物)以及氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。 4.培养基的用途液体培养基：增菌、工业生产固体培养基：纯化（分离），鉴定、活菌计数、保藏菌种半固体培养基：动力检测1.无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。 无菌操作是培养微生物成功的关键！（1）消毒定义：2.消毒与灭菌的概念及两者的区别 （2）灭菌的定义：是指杀灭病原微生物的方法。 是指杀灭或清除环境中一切微生物（包括芽胞、孢子）的方法a.灼烧灭菌3.常用灭菌的方法b.干热灭菌：160-170 下加热1-2h。c.高压蒸气灭菌：100kPa、121 下维持15-30min.取2个250ml的三角瓶中分别装入50mlLB液体培养基和50mlLB固体培养基（刚配好，尚未凝固），加上封口膜，牛皮纸包装后高压锅灭菌15min。LB液体培养基细菌的扩大培养LB固体培养基细菌的划线分离灭菌后的培养基在无菌操作台上倒入4个培养皿中，倒后立即置于水平位置上，轻轻晃动，使培养基铺满平皿底部，待凝，使之形成平面。 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 2.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。将斜面上培养的大肠杆菌菌种接种到灭菌后的液体培养基中，使其在37摇床培养12小时。 注意事项:l1.火焰旁从斜面上用接种环取菌；l2.取菌前接种环要用酒精灯灼烧灭菌，冷却后方能取菌；l3.取菌后封口膜和棉塞复原。1.1.平板划线法：平板划线法： 1）灼烧接种环； 2）接种环冷却后，蘸取带菌培养物； 3）在近火焰处，让带菌接种环在固体培养基上划线。 注意事项:1.接种环只蘸一次菌液，但要在培养基不同位置连续划线多次。2.划线首尾不能相接。3.划线后，培养皿倒置培养1224h。1 1.线条不重叠 2 2-3.从上次的末端开始，交叉23条线3 4 4.最后的划线不能与第一区相连。分离后，一个菌体便会形成一个菌落，这是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选菌株的最简便方法之一。2.2.稀释涂布平板法稀释涂布平板法稀释操作 注意：移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管离火焰12cm处.1.临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4冰箱保存。2.长期保存：甘油冷冻管藏法（一）培养基的制作是否合格（一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温如果未接种的培养基在恒温箱中保温1 12 2 d d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。否则需要重新制备。实验操作成果评价实验操作成果评价（二）接种操作是否符合无菌要求（二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。需要分析原因，再次练习。（三）是否进行了及时细致的观察与记录（三）是否进行了及时细致的观察与记录 培养培养12 h12 h与与24 h24 h后的大肠杆菌菌落的大小后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。1关微生物营养物质的叙述中，正确的是（ ）A.是碳源的物质不可能同时是氮源 B.凡碳源都提供能量C.除水以外的无机物只提供无机盐 D.无机氮源也能提供能量D解析：A、B选项的表达是不完整的。有的碳源只能是碳源；有的碳源可同时是氮源；有的碳源同时是能源；有的碳源同时是氮源，也是能源。对于C选项，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样。对于D选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如NH3可为硝化细菌提供能量和氮源。2下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是（ ）A.防止杂菌污染 B.接种前菌种要进行灭菌C.培养基和发酵设备都必须灭菌 D.灭菌必须在接种前B退出解析：发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵过程不能混入其他微生物（杂菌），A正确；B错误，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。C正确，因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。