第三节第三节 动物的克隆动物的克隆动物细胞的培养和克隆形成动物细胞的培养和克隆形成（1）离体的动物细胞能否正常的生活、）离体的动物细胞能否正常的生活、表现出正常的生命活动？表现出正常的生命活动？只要条件适合就能表现出正常的生命活只要条件适合就能表现出正常的生命活动，如细胞的分裂、生长等动，如细胞的分裂、生长等（2）是不是所有的动物细胞都能在）是不是所有的动物细胞都能在离体的情况下表现出生命活动？离体的情况下表现出生命活动？不是，越是幼嫩的细胞越容易培养并表不是，越是幼嫩的细胞越容易培养并表现出正常的生命活动，因此在细胞培养现出正常的生命活动，因此在细胞培养时一般选择幼嫩的细胞时一般选择幼嫩的细胞（3）细胞离体培养时，表现出什么样的）细胞离体培养时，表现出什么样的生命活动？生命活动？生长、分裂（繁殖）至接触抑制生长、分裂（繁殖）至接触抑制（4）离体的动物组织能否像离体的动物细胞一）离体的动物组织能否像离体的动物细胞一样表现出体外培养的特征？样表现出体外培养的特征？动物组织在离体的情况下，也能培养并动物组织在离体的情况下，也能培养并表现出正常的生命活动；但与细胞培养表现出正常的生命活动；但与细胞培养也有不同的地方：在得到离体的组织后，也有不同的地方：在得到离体的组织后，需要机械处理或胰蛋白酶处理得到分散需要机械处理或胰蛋白酶处理得到分散的细胞再进行细胞培养，同时动物组织的细胞再进行细胞培养，同时动物组织培养过程中可以伴随组织分化。培养过程中可以伴随组织分化。（5）动物组织培养具体是如何实现的？）动物组织培养具体是如何实现的？动物组织培养的发展历史动物组织培养的发展历史什么是原代培养？什么是传代培养什么是原代培养？什么是传代培养动物组织培养时，培养细胞能不能动物组织培养时，培养细胞能不能无限制地存活下去无限制地存活下去阅读教材阅读教材1.1.过程：过程：（一）动物细胞培养（一）动物细胞培养动物动物胚胎胚胎或或幼龄幼龄动动物的组织、器官物的组织、器官胰蛋白酶胰蛋白酶剪碎剪碎单个细胞单个细胞加培养液加培养液制成制成细细胞胞悬悬浮浮液液细胞系、细胞系、细胞株细胞株细胞增殖细胞增殖去掉组织去掉组织间蛋白间蛋白动物细胞培养不能动物细胞培养不能最终培养成生物体最终培养成生物体原代培养原代培养传代培养传代培养如何界定原代培养和传代培养；细胞株和细胞系？如何界定原代培养和传代培养；细胞株和细胞系？细胞悬细胞悬浮液浮液转入特转入特殊培养殊培养液中培液中培养养分瓶培养分瓶培养原代培养原代培养传代培养传代培养细胞系（可传代的细胞）细胞系（可传代的细胞）连续细胞系：连续细胞系：有限细胞系：有限细胞系：二倍体细胞二倍体细胞发生转化的细胞发生转化的细胞系（遗传物质发系（遗传物质发生了改变，具不生了改变，具不死性）死性）细胞株：细胞株：从原代培养物或细胞系中获从原代培养物或细胞系中获得用单细胞分离培养或通过得用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群，称细胞株。形成的细胞群，称细胞株。遗传物质未变遗传物质未变 （5）如何获得纯系的细胞系？）如何获得纯系的细胞系？采用细胞克隆采用细胞克隆什么是克隆培养法。什么是克隆培养法。细胞克隆的最基本要求是什么？细胞克隆的最基本要求是什么？什么细胞容易进行克隆培养什么细胞容易进行克隆培养阅读教材阅读教材如何提高细胞克隆形成率？如何提高细胞克隆形成率？克隆培养法的主要用途是什么？克隆培养法的主要用途是什么？1.1.过程：过程：诱导方式诱导方式物理法：物理法：化学法：化学法：生物法：生物法： 灭活仙台病毒灭活仙台病毒聚乙二醇聚乙二醇电刺激等电刺激等（二）动物细胞融合（二）动物细胞融合1.1.过程：过程：灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜连接细胞膜连接细胞融合，形成杂种细胞细胞融合，形成杂种细胞主要用于制备主要用于制备单克隆抗体单克隆抗体获得杂种植株获得杂种植株用途用途物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒物理（离心、振物理（离心、振荡、电刺激）荡、电刺激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）诱导方法诱导方法使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合去除细胞壁后诱去除细胞壁后诱导原生质体融合导原生质体融合细胞融合的方法细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、植物细胞全能性植物细胞全能性原理原理动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交比较项目比较项目植物体细胞杂交、动物细胞融合的比较植物体细胞杂交、动物细胞融合的比较1.其由何种细胞产生？其由何种细胞产生？2.主要分布在哪里？主要分布在哪里？3.如何得到抗体？如何得到抗体？(三）单克隆抗体三）单克隆抗体 动物细胞融合的重要应用动物细胞融合的重要应用 抗体抗体1 1、抗原抗原 动物体内动物体内刺激刺激浆细胞浆细胞 抗原抗原 动物体内动物体内刺激刺激浆细胞浆细胞 抗体抗体抗原不纯抗原不纯抗体不纯抗体不纯筛选单一浆细胞筛选单一浆细胞不能增殖，产生大量抗体不能增殖，产生大量抗体2 2、特异性差、纯度低；、特异性差、纯度低； 产量低、反应不够灵敏产量低、反应不够灵敏设计方案：设计方案：一个一个B B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖单克隆抗体的优点：化学性质单一单克隆抗体的优点：化学性质单一 特异性特异性 灵敏度高灵敏度高杂种细胞杂种细胞2.2.制备过程：制备过程：（1 1）给小鼠抗原注射的目的是什么？）给小鼠抗原注射的目的是什么？诱导小鼠体内的特异性免疫应答，分化诱导小鼠体内的特异性免疫应答，分化出浆细胞。出浆细胞。（2 2）两次筛选的目的相同吗？）两次筛选的目的相同吗？不同，第一次筛选是为了筛选杂交瘤细不同，第一次筛选是为了筛选杂交瘤细胞，第二次筛选是做抗体检验，筛选产胞，第二次筛选是做抗体检验，筛选产生特异性抗体的细胞。生特异性抗体的细胞。（3 3）最后培养有几种方案？）最后培养有几种方案？两种，体内培养和体外培养。两种，体内培养和体外培养。多莉多莉克隆猴克隆猴四、动物的克隆繁殖四、动物的克隆繁殖1、动物细胞全能性的表现程度：、动物细胞全能性的表现程度： 全能干全能干细胞胞多能干多能干细胞胞单能干能干细胞胞2、动物物难以克隆繁殖的根本原因：以克隆繁殖的根本原因：细胞分化使得胞分化使得细胞胞发生了基因的差异性表达，生了基因的差异性表达，有的基因开放，有的基因关有的基因开放，有的基因关闭。体。体细胞基因胞基因组中中的基因活的基因活动很不完全，不能像受精卵那很不完全，不能像受精卵那样发挥细胞的全能性。胞的全能性。卵细胞卵细胞母绵羊母绵羊母绵羊母绵羊乳腺细胞乳腺细胞细胞质细胞质细胞核细胞核细胞核移植细胞核移植早期胚胎早期胚胎卵裂卵裂C母绵羊子宫母绵羊子宫胚胎移植胚胎移植多莉羊多莉羊分娩分娩妊娠妊娠多多莉莉羊羊的的培培育育过过程程融合后的卵细胞融合后的卵细胞克隆动物的研究意义克隆动物的研究意义1.1.用于生物学和医学研究的实验动物用于生物学和医学研究的实验动物2.2.改良动物品种改良动物品种 3.3.治疗人类疾病治疗人类疾病4.4.保护濒危动物保护濒危动物6.6.世界上第一只克隆绵羊世界上第一只克隆绵羊“多莉多莉”的培育等程序如图的培育等程序如图所示。请仔细看图后回答问题：所示。请仔细看图后回答问题：黑面绵羊去黑面绵羊去核卵细胞核卵细胞白面绵羊卵白面绵羊卵腺细胞核腺细胞核重组细胞重组细胞早期胚胎早期胚胎另一头母绵羊子宫另一头母绵羊子宫克隆绵羊多莉克隆绵羊多莉ab电脉冲处理妊娠、出生写出写出 、所指的细胞工程、所指的细胞工程各称：各称：。实施细胞工程时，所需的实施细胞工程时，所需的受体细胞大多采用动物卵细胞受体细胞大多采用动物卵细胞的原因是的原因是： 。多莉面部的毛色是多莉面部的毛色是 ，判断依据：判断依据： 。继植物组织培养之后，克隆继植物组织培养之后，克隆绵羊培育成功，证明动物细胞绵羊培育成功，证明动物细胞也具有也具有 。 请举例说明克隆绵羊培育成请举例说明克隆绵羊培育成功的实际意义功的实际意义： 。