会计学1k动物细胞融合与单克隆抗体动物细胞融合与单克隆抗体(kngt)课时课时第一页，共22页。n n复习复习(fx)(fx)回顾：回顾：n n n n11、植物体细胞杂交的过程、植物体细胞杂交的过程是怎样的？是怎样的？n n22、动物细胞和植物细胞在、动物细胞和植物细胞在结构上有何不同结构上有何不同 ？第1页/共21页第二页，共22页。一、动物细胞融合：一、动物细胞融合：1、概念、概念(ginin)：也：也称称 ，是指，是指 或或 动物细胞结合动物细胞结合形成一个细胞的过程。形成一个细胞的过程。形成的单核细胞称为形成的单核细胞称为 。2、过程：不同、过程：不同 的的两个细胞两个细胞 细胞细胞细胞细胞(xbo)杂杂交交两个两个多个多个杂交细胞杂交细胞DNA杂交杂交第2页/共21页第三页，共22页。n n3、原理（与植物原生质体融、原理（与植物原生质体融合比较合比较(bjio)） n n 诱导方法：诱导方法： 、 、 。n n 思考：为什么灭活病毒思考：为什么灭活病毒能够作为诱导剂？不灭活的能够作为诱导剂？不灭活的是否可以？是否可以？n n4、意义：、意义：n n 克服了克服了 杂交的不亲和杂交的不亲和性。性。物理物理(wl)法法化学法化学法生物生物(shngw)法法远缘远缘灭活的病毒对细胞没有感染能力。灭活的病毒对细胞没有感染能力。第3页/共21页第四页，共22页。动物动物(dngw)细细胞融合胞融合杂种杂种(zzhng)细胞细胞愈伤组织愈伤组织(zzh)杂种植株杂种植株植物细胞植物细胞 A植物细胞植物细胞B 原生质体原生质体A原生质体原生质体B植物体细胞杂交植物体细胞杂交去壁去壁融合融合组培组培物理法物理法化学法化学法生物法：生物法：灭活的病毒灭活的病毒动物细胞动物细胞A动物细胞动物细胞B杂种细胞杂种细胞第4页/共21页第五页，共22页。5 5、动物、动物、动物、动物(dngw)(dngw)细胞融合与植物体细胞细胞融合与植物体细胞细胞融合与植物体细胞细胞融合与植物体细胞杂交比较杂交比较杂交比较杂交比较比较比较项目项目融合融合原理原理融合融合方法方法诱导手段诱导手段用法用法植物植物体细体细胞杂胞杂交交细胞膜的细胞膜的流动性流动性去壁后诱去壁后诱导原生质导原生质体融合体融合物理法物理法（离心、（离心、振动、电激）振动、电激）化学法化学法（聚乙（聚乙二醇二醇获得杂获得杂种植株种植株动物动物细胞细胞融合融合细胞膜的细胞膜的流动性流动性使细胞分使细胞分散后诱导散后诱导细胞融合细胞融合上法上法 + 生生物法物法制备制备单单克隆抗克隆抗体体第5页/共21页第六页，共22页。二、单克隆抗体二、单克隆抗体二、单克隆抗体二、单克隆抗体(kngt)(kngt)(kngt)(kngt)n n1.1.传统传统传统传统(chuntng)(chuntng)的抗体由何种细胞产生的抗体由何种细胞产生的抗体由何种细胞产生的抗体由何种细胞产生？n n淋巴细胞作用有何特点？淋巴细胞作用有何特点？淋巴细胞作用有何特点？淋巴细胞作用有何特点？n n3. B3. B淋巴细胞能在体外无限增殖吗？淋巴细胞能在体外无限增殖吗？淋巴细胞能在体外无限增殖吗？淋巴细胞能在体外无限增殖吗？n n4 . 4 . 米尔斯坦和科勒的创造性设想是什么？米尔斯坦和科勒的创造性设想是什么？米尔斯坦和科勒的创造性设想是什么？米尔斯坦和科勒的创造性设想是什么？提提问问？第6页/共21页第七页，共22页。抗体的传统抗体的传统(chuntng)生产方生产方法法从从血血清清中中分分离离(fnl)抗抗体体该法制备抗体该法制备抗体(kngt)的特点：的特点： 产量低、纯度低，且抗体产量低、纯度低，且抗体(kngt)的特异性差、灵敏度的特异性差、灵敏度低。低。多多种种效效应应B细细胞胞动动物物体体内内多多种种抗抗体体抗抗原原 第7页/共21页第八页，共22页。n n实验目的实验目的: :制备单克隆抗体制备单克隆抗体(kngt).(kngt).n n实验原理：实验原理：n n实验过程：实验过程：1975197519751975年英国年英国年英国年英国(yn u)(yn u)(yn u)(yn u)科学家米尔斯坦和柯科学家米尔斯坦和柯科学家米尔斯坦和柯科学家米尔斯坦和柯勒的实验勒的实验勒的实验勒的实验第8页/共21页第九页，共22页。动物细胞动物细胞A动物细胞动物细胞B杂种细胞杂种细胞用动物细胞融合的方法制备用动物细胞融合的方法制备(zhbi)单克隆单克隆抗体抗体试一试试一试聚乙二醇或灭活的病毒聚乙二醇或灭活的病毒(bngd)杂交瘤细胞杂交瘤细胞(xbo)细胞培养细胞培养提取抗体提取抗体效应细胞效应细胞肿瘤细胞肿瘤细胞第9页/共21页第十页，共22页。注射注射(zhsh)(zhsh)抗抗原原效应效应(xioyng)B(xioyng)B细细胞胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞(xbo)(xbo)融合融合多种杂多种杂交细胞交细胞选择性培养基选择性培养基 筛选筛选1 1抗原抗原- -抗抗体杂交法体杂交法克隆化克隆化单克隆抗单克隆抗体体 筛选筛选2 23.若细胞两两融合后，有几若细胞两两融合后，有几种融合情况？种融合情况？单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程第10页/共21页第十一页，共22页。注射注射(zhsh)(zhsh)抗抗原原效应效应(xioyng)B(xioyng)B细细胞胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞(xbo)(xbo)融合融合多种杂多种杂交细胞交细胞选择性培养基选择性培养基 筛选筛选1 1抗原抗原- -抗体抗体杂交法杂交法克隆化克隆化单克隆单克隆抗体抗体 筛选筛选2 24.第一次筛选出的杂交瘤细胞第一次筛选出的杂交瘤细胞为何需进行克隆化培养和专一为何需进行克隆化培养和专一抗体检测？抗体检测？第11页/共21页第十二页，共22页。效应效应(xioyng)B(xioyng)B细细胞胞B B淋巴细胞淋巴细胞注射注射(zhsh)(zhsh)抗抗原原骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞(xbo)(xbo)融合融合B-BB-B细胞细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞 瘤瘤- -瘤细胞瘤细胞选择性培养基选择性培养基 筛选筛选1 1多种杂交瘤细胞多种杂交瘤细胞符合要求的杂交瘤符合要求的杂交瘤细胞细胞抗原抗原- -抗体抗体杂交法杂交法 筛选筛选2 2克隆化克隆化体外培养体外培养小鼠腹腔内增殖小鼠腹腔内增殖单克隆抗体单克隆抗体杂交瘤细胞特点：杂交瘤细胞特点：既可以产生特异性抗体，既可以产生特异性抗体，又可以大量增殖又可以大量增殖第12页/共21页第十三页，共22页。n n 注意：注意：n n对小鼠做何处理？对小鼠做何处理？n n n n细胞融合后，培养液中共有几种细胞？有几种融合细胞融合后，培养液中共有几种细胞？有几种融合细胞？细胞？n n杂交瘤细胞的特点：既能大量杂交瘤细胞的特点：既能大量(dling)(dling)，又，又能产生能产生。n n思考：思考： 产生抗体的杂交瘤细胞如何筛选出来的？产生抗体的杂交瘤细胞如何筛选出来的？注射特定注射特定(tdng)的抗原的抗原蛋白蛋白五种五种(w zhn)（B淋巴细胞、骨髓瘤细胞、淋巴细胞、骨髓瘤细胞、B-B、骨骨、骨骨、杂交瘤细胞）杂交瘤细胞） 其中三种融合细胞。其中三种融合细胞。繁殖繁殖专一的抗体专一的抗体特定的选择性培养基特定的选择性培养基第13页/共21页第十四页，共22页。读下面一段文字资料，找出单克隆抗体读下面一段文字资料，找出单克隆抗体(kngt)的概念的概念 人们发现，在动物发生免疫反应人们发现，在动物发生免疫反应(fnyng)(fnyng)的过程的过程中，体内的中，体内的B B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个体，但是每个B B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B B细细胞进行无性繁殖，即克隆。胞进行无性繁殖，即克隆。2.单克隆抗体单克隆抗体(kngt)的概念的概念单单: : 单个细胞单个细胞 克隆克隆: : 无性繁殖无性繁殖单克隆单克隆抗体抗体: :单个细胞克隆产生的单个细胞克隆产生的化学性质单一化学性质单一特异性强特异性强的抗体的抗体第14页/共21页第十五页，共22页。单克隆抗体单克隆抗体单克隆抗体单克隆抗体(kngt)(kngt)(kngt)(kngt)的优点和应的优点和应的优点和应的优点和应用用用用n n优点优点优点优点n n强，强，强，强，高，高，高，高，大。大。大。大。n n应用：应用：应用：应用：n n作为诊断试剂：准确识别各种作为诊断试剂：准确识别各种作为诊断试剂：准确识别各种作为诊断试剂：准确识别各种(zhn)(zhn)(zhn)(zhn)物质的细微差别，并跟物质的细微差别，并跟物质的细微差别，并跟物质的细微差别，并跟的结合，具有的结合，具有的结合，具有的结合，具有、的优点。的优点。的优点。的优点。n n用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗，可制成，可制成，可制成，可制成“”“”“”“”，也有少量用于治疗其他疾病。，也有少量用于治疗其他疾病。，也有少量用于治疗其他疾病。，也有少量用于治疗其他疾病。特异性特异性灵敏度灵敏度产量产量(chnling)抗原抗原一定抗原发生特异一定抗原发生特异性性准确准确 高效高效 简易简易 快速快速癌症癌症生物导弹生物导弹第15页/共21页第十六页，共22页。n n1 1、从母羊甲的体细胞中取出细胞核，注入到母羊乙、从母羊甲的体细胞中取出细胞核，注入到母羊乙、从母羊甲的体细胞中取出细胞核，注入到母羊乙、从母羊甲的体细胞中取出细胞核，注入到母羊乙去掉核的卵细胞中，融合后的细胞经卵裂形成早期去掉核的卵细胞中，融合后的细胞经卵裂形成早期去掉核的卵细胞中，融合后的细胞经卵裂形成早期去掉核的卵细胞中，融合后的细胞经卵裂形成早期胚胎胚胎胚胎胚胎(piti)(piti)，再植入到另一只母羊丙的子宫内，出，再植入到另一只母羊丙的子宫内，出，再植入到另一只母羊丙的子宫内，出，再植入到另一只母羊丙的子宫内，出生小羊的大多数性状生小羊的大多数性状生小羊的大多数性状生小羊的大多数性状 ( ) ( ) A.A.难以预测难以预测难以预测难以预测 B. B.像甲像甲像甲像甲 C. C.像乙像乙像乙像乙 D. D.像丙像丙像丙像丙n n2 2（20042004年，全国）用动物细胞工程技术获取单克年，全国）用动物细胞工程技术获取单克年，全国）用动物细胞工程技术获取单克年，全国）用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验步骤中错误的是（隆抗体，下列实验步骤中错误的是（隆抗体，下列实验步骤中错误的是（隆抗体，下列实验步骤中错误的是（ ）n nA A将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B B淋巴淋巴淋巴淋巴细胞细胞细胞细胞n nB B用纤维素酶处理用纤维素酶处理用纤维素酶处理用纤维素酶处理B B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞n nC C用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的B B淋巴淋巴淋巴淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合n nD D筛选杂交资金积累细胞，并从中选出能产生所需筛选杂交资金积累细胞，并从中选出能产生所需筛选杂交资金积累细胞，并从中选出能产生所需筛选杂交资金积累细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体BB第16页/共21页第十七页，共22页。n n3.3.动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是 （ ）n n诱导融合的方法完全相同诱导融合的方法完全相同诱导融合的方法完全相同诱导融合的方法完全相同 所用的技术手段不相同所用的技术手段不相同所用的技术手段不相同所用的技术手段不相同 所采用的原理完全相同所采用的原理完全相同所采用的原理完全相同所采用的原理完全相同 都能形成杂种细胞都能形成杂种细胞都能形成杂种细胞都能形成杂种细胞n nA.A. B. B. C. C. D. D.n n4. 4. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B B淋巴细胞诱淋巴细胞诱淋巴细胞诱淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖培养基上不能存活增殖培养基上不能存活增殖培养基上不能存活增殖(zngzh)(zngzh)的细胞是（的细胞是（的细胞是（的细胞是（ ）n n 淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞B B淋巴细胞自身淋巴细胞自身淋巴细胞自身淋巴细胞自身融合细胞融合细胞融合细胞融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞杂交瘤杂交瘤杂交瘤杂交瘤细胞细胞细胞细胞n nA A B Bn nC C D D CA第17页/共21页第十八页，共22页。创新应用训练创新应用训练创新应用训练创新应用训练5 5 5 5右图为某同学根据杂交右图为某同学根据杂交右图为某同学根据杂交右图为某同学根据杂交瘤技术的方法瘤技术的方法瘤技术的方法瘤技术的方法(fngf)(fngf)(fngf)(fngf)，设，设，设，设计的生产破伤风杆菌抗体的计的生产破伤风杆菌抗体的计的生产破伤风杆菌抗体的计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。据图回答：实验方案。据图回答：实验方案。据图回答：实验方案。据图回答：（1 1 1 1）该方案能达到预）该方案能达到预）该方案能达到预）该方案能达到预期效果吗？。原因是期效果吗？。原因是期效果吗？。原因是期效果吗？。原因是。（2 2 2 2）图中）图中）图中）图中为为为为过程，过程，过程，过程，常用作为诱导剂。常用作为诱导剂。常用作为诱导剂。常用作为诱导剂。该细胞继承了该细胞继承了该细胞继承了该细胞继承了，因此不仅能分泌因此不仅能分泌因此不仅能分泌因此不仅能分泌，还有还有还有还有本领。本领。本领。本领。（3 3 3 3）该方案的目的是。）该方案的目的是。）该方案的目的是。）该方案的目的是。不能不能 没有将抗原注入小鼠体内没有将抗原注入小鼠体内(t ni)，无法获得产生单一抗体的无法获得产生单一抗体的B淋巴细胞淋巴细胞.细胞融合细胞融合 灭活病毒灭活病毒(bngd) 双亲细胞的遗传物质双亲细胞的遗传物质 特异性抗体特异性抗体 在体外培养条件下大量增殖在体外培养条件下大量增殖 制备单克制备单克隆抗体隆抗体 第18页/共21页第十九页，共22页。作业：作业： 1、动物细胞融合与植物体细、动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较。胞杂交的比较。 2、单克隆抗体制备、单克隆抗体制备(zhbi)过程。过程。第19页/共21页第二十页，共22页。教学目标：教学目标： 1、了解并能简述动物细胞培养、了解并能简述动物细胞培养的过程、条件的过程、条件(tiojin)及应用及应用 2、举例说出动物细胞融合与单、举例说出动物细胞融合与单克隆抗体的原理和应用克隆抗体的原理和应用教学重点和难点：教学重点和难点： 1.动物细胞培养的过程及条件动物细胞培养的过程及条件(tiojin) 2.单克隆抗体的制备和应用单克隆抗体的制备和应用第20页/共21页第二十一页，共22页。内容(nirng)总结会计学。1、植物体细胞杂交的过程是怎样的。物理法（离心、振动、电激）化学法（聚乙二醇。产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。3.若细胞两两融合后，有几种融合情况。既可以产生特异性抗体，又可以大量增殖。思考：产生抗体的杂交瘤细胞如何筛选出来的。要想获得大量的单一(dny)抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。B用纤维素酶处理B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞。据图回答：（1）该方案能达到预期效果吗第二十二页，共22页。