分子医学技能分子医学技能实验设计实验设计n n理解所学的实验方法和技术理解所学的实验方法和技术n n运用基本的实验方法和技术进行科学研究运用基本的实验方法和技术进行科学研究实验设计的基本内容实验设计的基本内容n n实验目的与意义（解决什么问题实验目的与意义（解决什么问题实验目的与意义（解决什么问题实验目的与意义（解决什么问题_ _为什么做？为什么做？为什么做？为什么做？）n n实验材料和试剂（需要什么材料完成实验材料和试剂（需要什么材料完成实验材料和试剂（需要什么材料完成实验材料和试剂（需要什么材料完成_ _用什么做用什么做？）n n实验方法和步骤（采用什么方法与手段实验方法和步骤（采用什么方法与手段实验方法和步骤（采用什么方法与手段实验方法和步骤（采用什么方法与手段_ _怎么做怎么做怎么做怎么做? ?）n n实验指标（观察指标实验指标（观察指标实验指标（观察指标实验指标（观察指标_ _看什么？看什么？看什么？看什么？）n n实验预期结果与分析（实验预期结果与分析（实验预期结果与分析（实验预期结果与分析（如何评价如何评价如何评价如何评价? ?）讨论与交流讨论与交流n几个基本概念几个基本概念 分子识别与靶分子、特异性、细胞周期、分子识别与靶分子、特异性、细胞周期、探针探针n标记标记 DNA、RNA、蛋白质、蛋白质n几个问题的思考几个问题的思考关于分子识别与靶分子关于分子识别与靶分子n受体与配体的分子识别（高亲和力，高特异性）受体与配体的分子识别（高亲和力，高特异性）n抗原与抗体的分子识别（高特异性）抗原与抗体的分子识别（高特异性）n酶与底物的分子识别酶与底物的分子识别( (专一性，信号放大）专一性，信号放大）n特异蛋白之间的分子识别（特异性）特异蛋白之间的分子识别（特异性）n核苷酸链之间的分子识别核苷酸链之间的分子识别（单链反义核糖核酸（单链反义核糖核酸（RNA）与细胞质内的）与细胞质内的mRNA）n蛋白质与核酸分子的分子识别蛋白质与核酸分子的分子识别（激素受体复合物，通过特异的序列激（激素受体复合物，通过特异的序列激素反应元件识别、结合基因调控序列）素反应元件识别、结合基因调控序列）分子靶向分子靶向（molecular targeting）n各种分子（显像或治疗药物）通过与在各种分子（显像或治疗药物）通过与在疾病状态下明显高表达或缺失的靶分子疾病状态下明显高表达或缺失的靶分子的相互作用而特异性浓集。的相互作用而特异性浓集。n反映的是反映的是特异性特异性作用，而不是扩散、膜作用，而不是扩散、膜通透性等非特异性作用。通透性等非特异性作用。细胞周期示意图细胞周期示意图 n探针探针(probe)，一般指能与特定核苷酸序，一般指能与特定核苷酸序列或基因序列的列或基因序列的DNA片段或片段或RNA片段发片段发生特异性互补的核苷酸片段，可用于检生特异性互补的核苷酸片段，可用于检测待测物中的核苷酸序列或基因序列。测待测物中的核苷酸序列或基因序列。 实际应用的探针必须使实际应用的探针必须使DNA或或RNA分子分子上带有可被探测的信号，即标记物上带有可被探测的信号，即标记物 。n根据核酸分子探针的性质和来源可分为根据核酸分子探针的性质和来源可分为 基因组基因组DNA探针、探针、 cDNA探针、探针、 RNA探针探针 人工合成的寡核苷酸人工合成的寡核苷酸 根据实验目的和要求的不同加以选择。根据实验目的和要求的不同加以选择。 举举 例例题目：肝癌患者和正常人血清蛋白质分布的初步比较题目：肝癌患者和正常人血清蛋白质分布的初步比较1.1.研究目的与意义研究目的与意义 通过比较肝癌患者和正常人血清中蛋白质的种类通过比较肝癌患者和正常人血清中蛋白质的种类与数量的不同，了解肝癌患者血清中出现的异常蛋与数量的不同，了解肝癌患者血清中出现的异常蛋白和正常蛋白质的改变，初步探讨这种改变对肝癌白和正常蛋白质的改变，初步探讨这种改变对肝癌诊断和判断病情的作用。诊断和判断病情的作用。2.2.材料与试剂材料与试剂 标本：正常人血清、不同病程肝癌患者血清（早、标本：正常人血清、不同病程肝癌患者血清（早、中、晚期）、蛋白质标准对照中、晚期）、蛋白质标准对照 试剂：不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳所用试剂试剂：不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳所用试剂 仪器与设备：电泳仪、电泳槽、染色缸、漂洗缸、仪器与设备：电泳仪、电泳槽、染色缸、漂洗缸、烧杯、吸管、微量移液器烧杯、吸管、微量移液器3.实验方法和步骤实验方法和步骤 方法：不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳方法：不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳 步骤：步骤： 试剂准备试剂准备 制胶制胶 样品处理样品处理 电泳电泳 染色与脱色染色与脱色 4.实验观察指标实验观察指标 聚丙烯酰胺凝胶上电泳区带的分布聚丙烯酰胺凝胶上电泳区带的分布 电泳区带颜色深浅电泳区带颜色深浅 5.实验预期结果的描述实验预期结果的描述 电泳显示与正常人相比肝癌患者血清在分子量电泳显示与正常人相比肝癌患者血清在分子量40Kd处有异常电泳区带出现，该区带的颜色在早处有异常电泳区带出现，该区带的颜色在早期肝癌患者较浅，随肝癌病程呈进行性增加，在期肝癌患者较浅，随肝癌病程呈进行性增加，在肝癌广泛转移时表现颜色最深，经电泳图谱扫描肝癌广泛转移时表现颜色最深，经电泳图谱扫描显示，分别为？显示，分别为？%，同时肝癌患者的清蛋白颜色变，同时肝癌患者的清蛋白颜色变浅，定量显示为正常人的？浅，定量显示为正常人的？%。6.实验结果的分析及说明的问题实验结果的分析及说明的问题 异常蛋白的出现异常蛋白的出现诊断诊断 异常蛋白的变化异常蛋白的变化病情判断与预后病情判断与预后 清蛋白的减少清蛋白的减少肝癌时肝功能下降肝癌时肝功能下降 题目：应用聚合酶链反应（题目：应用聚合酶链反应（PCRPCR）分析）分析HBVHBV感染者病毒感染者病毒DNADNA的整合状态的整合状态 研究目的与意义研究目的与意义 实验材料和试剂实验材料和试剂 实验方法和步骤实验方法和步骤 实验指标实验指标 实验预期结果的描述实验预期结果的描述问题问题1n食物中有两种含甲基的化合物食物中有两种含甲基的化合物 胆胆碱和蛋氨酸，其甲基部分可相互转碱和蛋氨酸，其甲基部分可相互转移，彼此代替，并供给肌酸与肾上移，彼此代替，并供给肌酸与肾上腺素合成的需要。腺素合成的需要。 其转移过程是以甲基作为完整基团直其转移过程是以甲基作为完整基团直接转移，还是分解后重新形成？接转移，还是分解后重新形成？问题问题2 3-羟羟-3-甲基戊二酰辅酶甲基戊二酰辅酶A还原酶主要存在细还原酶主要存在细胞的内质网，能催化胞的内质网，能催化HMG-CoA MVAn 该酶是胆固醇生物合成关键限速酶该酶是胆固醇生物合成关键限速酶n 有多种因素有多种因素(药物、激素、代谢物）主要药物、激素、代谢物）主要通过调节此酶活性影响胆固醇合成通过调节此酶活性影响胆固醇合成 如何测定其活性如何测定其活性?问题问题3n从某中药中提取得某单体，可能对瘤细从某中药中提取得某单体，可能对瘤细胞胞DNA合成有抑制作用合成有抑制作用 如何设计一体外实验验证？如何设计一体外实验验证？问题问题4n某新型肿瘤单克隆抗体在肿瘤组织有较某新型肿瘤单克隆抗体在肿瘤组织有较好的特异性浓聚。好的特异性浓聚。 如何设计一实验证明其浓聚程度？如何设计一实验证明其浓聚程度？问题问题5如何监测干细胞的移植如何监测干细胞的移植? ?