临床微生物标本临床微生物标本的采集与运送的采集与运送梅州市中医医院院感科梅州市中医医院院感科微生物检验的重要性微生物检验的重要性世界人口死因世界人口死因 感染性疾病：感染性疾病：2525抗生素时代，感染仍是人类健康的主要抗生素时代，感染仍是人类健康的主要“杀手杀手”，主要原因之一是当代的感染，主要原因之一是当代的感染性疾病，在病原上发生了较大的变化，性疾病，在病原上发生了较大的变化，形成了现代感染性疾病在病原学上的新形成了现代感染性疾病在病原学上的新特点特点 高死亡率原因高死亡率原因v新现传染病：新现传染病：近近3030年，已有近年，已有近3030种新的病原种新的病原生物，其中包括生物，其中包括HIVHIV、 SARSSARS、禽流感和各种、禽流感和各种新型肝炎病毒等引起的各种疾病。新型肝炎病毒等引起的各种疾病。v再现传染病：再现传染病：以往已被认为得到很好控制的以往已被认为得到很好控制的传染病，如结核、登革热等的流行和传播又传染病，如结核、登革热等的流行和传播又重新抬头。重新抬头。现代感染性疾病的新特点现代感染性疾病的新特点v细菌的耐药性不断增强：细菌的耐药性不断增强：同一种细同一种细菌对抗生素的耐药性可以完全不同，菌对抗生素的耐药性可以完全不同，甚至出现同时耐多种抗生素的甚至出现同时耐多种抗生素的“多多重耐药重耐药”细菌，往往使临床医师的细菌，往往使临床医师的“经验性经验性”治疗或所谓的常规治疗治疗或所谓的常规治疗根本无效。根本无效。提高感染样本送检率提高感染样本送检率加强细菌耐药监测加强细菌耐药监测关注细菌性疾病的病原学诊断，已成为关注细菌性疾病的病原学诊断，已成为临床工作者、临床微生物与微生态工作者、临床工作者、临床微生物与微生态工作者、药学家和从事感染控制的工作者共同关注的药学家和从事感染控制的工作者共同关注的热门焦点。热门焦点。我们应该追求：我们应该追求：“准确的病原学诊断准确的病原学诊断”“针对性病原学治疗针对性病原学治疗”正确的微生物标本采集和运送，正确的微生物标本采集和运送，是准确的病原学诊断的前提！是准确的病原学诊断的前提！成功治疗感染症的因素成功治疗感染症的因素 成功分离病原菌成功分离病原菌标本收集、运送、保存标本收集、运送、保存标本处理方法标本处理方法检验医师专业知识检验医师专业知识 医师判读病原菌培养结果医师判读病原菌培养结果 选择适当治疗方法选择适当治疗方法临床医生要合理用好两种数据临床医生要合理用好两种数据v1. 1. 本地区、本单位病原流行病学资料，指本地区、本单位病原流行病学资料，指导经验用药。导经验用药。（微生物室、院感科、临床（微生物室、院感科、临床科室）科室）v2.2.药敏试验报告，纠正经验用药。药敏试验报告，纠正经验用药。 重视病原学检查重视病原学检查, ,尽可能在应用抗菌药物尽可能在应用抗菌药物之前留取标本送检。以提高病原学诊断率之前留取标本送检。以提高病原学诊断率, ,为选药和调整药物提供依据。为选药和调整药物提供依据。检验误差发生率哪个阶段最高 “正确的微生物学检验始自正确的标本采取。临床医师、护师及检验技师都必须通晓其要领。” 著名的临床微生物检验专著著名的临床微生物检验专著ManualofClinicalMicrobiology的主编的主编PatrickMurray60%60%以上实验误差发生在分析前以上实验误差发生在分析前 19971997年，一位意大利著名检验专家就对急诊检年，一位意大利著名检验专家就对急诊检验误差发生的种类和发生率进行了统计。结果显验误差发生的种类和发生率进行了统计。结果显示，约有示，约有68.2%68.2%的检验误差发生在检验前期，而来的检验误差发生在检验前期，而来自于检验中期和检验后期的误差率分别为自于检验中期和检验后期的误差率分别为13.3%13.3%和和18.5%18.5%。 20072007年，这位检验专家又进行了类似统计，年，这位检验专家又进行了类似统计，结果显示，检验前期的误差发生率仍高达结果显示，检验前期的误差发生率仍高达61.9%61.9%。 摘自：摘自： 标本采集和运送是细菌培养成功的最最重要的关键 但由于标本的采集和运送常由护士或医生但由于标本的采集和运送常由护士或医生或病人自己完成，所以也是最不容易做好的或病人自己完成，所以也是最不容易做好的事情，而且不知道问题所在之处，造成的后事情，而且不知道问题所在之处，造成的后果是果是: : 临床医生最不能接受的问题临床医生最不能接受的问题: :阳性率低阳性率低国内微生物标本的采集目前存在的问题国内微生物标本的采集目前存在的问题 ： 标本送检率低标本送检率低 从全国来看，抗感染治疗从全国来看，抗感染治疗前，送检相关标本可能只占应送标本的一半前，送检相关标本可能只占应送标本的一半左右，与抗菌药物应用率之高形成鲜明的反左右，与抗菌药物应用率之高形成鲜明的反差。一些医师在经验性治疗受挫后方送标本，差。一些医师在经验性治疗受挫后方送标本，此时已失去阳性培养的机会。此时已失去阳性培养的机会。 标本有缺陷标本有缺陷 正确收集各种临床标本，正确收集各种临床标本，关注特检标本采样与送检的方法和条件，是关注特检标本采样与送检的方法和条件，是完成病原学诊断的先决条件。完成病原学诊断的先决条件。标本规范化采集的重要性标本规范化采集的重要性v正确采集、处理与运送细菌培养的标本直接关系到正确采集、处理与运送细菌培养的标本直接关系到致病菌培养的正确性与阳性率的高低，是临床细菌致病菌培养的正确性与阳性率的高低，是临床细菌检验成功的关键。检验成功的关键。v标本质量的好坏直接影响诊断结果的正误，标本质量的好坏直接影响诊断结果的正误，不当的不当的标本可导致假阴性、假阳性结果的出现，因此标本标本可导致假阴性、假阳性结果的出现，因此标本采集与处理的规范化是准确、及时地向临床提供重采集与处理的规范化是准确、及时地向临床提供重要的临床感染信息的基础。要的临床感染信息的基础。v好的微生物检验标本可提升实验室工作效率及病患好的微生物检验标本可提升实验室工作效率及病患照顾质量，降低医疗成本。照顾质量，降低医疗成本。样本收集基本原则样本收集基本原则1.1.及时采集微生物标本作病原学检查及时采集微生物标本作病原学检查2.2.在抗菌药物使用前采集标本在抗菌药物使用前采集标本3.3.采样时严格执行无菌操作采样时严格执行无菌操作4.4.采样后立即送检甚至床旁接种尤其是厌氧培养采样后立即送检甚至床旁接种尤其是厌氧培养5.5.标本容器须灭菌处理，但不得使用消毒剂标本容器须灭菌处理，但不得使用消毒剂6.6.送检标本应注明来源和检验目的送检标本应注明来源和检验目的样本拒收标准样本拒收标准v样本上无病患标签或病患标签与检验申请单不符；样本上无病患标签或病患标签与检验申请单不符；v样本以不当的温度、运送培养基及容器运送；样本以不当的温度、运送培养基及容器运送；v样本量不足、已被防腐剂固定或运送时间过长；样本量不足、已被防腐剂固定或运送时间过长；v样本外漏、容器破损及明显受污染的标本；样本外漏、容器破损及明显受污染的标本；v样本的检验项目申请不适合进行；样本的检验项目申请不适合进行；v当日重复送标本（除血培养外）。当日重复送标本（除血培养外）。常见不合格标本主要有以下问题：常见不合格标本主要有以下问题： u标本采集时间错误标本采集时间错误u容器错误容器错误u标本量不足标本量不足u标本采集延误标本采集延误u标本未及时正确运送标本未及时正确运送u以及暂存条件错误。以及暂存条件错误。u。 如何提高细菌阳性检出率如何提高细菌阳性检出率标本采集时机标本采集时机标本采集方法标本采集方法标本的质与量标本的质与量标本的运送与保存标本的运送与保存镜检筛选合格标本镜检筛选合格标本高质量、多种分离培养基高质量、多种分离培养基培养环境培养环境合理的收费制度合理的收费制度标本收集部位 非无菌部位 无菌部位 眼 血液 耳 脊髓液 呼吸道 胸膜液 肠胃道 腹膜液 泌尿道 关节液 皮肤 毛发最有价值的细菌学检测项目最有价值的细菌学检测项目q血液培养血液培养q 脑脊液培养脑脊液培养q 胆汁培养胆汁培养q 胸腹水培养胸腹水培养q 关节液关节液q 其他无菌体液或分泌液其他无菌体液或分泌液对不能及时送检的样本储存方法对不能及时送检的样本储存方法储存环境储存环境标本来源标本来源4冰箱冰箱尿液、粪便（含寄生虫检验）、尿液、粪便（含寄生虫检验）、鼻腔、咽喉样本；霉菌培养标本鼻腔、咽喉样本；霉菌培养标本35-37温箱温箱CSF（脑脊液），淋病检查样本，（脑脊液），淋病检查样本，血液培养瓶（或室温）血液培养瓶（或室温）室温室温厌氧菌分离样本（脓及伤口样本）厌氧菌分离样本（脓及伤口样本）；体液冷凝实验用血清；体液冷凝实验用血清一、血培养标本采集规范一、血培养标本采集规范完整的血培养过程完整的血培养过程vv医师开出医嘱医师开出医嘱vv护理人员收集送检样本护理人员收集送检样本vv实验室检测、分离并鉴定导致血流感实验室检测、分离并鉴定导致血流感染的微生物染的微生物vv三级报告：为临床医生提供抗菌药物三级报告：为临床医生提供抗菌药物敏感性试验结果敏感性试验结果目前血培养的问题目前血培养的问题：采血时机不合适采血时机不合适采血套数不够采血套数不够采血量不足采血量不足只做需氧培养，不同时做厌氧培养只做需氧培养，不同时做厌氧培养采血前或采血时正在使用抗生素治疗采血前或采血时正在使用抗生素治疗（一）血培养检测采血指征（一）血培养检测采血指征 临床上疑为败血症、脓毒血症或其他血液感染的临床上疑为败血症、脓毒血症或其他血液感染的患者患者 1. 1. 发热（发热（3838）或低温（）或低温（3636）2. 2. 寒战寒战3. 3. 白细胞增多（白细胞增多（101010109 9/L/L，特别有，特别有“核左移核左移”未未成熟的或杆状核白细胞增多）成熟的或杆状核白细胞增多） 4. 4. 粒细胞减少（成熟的多核白细胞粒细胞减少（成熟的多核白细胞1110109 9/L/L）5. 5. 血小板减少血小板减少6 6皮肤粘膜出血皮肤粘膜出血7 7昏迷，休克昏迷，休克8 8多器官衰竭多器官衰竭 9. CRP9. CRP升高升高在评估可疑新生儿败血症时，除发热或低烧外，很在评估可疑新生儿败血症时，除发热或低烧外，很少培养出细菌，应该补充尿液和脑脊液培养。少培养出细菌，应该补充尿液和脑脊液培养。 对入院危重感染患者未进行系统性抗菌药物治疗之对入院危重感染患者未进行系统性抗菌药物治疗之前，应及时采集血培养。前，应及时采集血培养。 （二）血培养检测消毒程序（二）血培养检测消毒程序u培养瓶消毒程序：培养瓶消毒程序：用消毒液消毒培用消毒液消毒培养瓶橡皮塞，待干燥后使用。养瓶橡皮塞，待干燥后使用。u皮肤消毒程序：皮肤消毒程序：用消毒液从穿刺点用消毒液从穿刺点向外画圈消毒，至消毒区域直径达向外画圈消毒，至消毒区域直径达5cm5cm以上，待消毒液挥发干燥后（常以上，待消毒液挥发干燥后（常需需30s30s以上）穿刺采血。以上）穿刺采血。（三）静脉穿刺和培养瓶接种（三）静脉穿刺和培养瓶接种u成人用注射器无菌穿刺取血后，排尽针头成人用注射器无菌穿刺取血后，排尽针头内空气，直接注入血培养瓶，勿换针头内空气，直接注入血培养瓶，勿换针头（如果行第二次穿刺或用头皮针取血时，（如果行第二次穿刺或用头皮针取血时，应换针头）应换针头）u先注于厌氧瓶培养瓶，避免注入空气，然先注于厌氧瓶培养瓶，避免注入空气，然后注入需氧瓶，轻轻混匀以防血液凝固。后注入需氧瓶，轻轻混匀以防血液凝固。u近年来，临床普遍采用负压血培养瓶，将近年来，临床普遍采用负压血培养瓶，将血从患者静脉直接吸入血培养瓶，减少污血从患者静脉直接吸入血培养瓶，减少污染环节。染环节。要求：要求：严格无菌操作，不允许在皮肤消毒后用手按严格无菌操作，不允许在皮肤消毒后用手按压静脉，除非带有无菌手套。压静脉，除非带有无菌手套。不推荐采血和接种血培养瓶更换注射器针头，不推荐采血和接种血培养瓶更换注射器针头，采用真空采血装置能降低污染率。采用真空采血装置能降低污染率。说明：说明：无论采用何种采血方法，血培养可接受无论采用何种采血方法，血培养可接受的污染率通常是的污染率通常是3%3%。研究表明，经过专门研究表明，经过专门培训的熟练抽血者采集血培养的污染率为培训的熟练抽血者采集血培养的污染率为3%3%，而未经培训的住院医生和护士污染率则达，而未经培训的住院医生和护士污染率则达11%11%。因此对临床护士就血培养标本采集进行。因此对临床护士就血培养标本采集进行专门的、严格的培训是非常必要的。专门的、严格的培训是非常必要的。03060时间 (分钟)体温体温血培养采血时机血培养采血时机细菌浓度细菌浓度采集血培养样本的最佳时间采集血培养样本的最佳时间vv尽可能在患者寒战或开始发热时采血尽可能在患者寒战或开始发热时采血vv在患者接受抗生素治疗前采血在患者接受抗生素治疗前采血vv如患者已经应用抗菌药物进行治疗，应在如患者已经应用抗菌药物进行治疗，应在下一次用药之前采血培养下一次用药之前采血培养采集部位采集部位要求：要求：从两侧上肢静脉采血，从两侧上肢静脉采血，“双瓶双侧双瓶双侧”采血培养。采血培养。至少做到至少做到“双侧双瓶双侧双瓶”。必要时从下肢静脉采血做。必要时从下肢静脉采血做第三套血培养。第三套血培养。 说明：说明：不建议采集不建议采集（1 1）动脉血，因其诊断价值没有比静脉血更大；）动脉血，因其诊断价值没有比静脉血更大；（2 2）静脉留置导管，因其常伴有高污染率。如果必）静脉留置导管，因其常伴有高污染率。如果必须从留置导管内采血，也应同时从外周静脉采集另须从留置导管内采血，也应同时从外周静脉采集另外一个血培养标本，以帮助阳性结果的判读。外一个血培养标本，以帮助阳性结果的判读。基本概念基本概念所谓所谓“双瓶双侧双瓶双侧”，是指从一个部位采血接种，是指从一个部位采血接种一套一套培养瓶，再从另一部位采血接种培养瓶，再从另一部位采血接种另一套另一套培培养瓶。（通常是双臂）养瓶。（通常是双臂）所谓所谓“双侧双瓶双侧双瓶”，是指从一个部位采血接种，是指从一个部位采血接种一个需氧瓶，再从另一部位采血接种另一个厌一个需氧瓶，再从另一部位采血接种另一个厌氧瓶（少用）。氧瓶（少用）。一次静脉采血注入到多个培养瓶中应视为一次静脉采血注入到多个培养瓶中应视为单个单个血培养。血培养。基本概念基本概念vv成人成人“一套一套” 血培养应该包括需氧瓶和厌血培养应该包括需氧瓶和厌氧瓶各一个，也叫氧瓶各一个，也叫“一份一份”vv注意：一次穿刺采血，算注意：一次穿刺采血，算“一套一套”，采集，采集第二套应从另一个穿刺点获得。第二套应从另一个穿刺点获得。vv儿童一般只做需氧培养，但仍需从多个部儿童一般只做需氧培养，但仍需从多个部位采集多次。特殊患者才考虑厌氧培养。位采集多次。特殊患者才考虑厌氧培养。采集次数采集次数要求：要求：对怀疑菌血症、真菌血症的成人患者，推荐同对怀疑菌血症、真菌血症的成人患者，推荐同时采集时采集2-32-3套（不同部位）血培养标本。（即双瓶套（不同部位）血培养标本。（即双瓶双臂同时采集血培养标本。）双臂同时采集血培养标本。） 婴幼儿患者，推荐同时采集婴幼儿患者，推荐同时采集2 2次（不同部位）血培次（不同部位）血培养标本。养标本。说明：说明：除特殊情况之外，在采取血培养后的除特殊情况之外，在采取血培养后的2 2至至5 5天内，天内，无需重复采取血培养。因为抗菌治疗的无需重复采取血培养。因为抗菌治疗的2 2至至5 5天内，天内，血液中的细菌不会立即消失。研究证明，血培养只血液中的细菌不会立即消失。研究证明，血培养只做做1 1套的检出率为套的检出率为65%65%，做，做2 2套和套和3 3套的检出率分别为套的检出率分别为80%80%和和96%96%。单瓶的血培养检出率不高，而且结果很。单瓶的血培养检出率不高，而且结果很难做出临床解释。难做出临床解释。采血套数采血套数Weinstein et al. Detection of Bloodstream Infections in Adults: How Many Weinstein et al. Detection of Bloodstream Infections in Adults: How Many BloodCultures Are Needed J Clin Microbiol. 2007; 45:3546-3548BloodCultures Are Needed J Clin Microbiol. 2007; 45:3546-3548表皮葡萄球菌的临床意义表皮葡萄球菌的临床意义2 23 3套血培养，有助于污染的判断。套血培养，有助于污染的判断。Tokars, JI. Clin Infect Dis 2004; 39:333Tokars, JI. Clin Infect Dis 2004; 39:333 采集采集1套无法判套无法判断是病原菌还断是病原菌还是污染菌。是污染菌。采血量采血量要求：要求： 成年患者推荐的采血量为每套不少于成年患者推荐的采血量为每套不少于10ml10ml， 每瓶不少于每瓶不少于5ml5ml。 婴幼儿患者推荐的采血量为每瓶不少于婴幼儿患者推荐的采血量为每瓶不少于2ml2ml。说明：说明：血标本采集的量是影响检出率的最重要的因血标本采集的量是影响检出率的最重要的因素。成人血培养采血量在素。成人血培养采血量在2-30ml2-30ml之间，病原菌检之间，病原菌检出率与采血量成正比例增长。每增加出率与采血量成正比例增长。每增加1ml1ml的血液，的血液，病原菌的检出率增加病原菌的检出率增加3.2%3.2%。儿童患者因为血液中。儿童患者因为血液中病原菌浓度较高，血培养量无需等同于成人。对病原菌浓度较高，血培养量无需等同于成人。对血液病患者或者血容量相对较低的患者建议使用血液病患者或者血容量相对较低的患者建议使用儿童瓶来减少血液的采集量增加病原菌的检出率儿童瓶来减少血液的采集量增加病原菌的检出率。菌血症病人血中细菌浓度菌血症病人血中细菌浓度成年病人成年病人:v链球菌心内膜炎链球菌心内膜炎1to30organisms/mlv葡萄球菌心内膜炎葡萄球菌心内膜炎1to20organisms/mlv革兰氏阴性菌血症革兰氏阴性菌血症1to10organisms/mlv革兰氏阳性菌血症革兰氏阳性菌血症1to300organisms/ml幼儿病人幼儿病人:v革兰氏阴性菌血症革兰氏阴性菌血症5to1000organisms/mlv75%幼儿菌血症病人血液有幼儿菌血症病人血液有100organisms/ml所以采血量一定要足够！所以采血量一定要足够！血液标本在需氧瓶和厌氧瓶中的分配血液标本在需氧瓶和厌氧瓶中的分配要求：要求：一个需氧瓶和一个厌氧瓶为一套血培养，作一个需氧瓶和一个厌氧瓶为一套血培养，作为常规血培养的组合。为常规血培养的组合。说明：采用一对需氧瓶说明：采用一对需氧瓶+ +厌氧瓶组合，比采用二个需厌氧瓶组合，比采用二个需氧瓶的组合可检出更多的葡萄球菌、肠杆菌科细氧瓶的组合可检出更多的葡萄球菌、肠杆菌科细菌和厌氧菌。而且，采两瓶可以保证足够的采血菌和厌氧菌。而且，采两瓶可以保证足够的采血量。当被用来做培养的采血量少于推荐值时，血量。当被用来做培养的采血量少于推荐值时，血必须首先接种需氧瓶，然后将剩余的血液接种入必须首先接种需氧瓶，然后将剩余的血液接种入厌氧瓶。因为多数菌血症是由需氧和兼性需氧细厌氧瓶。因为多数菌血症是由需氧和兼性需氧细菌造成的，而这些细菌从需氧瓶中更好的被分离。菌造成的，而这些细菌从需氧瓶中更好的被分离。由于婴幼儿患者厌氧菌所致菌血症比较罕见，由于婴幼儿患者厌氧菌所致菌血症比较罕见，婴幼儿血培养可以仅用需氧瓶，为提高检出婴幼儿血培养可以仅用需氧瓶，为提高检出率、区分污染菌，应采用率、区分污染菌，应采用两只需氧瓶两只需氧瓶为一组为一组血培养。仍然采用血培养。仍然采用双侧双瓶双侧双瓶的采血方式。的采血方式。真菌血培养采用需氧血培养瓶采集标本。采真菌血培养采用需氧血培养瓶采集标本。采用中和用中和/ /灭活抗菌药物的血培养瓶可提高真灭活抗菌药物的血培养瓶可提高真菌的检出率。自动化血培养系统不能用于双菌的检出率。自动化血培养系统不能用于双相真菌的检测。相真菌的检测。小结小结一、血培养套数与采血部位一、血培养套数与采血部位vv每位患者每次采血最少每位患者每次采血最少2 2套，套，3 3套更好套更好vv初发患者，绝不能只采初发患者，绝不能只采1 1套标本套标本vv 多个穿刺部位采血。因多部位同时发多个穿刺部位采血。因多部位同时发 生污染的几率较小，便于对结果进判断生污染的几率较小，便于对结果进判断二、关于标本采集间隔时间二、关于标本采集间隔时间vv对对对对于于于于非非非非持持持持续续续续性性性性菌菌菌菌血血血血症症症症，同同同同时时时时或或或或短短短短时时时时间间间间内内内内采采采采集集集集2 23 3套套套套血血血血培培培培养养养养，因因因因为为为为体体体体内内内内巨巨巨巨噬噬噬噬细细细细胞胞胞胞吞吞吞吞噬噬噬噬系系系系统统统统会会会会在在在在151530min30min内内内内清清清清除除除除掉进入人体内的细菌。掉进入人体内的细菌。掉进入人体内的细菌。掉进入人体内的细菌。vv可可可可疑疑疑疑急急急急性性性性心心心心内内内内膜膜膜膜炎炎炎炎患患患患者者者者要要要要立立立立即即即即取取取取血血血血作作作作血血血血培培培培养养养养，3030分分分分钟钟钟钟内内内内完完完完成成成成3 3套套套套血血血血培培培培养养养养的的的的采采采采集集集集，采采采采集集集集后后后后立立立立即即即即进进进进行行行行抗抗抗抗菌菌菌菌药药药药的的的的经经经经验验验验治治治治疗。如果疗。如果疗。如果疗。如果2424小时内报告阴性，则继续采集小时内报告阴性，则继续采集小时内报告阴性，则继续采集小时内报告阴性，则继续采集2 2套血培养。套血培养。套血培养。套血培养。vv可可可可疑疑疑疑的的的的亚亚亚亚急急急急性性性性心心心心内内内内膜膜膜膜炎炎炎炎患患患患者者者者每每每每间间间间隔隔隔隔3030分分分分钟钟钟钟至至至至1h1h采采采采集集集集1 1套套套套，连连连连续续续续采采采采集集集集3 3套套套套标标标标本本本本。如如如如果果果果2424小小小小时时时时内内内内报报报报告告告告阴阴阴阴性性性性，则则则则继继继继续续续续采采采采集集集集2 2套血培养。套血培养。套血培养。套血培养。v血培养对无菌操作的要求比注射、采集生化、凝血培养对无菌操作的要求比注射、采集生化、凝血等其它标本要高。血等其它标本要高。v所以要最先采集血培养标本。所以要最先采集血培养标本。v污染率的指标是污染率的指标是 3%10105 5CFU/ml CFU/ml 或革兰阳性球菌数或革兰阳性球菌数10104 4CFU/mlCFU/ml时有临床诊断意义。时有临床诊断意义。 （不是绝对的，受多（不是绝对的，受多因素影响，综合判断）因素影响，综合判断）v2. 2. 尿液标本的采集和培养中的问题是污染杂菌，故应尿液标本的采集和培养中的问题是污染杂菌，故应严格进行严格进行无菌操作无菌操作。v3. 3. 尿标本采集后应立即送检，以免污染，尿液中尿标本采集后应立即送检，以免污染，尿液中不得不得加防腐剂和消毒剂加防腐剂和消毒剂。v4.4.除非是流行病学调查，除非是流行病学调查，长期留置导尿管患者常规长期留置导尿管患者常规尿培养没有临床意义尿培养没有临床意义，大量病原菌常可在这类患者，大量病原菌常可在这类患者中检出，导尿管留置时间延长易导致与引起患者尿中检出，导尿管留置时间延长易导致与引起患者尿道感染不一致的微生物定植生长；道感染不一致的微生物定植生长；v5.5.不可从集尿袋的下端管口留取标本，集尿袋内的不可从集尿袋的下端管口留取标本，集尿袋内的尿液也不能用于培养，可能会引起污染；尿液也不能用于培养，可能会引起污染；v6.6.临床常让患者留取清洁中段尿，临床常让患者留取清洁中段尿，应该在医护人员应该在医护人员监督指导下让患者正确的留取清洁中段尿监督指导下让患者正确的留取清洁中段尿；v7.7.由于种种原因，患者常常不能正确地留取清洁中由于种种原因，患者常常不能正确地留取清洁中段尿，实验室只是针对尿液标本培养的结果进行评段尿，实验室只是针对尿液标本培养的结果进行评估，或常常由于分析前尿液标本污染了多种细菌无估，或常常由于分析前尿液标本污染了多种细菌无法正确解释的结果，可能延误了临床的正确诊断和法正确解释的结果，可能延误了临床的正确诊断和治疗。治疗。下列因素可使尿液中细菌数量下列因素可使尿液中细菌数量减少，判断结果时应注意减少，判断结果时应注意使用抗生素治疗，细菌生长受到抑制；使用抗生素治疗，细菌生长受到抑制；尿液稀释，尿比重尿液稀释，尿比重1.0031.003，营养成分减少，细菌，营养成分减少，细菌生长迟缓；生长迟缓；尿尿PHPH5.05.0或或8.58.5，细菌生长受阻；，细菌生长受阻；尿频时，膀胱内细菌停留时间短，菌落数减少；尿频时，膀胱内细菌停留时间短，菌落数减少；尿道口消毒液混入标本中，影响细菌繁殖，菌落数尿道口消毒液混入标本中，影响细菌繁殖，菌落数减少；减少；不同种类的细菌生长速度不同、营养要求不同，菌不同种类的细菌生长速度不同、营养要求不同，菌落计数有所不同。落计数有所不同。四、四、 大便培养标本采集规范大便培养标本采集规范 （一）采集时间（一）采集时间v腹泻患者应在急性期，并尽可能在使用抗生素之前采集新腹泻患者应在急性期，并尽可能在使用抗生素之前采集新鲜粪便；伤寒患者在发病鲜粪便；伤寒患者在发病2 2周以后。周以后。（二）采集方法（二）采集方法v1 1自然排便采集法自然排便采集法 自然排便后，挑取有自然排便后，挑取有脓血或黏液脓血或黏液部部位的粪便位的粪便2-3g 2-3g ，液状粪便取絮状物盛于无菌的容器内或，液状粪便取絮状物盛于无菌的容器内或置于保存液或增菌液中送检。置于保存液或增菌液中送检。v2 2直肠拭子采集法直肠拭子采集法 对不易获得粪便或排便困难的患者对不易获得粪便或排便困难的患者及婴幼儿，可采用直肠拭子法采集标本，其方法是将拭子及婴幼儿，可采用直肠拭子法采集标本，其方法是将拭子前端用甘油湿润。然后插入肛门约前端用甘油湿润。然后插入肛门约4 45cm5cm（幼儿约（幼儿约2 23cm3cm）处，轻轻在直肠内旋转，擦取直肠表面粘液后取出，）处，轻轻在直肠内旋转，擦取直肠表面粘液后取出，盛入无菌试管或保存液中送检。盛入无菌试管或保存液中送检。（三）实验室检查（三）实验室检查 v肠道细菌大多为革兰阴性杆菌，且因粪便标本中有肠道细菌大多为革兰阴性杆菌，且因粪便标本中有各种正常菌群，形态上区分困难，因此各种正常菌群，形态上区分困难，因此一般不做直一般不做直接涂片检查接涂片检查。v只有当临床怀疑肠道菌群失调或检查霍乱弧菌、结只有当临床怀疑肠道菌群失调或检查霍乱弧菌、结核分枝杆菌、疑似葡萄球菌或难辩梭菌引起的伪膜核分枝杆菌、疑似葡萄球菌或难辩梭菌引起的伪膜性肠炎以及真菌性腹泻时，才做直接涂片检查。性肠炎以及真菌性腹泻时，才做直接涂片检查。v疑似葡萄球菌引起的抗菌素相关性肠炎，可取水样疑似葡萄球菌引起的抗菌素相关性肠炎，可取水样便或肠黏膜样物涂片，革兰染色后镜检，见革兰阴便或肠黏膜样物涂片，革兰染色后镜检，见革兰阴性杆菌明显减少，革兰阳性球菌大量散在或成堆性杆菌明显减少，革兰阳性球菌大量散在或成堆（葡萄状）排列，可提示（葡萄状）排列，可提示肠道菌群失调肠道菌群失调。（四）注意事项（四）注意事项v在腹泻发病的正确时间收集标本，病人应尽量在急在腹泻发病的正确时间收集标本，病人应尽量在急性期（性期（3d3d）内和用药前采集标本，以提高检出率。）内和用药前采集标本，以提高检出率。v大便标本中含有很多杂菌，粪便标本的采集须注意大便标本中含有很多杂菌，粪便标本的采集须注意防止外界脏物污染，防止外界脏物污染，尽量采用无菌容器。尽量采用无菌容器。v为提高阳性检出率，要采集新鲜标本，立即送检。为提高阳性检出率，要采集新鲜标本，立即送检。五、五、 生殖道标本采集规范生殖道标本采集规范 （一）送检指征（一）送检指征1. 1. 男性泌尿系统表现男性泌尿系统表现尿急、尿频、尿痛尿急、尿频、尿痛尿道分泌物增多尿道分泌物增多会阴部疼痛及阴囊疼痛会阴部疼痛及阴囊疼痛性功能障碍性功能障碍泌尿生殖器畸形和缺损泌尿生殖器畸形和缺损2. 2. 女性泌尿系统表现女性泌尿系统表现分泌物增多及性状异常分泌物增多及性状异常尿道口搔痒及脓性分泌物流畅尿道口搔痒及脓性分泌物流畅下腹疼痛下腹疼痛月经失调月经失调阴道出血阴道出血外阴搔痒外阴搔痒外阴或阴道疼痛外阴或阴道疼痛性功能障碍性功能障碍（二）标本采集（二）标本采集v 生殖器官标本包括子宫颈、阴道、前列腺；生殖器官标本包括子宫颈、阴道、前列腺；男性及女性外生殖器的分泌物及经血等。应男性及女性外生殖器的分泌物及经血等。应根据感染的部位和可能的病原体决定用于病根据感染的部位和可能的病原体决定用于病原学诊断的标本种类、采集部位和采集方法原学诊断的标本种类、采集部位和采集方法等。阴道、子宫颈及前列腺等分泌物应由医等。阴道、子宫颈及前列腺等分泌物应由医师采集，收集于无菌试管内送检。师采集，收集于无菌试管内送检。v尿道分泌物尿道分泌物1. 1. 女性尿道：患者排尿女性尿道：患者排尿1 1小时后采集，首先小时后采集，首先拭去尿道口的渗出物；再用拭子通过阴道，拭去尿道口的渗出物；再用拭子通过阴道，靠着耻骨联合，按摩尿道，采集分泌物；如靠着耻骨联合，按摩尿道，采集分泌物；如未获得分泌物，清洗外尿道，用灭菌纱布或未获得分泌物，清洗外尿道，用灭菌纱布或棉球擦拭，用泌尿生殖道拭子插入尿道棉球擦拭，用泌尿生殖道拭子插入尿道2 24cm4cm，旋转拭子，旋转拭子2 2秒。秒。2. 2. 男性尿道：用泌尿生殖道拭子插入尿道腔男性尿道：用泌尿生殖道拭子插入尿道腔2 24cm4cm，旋转拭子，至少停留，旋转拭子，至少停留2020秒，而使之秒，而使之容易吸收。容易吸收。v阴道分泌物阴道分泌物 擦除过多的分泌物和排出液，用无菌棉拭子擦除过多的分泌物和排出液，用无菌棉拭子采取阴道口内采取阴道口内4 4厘米内侧壁或后穹窿处分泌物，厘米内侧壁或后穹窿处分泌物，如果需要涂片，需再用一个拭子。如果需要涂片，需再用一个拭子。v男性前列腺：用前列腺按摩法采集前列腺液。男性前列腺：用前列腺按摩法采集前列腺液。清洗尿道口，冲洗尿道膀胱，从肛门用手指清洗尿道口，冲洗尿道膀胱，从肛门用手指按摩前列腺，使前列腺液溢出，用无菌容器按摩前列腺，使前列腺液溢出，用无菌容器收集。无肉眼可见脓液时，可用灭菌拭子轻收集。无肉眼可见脓液时，可用灭菌拭子轻轻伸入前尿道内，旋转拭子采集标本。轻伸入前尿道内，旋转拭子采集标本。（三）注意事项（三）注意事项 1.1.生殖器是开放性器官，标本采集过程中应严格遵生殖器是开放性器官，标本采集过程中应严格遵循无菌操作规程以减少杂菌污染。循无菌操作规程以减少杂菌污染。 2.2.由于阴道正常菌群的存在而使细菌的分离鉴定由于阴道正常菌群的存在而使细菌的分离鉴定受到干扰，所以在采集女性生殖道标本时应注意尽受到干扰，所以在采集女性生殖道标本时应注意尽量量减少或避免正常菌群的污染减少或避免正常菌群的污染。 3.3.疑有宫腔感染，如遇产妇需行剖宫产，待胎儿疑有宫腔感染，如遇产妇需行剖宫产，待胎儿娩出后取宫腔分泌物，并同时取婴儿耳拭子一同送娩出后取宫腔分泌物，并同时取婴儿耳拭子一同送检。检。 4.4.沙眼衣原体和病毒沙眼衣原体和病毒均在宿主细胞内繁殖，取材均在宿主细胞内繁殖，取材时拭子应在病变部位（移行上皮处稍内）停留十几时拭子应在病变部位（移行上皮处稍内）停留十几秒钟，并采集尽可能多的上皮细胞。秒钟，并采集尽可能多的上皮细胞。 5. 5. 生殖道感染生殖道感染厌氧菌厌氧菌也较多见，疑有厌氧菌感染也较多见，疑有厌氧菌感染时，标本采集和运送应避免与氧气接触，最佳方时，标本采集和运送应避免与氧气接触，最佳方法是床边采样，直接接种至厌氧装置内。法是床边采样，直接接种至厌氧装置内。 6. 6. 淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌检查时，取材的深度一定要够，因检查时，取材的深度一定要够，因为淋球菌好发于柱状上皮细胞而不是复层鳞状上为淋球菌好发于柱状上皮细胞而不是复层鳞状上皮细胞。不论男女尿道及子宫颈均需用拭子插入皮细胞。不论男女尿道及子宫颈均需用拭子插入尿道及子宫颈尿道及子宫颈3cm3cm深转动并停留深转动并停留10-30s10-30s取样送检。取样送检。 7. 7. 淋病奈瑟菌抵抗力低，对外环境变化颇为敏感，淋病奈瑟菌抵抗力低，对外环境变化颇为敏感，对寒冷和干燥抵抗力很弱。因此，为了保证培养对寒冷和干燥抵抗力很弱。因此，为了保证培养有足够的成功率，取材后要尽快送检，立即接种，有足够的成功率，取材后要尽快送检，立即接种，标本离体时间越短越好。标本离体时间越短越好。六、六、 化脓和创伤标本采集规范化脓和创伤标本采集规范 组织或器官的化脓性感染，其病原菌的来源可分组织或器官的化脓性感染，其病原菌的来源可分为两类：为两类：v 内源性内源性：感染源是炎症局部周围器官中的正：感染源是炎症局部周围器官中的正常菌群，由于损伤等因素进入无菌状态的组织内，常菌群，由于损伤等因素进入无菌状态的组织内，发生感染。发生感染。v 外源性外源性：感染源是存在于人体外部自然界的：感染源是存在于人体外部自然界的微生物，由于外伤和直接接触通过人体表面进入微生物，由于外伤和直接接触通过人体表面进入人体，造成感染人体，造成感染。 脓液的细菌学检查对于确定感染的种类（结核脓液的细菌学检查对于确定感染的种类（结核性或非结核性等）、提供药物敏感结果和指导临性或非结核性等）、提供药物敏感结果和指导临床治疗有重要的意义。床治疗有重要的意义。（一）标本采集（一）标本采集v1 1开放性感染和已溃破的化脓灶开放性感染和已溃破的化脓灶 标本采集前先标本采集前先用灭菌生理盐水拭去表面渗出物，尽可能用抽吸或用灭菌生理盐水拭去表面渗出物，尽可能用抽吸或将拭子深入伤口，紧贴伤口前沿取样，将拭子深入伤口，紧贴伤口前沿取样，从脓肿底部从脓肿底部或脓肿壁取样，效果最好或脓肿壁取样，效果最好。慢性感染，污染严重，。慢性感染，污染严重，很难分离到致病菌，可取感染部位下的组织，研磨很难分离到致病菌，可取感染部位下的组织，研磨成组织匀浆接种于适宜的培养基。成组织匀浆接种于适宜的培养基。v2 2封闭性脓肿封闭性脓肿 局部消毒后用局部消毒后用针及注射器抽吸针及注射器抽吸脓脓肿壁，将所有物质置于无菌试管内送检，疑为厌氧肿壁，将所有物质置于无菌试管内送检，疑为厌氧菌感染时立即作床边接种或置于厌氧转运装置送检菌感染时立即作床边接种或置于厌氧转运装置送检（针头插一橡皮塞隔绝空气）。但取样时，可能会（针头插一橡皮塞隔绝空气）。但取样时，可能会带入与感染过程无关的定植细菌。带入与感染过程无关的定植细菌。v3 3大面积创伤感染大面积创伤感染：可取感染组织块或沾有脓汁的：可取感染组织块或沾有脓汁的内层敷料送检。内层敷料送检。（二）注意事项（二）注意事项v细菌对干燥敏感细菌对干燥敏感或只能采集少量标本时，用棉拭或只能采集少量标本时，用棉拭子采集标本后立即放入液体培养基内，或采标本子采集标本后立即放入液体培养基内，或采标本前先将棉拭子沾少许肉汤以前先将棉拭子沾少许肉汤以保持标本湿度保持标本湿度。v对于不能立即送检的标本，应放对于不能立即送检的标本，应放44保存，培养保存，培养淋病奈瑟菌和脑膜炎奈瑟菌淋病奈瑟菌和脑膜炎奈瑟菌的标本除外。的标本除外。v尽可能在用药前采集标本。尽可能在用药前采集标本。v采样前病灶局部应避免用抗菌药物或消毒剂。采样前病灶局部应避免用抗菌药物或消毒剂。v革兰染色对标本进行评估。涂片中如出现上皮细革兰染色对标本进行评估。涂片中如出现上皮细胞提示标本已被污染。没有上皮细胞而有白细胞胞提示标本已被污染。没有上皮细胞而有白细胞说明标本采集正确。说明标本采集正确。v有的创伤均可有细菌污染，但不一定发生感染，有的创伤均可有细菌污染，但不一定发生感染，因此对分离到的细菌要根据创伤的情况、菌量和因此对分离到的细菌要根据创伤的情况、菌量和种数，收集标本的处理过程、机体免疫力及抗生种数，收集标本的处理过程、机体免疫力及抗生素的使用情况等多种因素来分析判断。素的使用情况等多种因素来分析判断。七、七、 穿刺液标本采集规范穿刺液标本采集规范 v穿刺液主要包括穿刺液主要包括: : 脑脊液脑脊液 胆汁胆汁 胸水胸水 腹水腹水 心包液心包液 关节液关节液 鞘膜液鞘膜液 在正常人体中，上述体液均是无菌的。有感染的在正常人体中，上述体液均是无菌的。有感染的情况下检出的细菌，在排除污染后应视为病原菌，情况下检出的细菌，在排除污染后应视为病原菌，及时给予正确的治疗，使病人早日恢复健康。及时给予正确的治疗，使病人早日恢复健康。（一）脑脊液（一）脑脊液1. 1. 采集时间采集时间： 怀疑为脑膜炎的病人，应立即采集脑怀疑为脑膜炎的病人，应立即采集脑脊液，最好在使用抗菌药物以前采集标本。脊液，最好在使用抗菌药物以前采集标本。2. 2. 采集方法采集方法： 用腰穿方法采集脑脊液用腰穿方法采集脑脊液3 35ml5ml，分装，分装到到3 3个无菌试管中，每个试管个无菌试管中，每个试管1 12ml2ml。第一管用于第一管用于细菌培养细菌培养! !也可将抽取液直接注入血培养瓶也可将抽取液直接注入血培养瓶,用血培养仪培养。用血培养仪培养。3.3.标本运送和保存：标本运送和保存：脑膜炎奈瑟菌离体后会迅脑膜炎奈瑟菌离体后会迅速自溶速自溶, ,肺炎链球菌和流感嗜血杆菌也很容易肺炎链球菌和流感嗜血杆菌也很容易死亡死亡, ,因此因此, ,标本应立即送检标本应立即送检, ,并注意保温、防并注意保温、防干燥。切不可置冰箱保存干燥。切不可置冰箱保存, ,否则会影响检出率。否则会影响检出率。 脑脊液标本送检的理想时间为脑脊液标本送检的理想时间为1515分钟分钟内，半内，半小时送检是可接受的，如果送检时间超过小时送检是可接受的，如果送检时间超过1 1小小时，则会影响结果。时，则会影响结果。 如不能及时送检，可使用血培养瓶（怀疑脑如不能及时送检，可使用血培养瓶（怀疑脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌感染时，请勿使用膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌感染时，请勿使用血培养瓶）血培养瓶）（二）胆汁及其它穿刺液（胸水、腹水、心包二）胆汁及其它穿刺液（胸水、腹水、心包液、关节液及鞘膜液等）液、关节液及鞘膜液等）1. 1. 采集时间采集时间 怀疑感染存在，应尽早采集标本，一怀疑感染存在，应尽早采集标本，一般在患者使用抗菌药物之前或停止用药后般在患者使用抗菌药物之前或停止用药后2-32-3天采天采集。集。2. 2. 采集方法采集方法v无菌操作穿刺抽取标本或外科手术采集标本。无菌操作穿刺抽取标本或外科手术采集标本。v标本采集量应标本采集量应1ml1ml。胸腔积液、腹水可抽取。胸腔积液、腹水可抽取10ml, 10ml, 心包液、关节液等可抽取心包液、关节液等可抽取2-5ml 2-5ml 。v标本采集后注入无菌小瓶或无菌试管中送检也可标本采集后注入无菌小瓶或无菌试管中送检也可将抽取液直接注入血培养瓶，用血培养仪培养。将抽取液直接注入血培养瓶，用血培养仪培养。v为防止穿刺液的凝固为防止穿刺液的凝固，应在无菌试管中预先加入，应在无菌试管中预先加入灭灭菌肝素，菌肝素，再注入穿刺液。再注入穿刺液。八、八、 眼、耳、鼻、咽拭子标本采集规范眼、耳、鼻、咽拭子标本采集规范 正常眼部、中耳及鼻窦内是无菌的，而咽正常眼部、中耳及鼻窦内是无菌的，而咽峡部有口腔的常在菌丛。峡部有口腔的常在菌丛。 耳、鼻、咽部的细耳、鼻、咽部的细菌感染病原菌多源于口腔，口腔中既有需氧菌感染病原菌多源于口腔，口腔中既有需氧菌也有厌氧菌，所以，其周围组织器官的感菌也有厌氧菌，所以，其周围组织器官的感染不仅考虑是需氧菌，也须检查厌氧菌。染不仅考虑是需氧菌，也须检查厌氧菌。（一）标本采集（一）标本采集 1. 1. 眼眼 结膜结膜：分别用（无菌盐水预湿）拭子绕每一个结膜取；：分别用（无菌盐水预湿）拭子绕每一个结膜取；采集完即接种培养基；将拭子涂片在两个玻片上染色。采集完即接种培养基；将拭子涂片在两个玻片上染色。角膜刮擦角膜刮擦：滴两滴局部麻醉液；用无菌铲刮擦脓肿或：滴两滴局部麻醉液；用无菌铲刮擦脓肿或溃疡，将刮擦物直接接种于培养基；将剩余材料涂于溃疡，将刮擦物直接接种于培养基；将剩余材料涂于两个干净的玻片上染色。两个干净的玻片上染色。液体或抽吸物液体或抽吸物：备眼，用针头抽吸液体。先用无菌生：备眼，用针头抽吸液体。先用无菌生理盐水冲洗眼部，然后用棉拭子拭干，再用无菌棉拭理盐水冲洗眼部，然后用棉拭子拭干，再用无菌棉拭子采集分泌物。子采集分泌物。2. 2. 耳耳 内耳内耳：对复杂的、反复的或慢性顽固的中耳炎做鼓：对复杂的、反复的或慢性顽固的中耳炎做鼓膜穿刺术，接触耳鼓室先用肥皂水清洗耳道再用注膜穿刺术，接触耳鼓室先用肥皂水清洗耳道再用注射器收集液体；对破裂的鼓室，借助耳科诊视器，射器收集液体；对破裂的鼓室，借助耳科诊视器，用软杆拭子收集液体。用软杆拭子收集液体。外耳外耳：用湿拭子将耳道的任何碎屑或痂皮拭去；在：用湿拭子将耳道的任何碎屑或痂皮拭去；在外耳道用力旋转拭子取样。外耳道用力旋转拭子取样。3 3鼻或鼻咽分泌物鼻或鼻咽分泌物 直接用拭子涂抹病灶部位，切勿接触直接用拭子涂抹病灶部位，切勿接触周围粘膜或皮肤，标本立即送检。周围粘膜或皮肤，标本立即送检。4 4咽分泌物咽分泌物 先用清水漱口，用压舌板将舌向下向外压，先用清水漱口，用压舌板将舌向下向外压，将咽拭子在咽后壁或悬雍垂后侧涂抹数次，插入运送培将咽拭子在咽后壁或悬雍垂后侧涂抹数次，插入运送培养基。切勿接触口腔和舌粘膜。养基。切勿接触口腔和舌粘膜。（二）标本运送和保存二）标本运送和保存 标本采集时，无菌手续以稍蘸肉汤的拭标本采集时，无菌手续以稍蘸肉汤的拭子采集病变明显处的脓液和分泌物。采取后子采集病变明显处的脓液和分泌物。采取后拭子应置于运送培养基或培养拭子运送，以拭子应置于运送培养基或培养拭子运送，以防干燥。立即送检，如不能及时送检，应置防干燥。立即送检，如不能及时送检，应置于于冰箱保存，超过冰箱保存，超过48h48h不可使用。不可使用。 九、九、 导管标本采集规范导管标本采集规范 血管内留置管道是现代医护工作，尤其是血管内留置管道是现代医护工作，尤其是ICUICU一个不可缺少的部分。一个不可缺少的部分。 目前使用的有外周静脉导管和单腔、多腔的目前使用的有外周静脉导管和单腔、多腔的中心静脉导管、隧道式的中心静脉导管、漂浮式中心静脉导管、隧道式的中心静脉导管、漂浮式肺动脉导管、经外周静脉置入中心静脉的导管、肺动脉导管、经外周静脉置入中心静脉的导管、外周动脉导管等。外周动脉导管等。 这些可留置的通道为医疗工作的液体、血液这些可留置的通道为医疗工作的液体、血液制品、营养物质、药物的输入、血流动力学监测、制品、营养物质、药物的输入、血流动力学监测、采血及急救通道的维持提供了可靠途径；但同时采血及急救通道的维持提供了可靠途径；但同时也带来了各种并发症，如导管相关的局部感染与也带来了各种并发症，如导管相关的局部感染与菌血症、血栓形成、血栓性脉管炎、脓性血栓脉菌血症、血栓形成、血栓性脉管炎、脓性血栓脉管炎等。管炎等。血管导管培养血管导管培养 血管导管（血管导管（intravascular catheter tips intravascular catheter tips ）及腹）及腹膜透析导管（膜透析导管（peritoneal dialysis catheters peritoneal dialysis catheters ）培养是监测血流感染源方法之一培养是监测血流感染源方法之一 标准方法：标准方法：u 经由导管抽取经由导管抽取20ml20ml血液，进行血液培养；血液，进行血液培养；u 导管周围的皮肤乙醇消毒，然后以无菌剪刀取下导管周围的皮肤乙醇消毒，然后以无菌剪刀取下约约5cm5cm长度，置于无菌容器中送检（防干燥，不能长度，置于无菌容器中送检（防干燥，不能作床旁接种者，可将导管置含有少量生理盐水的无作床旁接种者，可将导管置含有少量生理盐水的无菌试管内送检。也可将剪下的导管体内段置肉汤增菌试管内送检。也可将剪下的导管体内段置肉汤增菌液或用于血培养液内，但不能区分导管感染菌与菌液或用于血培养液内，但不能区分导管感染菌与少量的定植菌）少量的定植菌） 再由静脉端抽血进行另外一套血液培养。再由静脉端抽血进行另外一套血液培养。 标本处理：标本处理： 实验室将体内段导管立即置血平皿上作滚实验室将体内段导管立即置血平皿上作滚动涂布接种，将血平板置动涂布接种，将血平板置3535培养培养8 824h24h，观察有无细菌生长，如细菌菌落数观察有无细菌生长，如细菌菌落数15 15 CFU/TipCFU/Tip即为阳性，则认为血流感染是可能即为阳性，则认为血流感染是可能与导管有关。与导管有关。导管相关感染主要病原菌：导管相关感染主要病原菌：v凝固酶阴性的葡萄球菌（主要是表皮葡萄凝固酶阴性的葡萄球菌（主要是表皮葡萄球菌）是最常见的导致导管相关性感染的球菌）是最常见的导致导管相关性感染的细菌，所占比例超过细菌，所占比例超过50% 50% 。主要原因是凝。主要原因是凝固酶阴性的葡萄球菌易粘附塑料导管，易固酶阴性的葡萄球菌易粘附塑料导管，易导致导管相关菌血症。导致导管相关菌血症。v其次是革兰氏阴性肠杆菌属及真菌，特别其次是革兰氏阴性肠杆菌属及真菌，特别是白色念珠菌。是白色念珠菌。v较少见的还有假单胞菌属、棒状菌属等。较少见的还有假单胞菌属、棒状菌属等。v其它如黄杆菌属、不动杆菌等不常见的感其它如黄杆菌属、不动杆菌等不常见的感染，常提示输液品感染或环境污染。染，常提示输液品感染或环境污染。十、十、 组织标本采集规范组织标本采集规范 根据不同的病变部位，炎症或坏死组织部位，采用相应的根据不同的病变部位，炎症或坏死组织部位，采用相应的方法采集组织标本。方法采集组织标本。（一）表浅组织（一）表浅组织 表浅的感染组织和各种窦道标本可用棉签擦拭、小刀表浅的感染组织和各种窦道标本可用棉签擦拭、小刀刮取、穿刺抽吸或手术切除。对窦道和瘘管应深部刮取管壁刮取、穿刺抽吸或手术切除。对窦道和瘘管应深部刮取管壁组织。组织。 1 1皮肤、黏膜、指甲皮肤、黏膜、指甲 用棉签或小刀擦取或刮取，用棉签或小刀擦取或刮取，也可用手术切除或穿刺抽取置无菌试管送检。也可用手术切除或穿刺抽取置无菌试管送检。 2 2牙周牙周 穿刺活检或抽取炎性分泌物置无菌的容器穿刺活检或抽取炎性分泌物置无菌的容器内送检。内送检。 3 3窦道、瘘管窦道、瘘管 用深部刮取术，采集一小部分管用深部刮取术，采集一小部分管壁组织，置无菌的容器内送检。壁组织，置无菌的容器内送检。 采集时间采集时间 一般表浅皮肤黏膜组织在使用抗菌药物之前采集。一般表浅皮肤黏膜组织在使用抗菌药物之前采集。（二）深部组织（二）深部组织 深部组织标本可经皮肤穿刺采集或手术切取。深部组织标本可经皮肤穿刺采集或手术切取。标本置无菌容器并加少量生理盐水以保湿度，或置标本置无菌容器并加少量生理盐水以保湿度，或置肉汤增菌液，或置血平皿送检。如果怀疑为厌氧菌肉汤增菌液，或置血平皿送检。如果怀疑为厌氧菌感染，应把组织放入厌氧的传输系统内立即送检。感染，应把组织放入厌氧的传输系统内立即送检。 采集各种深部组织活检之前，应严格进行皮肤消采集各种深部组织活检之前，应严格进行皮肤消毒后才行无菌穿刺采集。毒后才行无菌穿刺采集。 采集时间采集时间 深部组织深部组织 包括肺、脑、胃、十二指肠等包括肺、脑、胃、十二指肠等腹部脏器、支气管、淋巴结、附件、扁桃体等，在腹部脏器、支气管、淋巴结、附件、扁桃体等，在手术或内窥镜检查时采集。手术或内窥镜检查时采集。v（三）作病原体分离的组织标本，不可用福尔马（三）作病原体分离的组织标本，不可用福尔马林固定。林固定。疑有污染的较大组织块，可用烧红的烙疑有污染的较大组织块，可用烧红的烙铁烧灼其表面或置沸水中铁烧灼其表面或置沸水中5 510s10s使表面变白消除使表面变白消除污染后，再用无菌器械切开组织，取中央部位组污染后，再用无菌器械切开组织，取中央部位组织送检。织送检。v 怀疑军团菌感染时，肺组织切片不要加入生怀疑军团菌感染时，肺组织切片不要加入生理盐水，因为生理盐水可抑制军团菌生长。理盐水，因为生理盐水可抑制军团菌生长。 各种活检组织标本，在常温下保存最长时间各种活检组织标本，在常温下保存最长时间为为24h24h。微生物标本的保存微生物标本的保存v储存环境储存环境 标本来源标本来源v44冰箱冰箱 尿液、痰液、粪便尿液、痰液、粪便v v3535温箱温箱 脑脊液培养标本、淋病检查样本脑脊液培养标本、淋病检查样本v室温室温 眼、耳、鼻、咽、血管导管、眼、耳、鼻、咽、血管导管、v 组织、体液、生殖道、组织、体液、生殖道、v 厌氧菌培养标本、厌氧菌培养标本、 血液培养瓶血液培养瓶v 指甲，头发，皮肤刮取物霉菌培指甲，头发，皮肤刮取物霉菌培v 养标本养标本