会计学1二章节二章节(zhngji)菌种扩大和培养菌种扩大和培养第一页，共21页。本节思考题本节思考题n n1、什么是自然选育(xun y)？自然选育(xun y)（自然分离）的一般程序是什么？第1页/共20页第二页，共21页。2. 32. 3工业工业工业工业(gngy)(gngy)微生物菌种的选育微生物菌种的选育微生物菌种的选育微生物菌种的选育n n一、微生物菌种的自然选育一、微生物菌种的自然选育n n 在生产过程中，不经过人工在生产过程中，不经过人工(rngng)(rngng)处理，利用处理，利用菌种的自然突变而进行菌种筛选的过程叫做自然选菌种的自然突变而进行菌种筛选的过程叫做自然选育育n n 第2页/共20页第三页，共21页。 自然选育是一种简单易行的选育方法，它可以达到纯化菌种，防止菌种衰退、稳定生产、提高产量的目的(md)。但是自然选育的最大缺点是效率低、进展慢。因此，经常把自然选育和诱变育种交替使用，这样可以收到良好的效果。 自然选育（自然分离）的一般程序，是把菌种制备成单孢子悬浮液，经过适当的稀释以后，在固体平板上进行分离，挑取部分单菌落进行生产能力的测定，经反复筛选，以确定生产能力更高的菌株代替原来的菌株。第3页/共20页第四页，共21页。 在过去在过去4040年间曾筛选出许多产生新的有用的次级代年间曾筛选出许多产生新的有用的次级代谢物的菌种。这些菌种多半是以经验谢物的菌种。这些菌种多半是以经验(jngyn)(jngyn)式的式的筛选方法获得的。大多数的抗生素均由放线菌纲产筛选方法获得的。大多数的抗生素均由放线菌纲产生。生。 第4页/共20页第五页，共21页。前述介绍放线菌纲为主的分离方法原前述介绍放线菌纲为主的分离方法原理理(yunl)(yunl)和发展和发展: :n n选择(xunz)性分离方法大致可分为五个步骤：n n含微生物材料的选择(xunz)；材料的预处理；所需菌种的分离；培养；菌落的选择(xunz)和纯化。第5页/共20页第六页，共21页。小结小结(xioji)(xioji)：菌种的分离简介：菌种的分离简介 一、菌种的来源一、菌种的来源一、菌种的来源一、菌种的来源根据根据根据根据(gnj)(gnj)(gnj)(gnj)资料直接向有科研单位、高等院校、资料直接向有科研单位、高等院校、资料直接向有科研单位、高等院校、资料直接向有科研单位、高等院校、工厂或菌种保藏部门索取或购买；工厂或菌种保藏部门索取或购买；工厂或菌种保藏部门索取或购买；工厂或菌种保藏部门索取或购买；从大自然中分离筛选新的微生物菌种。从大自然中分离筛选新的微生物菌种。从大自然中分离筛选新的微生物菌种。从大自然中分离筛选新的微生物菌种。 第6页/共20页第七页，共21页。二、分离二、分离(fnl)(fnl)思路思路 n n新新菌菌种种的的分分离离(fnl)(fnl)是是要要从从混混杂杂的的各各类类微微生生物物中中依依照照生生产产的的要要求求、菌菌种种的的特特性性，采采用用各各种种筛筛选选方方法，快速、准确地把所需要的菌种挑选出来。法，快速、准确地把所需要的菌种挑选出来。n n实实验验室室或或生生产产用用菌菌种种若若不不慎慎污污染染了了杂杂菌菌，也也必必须须重新进行分离重新进行分离(fnl)(fnl)纯化。纯化。 n n有有了了优优良良的的菌菌种种，还还要要有有合合适适的的工工艺艺条条件件和和合合理理先进的设备与之配合。先进的设备与之配合。第7页/共20页第八页，共21页。n n定定定定方方方方案案案案：首首首首先先先先要要要要查查查查阅阅阅阅资资资资料料料料，了了了了解解解解所所所所需需需需菌菌菌菌种种种种的的的的生生生生长培养特性。长培养特性。长培养特性。长培养特性。n n采样：有针对性地采集样品。采样：有针对性地采集样品。采样：有针对性地采集样品。采样：有针对性地采集样品。n n增增增增殖殖殖殖：人人人人为为为为地地地地通通通通过过过过(tnggu)(tnggu)(tnggu)(tnggu)控控控控制制制制养养养养分分分分或或或或培培培培养养养养条条条条件，使所需菌种增殖培养后，在数量上占优势。件，使所需菌种增殖培养后，在数量上占优势。件，使所需菌种增殖培养后，在数量上占优势。件，使所需菌种增殖培养后，在数量上占优势。n n分离：利用分离技术得到纯种。分离：利用分离技术得到纯种。分离：利用分离技术得到纯种。分离：利用分离技术得到纯种。n n发发发发酵酵酵酵性性性性能能能能测测测测定定定定：进进进进行行行行生生生生产产产产性性性性能能能能测测测测定定定定。这这这这些些些些特特特特性性性性包包包包括括括括形形形形态态态态、培培培培养养养养特特特特征征征征、营营营营养养养养要要要要求求求求、生生生生理理理理生生生生化化化化特特特特性性性性、发发发发酵酵酵酵周周周周期期期期、产产产产品品品品品品品品种种种种和和和和产产产产量量量量、耐耐耐耐受受受受最最最最高高高高温温温温度度度度、生生生生长长长长和和和和发发发发酵酵酵酵最最最最适适适适温温温温度度度度、最最最最适适适适pHpHpHpH值值值值、提提提提取取取取工工工工艺等。艺等。艺等。艺等。三、新种分离与筛选三、新种分离与筛选(shixun)的步骤的步骤第8页/共20页第九页，共21页。菌种筛选主要菌种筛选主要(zhyo)(zhyo)步骤步骤n n调查研究及查阅充分的资料调查研究及查阅充分的资料设计实验方案设计实验方案确定采集样品的生态环境确定采集样品的生态环境采样采样确定特定的增殖条件确定特定的增殖条件增殖培养增殖培养确定特殊确定特殊(tsh)(tsh)的选择培养基及可能的的选择培养基及可能的定性或半定量快速检出法定性或半定量快速检出法平板分离平板分离第9页/共20页第十页，共21页。n n原种斜面原种斜面确定确定(qudng)(qudng)发酵培养基础条件发酵培养基础条件筛选筛选 初筛（初筛（1 1株株1 1瓶）瓶）复筛（复筛（1 1株株3 35 5瓶）瓶）结合初步工艺条件摸索结合初步工艺条件摸索 再复筛（再复筛（1 1株株3 35 5瓶）瓶）335 5株株单株纯种分离单株纯种分离生产性能试验生产性能试验毒性试验毒性试验菌种鉴定菌种鉴定第10页/共20页第十一页，共21页。 （一）采样（一）采样(ci yn)1、采样对象 以采集土壤为主。一般园田(yuntin)土和耕作过的沼泽土中，以细菌和放线菌为主；富含碳水化合物的土壤和沼泽地中，酵母和霉菌较多，如一些野果生长区和果园内。采样的对象也可以是植物，腐败物品，某些水域等。第11页/共20页第十二页，共21页。从自然界筛选从自然界筛选(shixun)第12页/共20页第十三页，共21页。n n2 2、采样季节：以温度适中，雨量不多的秋初为好。、采样季节：以温度适中，雨量不多的秋初为好。n n3 3、采采土土方方式式：在在选选好好适适当当地地点点后后，用用小小铲铲子子除除去去表表土土，取取离离地地面面5-15cm5-15cm处处的的土土约约10g10g，盛盛入入清清洁洁的的牛牛皮皮纸纸袋袋或或塑塑料料袋袋中中，扎扎好好，标标记记，记记录录采采样样时时间间、地地点点、环环境境条条件件等等，以以备备查查考考。为为了了使使土土样样中中微微生生物物的的数数量量和和类类型型尽尽少少变变化化，宜宜将将样样品品逐逐步步分分批批寄寄回回，以以便便及及时时(jsh)(jsh)分离。分离。第13页/共20页第十四页，共21页。（二）增殖（二）增殖(zngzh)(zngzh)培养培养n n 为为了了容容易易分分离离到到所所需需的的菌菌种种，让让无无关关的的微微生生物物至至少少是是在在数数量量上上不不要要增增加加，可可以以通通过过配配制制选选择择 性性 培培 养养 (piyng)(piyng)基基 ， 选选 择择 一一 定定 的的 培培 养养(piyng)(piyng)条件来控制。条件来控制。n n 例例如如碳碳源源利利用用的的控控制制，可可选选定定糖糖，淀淀粉粉、纤纤维维素素，或或者者石石油油等等，以以其其中中的的一一种种为为唯唯一一碳碳源源，那那么么只只有有利利用用这这一一碳碳源源的的微微生生物物才才能能大大量量正正常常生生长长，而而其其它它微微生生物物就就可可能能死死亡亡或或淘淘汰汰。这这样样对下阶段的纯种分离就会顺利得多。对下阶段的纯种分离就会顺利得多。第14页/共20页第十五页，共21页。（三）培养（三）培养（三）培养（三）培养(piyng)(piyng)(piyng)(piyng)分离分离分离分离n n 尽管通过增殖培养效果显著，但还是处于微生物的混杂生长状态。因此还必须分离，纯化(chn hu)。在这步，增殖培养的选择性控制条件还应进一步应用，而且控制得细一点，好一点。纯种分离的方法有划线分离法、稀释分离法。第15页/共20页第十六页，共21页。平皿划线(hu xin)分离法 a. 连续划线(hu xin)分离法 b. 分区划线(hu xin)分离法第16页/共20页第十七页，共21页。（四）筛（四）筛选选n n 这这一一步步是是采采用用与与生生产产相相近近的的培培养养基基和和培培养养条条件件，通通过过三三角角瓶瓶的的容容量量进进行行小小型型发发酵酵(f (f jio)jio)试试验验，以以求求得适合于工业生产用菌种。得适合于工业生产用菌种。第17页/共20页第十八页，共21页。（五）毒性（五）毒性(dxn)(dxn)试验试验n n 自自然然界界的的一一些些微微生生物物是是在在一一定定条条件件下下产产毒毒的的，将将其其作作为为生生产产菌菌种种应应当当十十分分当当心心，尤尤其其与与食食品品工工业业有有关关的的菌菌种种，更更应应慎慎重重。据据有有的的国国家家规规定定，微微生生物物中中除除啤啤酒酒酵酵母母(jiom)(jiom)、脆脆壁壁酵酵母母(jiom)(jiom)、黑黑曲曲霉霉、米米曲曲霉霉和和枯枯草草杆杆菌菌作作为为食食用用无无须须作作毒毒性性试试验验外外，其其他他微微生生物物作作为为食食用用，均均需通过两年以上的毒性试验。需通过两年以上的毒性试验。第18页/共20页第十九页，共21页。 礼来礼来(Eli lilly),花了花了10年的时间从年的时间从40万株微万株微生物中，发现生物中，发现(fxin)了三种有潜力的新抗了三种有潜力的新抗生素。生素。第19页/共20页第二十页，共21页。内容(nirng)总结会计学。自然选育（自然分离）的一般程序是什么。在过去40年间曾筛选出许多产生新的有用的次级代谢物的菌种。这些菌种多半是以经验式的筛选方法获得的。发酵性能测定：进行生产性能测定。纯种分离的方法有划线分离法、稀释(xsh)分离法。（五）毒性试验。礼来(Eli lilly),花了10年的时间从40万株微生物中，发现了三种有潜力的新抗生素第二十一页，共21页。