需氧革兰阳性杆菌及需氧革兰阳性杆菌及检检验验华中科技大学同济医学院附属协和医院华中科技大学同济医学院附属协和医院熊熊 艳艳革兰阳性杆菌菌属间的鉴别革兰阳性杆菌菌属间的鉴别棒状杆菌棒状杆菌属属芽胞杆菌芽胞杆菌属属李斯特菌李斯特菌属属丹毒丝菌丹毒丝菌属属加特纳菌加特纳菌属属形态形态棒状棒状杆菌有芽杆菌有芽胞胞短杆、链短杆、链或丝状或丝状细杆或丝细杆或丝状状杆菌、多杆菌、多形性形性触酶触酶+ + + +- - -动力动力- -V V+ +- - -对氧对氧需氧，兼需氧，兼性厌氧性厌氧需氧，兼需氧，兼性厌氧性厌氧兼性厌氧兼性厌氧兼性厌氧兼性厌氧兼性厌氧兼性厌氧V V：炭疽芽胞杆菌阴性，其它芽胞杆菌阳性。炭疽芽胞杆菌阴性，其它芽胞杆菌阳性。 第一节第一节棒状杆菌属棒状杆菌属棒状杆菌属的共同特征棒状杆菌属的共同特征1)革兰阳性多形态杆菌革兰阳性多形态杆菌2)无荚膜、无鞭毛、无芽胞无荚膜、无鞭毛、无芽胞3)细菌呈不规则栅栏状排列细菌呈不规则栅栏状排列4)需氧或兼性厌氧需氧或兼性厌氧5)触酶试验阳性触酶试验阳性6)细胞壁结构和血清学分析，证实与分枝细胞壁结构和血清学分析，证实与分枝杆菌属、奴卡氏菌属有共同的成分。杆菌属、奴卡氏菌属有共同的成分。一一白喉棒状杆菌白喉棒状杆菌（一）生物学特性（一）生物学特性l形态与染色形态与染色l培养特性培养特性l菌落特征菌落特征l生化反应生化反应l抗原构造抗原构造l抵抗力抵抗力形态与染色形态与染色形态与染色形态与染色 细长弯曲、一端或两端膨大的革兰阳性杆菌。细长弯曲、一端或两端膨大的革兰阳性杆菌。无荚膜、无芽胞、无鞭毛、无菌毛。细菌排列呈无荚膜、无芽胞、无鞭毛、无菌毛。细菌排列呈散在散在L L、V V、Y Y字形及不规则栅栏状。字形及不规则栅栏状。 用美蓝、用美蓝、NeisserNeisser法、法、AlbertAlbert法等染色时，法等染色时，在细菌的一端或两端有浓染的颗粒，此颗粒与在细菌的一端或两端有浓染的颗粒，此颗粒与菌体着色不同，称为菌体着色不同，称为异染颗粒异染颗粒，为本菌重要形，为本菌重要形态学特征，对鉴别细菌有重要意义。态学特征，对鉴别细菌有重要意义。 2024/8/2培养特性培养特性培养特性培养特性 v需氧或兼性厌氧，生长温度为需氧或兼性厌氧，生长温度为1540，最适，最适生长温度为生长温度为3537，pH7.27.8。 v营养要求高，营养要求高，在普通培养基上虽能生长，但在普通培养基上虽能生长，但生长不良，形态不典型，大多需要特殊氨基酸。生长不良，形态不典型，大多需要特殊氨基酸。在加有血液、血清或鸡蛋的培养基上生长迅速，在加有血液、血清或鸡蛋的培养基上生长迅速，形态典型，异染颗粒明显。形态典型，异染颗粒明显。 2024/8/2菌落特征菌落特征l血平板：灰白、狭窄血平板：灰白、狭窄溶血环。溶血环。l鸡蛋斜面和血清斜面：生长迅速，灰白色有光鸡蛋斜面和血清斜面：生长迅速，灰白色有光泽菌落。泽菌落。l亚碲酸钾血平板：为选择培养基，菌落呈黑色。亚碲酸钾血平板：为选择培养基，菌落呈黑色。菌落分为重型、轻型或中间型。菌落分为重型、轻型或中间型。生化反应生化反应生化反应生化反应 触酶（触酶（+ +），氧化酶（），氧化酶（- -）能分解葡萄糖、麦芽糖、能分解葡萄糖、麦芽糖、果糖等果糖等，产酸不产气。，产酸不产气。不分解乳糖不分解乳糖、多数不分解蔗糖、多数不分解蔗糖。靛基质试验、明胶液化、尿素分解靛基质试验、明胶液化、尿素分解2024/8/2抗原构造抗原构造l菌体菌体O O抗原：与分枝杆菌、奴卡菌有共同抗原。抗原：与分枝杆菌、奴卡菌有共同抗原。lK K抗原：型特异性抗原，不耐热。抗原：型特异性抗原，不耐热。抵抗力抵抗力l对湿热和一般消毒剂敏感。对湿热和一般消毒剂敏感。l对冷和干燥有一定抵抗力对冷和干燥有一定抵抗力。（二）致病性（二）致病性l致病物质：白喉外毒素致病物质：白喉外毒素l由携带由携带-棒状杆菌噬菌体的白喉杆菌产生。棒状杆菌噬菌体的白喉杆菌产生。l作用机制：抑制细胞内蛋白质的合成。作用机制：抑制细胞内蛋白质的合成。l经呼吸道飞沫传播，引起白喉。经呼吸道飞沫传播，引起白喉。l假膜脱落阻塞呼吸道是白喉早期死亡的主要原因。假膜脱落阻塞呼吸道是白喉早期死亡的主要原因。l中毒性心肌炎是白喉晚期死亡的主要原因。中毒性心肌炎是白喉晚期死亡的主要原因。（三）免疫性（三）免疫性l抗白喉免疫主要依靠白喉抗毒素的中和作用。抗白喉免疫主要依靠白喉抗毒素的中和作用。l成人绝大多数具有免疫性，主要由于隐性感染成人绝大多数具有免疫性，主要由于隐性感染所获得的免疫力。所获得的免疫力。l锡克试验用于检测机体有无白喉抗毒素抗体存锡克试验用于检测机体有无白喉抗毒素抗体存在。在。（四）微生物学检验（四）微生物学检验 l标本采集标本采集 l检验程序检验程序 l检验方法检验方法l生化反应生化反应l毒力试验毒力试验标本采集标本采集l用无菌长棉拭子，从疑为假膜的边缘用无菌长棉拭子，从疑为假膜的边缘采集分泌物。采集分泌物。 l未见假膜的疑似患者或带菌者可采集未见假膜的疑似患者或带菌者可采集鼻咽部或扁桃体粘膜上的分泌物。鼻咽部或扁桃体粘膜上的分泌物。检验程序检验程序咽拭标本咽拭标本亚碲酸钾亚碲酸钾 血平板血平板观察菌落特征观察菌落特征 直接涂片直接涂片 革兰染色革兰染色异染颗粒染色异染颗粒染色血平板血平板 吕氏血清斜面吕氏血清斜面 直接涂片直接涂片 革兰染色革兰染色异染颗粒染色异染颗粒染色涂片染色镜检涂片染色镜检 生化反应生化反应 毒力试验毒力试验检验方法检验方法l标本直接涂片标本直接涂片 革兰染色：观察形态、染色性革兰染色：观察形态、染色性 异染颗粒染色：观察异染颗粒异染颗粒染色：观察异染颗粒 初步报告：检出形似白喉棒状杆菌初步报告：检出形似白喉棒状杆菌l分离培养分离培养 吕氏斜面：生长迅速，涂片镜检异染颗粒明显吕氏斜面：生长迅速，涂片镜检异染颗粒明显 亚碲酸钾血平板：黑色菌落亚碲酸钾血平板：黑色菌落生化反应生化反应根据根据糖发酵是否产酸糖发酵是否产酸可鉴别棒状杆菌可鉴别棒状杆菌中的不同种。中的不同种。白喉棒状杆菌发酵葡萄糖、麦芽糖产白喉棒状杆菌发酵葡萄糖、麦芽糖产酸，不分解蔗糖；尿素酶（酸，不分解蔗糖；尿素酶（）、硝酸）、硝酸盐还原试验（盐还原试验（+）等可用于与其他棒状杆）等可用于与其他棒状杆菌的鉴别。菌的鉴别。 毒力试验毒力试验l意义：是鉴定白喉杆菌为致病菌株的重要依据意义：是鉴定白喉杆菌为致病菌株的重要依据l方法方法 艾立克平板毒力试验艾立克平板毒力试验 对流电泳法对流电泳法 协同凝集试验协同凝集试验 动物实验动物实验二二其他棒状杆菌其他棒状杆菌第二节第二节需氧芽胞杆菌属需氧芽胞杆菌属芽胞杆菌属共同特点芽胞杆菌属共同特点1)1)绝大多数菌种在有氧条件下形成不大于绝大多数菌种在有氧条件下形成不大于菌体横径的芽胞菌体横径的芽胞2)2)除炭疽芽胞杆菌外均有动力和溶血能力除炭疽芽胞杆菌外均有动力和溶血能力3)3)非抗酸性非抗酸性4)4)营养要求不高，在普通培养基上生长良营养要求不高，在普通培养基上生长良好好 一一炭疽芽胞杆菌炭疽芽胞杆菌（一）生物学特性（一）生物学特性l形态与染色形态与染色l培养特性培养特性l菌落特征菌落特征l生化反应生化反应l抗原构造抗原构造l抵抗力抵抗力形态与染色形态与染色形态与染色形态与染色 为致病菌中最大的革兰阳性杆菌，两端齐平或为致病菌中最大的革兰阳性杆菌，两端齐平或凹陷，呈竹节状，单个或呈短链状排列。凹陷，呈竹节状，单个或呈短链状排列。 无鞭毛，形成芽胞，有毒菌株可形成荚膜。无鞭毛，形成芽胞，有毒菌株可形成荚膜。 人工培养或在外界环境中易产生芽胞，在人工培养或在外界环境中易产生芽胞，在活体或完整未经解剖的尸体内不形成芽胞，所活体或完整未经解剖的尸体内不形成芽胞，所以以炭疽病尸体严禁解剖炭疽病尸体严禁解剖。2024/8/2培养特性培养特性培养特性培养特性 l需氧或兼性厌氧。需氧或兼性厌氧。l营养要求不高，营养要求不高，普通培养基上生长良好普通培养基上生长良好。2024/8/2菌落特征菌落特征菌落特征菌落特征l普通琼脂平板：菌落扁平、粗糙，不透明灰白色，普通琼脂平板：菌落扁平、粗糙，不透明灰白色，无光泽，边缘不整齐，在低倍镜下可见到菌落边缘无光泽，边缘不整齐，在低倍镜下可见到菌落边缘呈呈卷发状卷发状。 l血液琼脂平板：培养血液琼脂平板：培养12121515h h，菌落周围菌落周围无溶血环无溶血环，18182424h h后可有后可有轻微溶血轻微溶血，而其他需氧芽胞杆菌大多，而其他需氧芽胞杆菌大多数溶血明显而快速。数溶血明显而快速。l液体培养基中呈絮状生长液体培养基中呈絮状生长l明胶培养基中呈倒置的杉树明胶培养基中呈倒置的杉树l有毒株在有毒株在NaHCONaHCO3 3培养基中形成荚膜，菌落呈粘液状，培养基中形成荚膜，菌落呈粘液状，有拉丝。有拉丝。2024/8/2 有有毒毒株株在在NaHCONaHCO3 3血血琼琼脂脂平平板板上上置置5%5%COCO2 2环环境境中中培培养养18182424h h，可可产产生生荚荚膜膜，菌菌落落由由粗粗糙糙型型变变为为粘粘液液型型，而而呈呈现现半半圆圆形形，突突起起，有有光光泽泽的的菌菌落落。以以接接种种针针挑挑取取时时呈呈拉拉丝丝状状，此此为为鉴鉴别别菌菌落落要要点点，而而无无毒毒株株则则形形成成粗粗糙糙型菌落。型菌落。 生化反应生化反应分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸不产分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸不产气。不分解乳糖。触酶（气。不分解乳糖。触酶（+），），VP（），），吲哚（吲哚（），尿素（），尿素（）。抗原结构抗原结构1)炭疽毒素炭疽毒素：由保护性抗原、致死因子、水肿因：由保护性抗原、致死因子、水肿因子组成的蛋白质复合物，后两者单独不能发挥子组成的蛋白质复合物，后两者单独不能发挥生物活性作用，都必须与保护性抗原组合才能生物活性作用，都必须与保护性抗原组合才能引起实验动物的水肿致死。引起实验动物的水肿致死。具有抗吞噬作用和具有抗吞噬作用和免疫原性，故患炭疽后有免疫力。免疫原性，故患炭疽后有免疫力。2)荚膜抗原荚膜抗原：与细菌毒力有关，失去荚膜后毒力：与细菌毒力有关，失去荚膜后毒力也就消失。该抗原具有高度特异性，在临床诊也就消失。该抗原具有高度特异性，在临床诊断中有鉴别诊断价值。断中有鉴别诊断价值。3)3)菌体抗原菌体抗原：耐热、耐腐败，耐热、耐腐败，无毒性，有种特异性。无毒性，有种特异性。4)4)芽胞抗原芽胞抗原：芽胞的外膜含有抗原决定簇，与皮质层：芽胞的外膜含有抗原决定簇，与皮质层一起组成炭疽芽胞杆菌芽胞的特异性抗原，此抗原一起组成炭疽芽胞杆菌芽胞的特异性抗原，此抗原具有免疫原性和血清学诊断价值。具有免疫原性和血清学诊断价值。 Ascoli热沉淀反应热沉淀反应：感染动物尸体组织浸出液煮：感染动物尸体组织浸出液煮沸半小时后，耐热的菌体抗原不被破坏，能与特沸半小时后，耐热的菌体抗原不被破坏，能与特异性抗体发生环状沉淀反应，称异性抗体发生环状沉淀反应，称Ascoli热沉淀反热沉淀反应，对炭疽病具有一定的诊断价值。应，对炭疽病具有一定的诊断价值。 2024/8/2抵抗力抵抗力 本菌繁殖体抵抗力与其它细菌相同，本菌繁殖体抵抗力与其它细菌相同，芽胞抵芽胞抵抗力很强抗力很强。在干燥的土壤或者皮毛中可存活。在干燥的土壤或者皮毛中可存活2020余余年。年。 芽胞对碘和氧化剂敏感。芽胞对碘和氧化剂敏感。 耐耐药药性性：本本菌菌对对磺磺胺胺类类、青青霉霉素素、四四环环素素、环丙沙星敏感。环丙沙星敏感。（二）致病性与免疫性（二）致病性与免疫性l致病物质：炭疽毒素、荚膜致病物质：炭疽毒素、荚膜l所致疾病所致疾病经多途径感染，引起炭疽病。经多途径感染，引起炭疽病。临床类型：肺炭疽、肠炭疽、皮肤炭疽、败血症。临床类型：肺炭疽、肠炭疽、皮肤炭疽、败血症。属人畜共患传染病，死亡率高。属人畜共患传染病，死亡率高。l免疫性：病后可获得持久性免疫力，再次感染者免疫性：病后可获得持久性免疫力，再次感染者甚少。甚少。（三三）微生物学检验）微生物学检验l标本采集标本采集l检验程序检验程序l检验方法检验方法标本采集标本采集l标本采集标本采集病人血液、痰、粪便、渗出液、脑脊液等。病人血液、痰、粪便、渗出液、脑脊液等。死亡病畜标本：死亡病畜标本：死于败血症的动物，严禁宰杀、死于败血症的动物，严禁宰杀、解剖解剖，可在消毒皮肤后割取耳朵、舌尖、采集，可在消毒皮肤后割取耳朵、舌尖、采集少量血液。少量血液。污染物品：皮革、兽毛、土壤等。污染物品：皮革、兽毛、土壤等。l标本处理标本处理：无杂菌污染标本直接接种，有杂菌：无杂菌污染标本直接接种，有杂菌污染标本先加热杀死繁殖体和杂菌再接种。污染标本先加热杀死繁殖体和杂菌再接种。已处理标本已处理标本直接涂片直接涂片增菌培养增菌培养分离培养分离培养Ascoli试验试验革兰染色革兰染色荚膜染色荚膜染色初步报告初步报告血平板血平板戊烷脒琼脂平板戊烷脒琼脂平板可疑菌落可疑菌落菌落涂片菌落涂片染色镜检染色镜检鉴定试验鉴定试验肉汤培养肉汤培养动物实验动物实验动物死亡动物死亡分离培养分离培养噬菌体裂解噬菌体裂解串珠试验串珠试验青霉素抑制试验青霉素抑制试验检验方法检验方法l涂片染色镜检涂片染色镜检革兰染色：涂片后升汞固定，革兰染色发现革革兰染色：涂片后升汞固定，革兰染色发现革兰阳性粗大杆菌、有荚膜，呈竹节样排列可初兰阳性粗大杆菌、有荚膜，呈竹节样排列可初步报告。步报告。l分离培养：分离培养：一般接种血平板，一般接种血平板，3737培养培养2424h h后后观察菌落特点。观察菌落特点。污染的标本先加热处理再接种。污染的标本先加热处理再接种。l动物试验：注射部位胶样水肿，肝脾肿大，出动物试验：注射部位胶样水肿，肝脾肿大，出血等。血等。在芽胞杆菌属中，除蜡样芽胞杆菌毒素在芽胞杆菌属中，除蜡样芽胞杆菌毒素对动物有致病作用外，炭疽芽胞杆菌是唯一具对动物有致病作用外，炭疽芽胞杆菌是唯一具有致病力者。有致病力者。鉴定试验鉴定试验i.i.青霉素抑制试验青霉素抑制试验 炭疽芽胞杆菌在含炭疽芽胞杆菌在含5 5 IU/mlIU/ml的青霉素培养基的青霉素培养基上能生长，而在含上能生长，而在含1010、100 100 IU/mlIU/ml的青霉素培的青霉素培养基上受到抑制不生长。养基上受到抑制不生长。鉴定试验鉴定试验ii.ii.串珠试验串珠试验 与类炭疽芽胞杆菌鉴别与类炭疽芽胞杆菌鉴别 炭疽芽胞杆菌受低浓度青霉素作用后，在炭疽芽胞杆菌受低浓度青霉素作用后，在形态上发生明显的变化。形态上发生明显的变化。如将本菌幼稚培养物如将本菌幼稚培养物接种于含接种于含0.050.050.50.5U/mlU/ml青霉素的培养基上，青霉素的培养基上，376376h h，菌体肿大呈圆珠状，称串珠反应。菌体肿大呈圆珠状，称串珠反应。 此反应可能与青霉素抑制细菌胞壁的合成此反应可能与青霉素抑制细菌胞壁的合成作用有关，为炭疽杆菌所特有，可用于与其他作用有关，为炭疽杆菌所特有，可用于与其他类炭疽类炭疽芽胞杆菌的鉴别。芽胞杆菌的鉴别。 鉴定试验鉴定试验iii.iii.青霉素和串珠联合试验青霉素和串珠联合试验iv.iv. 噬菌体裂解试验噬菌体裂解试验 与类炭疽芽胞杆菌鉴别与类炭疽芽胞杆菌鉴别v.v. NaHCO NaHCO3 3毒力试验毒力试验 有毒力的炭疽杆菌形成荚膜，菌落呈粘液型，有毒力的炭疽杆菌形成荚膜，菌落呈粘液型，无毒力的炭疽杆菌不形成荚膜，菌落呈粗糙型。无毒力的炭疽杆菌不形成荚膜，菌落呈粗糙型。鉴定试验鉴定试验鉴定试验鉴定试验vi.vi.植物凝集素试验植物凝集素试验 根据炭疽芽胞杆菌菌体多糖是植物凝集素受根据炭疽芽胞杆菌菌体多糖是植物凝集素受体的原理。体的原理。vii.vii.AscoliAscoli热沉淀试验热沉淀试验 用已知的抗炭疽杆菌抗体测定标本中未知的用已知的抗炭疽杆菌抗体测定标本中未知的抗原。炭疽杆菌沉淀原具有耐高热特征，在尸抗原。炭疽杆菌沉淀原具有耐高热特征，在尸体组织和皮毛中数年仍能检出，故可作追溯性体组织和皮毛中数年仍能检出，故可作追溯性诊断。诊断。2024/8/2炭疽芽胞杆菌与其它需氧芽胞杆菌的鉴别炭疽芽胞杆菌与其它需氧芽胞杆菌的鉴别鉴别项目鉴别项目炭疽芽胞杆菌炭疽芽胞杆菌枯草芽胞杆菌枯草芽胞杆菌蜡样芽胞杆菌及其蜡样芽胞杆菌及其它需氧芽胞杆菌它需氧芽胞杆菌形态形态菌体两端平整或凹陷菌体两端平整或凹陷两端钝圆两端钝圆两端钝圆两端钝圆荚膜荚膜+ +- - -动力动力- -+ + +菌落菌落有小突起，边缘呈卷有小突起，边缘呈卷发状，粘稠菌落发状，粘稠菌落锯齿状粗糙菌落锯齿状粗糙菌落蜡样或粗糙不粘稠蜡样或粗糙不粘稠菌落菌落肉汤肉汤絮状沉淀，上层清晰絮状沉淀，上层清晰均匀混浊有菌膜均匀混浊有菌膜均匀混浊有菌膜均匀混浊有菌膜AscoliAscoli+ +- - -溶血溶血不溶血或微溶血不溶血或微溶血+ + +串珠试验串珠试验+ +- - -二二蜡样芽胞杆菌蜡样芽胞杆菌（一）生物学特性（一）生物学特性l形态与染色形态与染色l培养特性培养特性l菌落特征菌落特征l生化反应生化反应l抵抗力抵抗力形态与染色形态与染色 革兰阳性大杆菌，两端较钝、链杆状，革兰阳性大杆菌，两端较钝、链杆状，长短不一，有鞭毛，无荚膜，可形成芽长短不一，有鞭毛，无荚膜，可形成芽胞。胞。 培养特性培养特性培养特性培养特性 v需氧或兼性厌氧，营养要求不高。需氧或兼性厌氧，营养要求不高。v 普通琼脂平板：可形成圆形、隆起、灰白色、普通琼脂平板：可形成圆形、隆起、灰白色、不透明、不透明、R R型型蜡滴样蜡滴样大菌落。大菌落。 v 血琼脂平板：菌落呈浅灰色，似毛玻璃状，血琼脂平板：菌落呈浅灰色，似毛玻璃状，菌落周围有菌落周围有或或溶血溶血。 2024/8/2 乳光反应或卵黄反应：乳光反应或卵黄反应： 在在卵卵黄黄琼琼脂脂平平板板上上生生长长迅迅速速，培培养养3 3h h后后，虽虽看看不不到到菌菌落落，但但该该菌菌可可分分解解卵卵磷磷脂脂而而形形成成白白色色的的混混浊浊环环，即即为为乳乳光光反反应应或或卵卵黄反应。黄反应。 生化反应生化反应 分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸不产分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸不产气，不分解乳糖。气，不分解乳糖。 VP VP（+ +），），液化明胶。液化明胶。抵抗力抵抗力 耐热，抵抗力强耐热，抵抗力强, , 能耐受能耐受10030min10030min。（二）（二）致病性致病性条件致病菌，主要引起食物中毒。条件致病菌，主要引起食物中毒。 临床上分为两种类型：临床上分为两种类型：A.A. 腹泻型：由不耐热的肠毒素引起。腹泻型：由不耐热的肠毒素引起。B.B. 呕吐型：由耐热的肠毒素引起。呕吐型：由耐热的肠毒素引起。（三三）微生物学检验）微生物学检验 l1标本采集标本采集 除进行本菌的分离培养外，必须作除进行本菌的分离培养外，必须作活菌计活菌计数数。因暴露于空气中的食物，在一定程度上都。因暴露于空气中的食物，在一定程度上都受本菌污染，故受本菌污染，故不能因分离出蜡样芽胞杆菌则不能因分离出蜡样芽胞杆菌则认为是引起食物中毒的病原菌认为是引起食物中毒的病原菌。l2检验程序检验程序 3检验方法检验方法1)1)直接镜检直接镜检： 2)2)活菌计数活菌计数 ： 一般认为蜡样芽胞杆菌的活菌数一般认为蜡样芽胞杆菌的活菌数大于大于10105 5 / /mLmL时，即有发生食物中毒的可能。时，即有发生食物中毒的可能。 3)3)分离培养分离培养 ：4)4)鉴定鉴定 第三节第三节产单核李斯特菌产单核李斯特菌一一生物学特性生物学特性l形态与染色形态与染色l培养特性培养特性l生化反应生化反应l抗原结构抗原结构l抵抗力抵抗力（一）形态与染色（一）形态与染色（一）形态与染色（一）形态与染色 革兰阳性小杆菌，直或稍弯，常呈革兰阳性小杆菌，直或稍弯，常呈V V字形成字形成对排列，有时呈丝状，偶尔可见双球状。对排列，有时呈丝状，偶尔可见双球状。 多数菌体一端较大，似棒状，易误认为是污多数菌体一端较大，似棒状，易误认为是污染的类白喉棒状杆菌；染的类白喉棒状杆菌； 又因菌体短小，三、五成链，并有又因菌体短小，三、五成链，并有溶血性，溶血性，易与链球菌混淆，用触酶试验加以区别。易与链球菌混淆，用触酶试验加以区别。 2024/8/2 在在22222525环环境境中中形形成成4 4根根鞭鞭毛毛，故故在在2525肉肉汤汤培培养养液液中中运运动动活活泼泼；而而在在3737时仅形成时仅形成1 1根鞭毛，根鞭毛，动力缓慢动力缓慢。 （二）培养特性（二）培养特性（二）培养特性（二）培养特性v 需氧或兼性厌氧，营养要求不高。需氧或兼性厌氧，营养要求不高。4 44545均能均能生长，最适温度生长，最适温度30303737。因在因在44能生长，故可能生长，故可进行进行冷增菌冷增菌。 v 初时菌落极小似初时菌落极小似露珠状露珠状、光滑透明，通过侧光、光滑透明，通过侧光微显蓝绿色，微显蓝绿色，3737培养数日，菌落增大变成灰暗，培养数日，菌落增大变成灰暗，血平板上的菌落有狭窄的血平板上的菌落有狭窄的溶血环。溶血环。 2024/8/2（三）生化反应（三）生化反应l 1 12 2d d内发酵葡萄糖、果糖、麦芽糖，内发酵葡萄糖、果糖、麦芽糖，产酸不产气，在产酸不产气，在3 31010d d内可发酵乳糖、内可发酵乳糖、蔗糖、阿拉伯糖。触酶阳性，蔗糖、阿拉伯糖。触酶阳性，VPVP（+ +），），MRMR（+ +）。）。 （四）抗原结构（四）抗原结构（四）抗原结构（四）抗原结构l 分为分为4 4个血清型，个血清型，1 1型主要感染啮齿动物，型主要感染啮齿动物，各型对人类均可致病，但以各型对人类均可致病，但以1a1a和和lblb最为多见。最为多见。l 本菌与葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌本菌与葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌及大肠埃希菌等具有共及大肠埃希菌等具有共同同抗原。抗原。2024/8/2（五）抵抗力（五）抵抗力l在土壤、粪便、饲料中能长期存活。在土壤、粪便、饲料中能长期存活。l耐盐、耐碱、不耐酸。耐盐、耐碱、不耐酸。l对热敏感，对对热敏感，对般消毒剂敏感，般消毒剂敏感，7070的的乙醇乙醇5min5min即可杀死本菌。即可杀死本菌。二致病性二致病性 本菌常伴随本菌常伴随EBEB病毒引起传染性单核病毒引起传染性单核细胞增多症。细胞增多症。三三微生物学检验微生物学检验 （一）标本采集（一）标本采集（二）检验程序（二）检验程序（三）检验方法（三）检验方法（三）检验方法（三）检验方法 1 1分离培养分离培养 2 2鉴定要点鉴定要点 A.A.形态染色：革兰阳性小杆菌。形态染色：革兰阳性小杆菌。B.B.溶血：本菌的溶血：本菌的溶血环很窄，往往把菌溶血环很窄，往往把菌落刮去，方可见菌落下面的落刮去，方可见菌落下面的溶血环。溶血环。C.C.动力试验：动力试验：2525动力阳性。动力阳性。D.D.44能生长能生长 2024/8/2第四节第四节红斑丹毒丝菌红斑丹毒丝菌一一生物学特性生物学特性l形态与染色形态与染色l培养特性培养特性l生化反应生化反应（一）形态与染色（一）形态与染色（一）形态与染色（一）形态与染色 革兰阳性杆菌，单个或形成短链状，革兰阳性杆菌，单个或形成短链状，粗糙型菌落形成长丝状。无鞭毛，无荚粗糙型菌落形成长丝状。无鞭毛，无荚膜，无芽胞。膜，无芽胞。 2024/8/2（二）培养特性（二）培养特性 厌氧或微需氧菌。初次分离需在厌氧厌氧或微需氧菌。初次分离需在厌氧环境中培养，传代后在有氧条件下也能环境中培养，传代后在有氧条件下也能生长。生长。（三）生化反应（三）生化反应（三）生化反应（三）生化反应v 氧化酶（氧化酶（），触酶（），触酶（），发酵葡萄），发酵葡萄糖、乳糖，产酸不产气。糖、乳糖，产酸不产气。 2024/8/2二致病性二致病性 红斑丹毒牡菌为红斑丹毒丝菌病的病原红斑丹毒牡菌为红斑丹毒丝菌病的病原体。体。 主要发生在鱼类、家畜、家禽和兔类，主要发生在鱼类、家畜、家禽和兔类，人类也感染发病。人类也感染发病。 人接触动物或其产品经皮肤损伤而引起人接触动物或其产品经皮肤损伤而引起类丹毒。以局部感染为主，继而发展成淋巴类丹毒。以局部感染为主，继而发展成淋巴管炎，可转变成关节炎。也可引起急性败血管炎，可转变成关节炎。也可引起急性败血症或心内膜炎。症或心内膜炎。三微生物学检验三微生物学检验三微生物学检验三微生物学检验 （一）标本采集（一）标本采集（二）检验程序（二）检验程序 （三）检验方法（三）检验方法 1直接镜检直接镜检 2分离培养分离培养 3生化反应生化反应 4动物试验动物试验 2024/8/2第五节第五节阴道加特纳菌阴道加特纳菌一一生物学特性生物学特性l形态与染色形态与染色l培养特性培养特性l生化反应生化反应l抵抗力抵抗力（一）形态与染色（一）形态与染色 本菌革兰染色视菌株和菌龄不同而异。本菌革兰染色视菌株和菌龄不同而异。本菌具有多形性，两端钝圆，无鞭毛，无本菌具有多形性，两端钝圆，无鞭毛，无荚膜，无芽胞。荚膜，无芽胞。 （二）培养特性（二）培养特性（二）培养特性（二）培养特性v 兼性厌氧菌，营养要求较高，在一般营兼性厌氧菌，营养要求较高，在一般营养琼脂平板上不生长。养琼脂平板上不生长。 v 在含在含5%5%人血琼脂平板上置人血琼脂平板上置5%5%COCO2 2，35353737培养培养2424h h后，形成针尖大小菌落；经后，形成针尖大小菌落；经4848h h后形成后形成溶血、圆形、光滑不透明的菌溶血、圆形、光滑不透明的菌落。落。 2024/8/2（三）生化反应（三）生化反应（三）生化反应（三）生化反应v 氧化酶（氧化酶（），触酶（），触酶（），尿素酶），尿素酶（）。发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖等，产）。发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖等，产酸不产气。酸不产气。 2024/8/2（四）抵抗力（四）抵抗力 所有菌株对氨苄青霉素、羧苄青霉素、所有菌株对氨苄青霉素、羧苄青霉素、苯唑青霉素、青霉素、万古霉素和甲硝唑苯唑青霉素、青霉素、万古霉素和甲硝唑敏感；对萘啶酸、新霉素、粘菌素和磺胺敏感；对萘啶酸、新霉素、粘菌素和磺胺嘧啶耐药。嘧啶耐药。二致病性二致病性l 阴道加特纳菌和厌氧菌阴道加特纳菌和厌氧菌在阴道内过度在阴道内过度生长，造成阴道正常菌群微生态平衡失生长，造成阴道正常菌群微生态平衡失调，而引起非特异细菌性阴道病（调，而引起非特异细菌性阴道病（BVBV）。l 可导致妇产科多种严重并发症。如子可导致妇产科多种严重并发症。如子宫全切术后感染、绒毛膜炎等。宫全切术后感染、绒毛膜炎等。l 本菌还能引起新生儿败血症和软组织本菌还能引起新生儿败血症和软组织感染。感染。l 并非并非GVGV阳性者都是阳性者都是BVBV，因为因为202040%40%的正常妇女的正常妇女阴道也可检出此菌。阴道也可检出此菌。l BV BV诊断标准：诊断标准：A.A. 阴道分泌物增多，稀薄均质灰白色，有恶臭味。阴道分泌物增多，稀薄均质灰白色，有恶臭味。B.B. 分泌物分泌物pHpH4.54.54.74.7。C.C. 分泌物胺试验阳性。分泌物胺试验阳性。D.D. 镜检有线索细胞。镜检有线索细胞。 2024/8/2三三微生物学检验微生物学检验 （一）标本采集（一）标本采集（二）检验程序（二）检验程序（三）检验方法（三）检验方法（三）检验方法（三）检验方法 1 1阴道分泌物直接检查阴道分泌物直接检查 A.A. 直接湿片镜检：线索细胞直接湿片镜检：线索细胞 B.B. 涂片染色镜检：涂片染色镜检：C.C. pH pH测定：阴道测定：阴道pHpH4.74.7，提示细菌性阴道炎。提示细菌性阴道炎。D.D. 胺试验：胺试验： 2 2分离培养分离培养 2024/8/2分枝杆菌属及检验分枝杆菌属及检验 分枝杆菌属主要特点分枝杆菌属主要特点l是一类直或微弯曲、有分枝生长趋势的杆菌。是一类直或微弯曲、有分枝生长趋势的杆菌。l细胞壁脂质含量高，主要为分枝菌酸。细胞壁脂质含量高，主要为分枝菌酸。l具有抗酸性，革兰染色不易着色，常用具有抗酸性，革兰染色不易着色，常用抗酸染抗酸染色色。l专性需氧，营养要求特殊，大多数生长缓慢。专性需氧，营养要求特殊，大多数生长缓慢。l不产内、外毒素和侵袭性酶等致病物质，不产内、外毒素和侵袭性酶等致病物质，其致其致病性与菌体成分有密切关系，病性与菌体成分有密切关系，所致疾病呈慢性。所致疾病呈慢性。分枝杆菌属种类分枝杆菌属种类结核分枝杆菌复合群结核分枝杆菌牛分枝杆菌、非洲分枝杆菌田鼠分枝杆菌非典型分枝杆菌麻风分枝杆菌光产色分枝杆菌暗产色分枝杆菌不产色分枝杆菌迅速生长分枝杆菌分枝杆菌属第一节第一节结核分枝杆菌结核分枝杆菌一一生物学特性生物学特性l形态与染色形态与染色l培养特性培养特性l生化反应生化反应l抵抗力抵抗力l变异性变异性形态与染色形态与染色l细长略弯，分枝生长细长略弯，分枝生长趋势。趋势。l无芽孢，无鞭毛，部无芽孢，无鞭毛，部分菌株有荚膜。分菌株有荚膜。l革兰染色阳性，不易革兰染色阳性，不易着色。着色。l抗酸染色阳性抗酸染色阳性，多数多数菌体含有一至数个菌体含有一至数个异异染颗粒染颗粒。 结核分枝杆菌结核分枝杆菌（抗酸染色）（抗酸染色）培养特性培养特性l 生长条件：生长条件： 细胞内寄生菌，专性需氧细胞内寄生菌，专性需氧，8%8%12%12%COCO2 2可刺激其可刺激其生长。生长。最适最适pH6.5pH6.56.86.8。 营养要求较高，必须在含有血清、卵黄、甘油、营养要求较高，必须在含有血清、卵黄、甘油、马铃薯以及无机盐类的特殊培养基上才能生长。马铃薯以及无机盐类的特殊培养基上才能生长。 l 生长现象：生长现象： 生长缓慢生长缓慢，在一般的培养基中，在一般的培养基中每分裂一代的速每分裂一代的速度为度为18182424h h。 改良罗氏培养基改良罗氏培养基菌落菌落特征：干燥、淡黄色、特征：干燥、淡黄色、 质地较硬的质地较硬的R R型菌落型菌落 液体培养基：形成菌膜，有毒株呈索状生长。液体培养基：形成菌膜，有毒株呈索状生长。结核分枝杆菌菌落结核分枝杆菌菌落生化反应生化反应l生化反应不活泼，不发酵糖类。生化反应不活泼，不发酵糖类。触酶阳性。触酶阳性。l与非结核分枝杆菌鉴别：与非结核分枝杆菌鉴别： 耐热触酶试验；（非结核分枝杆菌）耐热触酶试验；（非结核分枝杆菌）l与牛分枝杆菌鉴别与牛分枝杆菌鉴别 烟酸试验；（牛分枝杆菌）烟酸试验；（牛分枝杆菌）抵抗力抵抗力l抵抗力特点：抵抗力特点：“三耐四敏三耐四敏” 耐干燥、耐酸碱、耐孔雀绿（耐干燥、耐酸碱、耐孔雀绿（1:130001:13000） 对湿热、对湿热、7070乙醇、紫外线、常用抗结乙醇、紫外线、常用抗结核药物（但长期使用易产生耐药性）敏感。核药物（但长期使用易产生耐药性）敏感。 结核分枝杆菌细胞壁含有大量脂质，酒结核分枝杆菌细胞壁含有大量脂质，酒精较易渗入细胞壁将其杀死，故对精较易渗入细胞壁将其杀死，故对70%70%75%75%的酒精敏感的酒精敏感。但脂质可防止菌体内水分丢失，。但脂质可防止菌体内水分丢失，故对干燥的抵抗力特别强。故对干燥的抵抗力特别强。变异性变异性 典型形态典型形态多形性多形性 R R型菌落型菌落S S型菌落型菌落 有毒有毒无毒（用于制备疫苗）无毒（用于制备疫苗） 抗结核药敏感抗结核药敏感耐药耐药二致病性与免疫性二致病性与免疫性l致病物质致病物质l所致疾病所致疾病l免疫性与变态反应免疫性与变态反应致病物质致病物质l脂质脂质 索状因子：与该菌毒力有密切关系索状因子：与该菌毒力有密切关系 磷脂：磷脂： 分枝菌酸：与抗酸性有关分枝菌酸：与抗酸性有关 蜡质蜡质D D：具有佐剂作用：具有佐剂作用 硫酸脑苷脂：硫酸脑苷脂：l蛋白质蛋白质l糖类糖类l结核杆菌不产生内、外毒素，不产生侵袭性酶。结核杆菌不产生内、外毒素，不产生侵袭性酶。所致疾病所致疾病l经多途径感染，引起结核病，以肺结核经多途径感染，引起结核病，以肺结核多见多见l类型：原发感染和继发感染类型：原发感染和继发感染免疫性与变态反应免疫性与变态反应 抗结核免疫以细胞免疫为主抗结核免疫以细胞免疫为主 抗结核免疫属带菌免疫抗结核免疫属带菌免疫 抗结核免疫与抗结核免疫与型超敏反应同时出现型超敏反应同时出现结核菌素试验结核菌素试验l原理：用结核菌素进行皮肤试验，以检测受试者原理：用结核菌素进行皮肤试验，以检测受试者对结核杆菌是否有细胞免疫及迟发型超敏反应的对结核杆菌是否有细胞免疫及迟发型超敏反应的试验。试验。l结果：根据注射部位是否出现红肿判断结果结果：根据注射部位是否出现红肿判断结果 5mm5mm为阴性为阴性 5mm5mm为阳性为阳性 15mm15mm为强阳性为强阳性l应用：选择卡介苗接种对象；判断卡介苗接种效应用：选择卡介苗接种对象；判断卡介苗接种效果；辅助诊断婴幼儿结核病；测定肿瘤患者细胞果；辅助诊断婴幼儿结核病；测定肿瘤患者细胞免疫状态。免疫状态。结核分枝杆菌结核分枝杆菌检验程序检验程序标本核酸检测接种固体培养基可疑菌落涂片抗酸染色镜检抗体检测慢性生长菌快速生长菌菌种鉴定 标本前处理接种液体 培养基接种小白鼠 豚鼠脏器涂片 镜检抗酸染色鉴定试验结核分枝杆菌结核分枝杆菌涂片检查涂片检查l直接涂片直接涂片 薄涂片薄涂片 厚涂片厚涂片l集菌涂片集菌涂片 沉淀集菌法沉淀集菌法 漂浮集菌法漂浮集菌法l荧光显微镜检查法：荧光显微镜检查法： 金刚胺金刚胺O O染色染色荧光显微镜下检查荧光显微镜下检查抗酸染色抗酸染色报告方式报告方式报告方式报告方式镜检结果镜检结果- -仔细检查仔细检查300300个视野未发现抗酸杆菌个视野未发现抗酸杆菌300300个视野内发现个视野内发现1 12 2条抗酸菌条抗酸菌100100个视野内发现个视野内发现1 19 9条抗酸菌条抗酸菌2 21010个视野内发现个视野内发现1 19 9条抗酸菌条抗酸菌3 3每个视野内发现每个视野内发现1 19 9条抗酸菌条抗酸菌4 4每个视野内发现每个视野内发现9 9条以上抗酸菌条以上抗酸菌结核分枝杆菌结核分枝杆菌分离培养分离培养l标本前处理：标本前处理： 目的：杀死杂菌；液化标本目的：杀死杂菌；液化标本 方法：方法： 4 4NaOHNaOH法；法； 4 4H H2 2SOSO4 4法；法； 胰酶胰酶- -新洁尔灭法等新洁尔灭法等l培养基选择：罗氏培养基、米氏培养基、小川培培养基选择：罗氏培养基、米氏培养基、小川培养基等养基等l接种接种l培养培养培养结果记录与报告方法培养结果记录与报告方法报告方式报告方式培养结果培养结果斜面斜面2020个菌落以上，占斜面个菌落以上，占斜面1/41/4以下以下2 2斜面上菌落生长面积占斜面上菌落生长面积占1/41/4以上，以上，1/21/2以下以下3 3斜面上菌落面积占斜面斜面上菌落面积占斜面1/21/2以上，以上，3/43/4以下以下4 4斜面上菌落生长密集，成菌苔斜面上菌落生长密集，成菌苔非典型分枝杆菌非典型分枝杆菌l是指结核分枝杆菌与麻风分枝杆菌以外是指结核分枝杆菌与麻风分枝杆菌以外的分枝杆菌。的分枝杆菌。l大多为环境中的腐生菌。大多为环境中的腐生菌。l对酸碱比较敏感。对酸碱比较敏感。l对常用抗结核药耐受。对常用抗结核药耐受。l为条件致病菌，艾滋病患者易感染鸟复为条件致病菌，艾滋病患者易感染鸟复合分枝杆菌。合分枝杆菌。麻风分枝杆菌麻风分枝杆菌生物学性状生物学性状l为抗酸杆菌为抗酸杆菌。l细胞内寄生。细胞内寄生。l有麻风杆菌寄生的细胞呈泡沫状，称为有麻风杆菌寄生的细胞呈泡沫状，称为麻风细胞。麻风细胞。l体外人工培养尚未成功。体外人工培养尚未成功。l犰狳犰狳是动物感染模型。是动物感染模型。犰狳犰狳麻风分枝杆菌麻风分枝杆菌临床意义与微检临床意义与微检l经呼吸道、接触感染经呼吸道、接触感染l引起引起麻风病麻风病 瘤型麻风（开放型）：传染性强瘤型麻风（开放型）：传染性强 结核样型（闭锁性）：传染性弱结核样型（闭锁性）：传染性弱l微检：标本涂片抗酸染色是诊断麻风的微检：标本涂片抗酸染色是诊断麻风的主要依据主要依据麻风杆菌麻风杆菌麻风病人麻风病人第二节第二节 非典型分枝杆菌非典型分枝杆菌第三节第三节 分枝杆菌鉴定分枝杆菌鉴定第四节第四节 麻风分枝杆菌麻风分枝杆菌