血清蛋白的分离DEAE纤维素离子交换层析法 实验目的掌握离子交换层析的基本原理及基本操作（包括仪器的使用）熟悉层析的基本原理与分类原理一原理一原理二原理二 离子交换层析分离血清蛋白质离子交换层析分离血清蛋白质阴离子交换层析本质蛋白质的两性电解性质蛋白质与交换介质的结合蛋白质的分离过程操 作 一调试仪器操作二操作二 装柱装柱层析柱下口旋紧、层析柱上口打开层析柱下口旋紧、层析柱上口打开从上口倒入液体从上口倒入液体上口倒入纤维素上口倒入纤维素起始洗脱液，排气、查漏已平衡好的纤维素纤维素沉降完全纤维素沉降完全纤维素1/22/3高度保留弯月形液体界面封闭良好、防漏流出管口封闭流出管口封闭操作三操作三 加入样品加入样品加入血清加入血清 0.5 ml待样品完全进入加入起始洗脱液加入起始洗脱液洗脱液高约1厘米层析柱上口旋紧层析柱上口旋紧流出管口封闭流出管口封闭加样前加样前加样后加样后样品流入样品流入凝胶凝胶加入起始加入起始洗脱液洗脱液梯度发生器层析柱蝴蝶夹蠕动泵紫外检测仪记录仪磁力搅拌器蠕动泵方向选择“左”上样参数：上样参数：0.5 ml 血清血清洗脱参数：洗脱参数：起始缓冲液：起始缓冲液：30 ml 0.01M Na2HPO4终末缓冲液：终末缓冲液：30 ml 0.5 M NaH2PO4洗脱速度：洗脱速度：10滴滴/分分 记录仪器参数：记录仪器参数：电压：电压：100 mV 走纸速度：走纸速度：6 cm/h洗脱条件洗脱条件血清蛋白血清蛋白质等等 电 点点（PI）分分 子子 量量（MW）迁移率迁移率（cm2/s.v）白蛋白（白蛋白（A）4.8685005.910-51球蛋白球蛋白5.0610万万5.110-52球蛋白球蛋白5.0610万万4.110-5球蛋白球蛋白5.1210万万2.810-5球蛋白球蛋白6.85-7.310万万1.010-5血清蛋白的基本组成2024/8/22024/8/2离子交换层析离子交换层析1313结果与分析结果与分析2024/8/22024/8/2离子交换层析离子交换层析14142024/8/22024/8/2离子交换层析离子交换层析1515试剂试剂与与器材器材l l 试剂试剂试剂试剂 l l1 1、DEAEDEAE纤维素纤维素3232l l2 2、0.5M 0.5M HClHCll l3 3、0.5M 0.5M NaOHNaOH l l4 4、0.01M Na0.01M Na2 2HPOHPO4 4（pH8pH8）l l5 5、0.5M NaH0.5M NaH2 2POPO4 4（pH4pH4）l l 器材器材器材器材 l l天平、烧杯、量筒、天平、烧杯、量筒、pHpH试纸、层析柱、螺旋夹试纸、层析柱、螺旋夹l l梯度发生器、磁力搅拌器、恒流泵、紫外检测仪及记梯度发生器、磁力搅拌器、恒流泵、紫外检测仪及记录仪。录仪。 l l生命科学是以探求生命奥秘为中心课题。生命科学是以探求生命奥秘为中心课题。l l蛋白质、酶和核酸等生物大分子的结构蛋白质、酶和核酸等生物大分子的结构与功能。与功能。l l没有足够纯度的生物大分子，结构与功没有足够纯度的生物大分子，结构与功能的研究就无从谈起。能的研究就无从谈起。l l必须首先解决生物大分子的制备问题。必须首先解决生物大分子的制备问题。l l对获得的生物大分子进行鉴定。对获得的生物大分子进行鉴定。等等酶联免疫酶联免疫离心离心分子分子生物学技术生物学技术电泳电泳层析层析光学光学分光光度法分光光度法生化生化实验实验生化实验内容安排实验室实验室实验室实验室实验内容实验内容实验内容实验内容1 1实验：离子交换层析法分离血清蛋白实验：离子交换层析法分离血清蛋白实验：离子交换层析法分离血清蛋白实验：离子交换层析法分离血清蛋白2 2实验：血清实验：血清实验：血清实验：血清-球蛋白的提纯球蛋白的提纯球蛋白的提纯球蛋白的提纯实验：醋酸纤维素薄膜电泳实验：醋酸纤维素薄膜电泳实验：醋酸纤维素薄膜电泳实验：醋酸纤维素薄膜电泳3 3实验：聚丙烯酰胺凝胶电泳实验：聚丙烯酰胺凝胶电泳实验：聚丙烯酰胺凝胶电泳实验：聚丙烯酰胺凝胶电泳PAGEPAGE4 4实验：蛋白质的比色分析和血脂蛋白电泳实验：蛋白质的比色分析和血脂蛋白电泳实验：蛋白质的比色分析和血脂蛋白电泳实验：蛋白质的比色分析和血脂蛋白电泳5 5实验：真核基因组实验：真核基因组实验：真核基因组实验：真核基因组DNADNA提取提取提取提取6 6实验：酶促反应动力学实验实验：酶促反应动力学实验实验：酶促反应动力学实验实验：酶促反应动力学实验实验本身:实验室规则:时间、穿着、仪器不能乱动、赔偿制度、整洁、卫生。预习报告、规范操作（辨认标签）、如实记录、污染物、毒物、废弃物（酸碱烧伤大量自来水冲洗）l实验 实验报告要求：题目，组号题目，组号实验目的：实验目的：实验原理：实验原理：实验记录：如实记录实验记录：如实记录实验结果及结果分析：实事求是实验结果及结果分析：实事求是讨论或小结：讨论或小结：