家畜生理学实验血液生理之白细胞张宇飞指导教师：赵怀平（高级实验室）一、实验目地n了解白细胞计数原理，掌握其技术方法、红细胞沉降速率的测定方法及测定、测定红细胞膜对低渗溶液的抵抗能力。二、实验原理n白细胞旧称白血球，也被称为免疫细胞，体和动物血液及组织中的无色细胞，能吞噬异物或产生抗体，以帮助机体防御感染。白细胞一般有活跃的移动能力，它们可以从血管内迁移到血管外，或从血管外组织迁移到血管内。因此，白细胞除存在于血液和淋巴中外，也广泛存在于血管、淋巴管以外的组织中。n血液中的白细胞有五种，按照体积从小到大是：淋巴细胞，嗜碱粒细胞，中性粒细胞，单核细胞和嗜酸细胞。白细胞是无色有核的血细胞，在血液中一般呈球形，根据形态差异可分为颗粒和无颗粒两大类。n故白细胞计数具有重要的生理意义。n悬浮于低张溶液中的红细胞，由于溶液张力差异，可使红细胞外的水渐渐进入红细胞中。红细胞先变为球形；当达到临界容量时，则红细胞破裂溶解。观察上清液游离Hb量即可反映出红细胞脆性。n将抗凝血放入血沉管中垂直静置，红细胞由于密度较大而下沉。通常以红细胞在第一小时末下沉的距离表示红细胞的沉降速度，称为红细胞沉降率，即血沉。三、实验材料n家兔血、血细胞计数板、显微镜、试管、血沉管四、实验项目n1. 白细胞计数白细胞计数 WBC n2. 红细胞沉降率的测定红细胞沉降率的测定 n3. 红细胞的脆性实验红细胞的脆性实验五、实验方法n1、白细胞计数、白细胞计数 n3、白细胞计数n吸血及血液的稀释：吸血及血液的稀释均在红细胞吸管中进行。n推片及充液：在推片和充液前，先在显微镜下检查计数板和盖玻片是否清洁，若不干净则清洁后使用。推片是指用手指将盖玻片固定在计数板的正中间计数室边缘，然后大拇指将其缓慢的推行，使盖玻片贴在计数室两侧的槽上，充液是指将稀释好的血液摇匀后，先弃去吸管内的前两滴，然后用半滴放到计数室和盖玻片的间隙，同毛吸作用使血液进入计数室内。n计数：稀释的血液进入计数室后，静置23分钟后，在低倍显微镜下找中央大方格，然后在高倍镜下数4个角上的小方格和中央小方格中红细胞数目。n结果计算：N指细胞总数稀释200倍：x=N107稀释100倍：x=N2.5107n2. 红细胞沉降率的测定红细胞沉降率的测定n用清洁、干燥的血沉管，小心吸血至最高用清洁、干燥的血沉管，小心吸血至最高刻度刻度“0”处。绝对不能有气泡，如果有气处。绝对不能有气泡，如果有气泡重新做。将吸有血液的血沉管置于血沉泡重新做。将吸有血液的血沉管置于血沉管架上，分别在管架上，分别在15min、30min、1h时读取时读取血沉管上部血浆的高度，以毫米表示。血沉管上部血浆的高度，以毫米表示。n3. 红细胞的脆性实验红细胞的脆性实验n不同浓度氯化钠溶液的配制：不同浓度氯化钠溶液的配制：管号123456789101%氯化钠/mL1.801.401.301.201.10 1.000.900.800.700.60蒸馏水/mL0.200.600.700.800.90 1.001.101.201.301.40氯化钠浓度/%0.900.700.650.600.55 1.000.450.400.350.30n取决10支小试管；分别配制上述不同浓度的氯化钠溶液；各管再加入全血一滴；混匀后静置1小时观察结果。六、结果分析n1、白细胞计数n临床意义1生理变化（1）剧烈的体力劳动或情绪激动都使白细胞增加。（2）新生儿的白细胞数较成人高，3日后降到每微升10,000左右。（3）在妊娠期中，白细胞常轻度增多，分娩时增多可能更显著。（4）慢性特发性白细胞增多症，其白细胞总数可持续在10,00020,000l，但无其他异常发现。（5）高温作业、饮酒及饭后亦可能有轻度增加。n病理变化增高见于急性化脓性感染所引起的急性周身性感染，局部炎症（脓肿、脑膜炎、大叶性肺炎、兰尾炎、扁桃体炎、脓胸、败血症等）以及其他一些细菌感染（如猩红热、霍乱、白喉等）。此外，白血病、骨髓纤维化、恶性肿瘤、真性红细胞增多症、尿毒症、酸中毒、手术后、急性失血后、某些药物中毒和烧伤等亦常增高。其中尤以慢性白血病增高最多，有时可达几十万；骨髓纤维化大多在10,00020,000；真性红细胞增多症大多在12,00030,000。由于感染等所引起的类白血病反应，有时亦可高达数万。减少见于（1）某些感染：细菌（如伤寒、付伤寒、布氏菌病等）；病毒（如流感、麻疹、风疹、登革热等）及各种重度感染（如粟粒性肺结核病、严重败血症等）。（2）脾功能亢进：见于肝硬化、班替氏综合征等。（3）血液病：再生障碍性贫血，急性粒细胞缺乏症（可减到只剩数百l），非白血病性白血病、恶性网状细胞增多症。（4）化学因素：可致白细胞减少的有抗癌药物（氮芥、环磷酰胺、长春花碱及长春新碱等）、解热镇痛药（氨基比林、氨替比林、保太松、复方阿斯匹林及水扬酸钠等）、抗甲状腺药（两基硫氧嘧啶、甲基硫氧嘧啶，他巴唑、甲亢平等）、抗癫痫药（苯妥英钠、巴比妥类等）、磺胺类（磺胺噻唑、磺胺嘧啶、长效磺胺、磺胺异恶唑等）、抗生素（氯霉素、合霉素、新生霉素、青霉素、链霉素、金霉素等）、抗疟药（奎宁、扑疟奎宁、伯氨奎宁等）、抗痨药（异烟肼、异烟宗、对氨基水扬酸、氨硫脲等）、抗组织胺药（苯海拉明、苯沙明等）、抗糖尿病药（D860、P607等）、抗高血压药（氯噻嗪氢氯噻嗪、甲基多巴、利血平、氯丙嗪等）、利尿药（汞利尿剂、利尿酸、乙酰唑胺等）、其它（苯、金盐、铋、有机砷、山道年、二硝基酚、DDT、青霉胺等）。（5）物理因素(X线、放射性物质）。注：白细胞计数，对病情动态观察具有一定的意义。鉴于白细胞的正常数值幅度较大，因此，临床在分析结果时，须与分类和原来的白细胞基数结合起来，否则易造成延误诊断。n2. 红细胞沉降率的测定红细胞沉降率的测定n红细胞沉降率（红细胞沉降率（ESR）测定）测定临床意义临床意义ESR的变化主要同血浆中球蛋白，如的变化主要同血浆中球蛋白，如2和和球蛋白，尤其是与纤维蛋白原的球蛋白，尤其是与纤维蛋白原的含量多少有关，如果球蛋白与纤维蛋白原含量多于正常，血沉就增快，所以含量多少有关，如果球蛋白与纤维蛋白原含量多于正常，血沉就增快，所以变化无特异性。但对任何一种血沉增速的疾病，在病程内定期观察血沉的动变化无特异性。但对任何一种血沉增速的疾病，在病程内定期观察血沉的动态变化，可以帮助推断病变的发展情况。态变化，可以帮助推断病变的发展情况。增高见于：增高见于：生理性：妇女月经期，妊娠后生理性：妇女月经期，妊娠后3个月到产后个月到产后1个月，小儿和个月，小儿和50岁以上的老人。岁以上的老人。病理性：病理性：（1）各种急性的全身和局部感染，如活动性结核病、疟疾、风温热和肺炎。）各种急性的全身和局部感染，如活动性结核病、疟疾、风温热和肺炎。（2）结缔组织性疾患，如多发性肌炎。）结缔组织性疾患，如多发性肌炎。（3）在产重贫血、白血病、某些恶性肿瘤、甲亢、肾炎以及铅、砷、酒精中）在产重贫血、白血病、某些恶性肿瘤、甲亢、肾炎以及铅、砷、酒精中毒时亦常增高。毒时亦常增高。减低见于：减低见于：真性红细胞增多症及继发性红细胞增多症、低纤维蛋白原血症、球形红细胞真性红细胞增多症及继发性红细胞增多症、低纤维蛋白原血症、球形红细胞增多症、心脏代偿功能障碍等。增多症、心脏代偿功能障碍等。n3. 红细胞的脆性实验红细胞的脆性实验n结果：n开始溶血：上层液开始呈透明红色且管底有红细胞者；n完全溶血：溶液为透明红色且管底无红细胞者；必要时可离心后再观察结果。n临床意义：n脆性增加：遗传性球形红细胞增多症，口形红细胞增多症，椭圆形红细胞增多症（部分病例），新生儿ABO溶血病，已糖激酶缺乏伴球形红细胞增多症，自免溶贫伴球形红细胞增多症等。n脆性降低：正常头几个月的婴儿，珠蛋白合成障碍性贫血综合征（称海洋性贫血），Hb-C、D、E、G病，IDA，切脾后，MA，PV（少数病例），黄疸病儿及肝病等。