实验十二实验十二 pHpH对酶活性的影响对酶活性的影响 Exp. 12 Effect of Changes in pH on Enzyme Activity一、实验原理 酶的活性，受环境酶的活性，受环境pHpH的影响极为显著，通常只的影响极为显著，通常只在一定的在一定的pHpH范围内，酶才表现出活性，当酶活性达范围内，酶才表现出活性，当酶活性达到最高时的到最高时的pHpH值称为该酶的最适值称为该酶的最适pH(pH(optimum pH optimum pH ) )，低于或高于最适低于或高于最适pHpH时，酶的活性依次降低，酶的最时，酶的活性依次降低，酶的最适适pHpH受底物性质和缓冲液性质的影响。受底物性质和缓冲液性质的影响。 不同酶的最适不同酶的最适pHpH不同。但与该酶在生物体内存不同。但与该酶在生物体内存在的部位有关，例如高等动物的胃蛋白酶最适在的部位有关，例如高等动物的胃蛋白酶最适pHpH为为1.51.52.52.5，而胃液的，而胃液的pHpH与此相近，胰蛋白酶的最适与此相近，胰蛋白酶的最适pHpH为为8 8左右，而十二指肠附近肠道的左右，而十二指肠附近肠道的pHpH值近乎中性。值近乎中性。 本实验使用唾液淀粉酶本实验使用唾液淀粉酶( (salivary amylasesalivary amylase ) )来说来说明明pHpH对酶活性的影响。唾液淀粉酶的最适对酶活性的影响。唾液淀粉酶的最适pHpH为为6.86.8，有人发现该酶在磷酸缓冲液中，其最适，有人发现该酶在磷酸缓冲液中，其最适pHpH为为6.46.46.66.6。 二、实验用品1 1、材料、材料 新鲜并稀释新鲜并稀释200200倍的唾液倍的唾液2 2、试剂、试剂（1 1）0.5%0.5%淀淀粉粉溶溶液液: :称称取取0.5g0.5g淀淀粉粉溶溶于于0.3%NaCl0.3%NaCl溶溶液中。液中。（2 2）0.2M0.2M磷酸氢二钠溶液磷酸氢二钠溶液（3 3）0.1M0.1M柠檬酸溶液柠檬酸溶液（4 4）碘碘化化钾钾碘碘液液: :将将KI KI 20g20g及及碘碘10g10g，溶溶于于100ml100ml蒸馏水中，使用前，稀释蒸馏水中，使用前，稀释1010倍。倍。3 3、仪器设备、仪器设备 试试管管及及试试管管架架、2ml2ml和和5 5 mlml吸吸量量管管、恒恒温温水水浴浴锅锅、滴定管、滴定管、50 ml50 ml锥形瓶锥形瓶三、方法和步骤1 1、取、取8 8个个5050毫升锥形瓶，编号。毫升锥形瓶，编号。 按下表中的比例，用吸量管加入按下表中的比例，用吸量管加入0.2M0.2M磷酸氢磷酸氢二钠溶液和二钠溶液和0.1M0.1M柠檬酸溶液，制备柠檬酸溶液，制备 pH 5.0pH 5.08.0 8.0 的的8 8种缓冲溶液。种缓冲溶液。表1.pH 5.08.0 的8种缓冲溶液的制备锥形瓶号锥形瓶号0.2M磷酸氢磷酸氢二钠二钠/ml0.1M柠檬柠檬酸酸/ml 缓缓 冲冲 液液pH123456785.156.056.617.287.728.249.089.724.853.953.392.722.281.760.920.285.05.86.26.66.87.07.48.02 2、由由8 8个个锥锥形形瓶瓶中中，各各取取缓缓冲冲液液3ml3ml，分分别别注注入入8 8支支带带有有编编号号的的试试管管中中，随随后后于于每每个个试试管管中中，添添加加0.5%0.5%淀淀粉粉溶溶液液2 2 mlml和和稀稀释释200200倍倍的的唾唾液液2 2 mlml。( (增增加加1 1个个和和5 5号号内内容容相相同同的的试试管管，作作为为检检验验淀淀粉粉的的水水解解程程度度) )向向各各试试管管加加入入稀稀释释唾唾液液的的时时间间间间隔隔各各为为1 1分分钟钟。将将各各试试管管内内容容物物混混匀匀，并并依依次次置置于于3737恒恒温水浴中保温。温水浴中保温。3 3、5 5分分钟钟后后（视视酶酶的的活活性性而而定定，一一般般5 51010分分钟钟），每每隔隔1 1分分钟钟由由第第5 5号号试试管管之之一一吸吸取取1 1滴滴混混合合液液，置置于于白白磁磁板板上上，加加一一小小滴滴碘碘化化钾钾碘碘溶溶液液，检检查查淀淀粉粉的的水水解解程程度度，使使实实验验结结果果成成为为橙橙黄黄色色时时，向向所所有有试试管管依依次次添添加加1 12 2滴滴碘碘化化钾钾- -碘碘溶溶液液，充充分分混混匀匀。加加碘碘化化钾钾溶溶液液时时间间间间隔隔，由由第第一一管管起起，也也均均为为1 1分分钟，摇匀，观察各试管内容物的颜色。钟，摇匀，观察各试管内容物的颜色。四、实验结果根根据据各各试试管管内内容容物物呈呈现现的的颜颜色色，可可以以看看出出pHpH对对唾唾液液淀粉酶活性的影响。指出其最适淀粉酶活性的影响。指出其最适pHpH值。值。注意事项注意事项掌握第掌握第5 5号试管的水解程度是本实验成败的关键。号试管的水解程度是本实验成败的关键。五、思考题1.pH1.pH对酶活性有何影响？对酶活性有何影响？2.2.如何测定一个酶的最适如何测定一个酶的最适pH?pH?